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1 ダイアジノン (CAS no ) 試験管内試験結果 1. 試験項目ダイアジノンについて 下表に示す試験項目 ( 作用 ) を対象として 第 1 段階試験管内試験 ( レポータージーン試験 ) を実施した 試験対象とした作用モード エストロゲン 抗エストロゲン アンドロゲン 抗アンドロゲン 甲状腺ホルモン 抗甲状腺ホルモン 脱皮ホルモン その他 * P N N N P :EC 5 又は IC 5 値が検出 N :EC 5 又は IC 5 値が検出不可 * : その他 : 試験対象としたが まだ実施していない作用モード - : 試験対象としなかった作用モード. 試験方法及び条件レポータージーン試験は OECD の TG55 (Stably Transfected Human Estrogen Receptor-α Transcriptional Activation Assay for Detection of Estrogen Agonist-Activity of Chemicals) 及び Draft TG (Stably Transfected Human Androgen Receptor-α Transcriptional Activation Assay for Detection of Androgenic Agonist Agonist/Antagonist Activity of Chemicals) も参考に 化学物質の内分泌かく乱作用に関する日英共同研究において開発した方法及び条件に準じて実施した 1

2 アゴニスト検出系の試験での EC 5 値及び PC 値の算出 EC5 試験濃度 (E, M) % ( 最大転写活性 ) 5% % 転写活性の相対値 試験濃度 (E,M) PC % ( 陽性対照の最大転写活性 ) % % ( 助剤区転写活性 ) アンタゴニスト検出系の試験での IC 5 値及び linic 3 値の算出 PC IC5 試験濃度 (E, M) % 阻害 ( 陽性対照の転写活性 ) 5% % 阻害 ( 陰性対照の転写活性 ) 転写活性阻害の相対値 -13 PC 試験濃度 (E,M) lin.ic3 % 阻害 ( 陽性対照の転写活性 ) 3% % 阻害 ( 陰性対照の転写活性 ) 転写活性阻害の相対値

3 3. 結果 (1) メダカエストロゲン受容体 α(erα) レポータージーン試験 ( エストロゲン作用 ) エストロゲン作用については 試験最高濃度で転写活性倍率の上昇がみられた その PC 値は M 相対活性比は E の.1% であった エストロゲン作用 EC 5 又は PC 相対活性比 ダイアジノン (PC =1. -5 ).1% 17β エストラジオール.3 - (PC =. -11 ) % 3

4 () メダカエストロゲン受容体 α(erα) レポータージーン試験 ( 抗エストロゲン作用 ) 抗エストロゲン作用については 17β- エストラジオール - M 共添加条件でメダカ ERα の転写活性化阻害は認められなかった 抗エストロゲン作用 IC 5 又は linic 3 [M] 相対活性比 ダイアジノン ( 得られなかった ) -ヒドロキシタモキシフェン. - M %

5 (3) メダカアンドロゲン受容体 β(arβ) レポータージーン試験 ( アンドロゲン作用 ) アンドロゲン作用については メダカ ARβ の転写活性化は認められなかった アンドロゲン作用 EC 5 又は PC 相対活性比 ダイアジノン ( 得られなかった ) 11-ケトテストステロン.7-9 M % 5

6 () メダカアンドロゲン受容体 β(arβ) レポータージーン試験 ( 抗アンドロゲン作用 ) 抗アンドロゲン作用については 11- ケトテストステロン 1 - M 共添加条件でメダカ ARβ の転写活性化阻害は認められなかった -ヒドロキシフルタミド ( 細胞株 A 1) 15 -ヒドロキシフルタミド ( 細胞株 A ) 15 -ヒドロキシフルタミド ( 細胞株 A 3) 15 -ヒドロキシフルタミド ( 細胞株 A ) 15 -ヒドロキシフルタミド ( 細胞株 A 5) (11KT 共添加 :1x - M) (11KT 共添加 :1x - M) (11KT 共添加 :1x - M) (11KT 共添加 :1x - M) (11KT 共添加 :1x - M) -ヒドロキシフルタミド ( 細胞株 B 1) 15 -ヒドロキシフルタミド ( 細胞株 B ) 15 -ヒドロキシフルタミド ( 細胞株 B 3) 15 -ヒドロキシフルタミド ( 細胞株 B ) 15 -ヒドロキシフルタミド ( 細胞株 B 5) (11KT 共添加 :1x - M) (11KT 共添加 :1x - M) (11KT 共添加 :1x - M) (11KT 共添加 :1x - M) (11KT 共添加 :1x - M) 15 ダイアジノン ( 細胞株 A 1) 15 ダイアジノン ( 細胞株 A ) 15 ダイアジノン ( 細胞株 B 1) 15 ダイアジノン ( 細胞株 B ) (11KT 共添加 :1x - M) (11KT 共添加 :1x - M) (11KT 共添加 :1x - M) (11KT 共添加 :1x - M) 抗アンドロゲン作用 IC 5 又は linic 3 [M] 相対活性比 ダイアジノン.7-9,9% -ヒドロキシフルタミド (linic 3=3. - ) %

7 メダカエストロゲン受容体 α レポータージーン試験 メダカアンドロゲン受容体 β レポータージーン試験 ニシツメガエル甲状腺ホルモン受容体 β レポータージーン試験 エストロゲン作用 抗エストロゲン作用 アンドロゲン作用 抗アンドロゲン作用 抗甲状腺ホルモン作用 細胞株 HEK93 HepG HEK93 受容体発現ベクター medaka ER alpha/pcdna medaka AR beta/pcdna tropicalis TR beta/pcdna 試験レポーターベクター ERE-TK-Luc MMTV-Luc TRE-minP-Luc コントロールレポーターベクター prl-tk-rluc 試験用培地 DMEM(mM L-glutamine % FCS 含有 ) 試験環境 37 5%CO 細胞播種数 5 細胞 /well 連数 試験液量 溶媒 3well/ 濃度 1 ml/well ジメチルスルホキシド (DMSO) 溶媒終濃度.1%.%.1%.%.% 被験物質添加濃度 ( 試験濃度 ) 最高濃度 : - ~ -5 M 最低濃度: - ~ -9 M( 公比 ) 陽性物質及び共添加濃度 - E - M 11KT 1 - M T3 - M 溶媒終濃度.1%.%.1%.%.% (EXTEND に基づく平成 3 年度第 回化学物質の内分泌かく乱作用に関する検討会資料 3- より抜粋 ) ( 平成 年度第 1 回 EXTEND1 化学物質の内分泌かく乱作用に関する検討会資料 3- より抜粋 ) 7

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