取扱説明書

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なぎさきちや
4 years ago
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1 Realtime PCR Master Mix Realtime PCR Master Mix トラブルシューティング SYBR Green Realtime PCR Master Mix トラブルシューティングは p3 へ 1. 増幅がみられない乱れる原因対策検出機器の設定などが蛍光色標識に用いられている蛍光色素の種類によって検素に適合していない出機器の設定を変更する必要があります設定を適正化して再解析してください data collection の設定が不適蛍光標識プローブや蛍光標識プライマーを用いた切各種アッセイではアッセイ法により data collection の推奨設定位置が異なります設定を確認し適正化して再実験してくださいサンプル位置の設定ミス入力したサンプル番号と機器にセットしたサンプルの位置が合っているか確認し適正なサンプル位置を設定して再解析あるいは再実験してくださいその他装置の故障不具合各装置の取扱説明書に従い点検してくださいプライマー濃度や PCR 反応条件の変更をご検討ください増幅が悪い場合は一般的にアニーリング温度を下げるアニーリング時間を長くするかプライマー濃度を上げてみますまれに逆にアニーリング温度を上げることや伸長時間の延長などで向上することもありますランプ速度を遅くすることで感度が改善される場合がありますまた GC 含量の高いターゲットでは変性時間を延長することで改善することもありますそれでも不良の場合はプライマー再設計をおすすめします RNase の作用により鋳型 RNA が分解されている可能性がありますピペット等の器具類は RNA 取扱専用のものを使用し RNA を再調製してください 2. 定量値がばらつく原因装置の故障不具合対策装置の不具合により温度管理や検出にばらつきが生じている場合があります各装置の取扱説明書に従い点検してください純度が悪いサンプルはばらつきの原因となります均質なサンプルをご使用くださいまたサンプル中のゲノム DNA の残留によりゲノム DNA 由来の増幅産物が検出されることがあります DNase I 処理によりゲノム DNA の除去を行ってください - 1 -

2 Realtime PCR Master Mix 2. 定量値がばらつく ( つづき ) 原因計量のばらつき対策 PCR の増幅効率が悪い場合はばらつきも大きくなる傾向がありますプライマー濃度や PCR 反応条件の変更をご検討ください増幅が悪い場合は一般的にアニーリング温度を下げるアニーリング時間を長くするかプライマー濃度を上げてみます伸長時間の延長などでも向上することがありますまた GC 含量の高いターゲットでは変性時間を長くすることで改善されることがありますそれでもばらつきが大きい場合はプライマーおよびプローブの再設計をおすすめします多くのリアルタイム PCR 装置では推奨反応スケールよりも少量の液量で検出が可能ですが検出感度や正確性が低下する場合があります反応スケールを上げて推奨液量で再実験してください 3. ブランクサンプルにシグナルがみられる原因対策陽性サンプルや PCR 産物のコまずはブランクに用いたサンプル ( 水 ) を更新してくンタミネーションださいそれでも発生する場合は使用する蒸留水やプライマー試薬などを更新して再検討してください - 2 -

3 SYBR Green Realtime PCR Master Mix SYBR Green Realtime PCR Master Mix トラブルシューティング Realtime PCR Master Mix トラブルシューティングは p1 へ 1. 増幅がみられない乱れる原因検出機器の設定などが SYBR Green I に適合していない data collection の設定が不適切サンプル位置の設定ミスその他装置の故障不具合 2. 定量値がばらつく原因装置の故障不具合対策検出機器の設定を適正化して再解析してください SYBR Green アッセイでは通常伸長ステップの最後に data collection を設定します設定を確認し適正化して再実験してください入力したサンプル番号と機器にセットしたサンプルの位置が合っているか確認し適正なサンプル位置を設定して再解析あるいは再実験してください各装置の取扱説明書に従い点検してくださいプライマー濃度や PCR 反応条件の変更をご検討ください増幅が悪い場合は一般的にアニーリング温度を下げるアニーリング時間を長くするかプライマー濃度を上げてみますまれに逆にアニーリング温度を上げることや伸長時間の延長などで向上することもありますランプ速度を遅くすることで感度が改善される場合がありますまた GC 含量の高いターゲットでは変性時間を延長することで改善することもありますそれでも不良の場合はプライマー再設計をお勧めします RNase の作用により鋳型 RNA が分解されている可能性がありますピペット等の器具類は RNA 取扱専用のものを使用し RNA を再調製してください対策装置の不具合により温度管理や検出にばらつきが生じている場合があります各装置の取扱説明書に従い点検してください純度が悪いサンプルはばらつきの原因となります均質なサンプルをご使用くださいまたサンプル中のゲノム DNA の残留によりゲノム DNA 由来の増幅産物が検出されることがあります DNase I 処理によりゲノム DNA の除去を行ってください - 3 -

4 SYBR Green Realtime PCR Master Mix 2. 定量値がばらつく ( つづき ) 原因計量のばらつき対策 PCR の増幅効率が悪い場合はばらつきも大きくなる傾向がありますプライマー濃度や PCR 反応条件の変更をご検討ください増幅が悪い場合は一般的にアニーリング温度を下げるアニーリング時間を長くするかプライマー濃度を上げてみます伸長時間の延長などでも向上することがありますまた GC 含量の高いターゲットでは変性時間を長くすることで改善することがありますそれでもばらつきが大きい場合はプライマーの再設計をおすすめします多くのリアルタイム PCR 装置では推奨反応スケールよりも少量の液量で検出が可能ですが検出感度や正確性が低下する場合があります反応スケールを上げて推奨液量で再実験してください 3. ブランクサンプルにシグナルがみられる ( 融解曲線分析を実施してご判断ください ) 原因対策陽性サンプルや PCR 産物のコまずはブランクに用いたサンプル ( 水 ) を更新してくンタミネーションださいそれでも発生する場合は使用する蒸留水 ( ターゲットと同じピークの増幅やプライマー試薬などを更新して再検討してくださ産物がブランクサンプルで検出いされる場合 ) プライマーダイマーなど非特異反応の発生 ( ターゲットと異なるピークの増幅産物がブランクサンプルで検出される場合 ) プライマー濃度や PCR 反応条件の変更をご検討ください非特異反応が出る場合はアニール温度を上げるアニール時間伸長時間を短くするかプライマー濃度を下げてみます 3 ステップ化も効果があることがありますそれでも発生する場合はプライマー再設計をお勧めします - 4 -

製造販売元 - 納期注文に関するお問い合わせ - 東洋紡株式会社ライフサイエンス事業部 ( 大阪 ) 530-8230 大阪市北区堂島浜二丁目 2 番 8 号 TEL 06-6348-3786 FAX 06-6348-3833 E-mail : order_lifescience@toyobo.

5 製造販売元 - 納期注文に関するお問い合わせ - 東洋紡株式会社ライフサイエンス事業部 ( 大阪 ) 大阪市北区堂島浜二丁目 2 番 8 号 TEL FAX order_lifescience@toyobo.jp 東洋紡株式会社ライフサイエンス事業部 ( 東京 ) 東京都中央区京橋一丁目 17 番 10 号住友商事京橋ビル TEL FAX mail : order_lifescience@toyobo.jp - 製品の内容技術に関するお問い合わせ - テクニカルライン TEL FAX 開設時間 9:00~12:00, 13:00~17:00 ( 土日祝を除く ) tech_osaka@toyobo.jp [URL]

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【目　次】 17-07 SYBR Green Realtime PCR Master Mix -Plus- (Code No. QPK-212, QPK-212X5) 取扱説明書 TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN A3617K 目次 [1] はじめに 2 [2] 本品に含まれるもの 3 [3] ご用意いただくもの 4 [4] プロトコール