細辛 (Asari Radix Et Rhizoma) 中のアサリニンの測定 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C µm カラムアプリケーションノート製薬著者 Rongjie Fu Agilent Technologies Shanghai

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みひなこいまる
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1 細辛 (Asari Radix Et Rhizoma) 中のアサリニンの測定 Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8.9 µm カラムアプリケーションノート製薬著者 Rongjie Fu Agilent Technologies Shanghai 概要細辛 (Asari Radix Et Rhizoma) 中の活性化合物アサリニンをサブ 2 µm の Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 カラムと従来の 5 µm カラムの両方を用いて析しましたサブ 2 µm カラムにより解能が向上し析時間が短縮しましたはじめに漢方薬 (TCM) の品質を管理するため中国薬局方 (CHP) では HPLC メソッドによって主要化合物の濃度を測定するように規定しています漢方薬である細辛中の活性化合物アサリニンは CHP の規定に従って HPLC と従来のカラムを使用して測定する必要があります [] 表面多孔質粒子 LC カラムは高圧を生じることなく同じサイズの全多孔質粒子よりも高い効率を実現します新たに開発されたサブ 2 µm 表面多孔質粒子カラムは効率がさらに高まっており析時間を短縮できますアジレントは CHP メソッドを従来の Agilent ZORBAX Eclipse Plus-C mm 5 µm カラムの使用から InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm.9 µm カラムおよび 2. mm.9 µm カラムの使用に変換しました変換により改善したものには解能の向上析時間の短縮があります

2 試薬と実験方法試薬および溶媒はすべて HPLC または析グレードのものを使用しましたアセトニトリルは米国の JT Baker 社から購入しました漢方薬細辛とアサリニンは中国国内の製薬会社から入手しました標準溶液は濃度が µg/ml になるようにアサリニンをメタノールで溶解しました HPLC と UHPLC 析には次のコンポーネントで構成される Agilent 29 Infinity LC を使用しました Agilent 29 Infinity バイナリポンプ (G422A) Agilent 29 Infinity オートサンプラ (G4226A) Agilent 29 Infinity サーモスタット付カラムコンパートメント (G36C) Agilent 29 Infinity ダイオードアレイ検出器 (DAD) (G422A) 表は UHPLC システム構成の詳細を示しています表 2 は LC メソッドパラメータを示しています表. Agilent 29 Infinity LC システムの構成パラメータ Agilent 29 Infinity バイナリポンプ (G422A): Agilent 29 Infinity 高性能オートサンプラ (G4226A): Agilent 29 Infinity サーモスタット付カラムコンパートメント (G36C): Agilent 29 Infinity ダイオードアレイ検出器 (G422A): 設定値 35 µl 溶媒ミキサー : Agilent Jet Weaver 35 µl/ µl (G422-66) シートアセンブリ低散 Agilent 29 Infinity オートサンプラ用 (G ) オートサンプラとヒーター : キャピラリステンレス製.2 3 mm (G ) 茶色のスクリュートップバイアルラベル付き認定済み 2 ml 個 (582-76) 青のスクリューキャップ PTFE/ 赤色シリコンセプタム個 (582 77) 熱交換器.6 µl L (G36 83) ヒーターとカラム : A-Line クイックコネクトフィッティングアセンブリ 5 mm.2 mm ( ) カラムとフローセル : キャピラリー赤 PEEK.3 3 mm 5 m (42 646) Max-Light カートリッジフローセル mm µl (G422 68) Agilent OpenLAB CDS ChemStation Edition リビジョン C..7 [27]: G4226A: A.7. [] G422A: A.7. [6] G36C: A.7. [] G422A: B.7. [5] 表 2. HPLC/UHPLC メソッドパラメータ流量注入量カラム移動相 (ml/min) グラジエント (µl) サンプル前処理 TCC ( C) DAD Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm mm.9 µm (p/n ) Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm mm 2.7 µm (p/n ) Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm mm.9 µm (p/n ) Agilent ZORBAX Eclipse Plus C mm 5 μm (p/n ) A) 水 B) アセトニトリル A) 水 B) アセトニトリル A) 水 B) アセトニトリル.42 時間 ( ) % B 時間 ( ) % B 時間 ( ) % B 細辛パウダー.5 g を計量して 5 ml のメタノールを加えます 45 間の超音波処理によって抽出した後.2 μm フィルタ ( ) を用いてろ過します nm 4 Hz nm 4 Hz nm Hz 2

3 結果と考察この CHP- 規定メソッドは従来の mm 5 µm カラムを用いて細辛中のアサリニンの量を測定するよう定められていますこのメソッドを Agilent ZORBAX Plus C mm 5 µm カラムを用いて実行した後 Agilent InfinityLab Poroshell 2.9 µm の mm カラムと mm カラムを用いて実行しましたサブ 2 µm カラムの析効率を最大限に高めるために線流量を 2 倍にしましたカラムの長さと流量に応じてグラジエント時間を調整しました図のクロマトグラムは 5 μm カラムがアサリニンの定量析に適した解能を備えていることを示していますしかし InfinityLab Poroshell 2 2. mm.9 µm カラムを用いた場合は析時間が 4 からに短縮しアサリニンの解能もわずかに改善しています通常定量析に必要な最小解能は.5 です ZORBAX Eclipse Plus-C mm 5 µm カラムと InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm.9 µm カラムを使用したどちらのメソッドも定量析の要件は満たしていますしかし定量析において十な解能ではありませんでしたより長いサブ 2 µm カラムを使用する利点としては特に重要なピークについてピークキャパシティが高まり解能が向上するという点が挙げられますしかしカラムが長くなると生じる圧力も高くなります今回の析ではより長い InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm.9 µm カラムを使用しました ( 図 ) これによりアサリニンの解能は.6 から 2.9 へと大幅に向上しピークペアが.3 から.6 へとわずかに向上しました圧力は約 6 bar でカラム圧リミットの,3 bar よりもかなり低くこのため Agilent 29 Infinity LC の使用に適していました図 2 に示すように.9 µm の小さい粒子の表面多孔質粒子カラムでは 2.7 µm カラムよりも優れた効率と解能が得られました図 3 は InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm.9 μm カラムを用いたメソッドが細辛中のアサリニンの定量析に適していることを示していますサンプル : 細辛 Rs =.3 =.5 Agilent ZORBAX Plus-C mm 5 µm 最大圧力 : 92 bar =.6 Rs =.3 Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm.9 µm 最大圧力 : 43 bar = 2.9 Rs =.6 Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm.9 µm 最大圧力 : 592 bar 図. Agilent ZORBAX Eclipse Plus-C8 カラム Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm.9 µm カラムおよび 2. mm.9 µm カラムを用いた細辛の析のクロマトグラム 3

4 サンプル : 細辛 N = 8,933 = N = 4,597 =. Rs =.3 Rs =. Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm.9 µm 最大圧力 : 43 bar Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm 2.7 µm 最大圧力 : 22 bar 図 2. Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm.9 µm カラムと Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm 2.7 µm カラムを用いた細辛の析から得られたクロマトグラムの比較 N = 3,67 = 標準品サンプル図 3. Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8 2. mm.9 µm カラムを用いた細辛中のアサリニンの定量析 4

5 結論サブ 2 µm Agilent InfinityLab Poroshell 2 表面多孔質粒子カラムは UHPLC の圧力下できわめて優れた性能と高速析を実現しますまた長いカラムでは短いカラムより大幅に優れたピークキャパシティが得られターゲット化合物の測定に適した十な解能を得ることができます 5

6 詳細情報本文書のデータは代表的な結果を記載したものですアジレント製品とサービスの詳細についてはアジレントのウェブサイト com/chem/jp をご覧くださいホームページカストマコンタクトセンタ本製品は一般的な実験用途での使用を想定しており医薬品医療機器等法に基づく登録を行っておりません本文書に記載の情報説明製品仕様等は予告なしに変更されることがありますアジレントテクノロジー株式会社 Agilent Technologies, Inc. 27 Printed in Japan, April, JAJP

はじめに液体クロマトグラフィーには表面多孔質粒子の LC カラムが広く使用されていますこれらのカラムは全多孔質粒子カラムの同等製品と比べて低圧で高効率ですこれは主に物質移動距離がより短くカラムに充填されている粒子のサイズ分布がきわめて狭いためですカラムの効率が高いほど分析を高速化で

はじめに液体クロマトグラフィーには表面多孔質粒子の LC カラムが広く使用されていますこれらのカラムは全多孔質粒子カラムの同等製品と比べて低圧で高効率ですこれは主に物質移動距離がより短くカラムに充填されている粒子のサイズ分布がきわめて狭いためですカラムの効率が高いほど分析を高速化でアプリケーションノート食品 / 飲料品検査発酵モニタリング農薬バイオ燃料代替エネルギー Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z カラムによる糖の分析著者 Anne Mack and Ta-Chen Wei Agilent Technologies, Inc. 概要 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z

細辛 (Asari Radix Et Rhizoma) 中の アサリニンの測定 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C µm カラム アプリケーションノート 製薬 著者 Rongjie Fu Agilent Technologies Shanghai

細辛 (Asari Radix Et Rhizoma) 中のアサリニンの測定 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C µm カラムアプリケーションノート製薬著者 Rongjie Fu Agilent Technologies Shanghai