13_遺伝子導入技術_P indd

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1 遺 伝 子 導 入 技 術 遺 伝 子 導 入 技 術 344 トランスフェクション 試 薬 345 エレクトロポレーション 348 エレクトロポレーション 試 薬 348 エレクトロポレーションシステム 349 パーティクルデリバリーシステム 356

2 遺 伝 子 導 入 技 術 遺 伝 子 導 入 技 術 生 体 内 へDNAおよびRNAを 遺 伝 子 導 入 することは 生 命 現 象 を 解 析 する 上 で 最 も 一 般 的 なツールの 一 つとなっています 現 在 では 様 々 な 標 的 や 実 験 系 に 合 わせて 多 くの 遺 伝 子 導 入 技 術 が 確 立 されています バイオ ラッドは1986 年 のジーンパルサー 発 売 以 来 常 にこ の 分 野 のリーダーとして 多 くの 製 品 を 提 供 しております バイオ ラッドは 遺 伝 子 導 入 に 関 連 する 様 々なアプリケーションに 豊 富 なラインアップでお 応 えいたします 次 の 表 から 標 的 の 種 類 やアプリケーションを 選 択 し 最 適 な 手 法 や 製 品 をお 選 びいただけます それぞれの 製 品 に 関 する 詳 細 は 次 ページ 以 降 をご 参 照 ください 遺 伝 子 導 入 セレクションガイド Transfection Technologies Page Plant Cell Suspension Cultures Plant Cell Adherent Cultures Plant Cell Callus or Explants Pollen Leaves in Situ Detached Leaves Meristems in Situ Detached Meristems Gram-Positive Bacteria Gram-Negative Bacteria Yeast Other Fungi Skin or Organs in Vivo Ex Vivo Cells or Tissues (e.g., blood) Suspension Cell Cultures Mammalian Cells Gene Knockdowns Plants Bacteria Fungi Animals Organ Cultures Adherent Cells, Trypsinized Adherent Cells, Attached Organelles (chloroplasts, mitochondria) Lipid Transfection silentfect lipid reagent for RNAi 348 TransFectin lipid reagent 347 Electroporation Gene Pulser MXcell エレクトロポレーション システム 350 Gene Pulser Xcell コンプリートシステム 352 * * Gene Pulser Xcell CEシステム 353 * * Gene Pulser Xcell PCシステム 353 MicroPulser エレクトロポレーター 354 Biolistic Particle Delivery Helios gene gun システム 357 PDS-1000/He 359 PDS-1000/He Hepta システム 359 最 適 適 可 * プロトプラスト 化 が 必 要 トランスフェクション 試 薬 (P.345) エレクトロポレーション(P.348) パーティクルデリバリー(P.356) 核 酸 Ions Gene A DNA coated microcarrier Sample 脂 質 複 合 体 形 成 導 入 B Cell Membrane Gas リポソーム 細 胞 エンドサイ トーシス Helios Gene Gun System Particle Delivery Method 分 析 C 344 遺 伝 子 導 入 技 術

3 トランスフェクション 試 薬 トランスフェクション 試 薬 カチオン 性 脂 質 によるトランスフェクションは 広 範 囲 の 真 核 細 胞 に 適 しています 市 販 されている 多 くの 脂 質 性 トランスフェクショ ン 試 薬 は カチオン 性 脂 質 と dioleoylphosphatidylethanolamine(dope)やコレステロールなどの 脂 質 の 水 性 懸 濁 液 です カチオ ン 性 脂 質 は 陽 電 荷 表 面 を 有 する 小 さなリポソームを 形 成 します カチオン 性 脂 質 懸 濁 液 にDNAを 加 えると DNAの 陰 電 荷 を 有 する リン 酸 基 がリポソームの 陽 電 荷 表 面 と 相 互 に 作 用 します これらの 脂 質 ーDNA 複 合 体 は 負 電 荷 を 有 する 細 胞 膜 表 面 と 結 合 します 一 般 的 に 脂 質 ーDNA 複 合 体 は エンドソームおよびリソソームを 通 じて 細 胞 内 に 取 り 込 まれると 考 えられています 核 酸 脂 質 複 合 体 形 成 導 入 リポソーム 細 胞 エンドサイトーシス 分 析 セレクションガイド silentfect Lipid Reagent TransFectin Lipid Reagent 特 長 RNAi 用 試 薬 汎 用 性 試 薬 用 途 sirna 遺 伝 子 発 現 sirna(shrna) 細 胞 株 多 様 な 細 胞 例 :A549 BHK HeLa K562 Jurkat Vero Primary Fibroblasts 多 様 な 細 胞 例 :A549 MCF-7 HeLa HUVEC Jurkat Primary Fibroblasts 遺 伝 子 導 入 技 術 345

4 トランスフェクション 試 薬 See Also セルカウンター: P.34 リアルタイム PCR 機 器 : P.369 リアルタイム PCR 試 薬 : P.381 RNA 抽 出 キット: P.13 ラボチップ 電 気 泳 動 : P.278 silentfect Lipid Reagent for RNAi 最 近 ではsmall interfering RNA(siRNA)によるジーンサイレ ンシングが 遺 伝 子 発 現 解 析 研 究 における 重 要 なツールとなって きています ジーンサイレンシングでは 特 に 低 い 細 胞 毒 性 が リポフェクションを 評 価 する 時 の 重 要 なファクターです 細 胞 毒 性 が 高 い 場 合 細 胞 の 生 存 率 の 低 下 や 形 態 の 変 化 により 正 確 な 発 現 抑 制 効 果 の 測 定 が 難 しくなります バイオ ラッドの silentfect Lipid ReagentはsiRNAの 導 入 に 特 化 したリポフェク ション 試 薬 です sirnaとのアフィニティが 高 く かつ 細 胞 毒 性 を 抑 えた 試 薬 ですので sirnaを 用 いたジーンサイレンシン グ 実 験 に 適 しています silentfectは 幅 広 い 細 胞 種 で 利 用 可 能 で 導 入 が 難 しい 細 胞 に 対 しても 有 効 です 上 皮 細 胞 でのタイトジャンクションの 研 究 によく 用 いられるCaco-2 細 胞 は 導 入 が 比 較 的 困 難 な 細 胞 系 です が シカゴ 大 学 の 研 究 室 ではsiLentFectを 用 いてsiRNAを 導 入 し MLCK1 遺 伝 子 の 発 現 抑 制 に 成 功 しました 詳 細 はBulletin 5370 に 記 載 されております sirnaとの 親 和 性 が 高 くなっていますので sirnaと 試 薬 の 使 用 量 を 少 なくできます 幅 広 い 細 胞 種 において 高 い 遺 伝 子 導 入 効 率 を 示 します 至 適 な 濃 度 では 細 胞 毒 性 は 低 く 抑 えられていますので 適 正 な 発 現 抑 制 効 果 実 験 を 行 うことができます silentfectを 用 いてsiRNAとdsDNA vectorsを 同 時 に 導 入 する ことが 可 能 です Suggested Reagent Quantities for Different Sizes of Plates/Wells Culture Vessel Size Volume of Plating Media sirna conc. Volume of Serum Free Medium silentfect Reagent 96well 0.1ml 5-20nM 20μl μl 24well 0.5ml* 5-20nM 50μl μl 12well 1.0ml* 5-20nM 100μl μl 6well/35mm 2.5ml* 5-20nM 250μl μl 60mm 5.0ml* 5-20nM 500μl μl 100mm 10.0ml* 5-20nM 1.0ml μl * Carefully aspirate medium minutes prior to transfection and add onehalf volume of medium. MCF-7 細 胞 への 蛍 光 sirnaの 効 果 的 な 導 入 左 図 :Hoechst 核 染 色 右 図 : 蛍 光 ラベルsiRNA A 405 Luciferase activity, RLU silentfect volume, μl/well 3,000 2,500 2,000 1,500 1, sirna, nm silentfect volume, μl/well sirna, nm silentfect Lipid ReagentとsiRNAの 使 用 量 の 違 いによる 導 入 効 果 上 段 : 恒 常 的 にlacZを 発 現 させたCHO 細 胞 に 対 して laczをターゲットに したsiRNAを 導 入 したときのsiLentFect Lipid Reagentの 使 用 量 の 違 いによ るβガラクトシターゼ 活 性 ( 左 )とノックダウン 効 率 ( 右 ) 24wellプレー トを 使 用 下 段 : 恒 常 的 にルシフェラーゼを 発 現 させたCHO 細 胞 に 対 して ルシフェ ラーゼをターゲットにしたsiRNAの 使 用 量 の 違 いによるルシフェラーゼ 活 性 ( 左 )とノックダウン 効 率 ( 右 ) silentfect Lipid Reagentは96wellプレー トで 1wellあたり0.3μl 使 用 Downregulation, % Downregulation, % Examples of Cell Lines Successfully Transfected With silentfect Lipid Reagent* Cell Line Cell Type Cell Line Cell Type 184htrt Human breast epithelial LNCap Human prostate adenocarcinoma 4T1 Mouse mammary tumor MCF-7 Human breast adenocarcinoma A549 Human lung carcinoma Murine EC Mouse endothelial Caco-2 Human colon adenocarcinoma NIH 3T3 Mouse embryo fibroblast CHO-K1 Chinese hamster ovary epithelial PC-3 Human prostate cancer COS-7 SV40-transformed African green monkey kidney Primary fibroblast Human foreskin fibroblast HEK 293 Human embryonic kidney Primary keratinocyte Human keratinocyte HeLa Human cervical adenocarcinoma Primary ovarian Epithelial HepG2 Human liver carcinoma SVEC4 Vascular endothelial HUVEC Human umbilical vein endothelial VSMC Vascular smooth muscle * 詳 しくは Bulletin 5343 または 参 照 ください カタログ 番 号 品 名 価 格 保 存 silentfect Lipid Reagent, 0.5ml 34, silentfect Lipid Reagent, 1.0ml 53, silentfect Lipid Reagent, 5 1.0ml 168, 遺 伝 子 導 入 技 術

5 トランスフェクション 試 薬 TransFectin Lipid Reagent TransFectin Lipid Reagentは カチオン 性 脂 質 を 用 いたトランス フェクション 試 薬 です 様 々な 細 胞 において 高 い 遺 伝 子 導 入 効 率 とタンパク 質 の 高 レベルな 発 現 を 実 現 します 幅 広 い 細 胞 において 高 い 遺 伝 子 導 入 効 率 を 示 します 他 の 高 効 率 な 試 薬 と 比 べて 細 胞 毒 性 は 低 く 抑 えられています タンパク 質 の 高 レベルな 発 現 を 実 現 します シンプルな3ステップのプロトコールです トランスフェクション 後 の 培 地 交 換 は 不 要 です 40 90% confluenceの 細 胞 に 使 用 できます 血 清 含 有 培 地 上 の 細 胞 へ 使 用 できます O.D Volume of TransFectin, μl TransFectin LipidReagentの 使 用 量 の 違 いによる 導 入 効 果 K562 細 胞 に 対 して βガラクトシターゼを 発 現 させるためのプラスミド DNAを 導 入 したときのTransFectin LipidReagentの 使 用 量 の 違 いによるβ ガラクトシターゼ 活 性 1wellあたり cellを 培 養 した24wellプレートを 使 用 導 入 後 24 時 間 後 測 定 プラスミドDNAの 使 用 量 はそれぞれ0.25μl( ) 1.00μl( ) 使 用 See Also セルカウンター: P.34 リアルタイム PCR 機 器 : P.381 RNA 抽 出 キット: P.13 プラスミドDNA 抽 出 キット: P.15 Suggested Reagent Quantities for Different Sizes of Plates/Wells Culture Vessel Size Surface Volume of Area (cm 2 ) Plating Media Plasmid DNA Volume of Serum Free Medium TransFectin Reagent 96well ml ng 25μl μl 24well ml μg 50μl μl 12well ml μg 100μl μl 6well/35mm ml μg 250μl μl 60mm ml μg 500μl 15-20μl 100mm ml 12-36μg 1.5ml 40-60μl 無 血 清 培 地 50μlに 対 して0.5 4μlの TransFectin 培 養 細 胞 無 血 清 培 地 50μlに 対 して μgのプラスミドDNA 等 容 量 のTransFectinおよび DNA 溶 液 を 混 和 20 分 間 インキュベートして DNA-リポソーム 複 合 体 を 形 成 混 和 後 DNA-リポソーム 複 合 体 を 細 胞 に 直 接 添 加 (100μl/24ウェルプレート) 一 晩 インキュ ベートした 後 に 測 定 TransFectinの3ステッププロトコール Examples of Cell Lines Successfully Transfected With TransFectin Lipid Reagent* Cell Line Cell Type Cell Line Cell Type A375 Human malignant melanoma K562 Human bone marrow, chronic myelogenous leukemia A549 Human lung carcinoma LLC-MK2 Monkey epithelial kidney ACHN Human renal adenocarcinoma LNCaP Human prostate adenocarcinoma BHK Newborn Syrian golden hamster kidney MEF Mouse embryo fibroblast CHO Chinese hamster ovary NBT-II Rat bladder carcinoma COS-7 SV40-transformed African green monkey kidney Neuro-2a Mouse neuroblastoma CV-1 African green monkey fibroblast kidney NIH 3T3 Mouse embryo fibroblast HEK 293 Human embryonic kidney SH-SY5Y Human neuroblastoma HeLa Human cervical adenocarcinoma SW480 Human colorectal adenocarcinoma Hep G2 Human epithelial liver carcinoma Vero African green monkey kidney * 詳 しくは Bulletin 5343 または 参 照 ください カタログ 番 号 品 名 価 格 保 存 TransFectin Lipid Reagent, 0.5ml 29, TransFectin Lipid Reagent, 1.0ml 45, TransFectin Lipid Reagent, 5 1.0ml 147,000 4 遺 伝 子 導 入 技 術 347

6 エレクトロポレーション エレクトロポレーション 試 薬 エレクトロポレーション エレクトロポレーションは 短 パルスの 電 流 を 利 用 して DNA やRNAなどの 高 分 子 を 細 胞 内 に 導 入 する 技 術 です 細 胞 を 電 気 パルスにさらすと 細 胞 膜 に 一 時 的 に 孔 が 形 成 され 核 酸 はこの 孔 を 通 過 して 細 胞 内 に 入 り 込 むと 考 えられています この 手 法 には エレクトロポレーション 装 置 とエレクトロポレーション 用 のキュベットが 必 要 です バイオ ラッドは Gene Pulser MXcellシステム Gene Pulser Xcellシステム MicroPulserおよ び 専 用 のエレクトロポレーションキュベットを 提 供 しています Gene Pulserに 最 適 化 されたGene Pulserエレクトロポレーショ ンバッファーをご 用 意 しています B A Ions Gene Cell membrane エレクトロポレーション( 電 気 穿 孔 法 )の 原 理 ターゲットとなる 細 胞 を 高 電 圧 の 電 場 にさらすと 細 胞 膜 と 細 胞 質 の 間 で 一 時 的 に 極 端 な 電 位 差 が 生 じます(A) この 影 響 で 細 胞 膜 の 構 造 が 変 化 し 透 過 性 が 上 昇 します(B) 電 場 から 開 放 されると 細 胞 膜 の 構 造 は 回 復 しますが この 際 に 周 囲 に 溶 解 している 核 酸 タンパク 質 糖 低 分 子 などの 物 質 が 細 胞 内 に 取 り 込 まれます(C) エレクトロポレーショ ンは このような 細 胞 膜 の 構 造 変 化 を 利 用 し 目 的 となるDNAを 細 胞 内 へと 導 入 する 方 法 です C エレクトロポレーション 試 薬 See Also セルカウンター: P.34 ラボチップ 電 気 泳 動 : P.278 タンパク 質 電 気 泳 動 : P.155 Gene Pulser エレクトロポレーションバッファー 浮 遊 系 細 胞 初 代 培 養 細 胞 などへ 有 効 なエレクトロポレーショ ン 用 バッファーです 動 物 細 胞 へのsiRNA プラスミドDNAの 導 入 に 威 力 を 発 揮 します 高 い 遺 伝 子 導 入 効 率 を 維 持 しながら 導 入 細 胞 の 致 死 率 を 低 減 させます Gene Pulserシリーズを 含 む 様 々なエレクトロポレーション 装 置 に 使 用 可 能 です 様 々な 細 胞 株 にsiRNA プラスミドDNAの 遺 伝 子 導 入 を 可 能 にします 他 の 試 薬 使 用 時 のエレクトロポレーション 条 件 とは 大 きく 異 なります 目 安 としては PBS 使 用 時 の1/2 1/3の 電 気 容 量 (μf)が 至 適 条 件 に 近 い 条 件 となります カタログ 番 号 品 名 価 格 保 存 Gene Pulserエレクトロポレーションバッファー 1.8ml 10 本 29, Gene Pulserエレクトロポレーションバッファー 30ml 42, 遺 伝 子 導 入 技 術

7 エレクトロポレーション エレクトロポレーションシステム エレクトロポレーションシステム Gene Pulser システム エレクトロポレーションは 効 率 の 良 い 遺 伝 子 導 入 法 として 広 く 使 用 されている 手 法 です 目 的 の 細 胞 に 電 気 パルスを 与 える ことで 細 胞 膜 の 構 造 を 一 時 的 に 変 化 させ その 透 過 性 を 増 すこ とにより 周 囲 に 溶 解 している 核 酸 タンパク 質 糖 などの 物 質 を 取 り 込 ませます エクスポネンシャルパルス( 減 衰 波 )と スクエアパルス( 矩 形 波 ) 使 用 するパルスの 波 形 は エレクトロポレーションの 効 率 を 向 上 させる 重 要 な 条 件 のひとつです 一 般 に 用 いられている 電 気 パルスの 波 形 はエクスポネンシャルパルスとスクエアパルスで す Gene Pulser XcellおよびGene Pulser MXcellはその 両 方 を 供 給 することができます PulseTrac 回 路 独 自 のPulseTrac 回 路 が 抵 抗 値 やコンデンサー 容 量 を 測 定 し 供 給 されるパルスの 誤 差 を 最 小 限 に 抑 えます また サンプル 抵 抗 値 の 事 前 測 定 機 能 やアーク 防 止 機 能 により 貴 重 なサンプル の 浪 費 を 防 ぐことができます さらに 余 分 な 電 気 を 自 動 的 に 放 電 する 機 能 やコンデンサーのキャリブレーション 機 能 などが 安 全 で 信 頼 性 の 高 い 実 験 を 支 援 します Voltage, V V 0 V 0 e τ A Time, ms A. エクスポネンシャルパルスは 最 も 広 く 使 用 されている 波 形 である コ ンデンサーより 放 出 されたパルスの 電 圧 は 時 間 とともに 減 衰 する 使 用 されるエクスポネンシャルパルスはタイムコンスタントと 電 場 強 度 の 2つのパラメータで 表 現 される タイムコンスタント(τ)は 設 定 した 電 圧 を 初 期 電 圧 V 0 とするとき 電 圧 がV 0 の37%まで 減 少 するのに 要 する 時 間 と 定 義 される タイムコンスタントは 回 路 の 抵 抗 値 (R)とコンデンサー 容 量 (C)により 規 定 される(τ=R C) 電 場 強 度 (E 単 位 はkV/cm)は 初 期 電 圧 V 0 とキュベットの 電 極 間 距 離 で 規 定 される V 0 V t Voltage, V t B Time, ms エレクトロポレーションシステム 選 択 ガイド B. スクエアパルスはエクスポネンシャルパルスでは 生 存 率 が 低 い 細 胞 に 対 して 使 用 される スクエアパルスを 使 用 することで 一 般 に 生 存 率 が 向 上 すると 言 われている エクスポネンシャルパルスのタイムコンスタ ントを 十 分 に 大 きくした 条 件 下 で パルスを 任 意 のタイミングで 終 了 さ せることにより ほぼ 一 定 の 電 圧 を 維 持 したスクエアパルスを 供 給 する 個 々のスクエアパルスは 設 定 電 圧 およびパルスの 長 さ(t)で 表 現 される また 複 数 のパルスを 使 用 する 際 は パルスの 間 隔 もパラメーターのひ とつとなる 実 際 には 初 期 電 圧 とパルス 終 了 時 の 電 圧 には 僅 かな 差 が 生 じるが この 差 はpulse droop(vt)と 呼 ばれ 通 常 は5% 以 内 に 抑 えら れる Gene Pulser Mxcellシステム Gene Pulser Xcellシステム MicroPulser プレート 対 応 対 応 未 対 応 未 対 応 キュベット 対 応 対 応 対 応 対 応 原 核 / 真 核 生 物 真 核 生 物 両 方 原 核 生 物 推 奨 細 胞 チャンバー プレートチャンバー ShockPodチャンバー ShockPodチャンバー ShockPodチャンバー システムオプション Gene Pulser Xcellコンプリートシステム Gene Pulser Xcell PCシステム Gene Pulser Xcell CEシステム 遺 伝 子 導 入 技 術 349

8 エレクトロポレーション エレクトロポレーションシステム See Also セルカウンター: P.34 エレクトロ ポレーション バッファー: P.348 タンパク 質 電 気 泳 動 関 連 : P.155 Gene Pulser MXcell エレクトロポレーションシステム Gene Pulser Mxcellは 全 く 新 しいプレートタイプのエレクトロポ レーションシステムです 反 応 容 器 は96well 24well 12wellの3 種 類 の 専 用 プレートがあ り 1プレート 内 でウェルごとに24 種 類 までの 異 なるプログラ ムを 実 行 できます 内 蔵 されたプログラムを 使 用 することで 1 回 の 実 験 でエクスポネンシャルパルス( 減 衰 波 ) スクエアパ ルス( 矩 形 波 )の 両 方 をパルスすることや 電 圧 電 気 容 量 の グラジェントパルスをかけることが 可 能 であり その 細 胞 に 最 適 な 導 入 条 件 を 簡 単 に 見 つけることができます 本 体 プレートタイプの 簡 単 操 作 プリセットプログラムによる 簡 便 な 条 件 検 討 が 可 能 プレート チャンバー 1 度 の 実 験 で24 種 類 のプログラムを 実 行 可 能 エクスポネンシャルパルス スクエアパルスの 同 時 実 行 が 可 能 1プレートあたり2 分 で 操 作 完 了 専 用 シングルキュベットチャンバーを 接 続 することでキュ ベットの 使 用 が 可 能 エレクトロポレーション プレート96Well エクスポネンシャルパルス( 減 衰 波 )での 条 件 検 討 96well/Exp, Vgrad/Cgrad ウェルセットABCD1~12: 電 圧 勾 配 (ΔV ) 350μF A ,000Ω B C ΔV (V) ウェルセットEFGH1~12: D コンデンサー 容 量 勾 配 (ΔC ) E ,000 1,000 1, V 1,000Ω F G H ΔC (μf) スクエアパルス( 矩 形 波 )での 条 件 検 討 96well/Sqr, Vgrad, Dgrad ウェルセットABCD1~12: 電 圧 勾 配 (ΔV ) 2,000μF A ,000Ω 20ms B C ΔV (V) ウェルセットEFGH1~12: D パルス 持 続 時 間 勾 配 (ΔD ) E V 2,000μF 1,000Ω F G H ΔD (ms) エクスポネンシャルパルス( 減 衰 波 )とスクエアパルス( 矩 形 波 )の 組 合 せ 条 件 検 討 Opt 96well/Exp, Sqr ウェルセットABCD1~12: エクスポネンシャルパルス E 150V 200V 250V 300V 350V 450V 250V 250V 250V 250V 250V 250V A X 350μF 350μF 350μF 350μF 350μF 350μF 200μF 250μF 350μF 500μF 750μF 1,000μF P B C ウェルセットEFGH1~12: D スクエアパルス S Q R E F G H 150V 200V 250V 300V 350V 450V 250V 250V 250V 250V 250V 250V 20ms 20ms 20ms 20ms 20ms 20ms 5ms 10ms 15ms 20ms 25ms 30ms 350 遺 伝 子 導 入 技 術

9 エレクトロポレーション エレクトロポレーションシステム Gene Pulser MXcell 用 Single ShockPodキュベット チャンバー プロトコールはキュベット プレート 共 通 です チャンバーは 片 手 で 操 作 可 能 です 軽 量 です Gene Pulser MXcell 用 Single ShockPod キュベットチャンバーは 標 準 的 キュベットが 使 用 可 能 です Gene Pulser MXcell 用 エレクトロポレーションプレート Gene Pulser MXcellエレクトロポレーションシステム 用 の 電 極 付 反 応 プレートです デスポザーブルであるため コンタミネーションの 心 配 があり ません プレートの 種 類 は96well 24well 12wellの3 種 類 です Gene Pulser MXcell Sample Volume Selection Guide Format Well Volume Cell Concentration Number of Well Sets 12-well plate ml to well plate μl to well plate μl to cm cuvette μl to N/A 仕 様 Gene Pulser MXcellシステム 入 力 電 圧 VACまたは VAC 50/60Hz 消 費 電 力 最 大 240W 規 格 安 全 性 EN61010 EMC EN61326 Class A サイズ 重 量 cm 6.62kg 出 力 波 形 エクスポネンシャルパルス スクエアパルス 設 定 電 圧 (V) (2V 刻 み) コンデンサ 容 量 (μf) 25 2,475(25μF 刻 み) 設 定 抵 抗 値 (Ω) 50 1,500(50Ω 刻 み) サンプル 抵 抗 値 (Ω) 最 低 10(10 500V 設 定 時 ) スクエアパルス 幅 (msec) ,999.95(10 500V 設 定 時 ) スクエアパルス 数 1 3(10 500V 設 定 時 ) スクエアパルス 間 隔 (sec) (10 500V 設 定 時 ) カタログ 番 号 品 名 価 格 JA Gene Pulser MXcellシステム 1,320, JB Gene Pulser MXcellシステムSingle Shock Pod 付 1,440, Gene Pulser MXcell 用 Single Shock Pod 250, Gene Pulser MXcell 用 エレクトロポレーションプレート 96well 38, B05 Gene Pulser MXcell 用 エレクトロポレーションプレート 96well (5 枚 ) 180, Gene Pulser MXcell 用 エレクトロポレーションプレート 24well 38, B05 Gene Pulser MXcell 用 エレクトロポレーションプレート 24well (5 枚 ) 180, Gene Pulser MXcell 用 エレクトロポレーションプレート 12well 38, B05 Gene Pulser MXcell 用 エレクトロポレーションプレート 12well (5 枚 ) 180,000 遺 伝 子 導 入 技 術 351

10 エレクトロポレーション エレクトロポレーションシステム See Also Gene Pulser Xcell エレクトロポレーションシステム セルカウンター: P.34 タンパク 質 電 気 泳 動 : P.155 エレクトロポレーションは 効 率 の 良 い 遺 伝 子 導 入 法 として 広 く 使 用 されている 手 法 です 目 的 の 細 胞 に 電 気 パルスを 与 える ことで 細 胞 膜 の 構 造 を 一 時 的 に 変 化 させ その 透 過 性 を 増 す ことにより 周 囲 に 溶 解 している 核 酸 タンパク 質 糖 など CEモジュール PCモジュール の 物 質 を 取 り 込 ませます エレクトロポレーションにおいて 一 般 に 用 いられている 電 気 パルスの 波 形 はエクスポネンシャ ルパルス( 減 衰 波 )とスクエアパルス( 矩 形 波 )です Gene Pulser Xcellはその 両 方 を 供 給 することができます 従 来 品 Gene Pulser Gene PulserⅡの 後 継 機 種 です これまでのGene Pulser シリーズにて 得 られた 設 定 パラメータは Gene Pulser Xcellに そのまま 使 用 できない 場 合 があります その 場 合 は 再 検 討 が 必 要 となります エクスポネンシャルパルス( 減 衰 波 )とスクエアパルス( 矩 形 波 )の 両 方 を 供 給 することができるため 原 核 細 胞 真 核 細 胞 を 問 わず 幅 広 いターゲットへの 応 用 が 可 能 です 易 しい 操 作 方 法 と 広 い 表 示 画 面 により 初 めての 方 でもすぐ にお 使 いいただけます 本 体 広 く 使 用 されている 哺 乳 動 物 や 微 生 物 へのプリセットプロト コールが 内 蔵 されており 条 件 検 討 の 手 間 を 軽 減 します ShockPod Cuvette Chamber 独 自 のPulseTrac 回 路 は 正 確 なパルス 供 給 サンプルの 抵 抗 値 測 定 パルスの 実 効 値 やタイムコンスタントの 表 示 等 様 々 な 側 面 で 実 験 の 信 頼 性 を 高 めます 最 大 で144 件 のユーザープロトコールを 保 存 し 呼 び 出 して 使 用 することができます また 過 去 100 件 分 の 実 験 結 果 を 自 動 的 に 保 存 します 高 電 圧 回 路 (PC module) 使 用 時 には 最 大 3,000Vまでの 電 圧 を 供 給 できます プリセットプロトコール Mammalian Cells Bacterial Cells Fungal Cells CHO E. coli S. cerevisiae COS7 A. tumefaciens P. pastoris 3T3 P. aeruginosa C. albicans 293 S. aureus S. pombe HeLa B. cereus D. discoideum BHK21 A549 S. pyrogenes L. plantarum CV1 K562 HL60 Jurkat HuT 遺 伝 子 導 入 技 術

11 エレクトロポレーション エレクトロポレーションシステム Gene Pulser Xcellシステム 選 択 ガイド システム GENE Pulser Xcellコンプリートシステム 真 核 生 物 原 核 生 物 の 両 方 にトランスフェクション 可 能 なシステム 本 体 の 他 にCEモジュールとPCモジュールを 含 みます Gene Pulser Xcell CEシステム 哺 乳 類 動 物 細 胞 や 植 物 プロトプラストを 含 む 真 核 生 物 へのエレクトロポ レーション 用 システム 本 体 とCEモジュールを 含 みます Gene Pulser Xcell PCシステム 細 菌 や 真 菌 もしくは 少 容 量 サンプルに 高 電 圧 をかけるエレクトロポレー ション 用 システム 本 体 の 他 にPCモジュールが 含 まれます カタログ 番 号 品 名 価 格 J1 Gene Pulser Xcellコンプリートシステム( 動 物 細 胞 植 物 プロトプラスト バクテリア 用 ) 1,450,000 構 成 内 容 :Gene Pulser Xcell Main unit Gene Pulser Xcell CE module Gene Pulser Xcell PC module Gene Pulser Xcell ShockPod エレクトロポレーションキュベット0.1cm, 0.2cm, 0.4cm 各 50 個 J1 Gene Pulser Xcell CEシステム( 動 物 細 胞 植 物 プロトプラスト 用 ) 1,050,000 構 成 内 容 :Gene Pulser Xcell Main unit Gene Pulser Xcell CE module Gene Pulser Xcell ShockPod エレクトロポレーションキュベット0.2cm, 0.4cm 各 50 個 J1 Gene Pulser Xcell PCシステム(バクテリア 用 ) 950,000 構 成 内 容 :Gene Pulser Xcell Main unit Gene Pulser Xcell PC module Gene Pulser Xcell ShockPod エレクトロポレーションキュベット0.1cm, 0.2cm 各 50 個 J1 Gene Pulser Xcellコアユニット 930,000 構 成 内 容 :Gene Pulser Xcell Main unit Gene Pulser Xcell ShockPod Gene Pulser Xcell Main unit 850, Gene Pulser Xcell CE module 550, Gene Pulser Xcell PC module 450, Gene Pulser Xcell ShockPod 80, エレクトロポレーションキュベット 0.2cm( 酵 母 用 ) 50 個 24, エレクトロポレーションキュベット 0.4cm( 動 物 細 胞 植 物 プロトプラスト 用 ) 50 個 24, エレクトロポレーションキュベット 0.1cm(バクテリア 用 ) 50 個 24,800 エレクトロポレーションキュベットはGene Pulser Xcell Gene PulserⅡ MicroPulserで 使 用 できます 遺 伝 子 導 入 技 術 353

12 エレクトロポレーション エレクトロポレーションシステム MicroPulser エレクトロポレーター MicroPulserはバクテリア 菌 類 などの 微 生 物 専 用 のシンプルな エレクトロポレーターです エレクトロポレーションは 化 学 的 遺 伝 子 導 入 方 法 などと 比 べ その 効 率 は 最 も 高 い 手 法 のひとつ です バクテリア 菌 類 のプリセットプログラムにより 標 準 的 な プロトコールがすぐにご 利 用 いただけます アーククエンチング 機 能 (アーク 防 止 機 能 )により 誤 って 高 塩 濃 度 に 調 整 されたサンプルへのパルス 発 生 を 防 止 します プリセット 以 外 にもマニュアル 設 定 が 可 能 です 最 大 3,000V まで 出 力 が 行 え より 高 い 効 率 での 導 入 の 可 能 性 が 広 がります タイムコンスタント(τ) 実 効 電 圧 の 表 示 が 可 能 です コンパクト 軽 量 設 計 です 電 気 容 量 (10μF) 抵 抗 値 (600Ω)は 固 定 設 計 です E. coliパルサー Gene Pulserシリーズにて 得 られた 設 定 パラメーター は MicroPulserにそのまま 使 用 できない 場 合 があります その 場 合 は 再 検 討 が 必 要 となります ご 注 意 願 います プリセットプログラムおよび 実 験 例 Program Species Cuvette Size Preset Conditions Ec1 Escherichia coli 0.1cm 1.80kV, 1pulse Ec2 Escherichia coli 0.2cm 2.50kV, 1pulse StA Staphylococcus aureus 0.2cm 1.80kV, 1pulse, 2.5msec Agr Agrobacterium tumefaciens 0.1cm 2.20kV, 1pulse Ec3 Escherichia coli 0.2cm 3.00kV, 1pulse Sc2 Saccharomyces cerevisiae 0.2cm 1.50kV, 1pulse Sc4 Saccharomyces cerevisiae 0.4cm 3.00kV, 1pulse ShS Schizosaccharomyces pombe 0.2cm 2.00kV, 1pulse Dic Dictyostelium discoideum 0.4cm 1.00kV, 2pulse, 1.0msec Pic Pichia pastoris 0.2cm 2.00kV, 1pulse Bacteria Fungi Unless the pulse time is truncated below 5msec, the unit will deliver the optimal time constant 5msec to samples in high-resistance media. 仕 様 インプット 電 圧 V 規 格 EN61010 最 大 消 費 電 流 2A RMS ( V) Meets EN and EN harmonic, flicker and voltage fluctuation 最 大 出 力 3,000V, 100A standards that will be mandatory in 2001 出 力 波 形 エクスポネンシャルパルス( 減 衰 波 ) FCC, Class A 出 力 電 圧 200 3,000V 10Vステップ EC 1010, CE 操 作 環 境 温 度 消 費 電 力 200W 湿 度 0-95% サイズ 21(W) 31(D) 8(H)cm 重 量 2.9kg カタログ 番 号 品 名 価 格 MicroPulserエレクトロポレーター 498,000 構 成 内 容 :MicroPulser 本 体 ショッキングチャンバー キュベット10 個 (0.1cm 5 個 0.2cm 5 個 ) 354 遺 伝 子 導 入 技 術

13 エレクトロポレーション エレクトロポレーションシステム エレクトロポレーションキュベット 再 現 性 のあるエレクトロポレーションを 行 うには ハイクオリ ティーなキュベットが 必 要 です Gene Pulser Xcell 本 体 または MicroPulserから 出 力 された 正 確 なパルスは 損 失 することなく キュベットに 伝 わります バイオ ラッドのキュベットは 減 菌 済 で 個 別 に 包 装 されているので 無 駄 なく 清 潔 にご 使 用 いただ けます 大 腸 菌 やバクテリアの 高 効 率 形 質 転 換 には 0.1cmキュ ベットを 用 い 高 い 電 場 強 度 を 使 用 します 酵 母 の 形 質 転 換 は 0.2cmキュベットを 用 い 動 物 細 胞 の 場 合 は0.4cmキュベットを 使 用 します バイオ ラッドは 再 現 性 のある 結 果 が 得 られるよ うハイクオリティーなキュベットを 提 供 します 導 入 効 率 Gene Pulserシリーズ MicroPulser 用 に 規 定 されたキュベットに より 最 大 のエレクトロポレーション 効 率 が 得 られます 検 査 と 試 験 キュベットには 製 造 過 程 中 に 数 種 の 検 査 と 品 質 保 証 の ために 実 際 にエレクトロポレー ション 試 験 が 行 われています 殺 菌 キュベットはそれぞれフタを もち γ 線 による3 段 階 の 殺 菌 が 行 われ 1 個 ずつ 包 装 されています スムーズな 電 極 表 面 アルミニウム 電 極 はサンプル 全 体 に 均 一 の 電 場 がかかるよう エッチングクリー ニングが11 段 階 行 われています 色 による 識 別 0.4cm 0.2cm 0.1cm キュベットはそれぞれ 包 装 が 色 分 けされています 堅 固 なチャンバー 継 ぎ 目 のない チャンバーはサンプル 漏 れの 可 能 性 を 排 除 し またその 堅 固 な 構 造 のため 電 極 間 は 常 に 平 行 に 保 たれ ます 頑 丈 な 構 造 キュベットは 非 常 に 高 い 電 圧 ( 電 場 )パルスがかかるた め 丈 夫 なポリカーボネート 製 と なっています 徹 底 された 洗 浄 キュベット 内 はクリーンルーム 環 境 内 での 組 立 てと 2 種 類 の 洗 浄 繰 り 返 しによってコンタミネー ションの 心 配 がありません キュベット 容 量 キュベットタイプ 容 量 キャップの 色 0.1cm 20μl 80μl 茶 色 0.2cm 40μl 400μl 緑 色 0.4cm 200μl 800μl* 青 色 * 350μl 400μlが 最 適 です エレクトロポレーションキュベットは1 回 のみの 使 用 を お 勧 めしております 再 使 用 または 当 社 製 以 外 のキュベッ トの 使 用 は 品 質 保 証 の 対 象 外 となりますのでご 注 意 願 います カタログ 番 号 品 名 価 格 エレクトロポレーションキュベット 0.4cm( 動 物 細 胞 植 物 プロトプラスト 用 ) 50 個 24, エレクトロポレーションキュベット 0.2cm( 酵 母 用 ) 50 個 24, エレクトロポレーションキュベット 0.1cm(バクテリア 用 ) 50 個 24, B05 エレクトロポレーションキュベット 0.4cm( 動 物 細 胞 植 物 プロトプラスト 用 ) 50 個 5 箱 99, B05 エレクトロポレーションキュベット 0.2cm( 酵 母 用 ) 50 個 5 箱 99, B05 エレクトロポレーションキュベット 0.1cm(バクテリア 用 ) 50 個 5 箱 99, エレクトロポレーションキュベット 0.4cm 500 個 150, エレクトロポレーションキュベット 0.2cm 500 個 150, エレクトロポレーションキュベット 0.1cm 500 個 150, B05 エレクトロポレーションキュベット 0.4cm 2,500 個 650, B05 エレクトロポレーションキュベット 0.2cm 2,500 個 650, B05 エレクトロポレーションキュベット 0.1cm 2,500 個 650, B10 エレクトロポレーションキュベット 0.4cm 5,000 個 1,000, B10 エレクトロポレーションキュベット 0.2cm 5,000 個 1,000, B10 エレクトロポレーションキュベット 0.1cm 5,000 個 1,000,000 遺 伝 子 導 入 技 術 355

14 パーティクルデリバリーシステム パーティクルデリバリーシステム 多 様 な 細 胞 と 形 質 転 換 PDS-1000/Heは ターゲット 細 胞 より 小 さいマイクロキャリア ( 微 粒 子 )にDNAをコーティングし 細 胞 に 撃 ち 込 むことにより 形 質 転 換 します 今 日 利 用 できるいくつかの 形 質 転 換 法 のうち パーティクルデリバリー 法 は 細 胞 種 に 関 わらず 広 範 囲 な 応 用 が 期 待 できます この 方 法 は 従 来 の 胚 へのマイクロインジェ クション 法 に 比 べ 操 作 が 非 常 に 簡 単 であり 時 間 がかかりま せん このパーティクルデリバリー 法 は 撃 ち 込 みの 前 後 処 理 が 少 なくて 済 み インタクトな 培 養 細 胞 への 形 質 転 換 にも 便 利 な 方 法 です Gas DNA coated microcarrier Sample 最 近 のレポートでは 化 学 的 方 法 リポフェクション エレク トロポレーションでさえ 難 しいセンシティブな 哺 乳 動 物 細 胞 に PDS-1000/He を 用 いてin vitroで 形 質 転 換 する 方 法 が 報 告 されて います また より 少 量 のDNAと 細 胞 でトランジェントまたは ステーブルな 形 質 転 換 が 可 能 です 初 代 のパーティクルデリバ リー 装 置 は 火 薬 式 でした ヘリウムの 方 式 を 用 いたPDS-1000/ Heは これよりも 再 現 性 使 用 上 の 安 全 性 に 優 れており 火 薬 に よるコンタミネーションがありません また 組 織 に 与 えるダ メージも 非 常 に 少 なくなっています 一 定 の 圧 力 で 破 裂 するラ プチャーディスクを 用 いて マイクロキャリア( 微 粒 子 )の 速 度 をコントロールしています Helios Gene Gun System Particle Delivery Method For More Information Web: Request or download bulletin: つのパーティクルデリバリー Factors Affecting Transformation Helios Gene Gunシステム PDS-1000/He* 状 態 In situ, in vitro, in vivo, ex vivo In vitro, ex vivo, in vivo(plants) エリア 狭 い(2cm 2 ) 広 い(40cm 2 ) He 圧 psi** 450-2,200psi 種 類 動 物 : 皮 膚 器 官 培 養 細 胞 (マウス ウサギ 魚 など) 動 物 : 培 養 細 胞 ( 付 着 性 動 物 細 胞 植 物 細 胞 ) 植 物 : 葉 分 裂 組 織 植 物 : 卵 藻 類 菌 類 酵 母 バクテリア その 他 微 生 物 植 物 バクテリア 酵 母 バクテリア その 他 微 生 物 オルガネラ 葉 緑 体 ミトコンドリア 詳 しい 情 報 は 覧 ください * この 製 品 を 導 入 される 場 合 は 高 圧 ガス 保 安 法 に 関 する 届 出 が 必 要 です ** 高 圧 ガス 保 安 法 の 規 制 に 基 づき 560psi 以 下 でご 使 用 ください 本 装 置 は 高 圧 ガスを 取 扱 うため 各 都 道 府 県 への 高 圧 ガス 保 安 法 に 基 づく 届 出 (または 許 可 等 )が 必 要 となります また 移 設 する 際 も 納 品 時 と 同 様 の 届 出 が 必 要 になる 場 合 がございます ご 購 入 にあたっては 設 置 条 件 およびご 使 用 上 の 注 意 点 等 をお 問 い 合 わせください 356 遺 伝 子 導 入 技 術

15 パーティクルデリバリーシステム Helios Gene Gun システム Helios Gene Gunシステムは 多 彩 な 目 的 細 胞 にin vivoにて 迅 速 に 直 接 撃 ち 込 むために 独 特 なハンドヘルドタイプの 銃 身 部 を 持 ちます 細 いチューブ 内 壁 に 目 的 細 胞 に 導 入 するDNAもしくは RNAをコーティングした 金 粒 子 を 付 着 させそれをヘリウム 圧 に て 撃 ち 込 みます 専 用 のチュービングプレップステーション 及 びチュービングカッターにより 一 度 に 約 40のサンプルカート リッジが 作 製 できます サンプルカートリッジホルダーには 一 度 に 最 大 12のサンプルカートリッジが 装 着 できます 必 要 に 応 じて 連 続 に 撃 ち 込 みを 行 うことや ターゲット 部 を 変 えて 撃 ち 込 むことが 可 能 です Helios Gene Gunシステムを 用 いて 遺 伝 子 導 入 を 行 うことによ り in vivoをターゲットとした 新 しく 幅 広 い 研 究 の 可 能 性 が 広 がります この 可 能 性 は 遺 伝 子 治 療 ( 特 にガン 治 療 傷 の 治 療 および 感 染 症 )を 研 究 する 上 で 特 に 有 効 と 考 えられています 植 物 への 応 用 としては 茎 頂 組 織 や 葉 のin vivoトランスフォー メーションなどが 行 われています またDNAワクチン(Genetic Immunization)の 分 野 では 皮 膚 に 直 接 撃 ち 込 むことによりDNA 量 を 少 なく(μgオーダー) 手 間 の かかるタンパク 質 精 製 の 過 程 が 省 けます 体 液 性 免 疫 や 細 胞 媒 介 性 免 疫 においてはこの 技 術 が 動 物 において 試 みられています Helios Gene GunシステムはPDS-1000/Heと 同 様 にBiolistic 技 術 をもとに 開 発 された パー ティクルデリバリーシステムである DNAをコーティングした 金 粒 子 をヘリウム ガス 圧 力 によって 加 速 し 目 的 の 細 胞 へ 撃 ち 込 む For More Information Web: Request or download bulletins: 5443 and 5446 カタログ 番 号 品 名 価 格 J2 Helios Gene Gunシステム(100/120V 50/60Hz 用 ) 6,400,000 構 成 内 容 : Helios Gene Gunキット Helios Gene Gun(1) カートリッジエクストラクターツール(1) カートリッジホルダー(5) 交 換 用 バレルライナー(5) O-リング(5) 電 池 9V(1) ヘリウムホースアッセンブリー ヘリウムレギュレーター (GA580フィメールフィッティング プレッシャーリリーフ/バルブ 付 ) 最 大 圧 2,600psi(1) チュービングプレップステーション(100/120V) チュービングプレップステーション(1) 3/16"メールルアー(2) チュービングサポートシリンダー(1) 1/8"レンチルアー(2) パワーコード(1) レンチ(1,5/64") O-リング(5) シリンジホルダー(1 10cc 用 ) N 2 レギュレーターホース(Nalgene 12ft) シリンジキット シリンジアダプターチュービング(5ft 0.104"ID 0.192"OD) シリンジ10cc(5) 1/8"フィーメールルアーフィッティング(5) チュービングカッター チュービングカッター(1) レザーブレード(10) Helios 条 件 設 定 キット 0.6μm 金 粒 子 (0.25g) 1.0μm 金 粒 子 (0.25g) 1.6μm 金 粒 子 (0.25g) PVP(0.5g MW360,000) Helios Gene Gun 関 連 製 品 Helios Gene Gun 用 条 件 設 定 キット 110,000 構 成 内 容 :0.6μm 金 粒 子 (0.25g) 1.0μm 金 粒 子 (0.25g) 1.6μm 金 粒 子 (0.25g) Heliosカートリッジキット(1) PDS/Helios 用 マイクロキャリアパッケージ0.6μ 金 粒 子 0.25g 55, PDS/Helios 用 マイクロキャリアパッケージ1.0μ 金 粒 子 0.25g 55, PDS/Helios 用 マイクロキャリアパッケージ1.6μ 金 粒 子 0.25g 55, Helios Gene Gun 用 カートリッジキット 29,000 構 成 内 容 :PVP(MW360, g) カートリッジバイアル(5) 乾 燥 剤 (5) ゴールドコート 用 チューブ(50ft) Helios Gene Gun 用 ゴールドコート 用 チューブ(50ft) 25,000 次 ページへ 続 く 遺 伝 子 導 入 技 術 357

16 パーティクルデリバリーシステム カタログ 番 号 品 名 価 格 スペアパーツ Helios Gene Gun 用 O-リング 5 個 3, Helios Gene Gun 用 バレルライナー 5 個 12, Helios Gene Gun 用 カートリッジホルダー 5 個 22, Helios Gene Gun 用 カートリッジエクストラクターツール 3, Helios Gene Gun 用 Diffusion Screen 5 個 11,000 Helios Gene Gunにはこの 他 に 別 途 購 入 品 (ヘリウムガス 窒 素 ガス 窒 素 レギュレーター 等 )が 必 要 です 詳 細 はお 問 い 合 わせください Helios Gene Gunシステムご 使 用 に 関 して Helios Gene Gunシステムは 高 圧 ガスを 使 用 するため 高 圧 ガス 保 安 法 の 対 象 となります 以 下 の 点 を 遵 守 していただくことにより 高 圧 ガス 保 安 法 で 定 める 適 用 除 外 となります 本 体 へは ヘリウムガス 以 外 を 供 給 しないでください ヘリウム 供 給 元 へ 接 続 するレギュレーターの2 次 圧 ( 出 力 )を1Mpa 未 満 にしてください 全 ガス 漏 洩 時 実 験 室 の 酸 素 濃 度 が18% 未 満 にならない 環 境 でご 使 用 ください (10m 3 のボンベをご 使 用 の 場 合 は 目 安 として 60m 3 以 上 の 容 積 が 必 要 となります) 実 験 室 には 十 分 な 換 気 設 備 を 備 え ガス 漏 洩 時 ガスが 滞 留 しないようにしてください 弊 社 納 品 後 のシステムは 構 成 品 の 除 去 や 入 れ 替 え 改 造 など 行 わないでください 358 遺 伝 子 導 入 技 術

17 パーティクルデリバリーシステム PDS-1000/He and Hepta システム PDS-1000/Heは 減 圧 装 置 とヘリウムの 圧 力 を 用 いて 目 的 の 細 胞 へマイクロキャリアを 効 果 的 に 加 速 して 撃 ち 込 む 装 置 です 撃 ち 込 み 前 にチャンバーのドアを 閉 め チャンバー 内 を 陰 圧 に します これは DNAでコーティングしたマイクロキャリアの 空 気 抵 抗 を 抑 えるために 必 要 で 安 全 インターロックになって います(この 装 置 は チャンバー 内 が 陰 圧 にならないと 作 動 し ません) Fire スイッチを 押 し ヘリウムガスがメーターバルブで 調 整 し た 目 盛 りまで 上 部 シリンダー 内 に 流 れ 込 みます ガスは 設 定 したラプチャーディスクが 破 裂 圧 力 に 到 達 するまで 送 られます 破 裂 により ヘリウムガス 衝 撃 圧 力 が 発 生 し マイクロキャリ アアッセンブリーに 伝 わります この 衝 撃 圧 力 はプラスチックのマクロキャリア 上 のDNAコー ティングしたマイクロキャリアをターゲット 細 胞 の 方 向 へ 移 動 させます マクロキャリアアッセンブリーとターゲットサンプル 間 にス トッピングスクリーンが 取 り 付 けられており 発 射 されたプラ スチックディスク(マクロキャリア)はこのスクリーンで 停 止 し マイクロキャリアのみスクリーンを 通 過 して ターゲット 細 胞 へ 撃 ち 込 まれます For More Information Web: Request or download bulletins: 5443 and 5447 Gas acceleration tube Rupture disk Microcarrier launch assembly Target cells PDS-1000/Heの 作 動 方 式 図 解 矢 印 は ヘリウムの 流 れる 方 向 Stopping screen Target shelf Macrocarrier DNA-coated microcarriers PDS-1000/He Heptaアダプター PDS-1000 HeptaアダプターはPDS-1000/Heと 接 続 することに よって 従 来 のPDS-1000システムより 一 度 に7 10 倍 の 多 く の 細 胞 へ 導 入 することが 可 能 です 注 意 : 本 製 品 を 導 入 される 場 合 は 高 圧 ガス 保 安 法 に 関 する 届 出 が 必 要 で す 現 在 所 有 されているPDSシステムに Heptaアダプターを 導 入 される 場 合 も 新 たに 届 出 が 必 要 です パーティクルデリバリー 法 なので リポフェクションのよう に 導 入 後 の 細 胞 毒 性 がありません C. elegansの 研 究 で 多 数 の 実 績 があります ストッピングスクリーン 以 外 の 消 耗 品 は 標 準 システムと 共 通 です Bombardment Parameters* Heptaアダプター PDS-1000/He 装 置 マイクロキャリアランチアッセンブ リー ヘリウムプレッシャーゲージ ( 上 部 ) 装 備 のメインチャンバー 中 央 のゲージ( 装 置 左 側 )は チャンバー 内 の 陰 圧 をモニターし 下 方 2つのノ ブは 吸 引 とベント 速 度 を 調 整 Cell Type Vacuum, " Hg Target Distance, cm Helium Pressure, psi Particle Size Yeast , μm gold Algae , μm gold Plant Embryos , μm gold Callus or cell cultures , μm gold Subcellular organelles , μm gold Animal Tissue cultures , μm gold Tissue sections , μm gold * Recommended settings as starting parameters for bombardment of a variety of cell types. Many factors affect bombardment efficiency, but most users will find it sufficient to optimize the major variables individually, then test their interactions on a limited scale. 遺 伝 子 導 入 技 術 359

18 パーティクルデリバリーシステム カタログ 番 号 品 名 価 格 PDS-1000/He* J1 PDS-1000/He 5,400, J1 PDS-1000/He Hepta システム 7,200, PDS-1000/He Hepta アダプター 1,800,000 Expert Careプラン( 通 常 の 無 償 保 証 1 年 間 に 加 え さらに 保 証 期 間 を 延 長 するプランです) SVCEC PDS-1000/He 保 証 延 長 1 年 250,000 SVCEC PDS-1000/He 保 証 延 長 2 年 465,000 PDS-1000/He 消 耗 品 PDS-1000/He 条 件 設 定 キット500 回 175,000 構 成 内 容 :1.0μm 金 粒 子 および1.6μm 金 粒 子 0.25g 8 種 類 のラプチャーディスク100 枚 マクロキャリア500 枚 ストッピングスクリーン500 枚 JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.0μ 金 +450psi** ラプチャーディスク)500 回 145,000 構 成 内 容 :1.0μm 金 粒 子 0.5g 450psi** ラプチャーディスク500 枚 マクロキャリア500 枚 ストッピングスクリーン500 枚 JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.0μ 金 +650psi** ラプチャーディスク)500 回 145, JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.0μ 金 +900psi** ラプチャーディスク)500 回 145, JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.0μ 金 +1,100psi** ラプチャーディスク)500 回 145, JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.0μ 金 +1,350psi** ラプチャーディスク)500 回 145, JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.0μ 金 +1,550psi** ラプチャーディスク)500 回 145, JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.0μ 金 +1,800psi** ラプチャーディスク)500 回 145, JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.0μ 金 +2,000psi** ラプチャーディスク)500 回 145, JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.6μ 金 +450psi** ラプチャーディスク)500 回 150,000 構 成 内 容 :1.6μ 金 0.5g 450psi** ラプチャーディスク500 枚 マクロキャリア500 枚 ストッピングスクリーン500 枚 JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.6μ 金 +650psi** ラプチャーディスク)500 回 150, JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.6μ 金 +900psi** ラプチャーディスク)500 回 150, JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.6μ 金 +1,100psi** ラプチャーディスク)500 回 150, JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.6μ 金 +1,350psi** ラプチャーディスク)500 回 150, JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.6μ 金 +1,550psi** ラプチャーディスク)500 回 150, JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.6μ 金 +1,800psi** ラプチャーディスク)500 回 150, JA PDS-1000/Heスタンダードプレッシャーキット(1.6μ 金 +2,000psi** ラプチャーディスク)500 回 150, PDS-1000/Heラプチャーディスク 450psi** 100 枚 23, PDS-1000/Heラプチャーディスク 650psi** 100 枚 23, PDS-1000/Heラプチャーディスク 900psi** 100 枚 23, PDS-1000/Heラプチャーディスク 1,100psi** 100 枚 23, PDS-1000/Heラプチャーディスク 1,350psi** 100 枚 23, PDS-1000/Heラプチャーディスク 1,550psi** 100 枚 23, PDS-1000/Heラプチャーディスク 1,800psi** 100 枚 23, PDS-1000/Heラプチャーディスク 2,000psi** 100 枚 23, PDS/Helios 用 マイクロキャリアパッケージ 0.6μ 金 粒 子 0.25g 55, PDS/Helios 用 マイクロキャリアパッケージ 1.0μ 金 粒 子 0.25g 55, PDS/Helios 用 マイクロキャリアパッケージ 1.6μ 金 粒 子 0.25g 55, PDS-1000/He 用 マクロキャリア 500 枚 36, PDS-1000/He 用 ストッピングスクリーン 500 枚 25, PDS-1000/He Hepta 用 ストッピングスクリーン 50 枚 93, PDS-1000/Heマクロキャリアホルダーパッケージ 5 個 29,000 * このシステムには 別 途 購 入 品 が 必 要 です また 消 耗 品 は 附 属 されておりません ** 1psi 0.07kg/cm 2 6.9kPa 本 装 置 は 高 圧 ガスを 取 扱 うため 各 都 道 府 県 への 高 圧 ガス 保 安 法 に 基 づく 届 出 (または 許 可 等 )が 必 要 となります また 移 設 する 際 も 納 品 時 と 同 様 の 届 出 が 必 要 になる 場 合 がございます 360 遺 伝 子 導 入 技 術