EGFR の exon18,19,21 はチロシンキナーゼ領域をコードしており この部分の遺伝 変異によりチロシンキナーゼ活性が恒常的に亢進することが 細胞のがん化に関与している. exon18,19,21 の変異を調べ 変異があるとイレッサが有効 exon20 の codon790 に変異 (T7
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- ぎんと よせ
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1 U 化学実習レポート Ⅰ-C タンパク質の 化学 (SDS 電気泳動 / ウエスタンブロット ) 実習担当 : 化学第 講座 作成 : 下貴 ( 医学科 2008 年度 学 ) 1 実習の 的 体から分取した組織や培養細胞中に あるタンパク X が発現しているかどうか ( またどれだけ発現しているか ) を調べたいとき 化学でよく使われる 法の 1 つがウエスタンブロットである この 法は (1) まず SDS 電気泳動によって試料中のタンパクを分 量別に分けて (2) さらにタンパク X と特異的に結合する抗体を いて検出することで 的のタンパク X の存在とおよその発現量を い精度で知ることができる 本実習では ウエスタンブロットを いて Hela 細胞のリン酸化 EGFR (p-egfr) を検出することを 的とする EGF(epithelial growth factor; 上 増殖因 ) は細胞増殖を促すシグナル分 であり EGFR(EGF Receptor) は EGF と結合するチロシンキナーゼ型の受容体である 右図のように EGFR に EGF が結合すると 受容体の細胞内ドメインの交差的リン酸化が起こる この部分に各種のアダプタータンパクがつくことで シグナルを下流へと伝達される stryer 5th figure 本実習で いる抗 p-egfr 抗体は EGF 刺激により活性化されたリン酸化 EGFR(p-EGFR) と特異的に結合する ( リン酸化されていない EGFR には結合しない ) そこで Hela 細胞に EGF を添加したサンプル 添加していないサンプル の 2 種類を いて それぞれ電気泳動とウエスタンブロットを い 前者で p-egfr が存在し 後者では存在しないことを確認するのが 本実習の 的である これをより 般的に い直すと ウエスタンブロットによって EGF による EGFR のリン酸化を検出できる ことになる EGFR を介したシグナル伝達 (3 課題で説明する ) は 発がんに深くかかわっている たとえば抗が ん剤のゲフィチニブ ( 商品名イレッサ ) は 術不能または再発した 肺の 細胞癌に いられる が この作 機序は EGFR の リン酸化を選択的に阻害する というものである また がん組織で遺伝 のどの部分が変異したかによって イレッサの有効性が変わることが知られて いる そのため イレッサの投与前に EGFR の遺伝 診断を い 投与するかどうかを決定する こ の検査は 最もはやく保険適 された遺伝 診断の 1 つである 検査内容の概要を以下に す : 1
2 EGFR の exon18,19,21 はチロシンキナーゼ領域をコードしており この部分の遺伝 変異によりチロシンキナーゼ活性が恒常的に亢進することが 細胞のがん化に関与している. exon18,19,21 の変異を調べ 変異があるとイレッサが有効 exon20 の codon790 に変異 (T790M) があると イレッサに耐性 K-ras 遺伝 の codon12 あるいは 13 に点突然変異があると イレッサが無効となる可能性がある ( 臨床検査データブック より ) 2 実験 法と結果 1 試料の準備 SDS-PAGE まで Hela 細胞を2つのディッシュで 清なしで 10 時間培養し その後 のディッシュのみ 50ng/ml の EGF を5 分間添加する Hela 細胞は 1951 年に亡くなった 宮頸がん患者に由来する はじめてのヒト由来の株化細胞 ( 培養 で半永久的に維持 増殖が可能な細胞 ) であり 現在でもヒト細胞を いた各種の研究でよく いられている 清には ( 各種の増殖因 も含め ) さまざまな物質が っているから 清なしで培養することで その影響が出ないようにしている SDS-PAGE サンプルバッファを添加して 細胞を超 波で破砕し (sonication) 加熱してタンパクの SDS 化を った アクリルアミドゲルを作成し 上記の SDS 化した試料の電気泳動 (SDS-PAGE) を った ここで レーン構成を下表にまとめておく SDS-PAGE の原理については 1-B のレポートですでに説明したから ここでは繰り返さない A アミドブラック染 B ウエスタン (β- アクチン ) C ウエスタン (p-egfr) marker EGF(-) EGF(+) marker EGF(-) EGF(+) marker EGF(-) EGF(+) 2 ブロッティング ブロッキング 検出反応 前準備として スポンジ ろ紙 メンブレン ( ニトロセルロース膜 ) をブロッティング緩衝液に浸しておく 電気泳動したゲルを取り出し スポンジ ろ紙 ゲル メンブレン ろ紙 スポンジの順で 気泡が らないように密に重ねていき ブロッターにセットする 電源をつないて電圧をかけ (60V,60min) ゲルからメンブレンへとタンパクの転写 ( ブロッティング ) をおこなう メンブレンを A B C の3つに切断して それぞれ次のように処理する A は 以下の 順でアミドブラック染 を う アミドブラック液に浸す (10 分 ) 脱 剤に浸す (10 分 ) フィルムにパックしてそのまま保存する B C はブロッキング (5% スキムミルク /TBS-T 液に 40 分浸す ) し TBS-T で洗浄する 2
3 ここで SDS-PAGE 以降の実験 法についてまとめて解説しておこう 電気泳動後の アクリルアミドゲル アミドブラックによる 特異的染 ニトロセルロース膜に タンパクを転写 抗体を いた 特異的染 ニトロセルロース膜 改変 ) 概要 ( 上図 ) 電気泳動後のアクリルアミドゲルとニトロセルロース膜を重ねあわせて電圧をかけることで ゲル中のタンパクをニトロセルロース膜へと転写する ( ブロッティング ) ニトロセルロース膜を A~C の 3 つに切り離し A はアミドブラックによって 特異的なタンパクの染 を う ( アミドブラック染 ) B C はそれぞれβ-actin p-egfr に対する特異的抗体を いて これらのタンパクを検出する ブロッティングについて アクリルアミドゲルのままだと 抗体反応をうまく うことができない そこでゲルから特殊な素材の膜 ( 般名としてはメンブレンと呼ぶ 本実習ではニトロセルロース膜 ) へとタンパクを転写することで 抗体反応を うことができるようにする この操作をブロッティングという ウエスタンブロット の名称はこの操作から来ている 右図のように バッファーに浸したスポンジ ろ紙でゲルとニトロセルロース膜を挟み 両側から電圧をかける SDS 化したタンパクはマイナスの荷電を持つから プラス極 ( ゲルからニトロセルロース膜の ) へと移動する アミドブラック染 について アミドブラック (amido black 10B) は右図 のような構造式を持つ ので 全タン 3 wikipedia(e) amido black 10B
4 パクと結合する性質があるから ニトロセルロース膜上のタンパクを 特異的に染 することができる ブロッキングについてニトロセルロース膜には微細な孔が空いていて この孔にタンパクが り込むようになっている ブロッティングでアクリルアミドゲルのタンパクをニトロセルロース膜に転写した後 膜をタンパク溶液 ( ここでは市販のスキムミルク ) に浸して 残りの孔を埋めてやる この操作をブロッキングという ニトロセルロース膜は タンパクを< 層だけ> 吸着することのできる膜だと考えればいい ブロッキングを わずに抗体反応を うと 空いている孔に抗体が吸着してしまう スキムミルク中に豊富に含まれるタンパクで孔を全部埋めてやることで 抗体は 的のタンパク X と特異的に結合することができるようになるのである もちろん タンパクどうしが弱い接着や 抗体と 的以外のタンパクの弱い結合が起こることがある 順中の Wash は こうした弱く結合したタンパクを除去することを 的とする Wash に使う TBS-T はトリス緩衝液に Tween-20 を加えたもので Tween-20( 界 活性剤 ) を加えることで弱く結合したタンパクを除去しやすくしている 抗体反応と ECL による検出 ブロッキング後のニトロセルロース膜に 的のタンパク X に特異的に結合する 次抗体を加えて反応させる Wash して弱く結合したタンパクを除去した後 次抗体の Fc 部分に特異的に結合する 次抗体を加えて 反応させる ( 右図 ) この 次抗体には HRP(horse radish peroxidase; 洋わさびペルオキシダーゼ ) という酵素が結合されている そこで メンブレンに対して ECL 溶液を加えると 酵素反応により溶液中の蛍光物質が励起し 弱い蛍光を発する これを暗室中で X 線フィルムにあてて感光させることで 的のタンパク X の位置にバンドを得る ECL(enhanced cehmilunescence) は商品名 さて 上の説明を読んで 2 種類も抗体を 意して反応させるのは 倒だから 1 種類の抗体だけでできないのか という疑問を持つ がいるかもしれない この疑問に対しては 次のように答えることができる すなわち 確かに 1 種類の抗体だけで済む製品もある ( たいていはかなり有名なタンパクを検出する製品 ) しかし 般に < 的のタンパク X に対する 次抗体をつくる>と < 次抗体に結合する 酵素で標識した 次抗体をつくる>という 2 つの作業に分割した が 全体としてコストは低くなる 3 1 次抗体 2 次抗体 ECL による検出まで メンブレン B C を パックしたフィルム内で 1 次抗体と結合させ (40 分 ) その後 TBS-T で洗浄 する (10 分 +5 分 +5 分 ) < 添加する 1 次抗体 > メンブレン B:β-actin( mouse anti-human β-actin) 1000 in 5% skim-milk/tbs-t メンブレン C:P-EGFR(rabbit anti-human P-EGFR) 1000 in 5% skim-milk/tbs-t 4
5 これらの 次抗体はそれぞれ ヒトβ-actin に対する マウス由来の抗体 ヒト p-egfr に対する ラビット由来の抗体 を意味する また 1000 は 1000 倍濃縮 つまり 1000 倍の skim-milk/tbs-t に溶解して使うという意味 各メンブレンを やはりパックしたフィルム内で2 次抗体と結合させ (40 分 ) その後 TBS-T で洗浄する (10 分 +5 分 +5 分 ) < 添加する 2 次抗体 > メンブレン B:HRP-conjugated rabbit anti-mouse IgG 2000 in 5% skim-milk/tbs-t メンブレン C:HRP-conjugated goat anti-rabbit IgG 2000 in 5% skim-milk/tbs-t これらの 次抗体はそれぞれ HRP を結合させた マウス IgG に対する ラビット由来の抗体 HRP を結合させた ラビット IgG に対する ヤギ由来の抗体 を意味する ECL 溶液を調製してメンブレンに添加し 暗室中で X 線フィルムへの感光を う 4 結果の検討 β-actin( 遺伝 名は ACTB) は actin のアイソフォームの 1 つで 筋組織以外の細胞 格にユビキタスに発現しているので ウエスタンブロットで positive control としてよく いられる positive control とは 必ず成功する対照群のこと 対象となる細胞は必ずβ- actin を含み また抗 β- actin 抗体の信頼性も確かめられているから ウエスタンブロットを うとβ- actin は必ず正しいバンドが出るはず 逆にβ - actin のバンドが出ないということは (β- actin が存在しないのではなく ) 実験が失敗した と考えらえる positive control と対をなすのは negative control で これは 必ず失敗する対照群のこと たとえば細胞を SDS 化した試料のかわりに を加えてウエスタンブロットを うと バンドが出るはずがない もしここでバンドが出た場合は たとえば実験途中で何らかのタンパクが混 したり 抗体の特異性が りない ブロッキングがうまくいっていないなどの可能性が考えられる NCBI のデータベースより 各タンパクの分 量は β-actin(np_ ) 41.6(kDa) EGFR(NP_005219) 132.0(kDa) となるが これはペプチド配列から計算した値で EGFR はさらに 40kDa の糖鎖がつき 全体で 170kDa となるようだ ( タカラバイオ Active EGF receptor EIA Kit の製品ページによる ) また p-egfr は リン酸化によって分 量がやや上昇していると思われる 下図にアミドブラック染 したメンブレン A ECL によるタンパク検出を ったメンブレン B C を す 5
6 marker A. アミドブラック染 B. ウエスタン C. ウエスタン (β-actin) (p-egfr) M - + M - + M - + メンブレン B からみると 分 量が 37-50kDa の間に明瞭なバンドをみとめる これはβ-actin と考えて間違いないだろう メンブレン A でもβ-actin と思われる明瞭なバンドをみとめる ( 印 ) この結果から 実験操作は成功していると考えられる 次にメンブレン C をみると kDa の間 (250kDa より ) に明瞭なバンドをみとめる やや分 量が くみえるのが気になるが p-egfr だと考えられる これはメンブレン A では この辺りの分 量のタンパクが薄くなって判別できない 細胞内に存在する EGFR/p-EGFR の量が相対的にわずかだであることが原因だとおもわれる 参考までに 右図はバイオ企業の EGFR 関連製品からの引 で レ com/ja/datasheet pegfr-tyr-1092h-antibody.html ーン A は EGFR レーン B は p-egfr を す p-egfr のバンドは kDa の間の 243kDa に近い に出ており メンブレン C のバンドが p-egfr であるという推定を 持している また p-egfr のバンドが ( リン酸化により?) EGFR と べやや 分 量側にシフトしていることがわかる 3 課題 1 SDS-PAGE について 濃縮ゲルと分離ゲルのそれぞれの役割について述べよ SDS-PAGE の概要については 1-A のレポートで説明した SDS-PAGE では右図のように 濃縮ゲル (stacking gel) と分離ゲル (separating gel; running gel) という 組成の異なる 2 種類のゲルを いる 各ゲルと泳動 バッファの組成は : 濃縮ゲル l:tris-hcl(ph6.8),6-18 % Polyacrylamide 分離ゲル :Tris-HCl(pH8.3),6-18 % Polyacrylamide 泳動バッファ :Tris(pH8.3), グリシン 泳動バッファ中のグリシン (Gly) の等電点は約 6 だから グリシンは ph8.3 では きく負に ph6.8 で はわずかに負に帯電している 6
7 ( 右図上 ) 濃縮ゲル (ph6.8) 中では グリシンの電荷は少なく 移動速度は Cl - イオン > SDS 化タンパク > Gly の順になる Cl - イオンは最もはやく流れるので Cl - イオンと Gly の間のイオン濃度が低下 = 抵抗が増 し この領域に い電圧がかかる そのため SDS 化タンパクと Gly は Cl - イオンを追いかけるようにして はやく進む しかし Cl - イオンとの境界付近では イオン濃度が い= 電圧は くないため 移動速度は遅くなる このようにして 濃縮ゲルと分離ゲルの境界付近で 的のタンパクが濃縮される (stacking は積み重なる くらいの意味 ) buffer stacking gel running gel buffer Gly SDS 化 タンパク Cl- イオン ( 右図下 ) 分離ゲル (ph8.3) 中では グリシンの荷電が きくなることで グリシンが SDS 化タンパクに先 し SDS 化タンパクの付近では電位が均 になる そこで SDS 化タンパクは分 量にしたがった移動速度で移動する ( つまり 分離される ) jp/ez/_userdata/2008_page_lecture.pdf( 改変 ) 2 EGF のシグナル伝達経路について説明せよ EGFR を介するシグナル伝達経路は細胞のがん化に深くかかわることから よく調べられている 下に すに主要な経路を 順に追っていこう EGF が受容体チロシンキナーゼである EGFR に結合すると EGFR は 量体化し 互いに互いの細胞内 ドメインをリン酸化して 活性化する EGFR の細胞内ドメインにはさまざまなアダプタータンパクが つく 図では きく 3 つの経路が されている 図の左側から順に 簡単に説明すると : (1)PLC 活性化 細胞膜の PIP3 を DG と IP3 に分解 IP3 は 胞体の Ca チャネルに作 してこれを開き 細胞質の Ca2+ 濃度が上昇 DG と Ca2+ は PKC を活性化 活性型 PKC は核に移 し 転写因 を活性化 (2)JAK 活性化 転写因 STAT シリーズが活性化し 核に移 (3)GRB 活性化 Sos を介して Ras 活性化 MAPK カスケード (MAPKKK MAPKK MAPK) 7
8 各種転写因 の活性化 以上のような各経路で 細胞増殖に必要な遺伝 の転写が活性化され 細胞増殖という effect が実現す る 3 EGF および β-actin の分 量を調べ 実験結果と 較して検討せよ 2-4 ですでに述べた 8
プロトコール集 ( 研究用試薬 ) < 目次 > 免疫組織染色手順 ( 前処理なし ) p2 免疫組織染色手順 ( マイクロウェーブ前処理 ) p3 免疫組織染色手順 ( オートクレーブ前処理 ) p4 免疫組織染色手順 ( トリプシン前処理 ) p5 免疫組織染色手順 ( ギ酸処理 ) p6 免疫
< 目次 > 免疫組織染色手順 ( 前処理なし ) p2 免疫組織染色手順 ( マイクロウェーブ前処理 ) p3 免疫組織染色手順 ( オートクレーブ前処理 ) p4 免疫組織染色手順 ( トリプシン前処理 ) p5 免疫組織染色手順 ( ギ酸処理 ) p6 免疫組織染色手順 ( ギ酸処理後 マイクロウェーブまたはオートクレーブ処理 )p7 抗原ペプチドによる抗体吸収試験 p8 ウエスタン ブロッティング
Western BLoT Immuno Booster
研究用 Western BLoT Immuno Booster 説明書 v201211 Western BLoT Immuno Booster は 抗体の反応性を増強させる成分を含む溶液で 抗体の希釈液に用いるだけで 抗原抗体反応を促進します 本製品は ウェスタンブロット ELISA 等の各種イムノアッセイに対応しており 各アッセイにおいて数倍から数十倍の検出感度向上が期待できます 西洋ワサビペルオキシダーゼ
Western BLoT Rapid Detect
研究用 Western BLoT Rapid Detect 説明書 v201212 Western BLoT Rapid Detect は 標識二次抗体の代わりに独自の IgG Detector(HRP labeled) を利用して一次抗体を検出するウェスタンブロッティング専用の検出試薬キットです 本製品を利用することで 標識二次抗体を用いて検出する従来法ではできなかった迅速検出 高感度検出 シグナルの増強
The Science of Western Blotting
メンブレンメーカーだから知っているウェスタンブロッティングのコツ ラボジャパン事業本部 バイオサイエンス営業部間瀬久 Contents 1 ウェスタンブロッティングの概要 2 電気泳動 & 転写 3 免疫検出 4 トラブルシューティング 5 吸引ろ過を用いた免疫反応 2 ウェスタンブロッティングの概要 3 ウェスタンブロッティングの概要 サンプル調製電気泳動転写免疫検出 タンパク質精製 分離 濃縮
図 B 細胞受容体を介した NF-κB 活性化モデル
60 秒でわかるプレスリリース 2007 年 12 月 17 日 独立行政法人理化学研究所 免疫の要 NF-κB の活性化シグナルを増幅する機構を発見 - リン酸化酵素 IKK が正のフィーッドバックを担当 - 身体に病原菌などの異物 ( 抗原 ) が侵入すると 誰にでも備わっている免疫システムが働いて 異物を認識し 排除するために さまざまな反応を起こします その一つに 免疫細胞である B 細胞が
プロトコル 細胞 増殖 / 毒性酸化ストレス分子生物学細胞内蛍光プローブ細胞染色ミトコンドリア関連試薬細菌研究用試薬膜タンパク質可溶化剤ラベル化剤二価性試薬イオン電極 その他 機能性有機材料 酵素 (POD,ALP) を標識したい 利用製品 < 少量抗体 (10μg) 標識用 > Ab-10 Rap
増殖 / 毒性酸化ストレス分子生物学内蛍光プローブ染色ミトコンドリア関連試薬細菌研究用試薬膜タンパク質可溶化剤ラベル化剤二価性試薬イオン電極 機能性有機材料 酵素 (PD,ALP) を標識したい 利用製品 < 少量抗体 (0μg) 標識用 > Ab-0 Rapid Peroxidase Labeling Kit < 抗体 タンパク質 (0-00μg) 標識用 > Peroxidase Labeling
先端生物工学演習Ⅱ 「タンパク質の電気泳動」
先端生物工学演習 Ⅱ タンパク質の電気泳動 2008 年 10 月 14 日 ( 旧 ) 進化生命システム学塚田幸治 1 話の中身 電気泳動という手法 ( 一般 ) アミノ酸の電荷とタンパク質の電荷 具体的な実験手法について ( 原理 ) Native( ( 構造や機能が破壊されていないタンパク質 ) SDS( ( 変性条件下でのタンパク質 ) 応用例 等電点電気泳動法と二次元電気泳動 非特異的染色法と特異的染色法
<4D F736F F D B82C982C282A282C482512E646F63>
サンプル条件および固定化分子の選択 Biacoreの実験ではセンサーチップに固定化する分子をリガンド それに対して結合を測定する分子をアナライトと呼びます いずれの分子をリガンドとし アナライトとするかは 実験系を構築する上で重要です 以下にサンプルに適したリガンド アナライトの設計方法やサンプルの必要条件などをご紹介します アナライト リガンド センサーチップ (1) タンパク質リガンドとしてもアナライトとしても用いることができます
一次サンプル採取マニュアル PM 共通 0001 Department of Clinical Laboratory, Kyoto University Hospital その他の検体検査 >> 8C. 遺伝子関連検査受託終了項目 23th May EGFR 遺伝子変異検
Department of Clinical Laboratory, Kyoto University Hospital 6459 8. その他の検体検査 >> 8C. 遺伝子関連検査受託終了項目 23th May. 2017 EGFR 遺伝子変異検査 ( 院内測定 ) c-erbb/egfr [tissues] 基本情報 8C051 c-erbb/egfr JLAC10 診療報酬 分析物 識別材料測定法
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ローディング コントロール抗体 アブカムならあなたにぴったりの コントロール抗体 が見つかるはずです ローディング コントロール抗体 (Loading control antibody) は ウエスタン ブロッティングにおけるポジティブ コントロールとなる抗体で 各レーンのサンプルが均等に泳動されていることの確認 ゲルからメンブレンへ確実に転写されていることの確認 また異なるサンプル中のターゲット
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60 秒でわかるプレスリリース 2006 年 6 月 23 日 独立行政法人理化学研究所 独立行政法人科学技術振興機構 細胞内のカルシウムチャネルに情報伝達を邪魔する 偽結合体 を発見 - IP3 受容体に IP3 と競合して結合するタンパク質 アービット の機能を解明 - 細胞分裂 細胞死 受精 発生など 私たちの生の営みそのものに関わる情報伝達は 細胞内のカルシウムイオンの放出によって行われています
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論文題目 腸管分化に関わる microrna の探索とその発現制御解析 氏名日野公洋 1. 序論 microrna(mirna) とは細胞内在性の 21 塩基程度の機能性 RNA のことであり 部分的相補的な塩基認識を介して標的 RNA の翻訳抑制や不安定化を引き起こすことが知られている mirna は細胞分化や増殖 ガン化やアポトーシスなどに関与していることが報告されており これら以外にも様々な細胞諸現象に関与していると考えられている
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3 ステップ アビジン - ビオチンシステム (SAB 法 ) とポリマー法 慶應義塾大学医学部病理学教室阿部仁 はじめに 免疫組織化学は Coons らが蛍光色素を抗体に標識した蛍光抗体法の技術を確立してから Singers のフェリチン抗体法を経て 1967 年に Nakane と Pierce により標識物質に西洋ワサビペルオキシダーゼ (horseradish peroxidase:hrp)
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ウェスタンブロッティング Osakada < セミドライ式ブロッティング装置使用 > 試薬類 転写バッファー [ph9.2] Tris base 5.8 g (48 mm) Glycine 2.9 g (39 mm) SDS 0.37 g (0.037%) Methanol 200 ml (20%) fill up to 1 L ポンソー 3R 溶液 ( 和光純薬 ) 10 PBS NaCl KCl
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研究用 TaKaRa PCR Human Papillomavirus Detection Set 説明書 v201703da 本製品は子宮頸癌において最も高頻度に検出される Human Papillomavirus(HPV)16 18 および 33 型をそれぞれ特異的に増幅し 検出するセットです HPV16 18 および 33 型の E6 を含む領域 (140 bp ただし HPV33 型は 141
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【Webinar】蛍光免疫染色の基礎
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60 秒でわかるプレスリリース 2006 年 4 月 13 日 独立行政法人理化学研究所 抗ウイルス免疫発動機構の解明 - 免疫 アレルギー制御のための新たな標的分子を発見 - がんやウイルスなど身体を蝕む病原体から身を守る物質として インターフェロン が注目されています このインターフェロンのことは ご存知の方も多いと思いますが 私たちが生まれながらに持っている免疫をつかさどる物質です 免疫細胞の情報の交換やウイルス感染に強い防御を示す役割を担っています
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酵素 : タンパク質の触媒 タンパク質 Protein 酵素 Enzyme 触媒 Catalyst 触媒 Cataylst: 特定の化学反応の反応速度を速める物質 自身は反応の前後で変化しない 酵素 Enzyme: タンパク質の触媒 触媒作用を持つタンパク質 第 3 回 : タンパク質はアミノ酸からなるポリペプチドである 第 4 回 : タンパク質は様々な立体構造を持つ 第 5 回 : タンパク質の立体構造と酵素活性の関係
リアルタイムPCRの基礎知識
1. リアルタイム PCR の用途リアルタイム PCR 法は 遺伝子発現解析の他に SNPs タイピング 遺伝子組み換え食品の検査 ウイルスや病原菌の検出 導入遺伝子のコピー数の解析などさまざまな用途に応用されている 遺伝子発現解析のような定量解析は まさにリアルタイム PCR の得意とするところであるが プラス / マイナス判定だけの定性的な解析にもその威力を発揮する これは リアルタイム PCR
SSH資料（徳島大学総合科学部 佐藤）
だ液タンパク質 (α- アミラーゼ ) の分析 ~ 電気泳動による決定と酵素活性の測定 ~ 人の体はさまざまなタンパク質から成り立っている タンパク質とは 20 種のアミノ酸という物質が 100 個以上重合して出来る生体高分子である 髪の毛 爪 皮ふなどもタンパク質からできており 生体内のタンパク質には これ以外にもいろいろな種類と機能がある このうち ある化学反応を触媒するタンパク質を特に酵素 (
Microsoft Word - タンパク質溶液内酵素消化 Thermo
タンパク質の溶液内酵素溶液内酵素消化 ( 質量分析用サンプル調製 ) 質量分析計によるタンパク質解析においては 一般的にタンパク質を還元 アルキル化した後にトリプシン等で酵素消化して得られた消化ペプチドサンプルが用いられます 本資料ではこのサンプル調製について 専用キットを用いて行う方法 各種試薬や酵素を用いて行う方法 また関連情報として タンパク質の定量法についてご紹介しています 内容 1 培養細胞の酵素消化
FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF Vol. 32, pp , 2004 FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF
FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF Vol. 32, pp. 47 51, 2004 FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF 2D-DIGE 21 DNA 2 Sypro Ruby 15 two-dimensional
の活性化が背景となるヒト悪性腫瘍の治療薬開発につながる 図4 研究である 研究内容 私たちは図3に示すようなyeast two hybrid 法を用いて AKT分子に結合する細胞内分子のスクリーニングを行った この結果 これまで機能の分からなかったプロトオンコジン TCL1がAKTと結合し多量体を形
AKT活性を抑制するペプチ ド阻害剤の開発 野口 昌幸 北海道大学遺伝子病制御研究所 教授 広村 信 北海道大学遺伝子病制御研究所 ポスドク 岡田 太 北海道大学遺伝子病制御研究所 助手 柳舘 拓也 株式会社ラボ 研究員 ナーゼAKTに結合するタンパク分子を検索し これまで機能の 分からなかったプロトオンコジンTCL1がAKTと結合し AKT の活性化を促す AKT活性補助因子 であることを見い出し
初級 視細胞桿体におけるシグナル伝達概要 : 網膜は外界からの光を受けて電気信号に変換して脳へ送るが 視 細胞はその最初に位置する光信号 電気信号変換器である ( 図 1) 光によって光受容体タンパク質ロドプシンが光異性化され 最終的には細胞 ディスク 図 1 視細胞桿体の構造図 2 桿体の電流応答
初級 EGFR におけるリガンドとレセプターの反応 概要 :EGF レセプター (EGFR/ErbB1R) は上皮系や神経系など多くの細胞膜表面に存在し 増殖や成長の制御に関わる上皮成長因子 (EGF) が EGFR に結合することで MAPK 経路などの活性化を行う受容体型チロシンキナーゼである EGF の結合によって EGFR 二量体が安定化し これによって細胞質側の C 末領域にあるリン酸化サイトが相図
Taro-kv12250.jtd
ニューカッスル病 マレック病 ( ニューカッスル病ウイルス由来 F 蛋白遺伝子導入マレック病ウイルス 1 型 ) 凍結生ワクチン 平成 22 年 8 月 12 日 ( 告示第 2288 号 ) 新規追加 ニューカッスル病ウイルスのF 蛋白をコードする遺伝子を弱毒マレック病ウイルス (1 型 ) に挿入して得られた組換え体ウイルスを培養細胞で増殖させて得た感染細胞浮遊液を凍結したワクチンである 1 小分製品の試験
学位論文の内容の要旨 論文提出者氏名 小川憲人 論文審査担当者 主査田中真二 副査北川昌伸 渡邉守 論文題目 Clinical significance of platelet derived growth factor -C and -D in gastric cancer ( 論文内容の要旨 )
学位論文の内容の要旨 論文提出者氏名 小川憲人 論文審査担当者 主査田中真二 副査北川昌伸 渡邉守 論文題目 Clinical significance of platelet derived growth factor -C and -D in gastric cancer ( 論文内容の要旨 ) < 要旨 > platelet derived growth factor (PDGF 血小板由来成長因子)-C,
表1-4B.ai
補剤の免疫調節作用における骨髄由来免疫抑制細胞 (MDSC) の役割 申請代表者 堀江一郎 東京理科大学薬学部応用薬理学研究室 助教 所外共同研究者 礒濱洋一郎 東京理科大学薬学部応用薬理学研究室 教授 所内共同研究者 済木育夫 病態生化学分野 教授 報告セミナー要旨 背景および目的 補剤には免疫機能調節作用があり, がんや炎症性疾患などの様々な免疫異常を伴う疾患での有効性が示されている. しかし,
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ELISA 用プレート ( フ ロッキンク レスタイフ ) ( 旧称 :New ELISA plate) 住友ベークライト株式会社 S- バイオ事業部 - 1 - ELISA 用プレート ( フ ロッキンク レスタイフ ) の特長 当社独自の表面処理技術によりブロッキング 操作なしで低いバックグランドを提供します 血清などに含まれる種々タンパク質の非特異吸着を抑制します 予めブロッキング処理がされている為
生理学 １章 生理学の基礎 1-1. 細胞の主要な構成成分はどれか １ タンパク質 ２ ビタミン ３ 無機塩類 ４ ＡＴＰ 第５回 按マ指 (1279) 1-2. 細胞膜の構成成分はどれか １ 無機りん酸 ２ リボ核酸 ３ りん脂質 ４ 乳酸 第６回 鍼灸 (1734) E L 1-3. 細胞膜につ
の基礎 1-1. 細胞の主要な構成成分はどれか １ タンパク質 ２ ビタミン ３ 無機塩類 ４ ＡＴＰ 第５回 (1279) 1-2. 細胞膜の構成成分はどれか １ 無機りん酸 ２ リボ核酸 ３ りん脂質 ４ 乳酸 第６回 (1734) 1-3. 細胞膜について正しい記述はどれか １ 糖脂質分子が規則正しく配列している ２ イオンに対して選択的な透過性をもつ ３ タンパク質分子の二重層膜からなる ４
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細胞の情報伝達 (1) 何を学習するか細胞が環境からシグナル ( 刺激 ) を受けて 細胞の状態が変化するときに 細胞内でどのような現象が起きているか を知る分子の大変複雑な連続反応であるので 反応の最初の段階を中心に見ていく ( 共通の現象が多いから ; 疾患の治療の標的となる分子が多い ) これを知るために (2) リガンドの拡散様式 ( 図 16-3) リガンドを発現する細胞とこれを受け取る細胞との
ChIP Reagents マニュアル
ChIP Reagents ~ クロマチン免疫沈降 (ChIP) 法用ストック溶液セット ~ マニュアル ( 第 1 版 ) Code No. 318-07131 NIPPON GENE CO., LTD. 目次 Ⅰ 製品説明 1 Ⅱ セット内容 1 Ⅲ 保存 2 Ⅳ 使用上の注意 2 Ⅴ 使用例 2 < 本品以外に必要な試薬 機器など> 2 1) 磁気ビーズと一次抗体の反応 3 2)-1 細胞の調製
フォルハルト法 NH SCN の標準液または KSCN の標準液を用い,Ag または Hg を直接沈殿滴定する方法 および Cl, Br, I, CN, 試料溶液に Fe SCN, S 2 を指示薬として加える 例 : Cl の逆滴定による定量 などを逆滴定する方法をいう Fe を加えた試料液に硝酸
沈殿滴定とモール法 沈殿滴定沈殿とは溶液に試薬を加えたり加熱や冷却をしたとき, 溶液から不溶性固体が分離する現象, またはその不溶性固体を沈殿という 不溶性固体は, 液底に沈んでいいても微粒子 ( コロイド ) として液中を浮遊していても沈殿と呼ばれる 沈殿滴定とは沈殿が生成あるいは消失する反応を利用した滴定のことをいう 沈殿が生成し始めた点, 沈殿の生成が完了した点, または沈殿が消失した点が滴定の終点となる
Microsoft Word - Fluo4 Direct Calcium Assay Kits_J1_3Apr2009.doc
Fluo-4 Direct Calcium Assay Kit カタログ番号 F10471 F10472 F10473 表 1. 製品内容および保存方法 試薬 Fluo-4 Direct カルシウムアッセイ試薬 (Component A) 量 F10471 F10472 F10473 10 10 ml 1 100 ml 1 1 L 水溶性プロベネシド (Component B) 2 77 mg 2
TaKaRa PCR Human Papillomavirus Typing Set
研究用 TaKaRa PCR Human Papillomavirus Typing Set 説明書 v201703da 本製品は さまざまなタイプの Human Papillomavirus(HPV) において塩基配列の相同性の高い領域に設定したプライマーを consensus primer として用いることにより HPV の E6 と E7 を含む領域 (228 ~ 268 bp) を共通に PCR
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1 要約 Pin1 inhibitor PiB prevents tumor progression by inactivating NF-κB in a HCC xenograft mouse model (HCC 皮下移植マウスモデルにおいて Pin1 インヒビターである PiB は NF-κB 活性を低下させることにより腫瘍進展を抑制する ) 千葉大学大学院医学薬学府先端医学薬学専攻 ( 主任
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05-07 Can Get Signal Immunoreaction Enhancer Solution (Code No. NKB-101, NKB-101T, NKB-201, NKB-301) 取扱説明書 TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN A3302K - 18 - - 目次 - [1] はじめに 1 [2] 製品内容
PanaceaGel ゲル内細胞の観察 解析方法 1. ゲル内細胞の免疫染色 蛍光観察の方法 以下の 1-1, 1-2 に関して ゲルをスパーテルなどで取り出す際は 4% パラホルムアルデヒドで固定してから行うとゲルを比較的簡単に ( 壊さずに ) 取り出すことが可能です セルカルチャーインサートを
1. ゲル内細胞の免疫染色 蛍光観察の方法 以下の 1-1, 1-2 に関して ゲルをスパーテルなどで取り出す際は 4% パラホルムアルデヒドで固定してから行うとゲルを比較的簡単に ( 壊さずに ) 取り出すことが可能です セルカルチャーインサートを用いた培養ではインサート底面をメス等で切り取ることで またウェルプレートを用いた培養ではピペットの水流でゲル ( 固定後 ) を底面から浮かすことで 回収しやすくなります
コラーゲンを用いる細胞培養マニュアル
コラーゲンを用いる細胞培養マニュアル コラーゲン ゲル マトリックス培養法 (Collagen Gel Matrix Culture) の 実際とその応用例について 目次 Ⅰ. 細胞培養について 1 Ⅰ-1. はじめに Ⅰ-2. 細胞培養の基礎 Ⅰ-3. コラーゲンを用いる細胞培養 Ⅰ-4. 細胞の基質としてのコラーゲンの役割 Ⅱ. コラーゲンについて 5 Ⅱ-1. コラーゲンの分子構造と諸性質
Microsoft Word - FMB_Text(PCR) _ver3.doc
2.PCR 法による DNA の増幅 現代の分子生物学において その進歩に最も貢献した実験法の1つが PCR(Polymerase chain reaction) 法である PCR 法は極めて微量の DNA サンプルから特定の DNA 断片を短時間に大量に増幅することができる方法であり 多大な時間と労力を要した遺伝子クローニングを過去のものとしてしまった また その操作の簡便さから 現在では基礎研究のみならず臨床遺伝子診断から食品衛生検査
PTM PTM Cell Signaling Technology CST 1,000 CST CST p.13 CST CST 2
A Guide to successful Western Blotting from Cell Signaling Technology www.cstj.co.jp WB PTM PTM Cell Signaling Technology CST 1,000 CST CST p.13 CST CST www.cstj.co.jp/wbprotocol 2 1 tissue or cells +
培養細胞からの Total RNA 抽出の手順 接着細胞のプロトコル 1. プレート ( またはウエル ) より培地を除き PBSでの洗浄を行う 2. トリプシン処理を行い 全量を1.5ml 遠心チューブに移す スクレイパーを使って 細胞を掻き集める方法も有用です 3. 低速遠心 ( 例 300 g
Maxwell RSC simplyrna Cells / Tissue Kit ( カタログ番号 AS1340/AS1390) 簡易マニュアル 注意 : キットを受け取りましたら 1-Thioglycerolを取り出し キット箱は室温で保存してください 取り出した1-Thioglycerolは2~10 で保存してください ご用意いただくもの 細胞 組織の両方の場合で共通 ボルテックスミキサー ピペットマン
1. ウエスタンブロッティング 電気泳動で分離したゲル中のタンパク質を膜 ( メン ブラン ) に移す方法をウエスタンブロッティング (Western Blotting) と言っています わざわざ膜に 移すのは 抗原抗体反応等を利用して特異的検出 ( 目的のタンパク質だけを検出 ) を行なう為 ゲル
電気泳動と 51 年 BIOSCIENCE & BIOTECHNOLOGY 1. ウエスタンブロッティング 電気泳動で分離したゲル中のタンパク質を膜 ( メン ブラン ) に移す方法をウエスタンブロッティング (Western Blotting) と言っています わざわざ膜に 移すのは 抗原抗体反応等を利用して特異的検出 ( 目的のタンパク質だけを検出 ) を行なう為 ゲル のままではせっかく分離した試料
抑制することが知られている 今回はヒト子宮内膜におけるコレステロール硫酸のプロテ アーゼ活性に対する効果を検討することとした コレステロール硫酸の着床期特異的な発現の機序を解明するために 合成酵素であるコ レステロール硫酸基転移酵素 (SULT2B1b) に着目した ヒト子宮内膜は排卵後 脱落膜 化
論文の内容の要旨 論文題目 着床期ヒト子宮内膜におけるコレステロール硫酸の発現調節機序及び機能の解析 指導教員武谷雄二教授 東京大学大学院医学系研究科 平成 15 年 4 月入学 医学博士課程 生殖 発達 加齢医学専攻 清末美奈子 緒言 着床とは 受精卵が分割し形成された胚盤胞が子宮内膜上皮へ接着 貫通し 子 宮内膜間質を浸潤して絨毛構造を形成するまでの一連の現象をいう 胚盤胞から分化した トロフォブラストが浸潤していく過程で
( 様式甲 5) 学位論文内容の要旨 論文提出者氏名 論文審査担当者 主査 教授 森脇真一 井上善博 副査副査 教授教授 東 治 人 上 田 晃 一 副査 教授 朝日通雄 主論文題名 Transgene number-dependent, gene expression rate-independe
( 様式甲 5) 学位論文内容の要旨 論文提出者氏名 論文審査担当者 主査 森脇真一 井上善博 副査副査 東 治 人 上 田 晃 一 副査 朝日通雄 主論文題名 Transgene number-dependent, gene expression rate-independent rejection of D d -, K d -, or D d K d -transgened mouse skin
日本標準商品分類番号 カリジノゲナーゼの血管新生抑制作用 カリジノゲナーゼは強力な血管拡張物質であるキニンを遊離することにより 高血圧や末梢循環障害の治療に広く用いられてきた 最近では 糖尿病モデルラットにおいて増加する眼内液中 VEGF 濃度を低下させることにより 血管透過性を抑制す
日本標準商品分類番号 872491 カリジノゲナーゼの血管新生抑制作用 カリジノゲナーゼは強力な血管拡張物質であるキニンを遊離することにより 高血圧や末梢循環障害の治療に広く用いられてきた 最近では 糖尿病モデルラットにおいて増加する眼内液中 VEGF 濃度を低下させることにより 血管透過性を抑制することが示されたが 血管新生に対するカリジノゲナーゼの影響を評価した報告はない そこで今回 網膜血管新生に対するカリジノゲナーゼの役割を同定するため
Microsoft Word ab205921_自動染色プロトコール_YU_IS.docx
抗 PD-L1 抗体 [clone 28-8] 動免疫組織染 装置別プロトコール PD-L1 RabMAb [clone 28-8] (ab205921) BioGenex 社 i6000( オフライン抗原賦活化 ) Leica 社 BOND RX( オンライン抗原賦活化 ) Ventana 社 Ultra( オフライン抗原賦活化 ) Dako 社 Omnis BioGenex 社 i6000 プロトコール
-119-
-119- - 日中医学協会助成事業 - 前立腺がんの造骨性骨転移のメカニズム解明 研究者氏名中国所属機関日本研究機関指導責任者共同研究者 王麗楊中国医科大学大阪大学歯学研究科教授米田俊之相野誠 要旨 近年日本の男性において急増している前立腺がんは死亡率の第 2 位にランクされている 80% 以上の前立腺癌は造骨性の骨転移を示し 患者の QOL および生存期間を著しく低下させる 前立腺がん発生のメカニズムには未だ不明な点が多く
BKL Kit (Blunting Kination Ligation Kit)
製品コード 6126/6127 BKL Kit (Blunting Kination Ligation Kit) 説明書 PCR 産物を平滑末端ベクターにクローニングする場合 使用するポリメラーゼ酵素の種類により 3' 末端に余分に付加された塩基を除去し さらに 5' 末端をリン酸化する必要があります 本製品は これらの一連の反応を簡便に短時間に行うためのキットです PCR 産物の末端平滑化とリン酸化を同時に行うことにより
ｎｓｇ０１－０４／ｋｙ１９１０６３１６９９０００１０７８１
β α β β α α β β β β β Ω Ω β β β β β α β δ β β β β A A β β β β 図 1 膵島内 β 細胞の電気的活動と膵島細胞内 Ca 2+ 濃度の変動. A は膵島内の β 細胞に微小電極 (300MΩ) を刺入して得た細胞内記録である. 実験中の細胞外灌流液は 36 に保たれた Krebs-Ringer-bicarbonate 溶液 (135mM Na
本日の内容 HbA1c 測定方法別原理と特徴 HPLC 法 免疫法 酵素法 原理差による測定値の乖離要因
HbA1c 測定系について ~ 原理と特徴 ~ 一般社団法人日本臨床検査薬協会 技術運営委員会副委員長 安部正義 本日の内容 HbA1c 測定方法別原理と特徴 HPLC 法 免疫法 酵素法 原理差による測定値の乖離要因 HPLC 法 HPLC 法原理 高速液体クロマトグラフィー 混合物の分析法の一つ 固体または液体の固定相 ( 吸着剤 ) 中で 液体または気体の移動相 ( 展開剤 ) に試料を加えて移動させ
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上原記念生命科学財団研究報告集, 26 (2012) 75. 哺乳類のゴルジ体ストレス応答の分子機構の解明 吉田秀郎 Key words: ゴルジ体, 小胞体, 転写, ストレス応答, 細胞小器官 兵庫県立大学大学院生命理学研究科生体物質化学 Ⅱ 講座 緒言細胞内には様々な細胞小器官が存在して細胞の機能を分担しているが, その存在量は細胞の需要に応じて厳密に制御されており, 必要な時に必要な細胞小器官が必要な量だけ増強される.
抗体定量用アフィニティークロマトグラフィー
59 抗体定量用アフィニティークロマトグラフィーカラム TSKgel Protein A 5PW の開発 バイオサイエンス事業部開発部セパレーション G 藤井智荒木康祐 1. はじめに近年 バイオ医薬品市場の成長は著しく 特に免疫グロブリン G(IgG) を中心とした抗体医薬品については 212 年に 46 億ドルであった市場規模が 218 年には 772 億ドルまで拡大すると予測されている 1)
タンパク質は 電気泳動後にタンパク質を可視化するための最も簡単で迅速な方法です バイオ ラッドは感度 定量性 質量分析計対応に合わせた可視 蛍光剤を取り扱っています CBB クマシーブリリアントブルーは を行ったゲル中のタンパク質をするための最も一般的な方法です バイオ ラッドでは 用途に合わせて2
ゲル剤 バイオ ラッドでは ゲル中のタンパク質を検出する剤を数多く取り扱っています 感度 操作性 再現性 定量性 電気泳動後のアプリケーションへの影響など サンプルと目的に応じて最適な剤は異なります 剤を選択する際に 下記の剤セレクションガイドをご参照ください 剤セレクションガイド 製品名 用途 プロセス数 所要時間目安 最高感度 事前調製 特徴 CBB Bio-Safe CBB G-250 ステイン
2. ポイント EGFR 陽性肺腺癌の患者さんにおいて EGFR 阻害剤治療中に T790M 耐性変異による増悪がみられた際にはオシメルチニブ ( タグリッソ ) を使用することが推奨されており 今後も多くの患者さんがオシメルチニブによる治療を受けることが想定されます オシメルチニブによる治療中に約
EGFR 変異陽性肺がんに対する新規耐性克服療法を発見 ~ 今後予想されるオシメルチニブ耐性の克服へ ~ 1. 概要 肺がんは我が国において現在がんによる死因の1 位であり さらなる増加が予測されています EGFR( 上皮成長因子受容体 ) 遺伝子変異は進行非小細胞肺がんの 3~4 割に見つかり EGFR 阻害薬が非常に高い効果を示しますが 1 年程度で耐性を生じて再増悪してしまいます この耐性のおよそ半数を占めるのが
検体採取 患者の検査前準備 検体採取のタイミング 記号添加物 ( キャップ色等 ) 採取容器採取材料採取量測定材料ノ他材料 DNA 検体ラベル ( 単項目オーダー時 ) ホンハ ンテスト 注 JAK2/CALR. 外 N60 氷 採取容器について その他造血器 **-**
JAK2-DNA point mutation analysis / CALR mutation analysis 連絡先 : 3664 基本情報 8C491 JAK2 JLAC10 診療報酬 分析物 項目 RML00820 認 識別 9951 DNA 点突然変異解析 定範囲 (20160914) 材料 099 その他の材料測定法 サンプル種類 結果識別 測定方法 第 2 章 特掲診療料 D006-2
Bacterial 16S rDNA PCR Kit
研究用 Bacterial 16S rdna PCR Kit 説明書 v201802da 微生物の同定は 形態的特徴 生理 生化学的性状 化学分類学的性状などを利用して行われますが これらの方法では同定までに時間を要します また 同定が困難な場合や正しい結果が得られない場合もあります 近年 微生物同定にも分子生物学を利用した方法が採用されるようになり 微生物の持つ DNA を対象として解析を行う方法が活用されています
生物学に関する実験例 - 生化学 / 医療に関する実験例 ラジオアッセイ法によるホルモン測定 [ 目的 ] 本実習では, 放射免疫測定 (Radioimmunoassay,RIA) 法による血中インスリンとイムノラジオメトリックアッセイ ( 免疫放射定測定 Immunoradiometric ass
![生物学に関する実験例 - 生化学 / 医療に関する実験例 ラジオアッセイ法によるホルモン測定 [ 目的 ] 本実習では, 放射免疫測定 (Radioimmunoassay,RIA) 法による血中インスリンとイムノラジオメトリックアッセイ ( 免疫放射定測定 Immunoradiometric ass](/thumbs/104/163903931.jpg "生物学に関する実験例 - 生化学 / 医療に関する実験例 ラジオアッセイ法によるホルモン測定 [ 目的 ] 本実習では, 放射免疫測定 (Radioimmunoassay,RIA) 法による血中インスリンとイムノラジオメトリックアッセイ ( 免疫放射定測定 Immunoradiometric ass")
生物学に関する実験例 - 生化学 / 医療に関する実験例 ラジオアッセイ法によるホルモン測定 [ 目的 ] 本実習では, 放射免疫測定 (Radioimmunoassay,RIA) 法による血中インスリンとイムノラジオメトリックアッセイ ( 免疫放射定測定 Immunoradiometric assay, IRMA) 法による血清中のレニンを定量を通して 今日用いられている種々のインビトロ検査法の原理並びに両者の違い等を理解する
前立腺癌は男性特有の癌で 米国においては癌死亡者数の第 2 位 ( 約 20%) を占めてい ます 日本でも前立腺癌の罹患率 死亡者数は急激に上昇しており 現在は重篤な男性悪性腫瘍疾患の1つとなって図 1 います 図 1 初期段階の前立腺癌は男性ホルモン ( アンドロゲン ) に反応し増殖します そ
再発した前立腺癌の増殖を制御する新たな分子メカニズムの発見乳癌治療薬が効果的 発表者筑波大学先端領域学際研究センター教授柳澤純 (junny@agbi.tsukuba.ac.jp TEL: 029-853-7320) ポイント 女性ホルモンが制御する新たな前立腺癌の増殖 細胞死メカニズムを発見 女性ホルモン及び女性ホルモン抑制剤は ERβ 及び KLF5 を通じ FOXO1 の発現量を変化することで前立腺癌の増殖
組織からのゲノム DNA 抽出キット Tissue Genomic DNA Extraction Mini Kit 目次基本データ 3 キットの内容 3 重要事項 4 操作 4 サンプル別プロトコール 7 トラブルシューティング 9 * 本製品は研究用です *
組織からのゲノム DNA 抽出キット Tissue Genomic DNA Extraction Mini Kit 目次基本データ 3 キットの内容 3 重要事項 4 操作 4 サンプル別プロトコール 7 トラブルシューティング 9 * 本製品は研究用です * 2 本キットは動物の組織からトータル DNA を迅速に効率よく抽出するようにデザインされています また 細菌 固定組織 酵母用のプロトコールも用意しています
Microsoft Word - Zenon Mouse IgG Labeling Kit_J1_28Apr2008.doc
製品情報 2008 年 4 月 28 日改訂 Zenon Mouse IgG Labeling Kit はじめに ひとこと 届いた製品はすぐに下記の条件下で保存してください : 2~6 C 遮光条件下 励起 / 蛍光波長 : 表 1 参照 Zenon Mouse IgG Labeling Kit は 抗体コンジュゲート生成のための 迅速かつ汎用的で信頼性のある方法を提供します しかも 出発物質はごく少量
検体採取 患者の検査前準備 検体採取のタイミング 記号 添加物 ( キャップ色等 ) 採取材料 採取量 測定材料 P EDTA-2Na( 薄紫 ) 血液 7 ml DNA 検体ラベル ( 単項目オーダー時 ) ホンハ ンテスト 注 JAK2/CALR. 外 N60 氷 採取容器について
0879010 8. その他の検体検査 >> 8C. 遺伝子関連検査 >> 8C491.JAK2 V617F 遺伝子変異検査 JAK2-DNA point mutation analysis / CALR mutation analysis 連絡先 : 3664 基本情報 8C491 JAK2 分析物 JLAC10 診療報酬 識別 9951 DNA 点突然変異解析 材料 019 全血 ( 添加物入り
els05.pdf
Web で学ぶ 平滑表面上に形成された高分子電解質積層膜のゼータ電位 本資料の掲載情報は, 著作権により保護されています 本情報を商業利用を目的として, 販売, 複製または改ざんして利用することはできません 540-0021 1 2 TEL.(06)6910-6522 192-0082 1-6 LK TEL.(042)644-4951 980-0021 TEL.(022)208-9645 460-0008
妊娠認識および胎盤形成時のウシ子宮におけるI型IFNシグナル調節機構に関する研究 [全文の要約]
![妊娠認識および胎盤形成時のウシ子宮におけるI型IFNシグナル調節機構に関する研究 [全文の要約]](/thumbs/93/111654027.jpg "妊娠認識および胎盤形成時のウシ子宮におけるI型IFNシグナル調節機構に関する研究 [全文の要約]")
Title 妊娠認識および胎盤形成時のウシ子宮における I 型 IFN シグナル調節機構に関する研究 [ 全文の要約 ] Author(s) 白水, 貴大 Issue Date 2017-03-23 Doc URL http://hdl.handle.net/2115/65952 Type theses (doctoral - abstract of entire text) Note この博士論文全文の閲覧方法については
MLPA 法 Q&A 集
MLPA 法 Q&A 集 目次 1. MLPA 法の導入 Q1. 導入にあたり 何が必要になりますか? Q2. 実験にはどのようなサンプルが必要でしょうか? Q3. サンプルDNAはどれくらい用意すれば良いですか? Q4. キャピラリーシーケンサが自施設に無い場合でも実験はできますか? Q5. FFPE 検体でも実験はできますか? 2. 実験のセットアップ Q1. 実験において重要なポイントはありますか?
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アフィニティービーズのご紹介 住友ベークライト株式会社 S- バイオ事業部 - 1 - 製品概要 生体分子 ( タンパク質や核酸など ) のアプリケーションに幅広く対応できるアフィニティ精製用担体 ( 球状ビーズ ) です ビーズ表面に施した弊社独自の表面処理により非特異吸着が高度に抑制されています 高 S/N 比を実現! ビーズ表面の活性エステル基がアミノ基 (-NH2) をもつリガンド ( タンパク質
生物有機化学
質問への答え 速い 書き込みが追い付かない 空欄を開いたことを言ってほしいなるべくゆっくりやります ただし 生化学をできるだけ網羅し こんなの聞いたことない というところをなるべく残さないようにと思っています 通常の講義よりは速いでしょう 試験では細かいことは聞きません レーザーポインターが見にくい アンカータンパク質の内側 外側とは? 細胞内と細胞外です 動画の場所 Youtube で Harvard
2019 年 3 月 28 日放送 第 67 回日本アレルギー学会 6 シンポジウム 17-3 かゆみのメカニズムと最近のかゆみ研究の進歩 九州大学大学院皮膚科 診療講師中原真希子 はじめにかゆみは かきたいとの衝動を起こす不快な感覚と定義されます 皮膚疾患の多くはかゆみを伴い アトピー性皮膚炎にお
2019 年 3 月 28 日放送 第 67 回日本アレルギー学会 6 シンポジウム 17-3 かゆみのメカニズムと最近のかゆみ研究の進歩 九州大学大学院皮膚科 診療講師中原真希子 はじめにかゆみは かきたいとの衝動を起こす不快な感覚と定義されます 皮膚疾患の多くはかゆみを伴い アトピー性皮膚炎においてはかゆみが診断基準の基本項目にもあげられる重要な要素となっています 執拗なかゆみの持続により 集中力の低下や不眠が生じ日常生活に悪影響を及ぼし
報道発表資料 2006 年 8 月 7 日 独立行政法人理化学研究所 国立大学法人大阪大学 栄養素 亜鉛 は免疫のシグナル - 免疫系の活性化に細胞内亜鉛濃度が関与 - ポイント 亜鉛が免疫応答を制御 亜鉛がシグナル伝達分子として作用する 免疫の新領域を開拓独立行政法人理化学研究所 ( 野依良治理事
60 秒でわかるプレスリリース 2006 年 8 月 7 日 独立行政法人理化学研究所 国立大学法人大阪大学 栄養素 亜鉛 は免疫のシグナル - 免疫系の活性化に細胞内亜鉛濃度が関与 - 私たちの生命維持を行うのに重要な役割を担う微量金属元素の一つとして知られていた 亜鉛 この亜鉛が欠乏すると 味覚障害や成長障害 免疫不全 神経系の異常などをきたします 理研免疫アレルギー科学総合研究センターサイトカイン制御研究グループと大阪大学の研究グループは
研究成果報告書
QT LQT LQT1 KCNQ1 KCNQ1 I Ks K + KCNE1 I Ks GqPCRGq KCNQ1 GqPCR AT 1 R α 1 α 1 AR α 1 AR KCNQ1 GqPCR KCNQ1 KCNQ1 KCNQ1 HaloTag KCNQ1-Halo Halo KCNQ1-Halo KCNQ1 KCNQ1 GFP ph uorin KCNQ1 KCNQ1 KCNQ1 KCNQ1
Microsoft Word - Fluo4 NW Calcium Assay KitsJ1_20Jun2006.doc
製品情報 2006 年 10 月 20 日改訂 Fluo-4 NW Calcium Assay Kit(F36205 F36206) F36205 Fluo-4 NW Calcium Assay Kit (high-throughput) *for 100 microplates* F36206 Fluo-4 NW Calcium Assay Kit (starter pack with buffer)
Gen とるくん™（酵母用）High Recovery
研究用 Gen とるくん ( 酵母用 ) High Recovery 説明書 v201510da Gen とるくん ( 酵母用 )High Recovery は 細胞壁分解酵素による酵母菌体処理と塩析による DNA 精製の組み合わせにより 効率良く酵母ゲノム DNA を抽出 精製するためのキットです 本キットを用いた酵母ゲノム DNA 調製操作は 遠心による酵母菌体の回収 GenTLE Yeast
MEGALABEL™
研究用 MEGALABEL 説明書 v201711 MEGALABEL は [γ- 32 P]ATP と T4 Polynucleotide Kinase を用いて DNA の 5' 末端を効率よく標識するためのキットです 本製品は T4 Polynucleotide Kinase を用いたリン酸化反応 交換反応それぞれに 独自の Buffer 系を採用し 末端形状によらず 10 6 cpm/pmol
Microsoft PowerPoint - 2_（廣瀬宗孝）.ppt
TrkA を標的とした疼痛と腫瘍増殖 に効果のあるペプチド 福井大学医学部 器官制御医学講座麻酔 蘇生学領域 准教授 廣瀬宗孝 1 研究背景 癌による痛みはWHOの指針に沿って治療すれば 8 割の患者さんで痛みが取れ 残りの内 1 割は痛みの専門医の治療を受ければ痛みが取れる しかし最後の1 割は QOLを良好に保ったまま痛み治療を行うことは困難であるのが現状である TrkAは神経成長因子 (NGF)
基質溶液 ( 脂質成分を含む製品では 本手順はデータの精度に大きく影響します 本手順の記載は特に厳守ください ) 添付の基質溶液は希釈不要です 融解し室温に戻した後 使用直前に十分に懸濁してください (5 分間の超音波処理を推奨いたします ) 解凍後の基質溶液の残りは 繰り返しの凍結融解を避けるため
QS S Assist KINASE _ADP-Glo TM Kit 測定法の概要 本アッセイ系は KINASE による基質へのリン酸転移反応を ATP の消費を指標に Luminescent ADP Detection Assay (ADP-Glo TM ) 法で検出するものです 本キットにはリン酸化反応に必要なアッセイバッファー 酵素希釈バッファー 酵素 基質 および検出試薬に添加する MgCl
報道発表資料 2002 年 8 月 2 日 独立行政法人理化学研究所 局所刺激による細胞内シグナルの伝播メカニズムを解明 理化学研究所 ( 小林俊一理事長 ) は 細胞の局所刺激で生じたシグナルが 刺激部位に留まるのか 細胞全体に伝播するのか という生物学における基本問題に対して 明確な解答を与えま
報道発表資料 2002 年 8 月 2 日 独立行政法人理化学研究所 局所刺激による細胞内シグナルの伝播メカニズムを解明 理化学研究所 ( 小林俊一理事長 ) は 細胞の局所刺激で生じたシグナルが 刺激部位に留まるのか 細胞全体に伝播するのか という生物学における基本問題に対して 明確な解答を与えました ミシガン大学 ( 高山秀一講師 ) および大阪大学 ( 松田道行教授 ) の協力のもと 理研脳科学総合研究センター
関係があると報告もされており 卵巣明細胞腺癌において PI3K 経路は非常に重要であると考えられる PI3K 経路が活性化すると mtor ならびに HIF-1αが活性化することが知られている HIF-1αは様々な癌種における薬理学的な標的の一つであるが 卵巣癌においても同様である そこで 本研究で
( 様式甲 5) 氏 名 髙井雅聡 ( ふりがな ) ( たかいまさあき ) 学 位 の 種 類 博士 ( 医学 ) 学位授与番号 甲 第 号 学位審査年月日 平成 27 年 7 月 8 日 学位授与の要件 学位規則第 4 条第 1 項該当 Crosstalk between PI3K and Ras pathways via 学位論文題名 Protein Phosphatase 2A in human
研究の詳細な説明 1. 背景病原微生物は 様々なタンパク質を作ることにより宿主の生体防御システムに対抗しています その分子メカニズムの一つとして病原微生物のタンパク質分解酵素が宿主の抗体を切断 分解することが知られております 抗体が切断 分解されると宿主は病原微生物を排除することが出来なくなります
病原微生物を退治する新たな生体防御システムを発見 感染症の予防 治療法開発へ貢献する成果 キーワード : 病原性微生物 抗体 免疫逃避 免疫活性化 感染防御 研究成果のポイント 病原微生物の中には 免疫細胞が作る抗体の機能を無効化し 免疫から逃れるものの存在が知られていた 今回 病原微生物に壊された抗体を認識し 病原微生物を退治する新たな生体防御システムを発見 本研究成果によりマイコプラズマやインフルエンザなど
60 秒でわかるプレスリリース 2008 年 2 月 19 日 独立行政法人理化学研究所 抗ウイルス反応を増強する重要分子 PDC-TREM を発見 - 形質細胞様樹状細胞が Ⅰ 型インターフェロンの産生を増幅する仕組みが明らかに - インフルエンザの猛威が続いています このインフルエンザの元凶であるインフルエンザウイルスは 獲得した免疫力やウイルスに対するワクチンを見透かすよう変異し続けるため 人類はいまだ発病の恐怖から免れることができません
要旨 グレープフルーツや夏みかんなどに含まれる柑橘類フラボノイドであるナリンゲニンは高脂血症を改善する効果があり 肝臓においてもコレステロールや中性脂肪の蓄積を抑制すると言われている 脂肪肝は肝臓に中性脂肪やコレステロールが溜まった状態で 動脈硬化を始めとするさまざまな生活習慣病の原因となる 脂肪肝
平成 27 年度新潟薬科大学薬学部卒業研究 Ⅱ 脂肪肝の炎症におけるナリンゲニンの効果の研究 Effect of Naringenin in inflammation of the fatty liver 臨床薬理学研究室 6 年 10P040 曽我沙也加 ( 指導教員 : 渡辺賢一 ) 要旨 グレープフルーツや夏みかんなどに含まれる柑橘類フラボノイドであるナリンゲニンは高脂血症を改善する効果があり
1. 背景血小板上の受容体 CLEC-2 と ある種のがん細胞の表面に発現するタンパク質 ポドプラニン やマムシ毒 ロドサイチン が結合すると 血小板が活性化され 血液が凝固します ( 図 1) ポドプラニンは O- 結合型糖鎖が結合した糖タンパク質であり CLEC-2 受容体との結合にはその糖鎖が
参考資料配布 2014 年 11 月 10 日 独立行政法人理化学研究所 国立大学法人東北大学 血小板上の受容体 CLEC-2 は糖鎖とペプチド鎖の両方を認識 - マムシ毒は糖鎖に依存せず受容体と結合 - 本研究成果のポイント レクチンは糖鎖とのみ結合する というこれまでの考え方を覆す CLEC-2 受容体は同じ領域でマムシ毒とがんに関わる糖タンパク質に結合 糖鎖を模倣したペプチド性薬剤の設計への応用に期待
650 Fluorophore 690 Fluorophore DMSO ( 1 x 500 μl) 1 x 1.5 ml) Opal polymer HRP Ms+Rb ( 2 x 50mL) Blocking/Ab Diluent (1 x 100 ml) 4 x 250ml) * 数量は Op
Manual Multiplex IHC For laboratory use only. A research method for research purposes only. Opal TM 4-7-color Manual IHC Kit 製品情報保存条件 : 遮光冷蔵保存 (4 ) 製品受領後 Opal 色素のみ DMSO 溶解前は -20 保存安定性 : 上記保存条件で 3 ヶ月間は安定適用用途
■リアルタイムPCR実践編
リアルタイム PCR 実践編 - SYBR Green I によるリアルタイム RT-PCR - 1. プライマー設計 (1)Perfect Real Time サポートシステムを利用し 設計済みのものを購入する ヒト マウス ラットの RefSeq 配列の大部分については Perfect Real Time サポートシステムが利用できます 目的の遺伝子を検索して購入してください (2) カスタム設計サービスを利用する
Powered by TCPDF ( Title ハイリスクHPV 型のタンパクを標的とした新たな分子標的治療に関する基礎的検討 Sub Title Study of a new therapy targeting proteins of high-risk HPV Au
Powered by TCPDF (www.tcpdf.org) Title ハイリスクHPV 型のタンパクを標的とした新たな分子標的治療に関する基礎的検討 Sub Title Study of a new therapy targeting proteins of high-risk HPV Author 大野, 暁子 (Ono, Akiko) Publisher Publication year
PowerPoint プレゼンテーション
多能性幹細胞を利用した毒性の判定方法 教授 森田隆 准教授 吉田佳世 ( 大阪市立大学大学院医学研究科遺伝子制御学 ) これまでの問題点 化学物質の人体および環境に及ぼす影響については 迅速にその評価を行うことが社会的に要請されている 一方 マウスやラットなど動物を用いた実験は必要ではあるが 動物愛護や費用 時間的な問題がある そこで 哺乳動物細胞を用いたリスク評価系の開発が望まれる 我々は DNA
B. モル濃度 速度定数と化学反応の速さ 1.1 段階反応 ( 単純反応 ): + I HI を例に H ヨウ化水素 HI が生成する速さ は,H と I のモル濃度をそれぞれ [ ], [ I ] [ H ] [ I ] に比例することが, 実験により, わかっている したがって, 比例定数を k
![B. モル濃度 速度定数と化学反応の速さ 1.1 段階反応 ( 単純反応 ): + I HI を例に H ヨウ化水素 HI が生成する速さ は,H と I のモル濃度をそれぞれ [ ], [ I ] [ H ] [ I ] に比例することが, 実験により, わかっている したがって, 比例定数を k](/thumbs/81/83835231.jpg "B. モル濃度 速度定数と化学反応の速さ 1.1 段階反応 ( 単純反応 ): + I HI を例に H ヨウ化水素 HI が生成する速さ は,H と I のモル濃度をそれぞれ [ ], [ I ] [ H ] [ I ] に比例することが, 実験により, わかっている したがって, 比例定数を k")
反応速度 触媒 速度定数 反応次数について. 化学反応の速さの表し方 速さとは単位時間あたりの変化の大きさである 大きさの値は 0 以上ですから, 速さは 0 以上の値をとる 化学反応の速さは単位時間あたりの物質のモル濃度変化の大きさで表すのが一般的 たとえば, a + bb c (, B, は物質, a, b, c は係数 ) という反応において,, B, それぞれの反応の速さを, B, とし,
化学物質の分析 > 臨床で用いる分析技術 > 分析技術 > 免疫学的測定法 1 免疫学的測定法 免疫反応を利用して物質を分析する方法として 免疫学的測定法 ( イムノアッセイ ) がある イムノアッセイは 抗体に抗原を認識させる ( 抗原抗体反応を利用する ) ことにより 物質を定量する分析法であり
1 免疫学的測定法 免疫反応を利用して物質を分析する方法として 免疫学的測定法 ( イムノアッセイ ) がある イムノアッセイは 抗体に抗原を認識させる ( 抗原抗体反応を利用する ) ことにより 物質を定量する分析法であり 多成分一斉解析には不向きであるが 高感度な測定が可能である また 合成医薬品やステロイドホルモンなどの低分子からタンパク質や核酸などの高分子までさまざまな物質の定量に用いられている
学位論文の要約
学位論文内容の要約 愛知学院大学 甲第 678 号論文提出者土屋範果 論文題目 骨芽細胞におけるずり応力誘発性 細胞内 Ca 2+ 濃度上昇へのグルタミン酸の関与 No. 1 愛知学院大学 Ⅰ. 緒言 矯正歯科治療時には機械刺激により骨リモデリングが誘発される 機械 刺激が骨リモデリングや骨量の制御因子の一つであることはよく知られて いるが 骨関連細胞が機械刺激を感受する分子機構は十分に明らかにされ
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研究者を笑顔にするウェスタン解析ツール Changing the face of westerns ウェスタンブロッティング解析ワークフロー Complete, innovative western workflow solutions Easy! Fast! Clear! Western drama STEP 1 Western done! Separate Slow western STEP 2
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電気泳動 ウェスタンブロッティング キャンペーン 期間 2016年6月6日 月 8月5日 金 電気泳動用スタンダード ( マーカー ) 20%OFF プレシジョン Plus スタンダードシリーズ バンドがシャープでわかりやすい リコンビナントタンパク質を使用しているので シャープなバンドで正確な分子量測定を行えます 1 2 3 4 5 6 7 8 9 250 kd 150 100 75 1 3: 他社スタンダード
するものであり 分子標的治療薬の 標的 とする分子です 表 : 日本で承認されている分子標的治療薬 薬剤名 ( 商品の名称 ) 一般名 ( 国際的に用いられる名称 ) 分類 主な標的分子 対象となるがん イレッサ ゲフィニチブ 低分子 EGFR 非小細胞肺がん タルセバ エルロチニブ 低分子 EGF
分子標的治療 うじ部長氏 名古屋掖済会病院 病理診断科 ひら平 のぶ伸 こ子 近年 がんの薬物治療に 分子標的治療薬 を用いることが増えています この治療薬は 1990 年頃から使用されるようになりました 乳がんに使用されるハーセプチンや肺がんに使用されるイレッサなど 新聞や雑誌で報道されたので ご存知の方も多いと思います こういった 分子標的治療薬 の使用にあたっては 病理学的検査 ( 肺がんや乳がん