技術論文 Daptomycin の Etest 法による MIC 測定における精度管理の重要性および問題点中島英恵 1) 1) 長野市民病院臨床検査科長野県長野市富竹要旨ダプトマイシン DAP 非感性株を含む Staphylococcus aureus

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たつやしんまつ
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1 技術論文 Daptomycin の Etest 法による MIC 測定における精度管理の重要性および問題点中島英恵 ) ) 長野市民病院臨床検査科長野県長野市富竹 - 要旨ダプトマイシン DAP 非感性株を含む Staphylococcus aureus S. aureus 株を使用し市販のブランド BD 栄研極東のミュラーヒントン寒天培地を用いた際の Etest 法による DAP のブレイクポイント BP MIC 値が μg/ml 付近の MIC 値の測定精度について微量液体希釈法を基準に比較検討した精度管理 QC 株には S. aureus ATCC9 および Enterococcus faecalis ATCC9 を使用した S. aureus 株に対する MIC 測定では QC 株に対する MIC 値が QC レンジ外であった栄研及び極東で偽感性が発生した BD は QC 株に対する MIC 値は QC レンジ内であったが偽非感性が発生した S. aureus に対する DAP の MIC 測定では BP とかけ離れた MIC 値を示す S. aureus ATCC9 だけでなく DAP の BP 値を示す S. aureus 株も QC 株として設定していく必要があるキーワードダプトマイシン黄色ブドウ球菌最小発育阻止濃度 Etest 精度管理 Daptomycin DAP は日本において 0 年 9 ブランド各々が BMD 法と有意な差を認めている月に 5 番目の抗 Methicillin-resistant Staphylococcus p < ) S. aureus に対する DAP の MIC 値は aureus MRSA 薬として発売になった DAP の薬日本で市販のブランドの MHA を用いて Etest 法で剤感受性検査法には微量液体希釈法 broth 測定した場合 DAP の MIC 測定の標準法である microdilution BMD 法もしくは Etest 法による MIC BMD 法とは異なる結果となる可能性があることが測定があり使用する培地中の Ca 濃度が MIC 値の判明したしかし先の検討では被検菌株が BMD 変動要因となることが知られている従って法で μg/ml の MIC 値を示す株のみで Clinical and Laboratory Standard Institute CLSI であった臨床分離 S. aureus に対する DAP 非感性株は BMD 法の Mueller-Hinton broth の Ca 濃度をの割合は 0.%以下であり DAP 非感性株を用い生理的濃度の 50 mg/l に調整するよう規定していて日本で市販の MHA を用いた際の Etest 法における一方 Etest 法では Ca 濃度が 5 0 mg/l るブレイクポイント付近の MIC 値の測定精度に関すの Mueller-Hinton Agar MHA を用いるよう添付文る報告は未だ無い ) 今回 DAP 非感性の S. aureus 書に記載されている ) しかし MHA の Ca濃度はを用い S. aureus の DAP ブレイクポイント MIC 標準化されておらず市販の MHA はブランドおよ値が μg/ml 付近に対する Etest 法における MIC びロット毎に Ca 濃度が異なる値の測定精度について検討を行った ) ) ) そこで私たちは先に被検菌株に臨床分離 MRSA 98 株を使用し日本で生培地として市販されているブランドの MHA を用いた際の Etest 法における MIC 値のばらつきを BMD 法を基準として比較し平成 5 年月 7 日受付平成年 5 月 5 日受理 58

2 対象および方法 I II 結果 MHA 中の Ca濃度対象菌株精度管理 Quality Control QC 株対象菌株は Cubist 社から提供された S. aureus MHA 中の Ca濃度は BD-MHA が mg/ 株 C C を用いた QC 株は CLSI および L 栄研-MHA が mg/l 極東-MHA が. Etest 添付文書に従い S. aureus ATCC9 および.8 mg/l で栄研-MHA および極東-MHA は添 Enterococcus faecalis ATCC9 を使用した付文書で推奨の Ca濃度の範囲外であった ), ) Etest 法で使用した MHA と MHA 中の Ca濃度の測定 QC 株の MIC 測定結果 QC 株の MIC 測定結果を Table に示す S. aureus MHA はミュラーヒントン II 寒天培地 lot ATCC9 に対する MIC 値は BMD 法がベクトンディッキ μg/ml CLSI の BMD 法の QC レンジはンソン以下 BD-MHA ポアメディアミュラー μg/ml に対し Etest 法は BD-MHA が μg/ml ヒントン S 寒天培地 lot 栄栄研-MHA が μg/ml 極東-MHA がもしく研化学以下栄研-MHA バイタルメディア変は μg/ml であったに対法ミュラーヒントン寒天培地 lot COAD0 する MIC 値は BMD 法が μg/ml CLSI の BMD COADD0 COAD5S0 極東製薬工業以下極法の QC レンジは μg/ml に対し Etest 法東-MHA のブランド各々ロットを使用したは BD-MHA が.5 もしくは μg/ml 栄研-MHA MHA 中の Ca 濃度は Radiometer ABL800 FLEX ラがもしくは μg/ml 極東-MHA が μg/ml ジオメーターメディカルで測定し算出したであったなお Etest 法の QC レンジは S. aureus ), 5 ) MIC 測定方法 ATCC9 は μg/ml BMD 法は MIC 測定パネルに Mueller-Hinton broth は μg/ml である ) 本検討で得られた QC 株のの Ca 濃度が 50 mg/l に調整されたフローズンプ MIC 値を評価するため添付文書に従い通常のレート栄研 lot 500 栄研化学を用い検査方倍希釈系列に換算すると S. aureus ATCC9 に対法は添付文書に従ったなお MIC 測定パネルは薬する MIC 値は BD-MHA が μg/ml 栄研-MHA 剤濃度を 8 μg/ml とし希釈系列は Etest 法とが μg/ml 極東-MHA が μg/ml E. faecalis 同様 ATCC9 に対する MIC 値は BD-MHA が 8 μg/ml とした Etest 法は MIC 測 μg/ml 栄研-MHA が μg/ml 極東-MHA が 0.5 μg/ 定試薬に Etest ストリップ lot シス ml となり BD-MHA では S. aureus ATCC9 E. メックスビオメリューを用い検査方法は添付 faecalis ATCC9 共に QC レンジ内であったし文書に従った BMD 法と Etest 法による MIC 測定かし栄研 -MHA では S. aureus ATCC9 がは接種菌液の濃度調整に濁度計を使用し同じ菌 QC レンジより低く極東 -MHA では S. aureus 液から同時に実施した QC は対象菌株の MIC 測 ATCC9 共に QC レンジ定日ごとに実施した MIC 値の解釈は CLSI に準じより低かった MIC μg/ml を感性 MIC > μg/ml を非感性と対象菌株の MIC 測定結果した BMD 法と Etest 法の MIC 値の比較は BMD 対象菌株の MIC 測定結果を Table に示す S. 法を基準とし BMD 法で感性かつ Etest 法で非感性 aureus 株の MIC 値は BMD 法で μg/ml を偽非感性 major error ME BMD 法で非感性かつと測定されその内訳は μg/ml が株 0.5 μg/ Etest 法で感性を偽感性 very major error VME とし ml が株 μg/ml が株.5 μg/ml が 5 株た μg/ml が株 μg/ml が株であった各ブラン ) ドの MHA を用いた Etest 法による MIC 値は BDMHA は BMD 法と比較し管高く測定さ 59

3 Table 精度管理株に対する微量液体希釈法およびブランド各々ロットの Mueller-Hinton Agar を用いた Etest 法による Daptomycin の MIC 値 Etest-MIC (μg/ml) BMD-MIC 精度管理株栄研-MHA BD-MHA (μg/ml) 極東-MHA 0959* 000* 000* 00* 0* 0* COAD0* COADD0* COAD5S0* (7.)* (8.8)* (8.)* (8.0)* (.)* BD ベクトンディッキンソン栄研栄研化学極東極東製薬工業 * MHA のロット番号 * MHA 中の Ca 濃度 mg/l Table 被検菌 S. aureus 株に対する微量液体希釈法およびブランド各々ロットの Mueller-Hinton Agar を用いた Etest 法による Daptomycin の MIC 値 Etest-MIC (μg/ml) BMD-MIC 菌株 No. (μg/ml) 栄研-MHA BD-MHA 極東-MHA 0959* 000* 000* 00* 0* 0* COAD0* COADD0* COAD5S0* (7.)* (8.8)* (8.)* (8.0)* (.)* C 0.0 C C C * *.5* C7.5 ** ** ** ** 0.5** 0.5** C8.5 ** **.5 ** ** ** C.5.5 ** ** ** ** ** C ** ** ** C ** ** ** C.5.5 ** ** C C C 8 BD ベクトンディッキンソン栄研栄研化学極東極東製薬工業 * MHA のロット番号 * MHA 中の Ca 濃度 mg/l * 偽非感性 ** 偽感性れ BMD 法で μg/ml であった株が ME となったられた MIC 値とその MIC 値をもとに解釈された判一方栄研-MHA は BMD 法と比較し同じ値もし定カテゴリーは抗菌薬選択の指標の一つとなってくは管低く測定され BMD 法で.5 μg/ml いるため MIC 値の正確な測定は重要である S. であった 5 株のうち各ロットもしくは株が aureus に対する DAP のブレイクポイントは現在 VME となったまた極東-MHA は BMD 法と比較 CLSI では MIC μg/ml が感性 MIC > μg/ml がし 0.5 管低く測定され BMD 法で.5 μg/ml で非感性 European Committee on Antimicrobial あった 5 株全てがロット全て VME となり BMD Susceptibility Testing EUCAST では MIC μg/ml 法で μg/ml であった株のうち株がロットでが感性 MIC > μg/ml が耐性と設定されており VME となった両ガイドラインともに中間のカテゴリーは存在しない ), ) 従って DAP の MIC 測定は測定の際に生 III 考察じる僅かな誤差が VME あるいは ME に繋がりやすい状況といえる感染症診療の現場において薬剤感受性検査で得 570 Etest 法の添付文書には DAP の MIC 測定では

4 適切な Ca濃度を含む MHA のみを使用するよう記定されていたしかし BMD 法で MIC 値が μg/ml 載されているが市販の MHA に Ca濃度の記載はであった株 C が BD-MHA では.5 もしくは無い本検討においてブランド間で MHA の Ca濃 μg/ml と測定され ME が発生した S. aureus 度は異なりまた先の検討においても臨床分離株の ATCC9 に対する MIC 値は S. aureus に対する MIC50/MIC90 は BMD 法が / μg/ml に対し DAP のブレイクポイント値 μg/ml と比較し Etest 法は BD-MHA が 0.5/ μg/ml 栄研-MHA が低い値である S. aureus の DAP のブレイクポイント /0.9 μg/ml 極東-MHA が / μg/ml と測値とかけ離れた MIC 値を示す S. aureus ATCC9 定され MHA の Ca 濃度は BD-MHA が 0. でブレイクポイント付近の MIC 値の測定精度を検 mg/l 栄研-MHA が 5. mg/l 極東-MHA が 5.0 証することに限界があると思われた S. aureus に mg/l でブランド全てが Etest 法の添付文書に記対する DAP の MIC 測定では特にブレイクポイ載の濃度の範囲外であった ) しかし日常検査のント付近の MIC 値の正確な測定のためには今後中で MIC 測定の度に MHA 中の Ca濃度を測定する S. aureus でかつブレイクポイントの MIC 値ことは時間と手間とコストの面から困難である μg/ml を示す株も QC 株として設定していく必要従って QC 株の MIC 測定を行うことで使用するがあると考える MHA の適否を判断するのが現実的である VME は臨床でその抗菌薬が使用される可能性が IV 結語あるため最も避けるべきエラーとされている本検討では栄研-MHA および極東-MHA を用いた際日本で生培地として市販されているブランドのに VME が発生したこのブランドの MHA 中の MHA BD-MHA 栄研-MHA 極東-MHA を用い Ca濃度は Etest 法の添付文書に記載の濃度より高た Etest 法による S. aureus に対する DAP の MIC 測く QC 株の MIC 値は Etest 法の QC レンジより低定では ME VME が発生する可能性がある VME かった従って QC を予め実施すれば VME を防は QC を行うことで防ぐことが可能であると考ぐことは可能であると考える得られた QC 株のえられたしかし ME を回避するためには今後 MIC 値の評価にあたっては S. aureus ATCC9 にブレイクポイントとかけ離れた MIC 値を示す S. 対する DAP の QC レンジは CLSI の BMD 法が aureus ATCC9 だけでなく DAP のブレイクポイ μg/ml に対し Etest 法は μg/ml でありントである MIC 値が μg/ml を示す S. aureus 株も下限値が異なることに注意しなければならないま QC 株として設定していく必要があるた極東-MHA の Ca濃度は添付文書に記載の濃度と..8 mg/l の差であったが BMD 法との MIC 値のずれが大きく VME が多く発生した極東-MHA を用いた Etest 法による MIC 測定では MHA 中の Ca濃度以外の要因も MIC 値に影響を及ぼしている可能性が懸念される一方 BD-MHA を用いた Etest 法による MIC 測定では QC 株の MIC 値は S. aureus ATCC9 およびともに QC レンジ内で MHA の Ca濃度も添付文書に記載の濃度の範囲内であった S. aureus ATCC9 に対する DAP の MIC 値に関して Etest 法の添付文書には QC 結果範囲は μg/ml と定義されるが μg/ml 前後の結果となる傾向があるとの記載があり本検討でも BD-MHA による MIC 値は μg/ml と測謝辞本検討を行うにあたり菌株を提供して下さいました Cubist Pharmaceuticals Inc.にご助言をいただきました Bradley Katz 氏 Cubist Pharmaceuticals Inc. 黒川利徳氏 MSD 株式会社に深謝申し上げます文献 ) Koeth LM, Thorne GM : Daptomycin in vitro susceptibility methodology: a review of methods, including determination of calcium in testing media, Clin Microbiol News 00 ; : 9. ) Clinical and Laboratory Standards Institute Performance standards for antimicrobial susceptibility testing ; twenty-third informational supplement, Document M00-S. Wayne, PA, 0. ) biomerieux Inc Etest Customer Information Sheet- REF /55008 Etest ダプトマイシン DPC, products.sysmex-biomerieux.net/product/pdf/dpcag07 ) Nakashima H et al.: Daptomycin Etest MICs for methicillinresistant Staphylococcus aureus vary among different media, J 57 5

5 Infect Chemother 0 ; 8 : ) Hanberger H et al.: Pharmacodynamics of daptomycin and vancomycin on Enterococcus faecalis and Staphylococcus aureus demonstrated by studies of initial killing and postantibiotic effect and influence of Ca and albumin on these drugs, Antimicrob Agents Chemother 99 ; 5 : ) European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing Breakpoint tables for interpretation of MICs and zone diameters. Version.. Munich and Basel, 0. fileadmin/src/media/pdfs/eucast_files/breakpoint_tables/ Breakpoint_table_v_..pdf Technical Article Importance and problems of quality control during daptomycin MIC testing using Etest methodology Hanae NAKASHIMA ) ) Department of Clinical Laboratory, Nagano Municipal Hospital (-, Tomitake, Nagano-shi, Nagano 8-855, Japan) Summary To assess the accuracy of daptomycin (DAP) MIC near the breakpoint against Staphylococcus aureus (i.e., MIC= μg/ml) by the Etest, MIC tests were conducted using S. aureus test isolates, including non-daptomycin-susceptible isolates, and brands of MHA plates (BD, Eiken and Kyokuto) commercially available in Japan. The results were compared with those obtained by the CLSI reference BMD. and Enterococcus faecalis ATCC 9 were used as the quality control (QC) strains. When the DAP MICs were determined by the Etest on Eiken and Kyokuto MHA plates, the MICs of the QC strains were beyond the Etest QC range, and very major errors occurred for test isolates. When the DAP MICs were determined by the Etest on BD MHA plates, the MICs of the QC strains were within the Etest QC range, but a major error occurred for test isolates. For more objective and accurate measurement of DAP MICs against S. aureus, it is necessary to set, not only S. aureus ATCC9, which indicates the MIC far from the breakpoint, but also the S. aureus strain, which indicates the MIC of the breakpoint, as the QC strain. Key words: Daptomycin, Staphylococcus aureus, MIC, Etest, Quality control (Received: December 7, 0; Accepted: May 5, 0) 57

Table 1. Antimicrobial drugs using for MIC

Table 1. Antimicrobial drugs using for MIC Table 2. Susceptibilities determined with the VITEK 2 system and agar dilution reference by interpretive eategory for Staphylococcus aureus Table 3. Interpretive

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