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1 Simple your Western. It s time. Meet the ProteinSimple product family Simple Western Simple Plex Biologics Toll-free: (888) Tel: (48) Fax: (48) orders@proteinsimple.com Tel: Fax: proteinsimple.jp/ proteinsimple.com ProteinSimple. ProteinSimple, the ProteinSimple logo, Simple Western, Peggy Sue, Sally Sue, Wes, Ella, ice, and MFI are trademarks and/or registered trademarks of ProteinSimple Ella Sally Sue Peggy Sue ice3 MFI Maurice

2 Westerns have become very simple 3 Wes Load Matrix Size-based Assay Stacking Matrix Separation Matrix Load Sample High MW Low MW Separate Immobilize Immunoprobe Quantitate Signal Target Protein Primary Ab HRP-labeled Secondary Ab David Lisa Kellie Bob Jess Kevin Brian Elaine Average 8.2% 7.8% 8.4% 1.% 6.2% 7.6% 6.% 7.9% 9.4% Experiments (n=24 replicates) SPECIFICATIONS

3 The gel-free, blot-free, hands-free Simple Western is here. Peggy Sue & Sally Sue Load Sample Charge-based Assay Low pi High pi Separation Matrix Separate Immobilize Immunoprobe Quantitate Signal Target Protein Primary Ab HRP-labeled Secondary Ab Size-based Results Chemiluminescence Chemiluminescence 3, 2, 1, 12 Charge-based Results 1,5 1, 5 5. pperk1 perk1 pperk2 5.5 perk2 + pperk2 perk1+ pperk MW (kda) perk pi

4 High Molecular Weight Protein Analysis Made Simple Total Protein Analysis the Simple Western Way A α-her2 α-pi3k Kinase Class III α-hsp7 α-plcγ α-egfr α-β-catenin α-her3 B α-her2 α-pi3k Kinase Class III α-hsp7 α-plcγ α-egfr α-β-catenin α-her kda (A) kda (B) HER3 MCF7 A431 HER2 HER3 1.ug/uL EGFRb-catenin.1ug/uL α-dystrophin α-brca2 α-trrap α-cbp α-dna-pk α-ubr kda DystrophinA1.2ug/uL BRCAA431 2ug/uL TRRAPA4311.ug/uL CBPK562.25ug/uL DNA-PKUBR5K562 1.ug/uL Load Matrix Total Protein Assay Stacking Matrix Separation Matrix.25ug/uL Load Sample Separate High MW Low MW A kda Uninduced: Total Protein Assay Induced: Total Protein Assay Uninduced: anti-dj-1 Induced: anti-dj-1 Uninduced: anti-gst Induced: anti-gst B GST-DJ1 Uninduced Total Protein Assay Induced Total Protein Assay Bio-Techne antibodies are now Simple Western Certified proteinsimple.com/antibody/antibodies.html Immobilize Label Quantitate Signal Chemiluminescence Biotin Strep-HRP Protein streptavidin-hrp Luminol/Peroxide GST-DJ-1 C GST-DJ1 Uninduced anti-dj-1 Induced anti-dj-1 Uninduced anti-gst Induced anti-gst GST-DJ1.4mM IPTG3uL5uL Bicine/Chaps Buffer 2uLA, 1-2 1:1 2uLSimple Western A, 3-6 compass A BSimple Westerncompass A C

5 Hands-free, multiplex-free, ELISA-free immunoassays Ella GNRs Waste dab-4 dab-3 dab Sample Running dab-1 Fluor Simple Plex Human Analytes Adiponectin/Acrp3, total Angiogenin Angiopoietin-1 Angiopoietin-2 Axl BAFF BDNF BMP-2 BMP-4 BMP-9 C-Reactive Protein (CRP) CA125 CA9 CCL17/TARC CCL2/MCP-1 CCL22/MDC CCL3/MIP-1α CCL4/MIP-1B CD16/VCAM-1 CD14 CD163 CD25/IL-2 Rα CD27 CD4/TNFRSF5 (this is not CD4 Ligand) CGA (Chromogranin A) Chitinase 3-like 1/YKL-4 Coagulation Factor III (Tissue Factor) COL4A1 CXCL1/IP-1 CXCL12 (SDF-1 alpha) CXCL13/ BLC/BCA-1 CXCL5/ENA-78 CXCL9/MIG DKK-1 E-Cadherin E-Selectin EGF Elafin/Trappin-2 Endothelin-1 ErbB2 Erythropoietin (EPO) FABP2/I-FABP FGF-21 Follistatin Fractalkine/ CX3CL1 Galectin-3 GAS6 GDF-15 Gp13 Granzyme B Growth Hormone (GH) HB-EGF HE4/WFDC2 HGF HGF R ICAM-1 IFN-γ IGFBP-1 IL-1α IL-1β IL-1 IL-12-p7 IL-13 IL-15 IL-17A IL-18 IL-18 BPa IL-1ra/IL-1F3 IL-2 IL-3 IL-33 IL-34 IL-4 IL-5 IL-6 IL-6 Rα IL-7 IL-8/CXCL8 LBP Leptin LIGHT Lipocalin-2/NGAL M-CSF Mesothelin MICA MIF MMP-1 MMP-7 MMP-8 MMP-9 Myeloperoxidase (MPO) NCAM-1/CD56 Nephrin NGF R/TNFRSF16 Osteopontin (OPN) Osteoprotegerin/TNFRSF 11B (abbreviated as OPG) PC9/PCSK9 PDGF-BB Pentraxin 3/TSG-14 PlGF Prolactin RAGE RANTES Reg-3a SCF SDF-1 alpha (CXCL12) Serpin A4 Serpin E1/PAI-1 Serum Amyloid A1 SLPI SP-D ST2/IL-1 R4 Tie-2 TIMP-1 TNF R1 TNF RII TNF-α TNF-β TPO TRAIL Trappin-2/Elafin upa-1 VCAM-1/CD16 VEGF R1 VEGF R2/KDR VEGF-A VEGF-C Vitamin D BP Mouse Analytes IL-6 MCP-1/CCL2 MIP-2/CXCL2 TNF-α SPECIFICATIONS

6 Maurice ice3 蔵 蔵 MFI Fluorescence cief Absorbance (mau) 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, CE-SDS mab1 mab2 mab3 mab pl NG-lgG Reduced IgG Non-reduced IgG Relative Migration Time 1 E μ μ μ μ μ 蔵, 46 kg Digital Camera Optics Sample Flow Cell Light Source

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