Microsoft Word - 【FIX HP版】平池先生原稿

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1 産 婦 人 科 領 域 におけるサーチュインファミリー 分 子 と 植 物 エストロゲン レスベラトロールの 役 割 東 京 大 学 医 学 部 附 属 病 院 女 性 診 療 科 産 科 講 師 平 池 修 はじめに 女 性 は 思 春 期 以 降 性 成 熟 期 を 迎 えると 月 経 周 期 が 確 立 し 排 卵 が 惹 起 され 生 殖 能 力 を 獲 得 する 排 卵 周 期 が 確 立 すると 卵 巣 発 育 卵 胞 からエストロゲン が 産 生 されるようになるが エストロゲンはヒトの 生 殖 器 を 中 心 として 身 体 各 臓 器 の 組 織 成 熟 をもたらす エストロゲンの 生 殖 器 外 作 用 としては 皮 膚 血 管 内 皮 骨 などに 対 する 作 用 が 有 名 である 周 閉 経 期 から 卵 巣 からの 排 卵 が 途 絶 してくるが 卵 巣 機 能 は 閉 経 後 にはほぼ 廃 絶 する よって エストロゲン 産 生 能 が 低 下 していくにつれ 身 体 臓 器 の 機 能 低 下 すなわち 老 化 が 起 きることか ら 女 性 の 身 体 成 熟 度 はエストロゲン 分 泌 状 態 により 大 きく 影 響 されること がわかる 閉 経 後 の 中 高 年 女 性 にみられるエストロゲン 欠 乏 症 状 を 改 善 するためには ホルモン 補 充 療 法 (HRT)が 必 要 となる HRT はおよそ 1950 年 代 頃 より 米 国 を 中 心 に 普 及 が 始 まり 全 世 界 的 に 広 まっていった 導 入 当 初 は 更 年 期 症 状 の 緩 和 だけでなく エストロゲンの 生 殖 器 外 作 用 の 類 推 から 副 効 用 として 冠 動 脈 疾 患 や 骨 粗 鬆 症 も 予 防 できるとの 発 想 があり 恰 も 万 能 薬 のような 扱 いを 受 けた 実 際 抗 動 脈 硬 化 作 用 もあることが 疫 学 的 に 分 かってきた 1) ことから 時 代 の 寵 児 としての 扱 いを 受 けてきたが 次 第 に 有 害 作 用 が 存 在 することが 疫 学 的 調 査 に より 明 らかとなってきた Women s Health Initiative study 2) 中 間 報 告 が 2002 年 に 発 表 され HRT 群 における 冠 動 脈 疾 患 乳 がん 発 症 率 が 事 前 設 定 値 を 超 えて しまい 急 遽 臨 床 試 験 そのものが 中 止 になったことは 全 世 界 に 衝 撃 を 与 えた このように HRT には 有 害 事 象 も 存 在 するため エストロゲンの 人 体 各 組 織 に おける 生 理 的 作 用 の 特 性 を 理 解 する 必 要 がある エストロゲンの 生 体 作 用 をもたらすのは 核 内 受 容 体 エストロゲン 受 容 体 1

2 (ER)である エストロゲン 作 用 の 典 型 的 メカニズムは 二 種 類 存 在 する ER(α および β)がリガンド 17β-estradiol(E 2 )によって 核 内 に 移 行 し 転 写 因 子 と して 作 用 する というものであり E 2 は 間 接 的 に 細 胞 増 殖 作 用 などといった 生 物 学 的 作 用 および 効 果 を 発 揮 する このように ER の 作 用 機 構 は 分 子 生 物 学 的 に 精 緻 であるが ホルモン 依 存 性 腫 瘍 の 形 成 過 程 において ER に 結 合 し 影 響 を 及 ぼす 転 写 共 役 因 子 が 担 う 分 子 機 構 の 解 析 は 重 要 である 中 でも 我 々は NAD + 依 存 性 ヒストン 脱 アセチル 化 酵 素 sirtuin1(sirt1)を 筆 頭 とするサーチュイン ファミリー 分 子 の 機 能 に 着 目 した サーチュインファミリー 分 子 は SIRT1 から SIRT7 までのサブタイプが 存 在 し SIRT1 は 酵 母 や 線 虫 の 寿 命 を 延 長 することで 注 目 を 集 めたが 最 近 ではこれら 7 つのサブタイプ 全 てが 核 細 胞 質 ミト コンドリアなど 細 胞 内 に 独 自 の 局 在 を 示 し 生 体 における 代 謝 抗 炎 症 認 知 機 能 腫 瘍 形 成 などといった 広 範 な 役 割 を 担 うことが 明 らかになってきて いる 3) SIRT1 は p53 FOXO PGC-1α NF-κB β カテニンなど 細 胞 内 シグ ナル 因 子 群 を 脱 アセチル 化 することで 遺 伝 子 発 現 制 御 細 胞 死 ストレス 反 応 老 化 脂 質 糖 代 謝 促 進 などの 機 能 を 有 していることが 近 年 明 らかに なっている( 図 1) 図 1 SIRT1 活 性 化 のメカニズムとその 生 体 作 用 2

3 赤 ワインに 含 まれるポリフェノールであるレスベラトロールは SIRT1 活 性 化 を 介 して 細 胞 死 抵 抗 因 子 の 発 現 量 を 抑 制 することが 動 物 実 験 などで 明 らかに なっている また レスベラトロールは 植 物 エストロゲンとして ER の 転 写 活 性 化 作 用 があり in vitro の 実 験 系 ではおよそ 10-6 ~10-5 M のオーダーで ER の 活 性 化 作 用 があり ERα に 対 してはアンタゴニストとしての 作 用 がないが ERβ 活 性 に 関 しては 相 加 的 に 作 用 する 一 種 の Selective Estrogen Receptor Modulator として 考 えられている 4) レスベラトロールは SIRT1 活 性 のみならず ERβ の 活 性 を 高 めることによって 多 くの 細 胞 において 分 化 促 進 細 胞 増 殖 抑 制 作 用 をも つ 可 能 性 がある 近 年 では サーチュインファミリー 分 子 の 構 造 解 析 から レ スベラトロールは SIRT1 および SIRT5 を 活 性 化 させるが サーチュインファミ リーの 中 で 最 も 強 く 抗 酸 化 機 能 を 持 つ SIRT3 の 機 能 を 抑 制 することが 示 唆 さ れている 5) 我 々は サーチュインファミリー 分 子 の 産 婦 人 科 領 域 における 機 能 解 析 を E 2 標 的 組 織 との 関 わりから 検 討 しており その 最 近 の 知 見 を 紹 介 する ヒト 卵 巣 における SIRT1 および SIRT3 の 生 理 的 意 義 ヒト 卵 巣 における SIRT1 および SIRT3 の 存 在 を 免 疫 組 織 化 学 染 色 法 にて 検 討 したところ 卵 巣 顆 粒 膜 細 胞 におけるSIRT1およびSIRT3の 存 在 が 確 認 された SIRT1 の 活 性 化 が 顆 粒 膜 細 胞 に 及 ぼす 影 響 をみるために ラット 顆 粒 膜 細 胞 を 初 代 培 養 し レスベラトロールにより 処 理 したところ 細 胞 数 は 低 下 するもの の 細 胞 死 は 発 生 していなかったが SIRT1 の 発 現 が 上 昇 し StAR LH 受 容 体 アロマターゼなどの 黄 体 化 関 連 因 子 群 タンパク 発 現 が 上 昇 することが 判 明 した ラット 卵 巣 顆 粒 膜 細 胞 培 地 にレスベラトロールを 添 加 ( 最 終 濃 度 100 μm)して 培 養 を 継 続 したところ 48 時 間 時 点 での 培 地 上 清 プロゲステロン 値 は 有 意 に 高 値 を 示 していたため 黄 体 化 関 連 因 子 群 の 発 現 上 昇 が 実 際 にプロゲステロン 値 の 上 昇 に 結 びついていることが 示 された 6) 顆 粒 膜 細 胞 の 黄 体 化 は 妊 娠 維 持 に 正 の 作 用 をするが レスベラトロールは 黄 体 化 関 連 因 子 の 発 現 を 介 し 顆 粒 膜 細 胞 の 黄 体 化 を 促 進 するというメカニズムが 示 された( 図 2A) サーチュインファ ミリーの 中 で 抗 酸 化 作 用 に 主 たる 役 割 をもつ SIRT3 の 卵 巣 における 生 理 的 意 義 を 体 外 受 精 プログラムにおいて 得 られるヒト 黄 体 化 顆 粒 膜 細 胞 を 用 いて 検 討 した ヒト 黄 体 化 顆 粒 膜 細 胞 を 初 代 培 養 し 過 酸 化 水 素 により 処 理 すると 細 3

4 胞 の 酸 化 ストレスが 顕 著 に 現 れカタラーゼ SOD1 など 抗 酸 化 因 子 の 発 現 が 上 昇 するが SIRT3 の 発 現 も 上 昇 した sirna を 用 いて 内 在 性 SIRT3 をノックダウ ンすると 細 胞 に 酸 化 ストレスが 顕 著 に 現 れることを 蛍 光 免 疫 染 色 法 にて 示 した また 内 在 性 SIRT3 のノックダウンにより アロマターゼ 17β-HSD1 などの 卵 胞 発 育 促 進 因 子 群 の mrna や StAR p450scc 3β-HSD などの 黄 体 化 関 連 因 子 群 の mrna が 上 昇 することが 判 明 した その 結 果 内 在 性 SIRT3 のノックダウンにより 培 地 上 清 プロゲステロン 値 が 低 値 となったことから SIRT3 は 卵 巣 顆 粒 膜 細 胞 の 抗 酸 化 作 用 に 影 響 を 及 ぼすことが 示 唆 された( 図 2B) 7) サーチュインファミリ ーはこのように 卵 巣 顆 粒 膜 細 胞 において 機 能 的 であり サブタイプ 別 の 特 定 機 能 を 担 いうることが 見 出 された A B 図 2 卵 巣 におけるサーチュインファミリーの 機 能 の 模 式 図 A:レスベラトロールによる 黄 体 化 促 進 機 構 B:SIRT3 による 卵 胞 発 育 および 黄 体 化 促 進 機 構 子 宮 内 膜 症 とレスベラトロール 子 宮 内 膜 症 は 生 殖 可 能 年 齢 女 性 に 好 発 し 不 妊 月 経 痛 などをもたらす 発 生 原 因 不 明 な 疾 患 であるが 子 宮 外 の 組 織 において 子 宮 内 膜 が 増 殖 性 に 発 育 する 疾 患 と 定 義 される 子 宮 内 膜 症 マウスモデルを 作 成 し ERβ アゴニストを 使 用 し た 実 験 によると 2 週 間 の ERβ アゴニスト 投 与 で 病 変 サイズが 縮 小 したという 既 報 がある 8) ERβ アゴニストには NK 細 胞 やマクロファージを 活 性 化 させる 作 用 があることから 免 疫 的 機 序 により 子 宮 内 膜 症 に 対 し 抑 制 的 に 作 用 するこ 4

5 とが 期 待 される また 子 宮 内 膜 症 マウスモデルにおいてレスベラトロールが 子 宮 内 膜 症 組 織 の 病 変 進 展 を 抑 制 することが 報 告 されており レスベラトロール の 子 宮 内 膜 症 への 治 療 効 果 に 関 する 研 究 が 色 々な 方 面 から 進 められている 子 宮 内 膜 症 モデルマウスおよびラットにおいて レスベラトロールは 子 宮 内 膜 症 病 巣 での 上 皮 細 胞 間 質 細 胞 両 者 の 増 殖 を 抑 制 し アポトーシスを 誘 導 するこ と 病 変 における 血 管 新 生 を 抑 制 することなども 報 告 された 子 宮 内 膜 症 患 者 に 対 し レスベラトロールとエストロゲン プロゲスチン 製 剤 との 併 用 で COX-2 発 現 を 抑 制 することから 疼 痛 の 緩 和 作 用 も 示 されており 臨 床 的 な 有 用 性 が 明 らかになりつつある 我 々は 子 宮 内 膜 症 間 質 細 胞 における SIRT1 の 存 在 を 免 疫 組 織 化 学 染 色 法 にて 示 し レスベラトロールが 濃 度 依 存 性 に 培 養 子 宮 内 膜 間 質 細 胞 の TNF-α 誘 導 性 IL-8 分 泌 を 抑 制 することを 示 した sirna を 用 いて 培 養 子 宮 内 膜 間 質 細 胞 の 内 在 性 SIRT1 をノックダウンすると レスベラトロール による IL-8 分 泌 抑 制 作 用 が 脱 抑 制 されることから レスベラトロールによる TNF-α 誘 導 性 IL-8 分 泌 には SIRT1 が 関 与 している 可 能 性 が 考 えられた( 図 3) 9) レスベラトロールには 顕 著 な 抗 炎 症 作 用 があることが 知 られているため 今 後 臨 床 応 用 されるべき 基 礎 を 示 した 図 3 子 宮 内 膜 症 間 質 細 胞 に 対 するレスベラトロールの 抗 炎 症 作 用 の 模 式 図 5

6 SIRT1 の 子 宮 内 膜 における 作 用 免 疫 組 織 化 学 染 色 法 を 用 いて SIRT1 が 子 宮 内 膜 に 存 在 することを 示 し 子 宮 内 膜 癌 細 胞 株 Ishikawa の 内 在 性 SIRT1 発 現 を 制 御 することで 細 胞 接 着 分 子 E-cadherin の 発 現 が 正 に 制 御 されることを 示 した レスベラトロールにより SIRT1 と E-cadherin の 発 現 が 共 に 濃 度 依 存 的 に 上 昇 するのみならず E-cadherin プロモーターも 正 に 制 御 されることが 判 明 した 子 宮 内 膜 癌 培 養 細 胞 株 Ishikawa を 子 宮 側 絨 毛 癌 培 養 細 胞 株 JAR を 配 偶 子 に 模 した in vitro spheroid assay を 着 床 モデルとして 検 討 したが SIRT1 活 性 化 により 着 床 能 が 亢 進 することがわかった また SIRT1 のレプレッサーである Sirtinol により 着 床 能 が 抑 制 されることを 見 出 した よってレスベラトロールは SIRT1 その ものの 発 現 とそれ 単 独 でも E-cadherin の 発 現 を 上 昇 させることで 着 床 能 向 上 に 寄 与 するということを 見 出 した( 図 4) 10) 図 4 レスベラトロールの 着 床 促 進 作 用 の 模 式 図 レスベラトロールは SIRT1 発 現 を 促 進 するだけでなく E-cadherin 発 現 を 直 接 的 に 促 進 することが 示 唆 されている 6

7 おわりに SIRT1 は 産 婦 人 科 領 域 においても 着 床 促 進 黄 体 化 促 進 抗 炎 症 などの 多 彩 な 機 能 が 存 在 することが 明 らかとなった また SIRT3 も 卵 巣 における 抗 酸 化 作 用 が 存 在 することで サーチュインファミリーの 産 婦 人 科 領 域 における 多 様 な 分 子 機 構 が 明 らかになった SIRT1 は 転 写 調 節 因 子 としての 作 用 があるが ERα と 内 在 性 複 合 体 を 形 成 し ERα 自 体 が SIRT1 プロモーターに 結 合 することで SIRT1 発 現 が 増 加 し 結 果 としてカタラーゼやグルタチオンペルオキシダーゼの 発 現 が 上 昇 する 一 方 癌 抑 制 遺 伝 子 である cyclin G2 や p53 の 発 現 は 減 少 するような 遺 伝 子 発 現 調 節 メ カニズムが 存 在 する SIRT1 によるホルモン 依 存 性 組 織 の 制 御 はさらに 複 雑 な ものであることが 推 察 されることから これからの 研 究 の 進 展 が 望 まれる 食 事 制 限 およびレスベラトロールは いずれも SIRT1 の 活 性 化 をもたらす レス ベラトロールの 有 用 な 作 用 を 診 療 HRT に 取 り 入 れることで ER 活 性 と SIRT1 活 性 の 精 緻 なバランスを 取 りつつより 優 れた HRT になる 可 能 性 がある 7

8 引 用 文 献 1) Stampfer, M.J., et al. Postmenopausal estrogen therapy and cardiovascular disease. Ten-year follow-up from the nurses' health study. New Engl J Med 325, (1991). 2) Rossouw, J.E., et al. Risks and benefits of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women: principal results From the Women's Health Initiative randomized controlled trial. JAMA 288, (2002). 3) Finkel, T., Deng, C.X. & Mostoslavsky, R. Recent progress in the biology and physiology of sirtuins. Nature 460, (2009). 4) Bowers, J.L., Tyulmenkov, V.V., Jernigan, S.C. & Klinge, C.M. Resveratrol acts as a mixed agonist/antagonist for estrogen receptors alpha and beta. Endocrinology 141, (2000). 5) Gertz, M., et al. A molecular mechanism for direct sirtuin activation by resveratrol. PloS one 7, e49761 (2012). 6) Morita, Y., et al. Resveratrol promotes expression of SIRT1 and StAR in rat ovarian granulosa cells: an implicative role of SIRT1 in the ovary. Reprod Biol Endocrinol 10, 14 (2012). 7) Fu, H., et al. SIRT3 positively regulates the expression of folliculogenesis- and luteinization-related genes and progesterone secretion by manipulating oxidative stress in human luteinized granulosa cells. Endocrinology 155, (2014). 8) Harris, H.A., Bruner-Tran, K.L., Zhang, X., Osteen, K.G. & Lyttle, C.R. A selective estrogen receptor-beta agonist causes lesion regression in an experimentally induced model of endometriosis. Hum Reprod 20, (2005). 9) Taguchi, A., et al. Resveratrol suppresses inflammatory responses in endometrial stromal cells derived from endometriosis: a possible role of the sirtuin 1 pathway. J Obstet Gynaecol Res 40, (2014). 10) Shirane, A., et al. Regulation of SIRT1 determines initial step of endometrial receptivity by controlling E-cadherin expression. Biochem Biophys Res Commun 424, (2012). 8

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