AutoTune 機能 1.AutoTune 機能 AutoTune 機能を使用して測定化合物のモニターイオン (m/z) コーン電圧及び (MS/ MS システムの場合 ) コリジョンエネルギーの最適化を行い MS メソッドを自動作成する方法についてご紹介します同時にレポートを印刷することも

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ことこしもとり
4 years ago
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1. を使用して測定化合物のモニターイオン (m/z) コーン電圧及び (MS/ MS システムの場合 ) コリジョンエネルギーの最適化を行い MS メソッドを自動作成する方法についてご紹介します同時にレポートを印刷することも可能です 1.1 測定化合物のイオン化確認シリンジに測定化合物 ( 濃度 0.

1 1. を使用して測定化合物のモニターイオン (m/z) コーン電圧及び (MS/ MS システムの場合 ) コリジョンエネルギーの最適化を行い MS メソッドを自動作成する方法についてご紹介します同時にレポートを印刷することも可能です 1.1 測定化合物のイオン化確認シリンジに測定化合物 ( 濃度 0.1 ~ 1 μg/ml 前後 ) を準備します ( 最初から高濃度のものを MS に導入しますと MS 内部に残存してしまう可能性がありますのでご注意ください ) LC の送液を開始します図 1. 配管例 (Q-PremierXE の場合 -ZQ, Q-micro も同様に配管します ) LC からは移動相の送液のみ ( 分析で使用する流速 ) Tee 測定対象物質はシリンジにセットします ( 流速 :10 ul/min) MS Tune 画面 ( タンデム四重極 MS の場合シングル MS モード ) を開きます MS Tune 画面の [Ion Mode] メニューより測定モードを選択します MS Tune 画面の Source タブを選択します ( 参考 : 図 2) MS Tune 画面の [Pump Flow] パラメータは例えば 10 μl/min と入力しますシリンジポンプを ON ( アイコンをクリック ) にします Tips PM41MSD1500 (SCN714) -1

2 図 2. MS Tune 画面例 (Q-PremierXE の場合 ) 測定化合物のスペクトルが見えることを確認します ( 図 3) 図 3. MS Tune 画面 ( 右側 ) 測定化合物の m/z を入力! [Gain] の入力値で画面上のイオン強度を調整! ( 大きな数字拡大表示小さな数字縮小表示 ) 下記ウィンドウの分割タンデム四重極 MS の場合 MS Scan を選択! 下記ウィンドウの表示幅を設定! Tips PM41MSD1500 (SCN714) -2

AutoTune Wizard 画面例 ( タンデム四重極 MS の場合 ) [Set-up] 欄で作成する MS

3 1.2 AutoTune の実行 MS Tune 画面のアイコンをクリックします図 4. MS Tune 画面 (Q-PremierXE の場合 ) AutoTune Wizard 画面が開きます図 5. AutoTune Wizard 画面例 ( タンデム四重極 MS の場合 ) [Set-up] 欄で作成する MS メソッドタイプのチェックボックスにチェックマークを入れます [Develop SIR Method] SIRメソッドを作成します [Develop MRM Method] MRMメソッドを作成します Tips PM41MSD1500 (SCN714) -3

図 6. AutoTune Wizard 画面例 ( タンデム四重極 MS の場合 ) 予め準備しておいた MS Tune ファイルを [Browse] ボタンより選択します [MS file name:] シングル MS モードで使用する MS Tune ファイルを入力します [MSMS file name:] MS/MS モードで使用する MS Tune ファイルを入力します図 7.

4 図 6. AutoTune Wizard 画面例 ( タンデム四重極 MS の場合 ) 予め準備しておいた MS Tune ファイルを [Browse] ボタンより選択します [MS file name:] シングル MS モードで使用する MS Tune ファイルを入力します [MSMS file name:] MS/MS モードで使用する MS Tune ファイルを入力します図 7. AutoTune Wizard 画面チェックボックスにチェックマークを入れ [Mass 1-4:] 欄に測定化合物のモニターイオン (m/z) 値を入力します ( 最大 4 化合物の混合溶液の測定が可能です ) MS Tune 画面の Peak Editor 欄 ( 図 3) に入力した数値をそのまま反映する場合には [Fill Values from tune page] ボタンをクリックします [Span 1-4:] 欄には測定化合物のイオンのみが表示されるよう最小範囲を入力します ( 入力値例 :5~10) 入力例 Tips PM41MSD1500 (SCN714) -4

Mass 1: 609.3 Span 1 : 10 上記 Span を設定した際には 604.3 ~ 614.3 の範囲でイオンをモニターします図 8.

5 Mass 1: Span 1 : 10 上記 Span を設定した際には ~ の範囲でイオンをモニターします図 8. AutoTune Wizard 画面コーン電圧コリジョンエネルギーの範囲プロダクトイオンスキャンの設定をします <Cone voltage range> 測定化合物に最適なコーン電圧を見つけるための設定となります例えば Start : 5 / End : 50 / Step : 5 と設定するとコーン電圧 5 V ~ 50 V までを 5 V 刻みで最適化を行うということになります [Cone voltage step size:] パラメータ値は [Cone voltage end:] から [Cone voltage start:] の値を差し引いた値を割り切れる値にしてください <Collison energy range> 測定化合物に最適なコリジョンエネルギーを見つけるための設定となります例えば Start:5 / End:50 / Step:5 と設定するとコリジョンエネルギー 5 ev~ 50 ev までを 5 ev 刻みで最適化を行うということになります [Collision energy step size:] パラメータ値は [Collision energy end:] から [Collision energy start:] の値を差し引いた値を割り切れる値にしてください <Daughter scan search details> [Number of daughter transitions] MRM メソッド作成を選択する場合に有効となるパラメータです複数のモニターイオン ( 確認イオンなど ) を設定するときその数を設定します最大 3 まで入力可能です Tips PM41MSD1500 (SCN714) -5

6 [Lowest fragment ion mass(da)] MRM メソッド作成を選択する場合に有効となるパラメータですここで入力した値以上の範囲でプロダクトイオンスキャンが行われます [Next ] ボタンをクリックします図 9. AutoTune Wizard 画面最適化した結果データを保存するかどうかまた保存する場合のファイル名を入力します [Save acquired optimization data for validation?] チェックマークを入れると最適化時の生データが保存されます必ずチェックマークを入れてください [Cone voltage optimize stage data file:] コーン電圧最適化時の生データが入力されたファイル名で保存されます入力時拡張子 (.raw) は不要ですファイル名には全角スペースやピリオド (.) などの記号は使わずに半角英数字または _( アンダーバー : 2 つまで ) で入力してください [Daughter search stage data file:] コリジョンエネルギー最適化時の生データが入力されたファイル名で保存されます入力時拡張子 (.raw) は不要ですファイル名には全角スペースやピリオド (.) などの記号は使わずに半角英数字または _( アンダーバー : 2 つまで ) で入力してください Tips PM41MSD1500 (SCN714) -6

図 10. AutoTune Wizard 画面 AutoTune を実行する前の確認事項が記載されています -N2ガスは流れていますか? -MS 本体はオペレートが ON になっていますか ( 通電状態ですか )? - 温度やその他のパラメータの実測値は正しいですか? - シリンジの送液はされていますか?

7 図 10. AutoTune Wizard 画面 AutoTune を実行する前の確認事項が記載されています -N2ガスは流れていますか? -MS 本体はオペレートが ON になっていますか ( 通電状態ですか )? - 温度やその他のパラメータの実測値は正しいですか? - シリンジの送液はされていますか? - シリンジの溶液は満たされていますか? -プローブは正しく設置されていますか? Q-PremierXE を使用されている方は Ar ガスを ON にしておきます図 11. AutoTune Wizard 画面 AutoTune が実行されます画面上では何を行っているかが表示されます Tips PM41MSD1500 (SCN714) -7

表 1 AutoTune にかかる時間の目安選択した項目 MRMメソッドのみ作成 MRM SIRメソッド作成 MRM SIRメソッド作成ソースパラメータの最適化 1 化合物の最適化にかかる時間の目安約 1 分 40 秒約 1 分 40 秒約 3 分 05 秒表 1 の時間を計測した際の設定コーン電圧 10~60V 2V 刻みコリジョンエネルギー 10 ~ 60eV 2eV 刻み

8 表 1 AutoTune にかかる時間の目安選択した項目 MRMメソッドのみ作成 MRM SIRメソッド作成 MRM SIRメソッド作成ソースパラメータの最適化 1 化合物の最適化にかかる時間の目安約 1 分 40 秒約 1 分 40 秒約 3 分 05 秒表 1 の時間を計測した際の設定コーン電圧 10~60V 2V 刻みコリジョンエネルギー 10 ~ 60eV 2eV 刻みプロダクトイオントランジッション 3つ AutoTune が終了すると次ページのような画面が表示されます図 12. AutoTune Wizard 画面自動作成される MS メソッド名や結果レポートのファイル名を入力します <Write Experiments> [MRM file name:] コーン電圧コリジョンエネルギーの最適化を行った後その結果は入力されたファイル名で MS メソッドとして保存されますファイル名を入力後 [Save As] ボタンをクリックしますファイル名には全角スペースやピリオド (.) などの記号は使わずに半角英数字または _( アンダーバー : 2 つまで ) で入力してください拡張子 (.exp) は削除しないでください [MRM run time:] MS メソッドの分析時間を入力します <Reporting> [Produce AutoTune report] チェックマークを入れると結果 ( レポート ) が印刷されます Tips PM41MSD1500 (SCN714) -8

[Report file] レポートファイルが入力されたファイル名で保存されますファイル名を入力後 [Save As] ボタンをクリックしますファイルの保存先を確認してくださいファイル名には全角スペースやピリオド (.) などの記号は使わずに半角英数字または _( アンダーバー : 2 つまで ) で入力してください拡張子 (.

9 [Report file] レポートファイルが入力されたファイル名で保存されますファイル名を入力後 [Save As] ボタンをクリックしますファイルの保存先を確認してくださいファイル名には全角スペースやピリオド (.) などの記号は使わずに半角英数字または _( アンダーバー : 2 つまで ) で入力してください拡張子 (.xml) は削除しないでください MRM file name 及び Report file を保存する場合には必ず [Save As] ボタンで開く画面の File メニューから Save もしくは Save As で名前を付けて保存して下さい図 13. AutoTune Wizard 画面 Auto Tune による最適化が終了します [Finish] ボタンをクリックします Tips PM41MSD1500 (SCN714) -9

10 1.3 結果確認 Auto Tune 機能によって作成された MS メソッドは MS Method 画面で確認することが可能です ( 図 14) 図 14. MS Method 画面図 15. 結果レポートファイル画面例 Tips PM41MSD1500 (SCN714) -10

11 図 16. コーン電圧及びコリジョンエネルギーの最適化結果コーン電圧コリジョンエネルギープレカーサーイオンプロダクトイオン Tips PM41MSD1500 (SCN714) -11

LC/MS/MS によるフェノール類分析日本ウォーターズ株式会社 2015 Waters Corporation 1 対象化合物 Cl HO HO HO フェノール 2- クロロフェノール (2-CPh) Cl 4-クロロフェノール (4-CPh) HO Cl HO Cl HO Cl Cl 2,4

LC/MS/MS によるフェノール類分析日本ウォーターズ株式会社 2015 Waters Corporation 1 対象化合物 Cl HO HO HO フェノール 2- クロロフェノール (2-CPh) Cl 4-クロロフェノール (4-CPh) HO Cl HO Cl HO Cl Cl 2,4 LC/MS/MS による類分析日本ウォーターズ株式会社 15 Waters Corporation 1 対象化合物 - クロロ (-CPh) 4-クロロ (4-CPh),4- ジクロロ (,4-DPh),6- ジクロロ (,6-DPh),4,6- トリクロロ (,4,6-TPh) 15 Waters Corporation 1 サンプル調製 ( 検量線標準液 ) 5 標準溶液添加 (,,4,,,5uL)