椊物とイオンの関係

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1 植 物 とイオンの 関 係 青 木 慶 和 田 代 裕 慶 野 口 俊 介 指 導 教 諭 千 葉 先 生 Ⅰ 動 機 と 目 的 私 たちは まずスポーツドリンクに 含 まれる 様 々なイオンが 体 にどのような 影 響 を 与 えるかに 興 味 を 持 った さらに 先 輩 たちが 行 った メダカの 耐 塩 性 の 研 究 を 読 んでイオンが 生 物 に 対 して 与 える 影 響 についてより 興 味 を 持 ち 調 べることにした そこで 私 たちは 研 究 の 材 料 に 植 物 を 選 んだ 植 物 は 動 物 と 異 なり 無 機 塩 類 を 無 機 イオンとして 根 から 吸 収 し 栄 養 とすることができるため イオンの 影 響 を 調 べ る 対 象 として 適 当 であると 思 った 植 物 に 対 する 無 機 栄 養 の 研 究 は 農 業 の 肥 料 として 古 くから 行 われてきており 特 定 元 素 の 過 剰 症 や 欠 乏 症 は 詳 しく 調 べられている しかし 定 量 的 な 記 載 がほとんどないことがわかった そこで 私 たちは イオンが 植 物 の 成 長 に 対 してどのような 影 響 を 与 えるかを 定 量 的 に 調 べることにした Ⅱ 概 要 植 物 を 栽 培 するのに 土 壌 を 使 用 すると そこに 含 まれる 無 機 塩 類 の 種 類 と 量 を 把 握 することが 困 難 な ため 定 量 的 な 実 験 ができない 今 回 行 った 水 耕 栽 培 は 使 用 する 培 地 に 含 まれる 無 機 塩 類 の 種 類 と 量 を 調 整 することが 可 能 であり 私 たちの 研 究 の 目 的 に 適 していると 考 えた インターネットで 水 耕 栽 培 の 方 法 を 調 べてみるといくつかの 方 法 があるが 私 たちは 一 度 になるべく 大 量 のデータを 集 める 必 要 があったので 目 的 に 合 った 水 耕 栽 培 装 置 の 開 発 ( 実 験 Ⅰ)を 行 った 次 に 自 作 の 水 耕 栽 培 装 置 を 利 用 して 無 機 塩 類 ( 無 機 イオン)が 植 物 の 成 長 にどのような 影 響 を 与 える か 調 べることにした 水 耕 栽 培 でイオンは 液 体 の 培 地 に 含 まれるため 私 たちはまず 液 体 培 地 を 何 にす るのかを 検 討 した 一 般 的 に 水 耕 栽 培 には 市 販 の 液 体 肥 料 が 用 いられるが その 組 成 は 企 業 秘 密 でわか らない そこで 私 たちは 組 成 がわかっている MS 培 地 に 注 目 した しかし MS 培 地 は 植 物 の 組 織 培 養 に 用 いられる 培 地 であり 水 耕 栽 培 に 利 用 できるかは 不 明 であった そこで MS 培 地 と その 組 成 を 変 え た MS 培 地 を 用 いた 水 耕 栽 培 を 行 い MS 培 地 が 私 たちの 研 究 に 利 用 できるか 確 認 した( 実 験 Ⅱ) 高 等 植 物 の 多 量 必 須 元 素 は 炭 素 水 素 酸 素 窒 素 リン 硫 黄 カリウム カルシウム マグネ シウムがあり それ 以 外 に 鉄 やマンガンといった 微 量 必 須 元 素 が 必 要 であることがわかっている 実 験 Ⅱの 水 耕 栽 培 に 用 いる 組 成 を 変 えた MS 培 地 については 上 記 の 必 須 元 素 のうち 組 成 が 変 わることでなるべく 影 響 が 大 きく 表 れるものを 予 想 し 調 整 を 行 った 今 回 は 以 下 の 理 由 でリンとマグネ シウムを 選 んだ P(リン)と Mg(マグネシウム)に 着 目 した 理 由 植 物 が 育 つのに 必 要 な 三 大 栄 養 素 のひとつが P で 成 長 に 大 きな 影 響 を 与 えると 考 えた Mg は 植 物 のクロロフィルの 生 成 に 必 要 なので 光 合 成 に 影 響 することで 成 長 にも 影 響 を 与 えると 考 えた 実 験 Ⅱを 行 ってみるとリンに 関 しては 濃 度 によって 成 長 に 差 が 生 じたのでさらにいろいろな 濃 度 で の 成 長 に 対 する 影 響 を 調 べた( 実 験 Ⅳ) また MS 培 地 の 組 成 の 差 は 葉 の 成 長 以 外 にも 葉 の 色 の 違 いとして 観 察 されたのでそのことに 関 する 実 験 を 行 った( 実 験 Ⅲ) 最 後 に 今 回 の 実 験 は 秋 以 降 に 行 ったので 対 象 とする 植 物 は 以 下 の 理 由 で 野 沢 菜 を 用 いた 野 沢 菜 を 選 んだ 理 由 木 曽 地 方 では 秋 以 降 に 種 をまき 栽 培 する 植 物 であったから 2-1

2 Ⅲ 実 験 内 容 実 験 Ⅰ 水 耕 栽 培 装 置 の 製 作 私 たちは 植 物 の 成 長 には 個 体 差 があるので 1 つの 培 地 につき 大 量 のデータを 集 める 必 要 があると 考 えた 目 的 に 合 った 水 耕 栽 培 の 方 法 をインターネットで 調 べてみると ペットボトルを 加 工 する 水 槽 に 循 環 用 ポンプを 取 り 付 けて 行 なう 等 の 方 法 があったが これらは 簡 単 かつ 大 量 のデータを 取 るのに 適 しておらず そのような 性 質 を 備 えた 装 置 を 製 作 する 必 要 があった そこで 私 たちは 卵 パックを 使 って 装 置 を 製 作 することにした 材 料 卵 パック スポンジ 野 沢 菜 の 種 バーミキュライト ハイポニカ( 協 和 株 式 会 社 ) 方 法 卵 パックを 用 意 し 上 部 の 一 部 をカッターで 切 り 取 り もう 片 方 の 切 り 取 っていないパックと 重 ね 合 わせる 切 り 取 ったところに 発 芽 後 1 週 間 たった 野 沢 菜 が 乗 っているスポンジを 差 し 込 む ( 左 写 真 )そして 下 部 を 液 体 培 地 で 満 たす 最 後 に 野 沢 菜 が 倒 れないようにバーミキュライトで 支 えた ( 右 写 真 ) 結 果 市 販 の 液 肥 であるハイポニカで 栽 培 した 野 沢 菜 の 種 が 従 来 通 り 成 長 したため この 装 置 が 使 えるこ とが 証 明 された 卵 パックとスポンジで 作 った 上 の 写 真 のような 装 置 を 以 下 の 実 験 で 使 用 する 場 合 これを 水 耕 栽 培 装 置 とよぶ 2-2

3 実 験 Ⅱ イオンが 植 物 の 成 長 に 与 える 影 響 純 水 液 体 肥 料 のハイポニカ( 濃 度 が 通 常 通 常 の 10 分 の1の 濃 度 通 常 の 10 倍 の 濃 度 ) MS 培 地 ( 通 常 の 組 成 Mg を 含 まない 組 成 Mg を 通 常 の 10 倍 含 む 組 成 P を 含 まない 組 成 P を 通 常 の 10 倍 含 む 組 成 ) 計 9つの 培 地 で 10 個 体 ずつ 育 て 植 物 の 成 長 を 葉 の 成 長 として 測 定 し 培 地 の 組 成 の 差 による 植 物 の 成 長 の 差 を 観 察 する 仮 説 (MS 標 準 の 成 長 を 基 準 にして) 純 水 : 枯 れる 成 長 が 遅 い ( 無 機 栄 養 が 無 いから) MS(P なし): 育 ちが 悪 い ( 三 大 栄 養 素 のうちのひとつが 欠 けているから) MS(P10 倍 ): 育 ちが 良 い (P が 大 量 に 含 まれているから) MS(Mg なし): 育 たない :(クロロフィルが 作 れなくなるから) MS(Mg10 倍 ): 育 ちが 良 い (クロロフィルを 大 量 に 作 れるから) ハイポニカ: 育 ちがよい ( 実 証 されているから) ハイポニカ(1/10): 育 たない ( 薄 いから) ハイポニカ(10 倍 ): 枯 れる( 浸 透 圧 の 影 響 ) 材 料 純 水 MS 培 地 ハイポニカ 野 沢 菜 の 種 バーミキュライト 水 耕 栽 培 装 置 方 法 1MS 培 地 MS 培 地 を 調 整 するために 貯 蔵 液 1~5を 作 る その 時 MgSO 4 7H 2 O を 10 倍 加 えた 貯 蔵 液 3(Mg10 倍 用 ) KH 2 PO 4 除 いた 貯 蔵 液 1(P なし 用 ) KH 2 PO 4 を 10 倍 加 えた 貯 蔵 液 1(P10 倍 用 )も 作 る(Mg 無 しは 貯 蔵 液 3の 代 わりに 純 水 を 加 え 調 整 した) MS 培 地 の 組 成 組 成 量 貯 蔵 液 1 1 NH 4 NO 3 2 KNO 3 3 KH 2 PO 4 4 H 3 BO 3 5 MnSO 4 4H 2 O 6 ZnSO 4 4H 2 O 7 KI 8 Na 2 MoO 4 2H 2 O 9 CuSO 4 5H 2 O 10 CoCl 2 6H 2 O 82.5g 95g 8.5g 310mg 1.115mg 430mg 41.5mg 12.5mg 1.25mg 1.25mg 貯 蔵 液 2 11 CaCl 2 2H 2 O 44g 貯 蔵 液 3 12 MgSO 4 7H 2 O 37g 貯 蔵 液 4 貯 蔵 液 5 13 FeSO 4 7H 2 O 14 Na 2 -EDTA 15 ミオイノシトール 16 ニコチン 酸 17 塩 酸 ピリドキシン 18 塩 酸 チアミン 19 グリシン 2.78g 3.78g 0.19g 19mg 19mg 0.19mg 76mg 2-3

4 各 培 地 の 調 整 を 行 う 貯 蔵 液 Ⅰ20 ml 貯 蔵 液 Ⅱ10 ml 貯 蔵 液 Ⅲ10 ml 貯 蔵 液 Ⅳ10 ml 貯 蔵 液 Ⅴ5 mlに 純 水 を 加 え 1l にする PHを 5.8 に 調 整 したのちオートクレーブで 120 で 15 分 間 滅 菌 し 使 用 する 2ハイポニカ ハイポニカは 基 準 の 濃 度 (メーカー 推 奨 濃 度 )と 10 倍 に 薄 めたものと 10 倍 に 濃 くしたものを 用 意 し 使 用 する 3 種 まきと 植 え 替 え バットに 純 水 を 含 ませたスポンジを 入 れ その 上 に 野 沢 菜 の 種 をまく 発 芽 後 1 週 間 経 ったものを 水 耕 栽 培 装 置 に 10 株 ずつ 植 え 替 える 4 測 定 1 週 間 ごとに 葉 の 長 さを 測 り 平 均 値 を 出 す 葉 の 長 さの 測 定 部 分 結 果 葉 の 大 きさ( 最 終 測 定 時 )(cm) 葉 の 色 純 水 2.02 緑 MS 4.08 黄 色 みがかっている MS(P なし) 3.2 黄 色 みがかっている MS(P 10) 4.36 濃 い 緑 MS(Mg なし) 3.71 黄 色 MS(Mg 10) 4.32 緑 ハイポニカ 6.64 緑 ハイポニカ(1/10) 4.45 緑 ハイポニカ( 10) 6 濃 い 緑 2-4

5 (cm) 葉 の 大 きさ(cm) Pなし P 10 Mgなし Mg 分 の1 ハイポニカ 純 水 MS 10 培 地 の 組 成 の 差 は 葉 の 大 きさ 以 外 に 葉 の 色 にも 影 響 した 水 耕 栽 培 の 培 地 として 期 待 していた MS 培 地 は ハイポニカには 及 ばないものの 純 水 に 比 べるとよ く 成 長 した (しかし 葉 の 色 は 黄 色 みがかっていた) P の 濃 度 を 変 えた 場 合 入 れなかったものは 成 長 も 悪 かった 10 倍 にしたものは 育 ちが 良 く 大 きな 違 いが 出 た Mg に 関 しては Pほど 成 長 に 影 響 がなかったが Mg を 含 まない 培 地 では 葉 の 色 が 黄 色 に 変 化 した ハイポニカは 通 常 の 濃 度 のものが 一 番 成 長 し 10 分 の1や 10 倍 のものは 枯 れたり 成 長 しなかっ た 考 察 MS 培 地 は 純 水 に 比 べ 葉 の 大 きさが 約 2 倍 になっている 葉 の 色 はやや 黄 色 みがかっているものの 私 たちが 普 段 目 にする 畑 で 栽 培 された 野 沢 菜 に 比 べ 形 態 的 に 大 きな 差 はなく MS 倍 地 が 水 耕 栽 培 の 培 地 として 利 用 できると 考 えられる 葉 の 色 が 黄 色 みがかったことについては MS 培 地 を 実 験 Ⅳ でもう 一 度 使 用 し 葉 を 観 察 したところ 緑 色 であった 実 験 Ⅱで 葉 が 黄 色 くなった 理 由 は 生 物 教 室 で 水 耕 栽 培 を 行 ったため 培 地 にカビが 生 えて 根 腐 りしたためではないかと 思 われる 実 験 Ⅳ は 人 工 気 象 機 内 で 育 て カビの 発 生 や 根 腐 りは 起 きなかったと 思 われる MS 培 地 の 水 耕 栽 培 への 利 用 の 可 能 性 についてさらにサンプルを 増 やし 検 討 をする 必 要 があるが 私 たちは 根 腐 りなどに 気 をつけて 使 用 すれば 水 耕 栽 培 にも 利 用 できると 考 えた P が 入 っているものといないものでは 成 長 に 差 があり P は 植 物 の 成 長 を 促 進 するものと 考 えられ る Mg が 不 足 しているものは 葉 の 大 きさよりも 葉 の 色 の 違 いとして 影 響 がでた 葉 が 黄 色 いことは 葉 におけるクロロフィル 量 が 尐 なくなっているのではないかと 考 えられる 2-5

6 実 験 Ⅲ クロロフィル 量 の 測 定 実 験 Ⅱの 結 果 水 耕 栽 培 の 培 地 に 含 まれる 無 機 塩 類 の 組 成 は 植 物 の 葉 の 成 長 以 外 に 葉 の 色 に 影 響 す ることが 分 かった そこで 各 サンプルに 含 まれるクロロフィルの 量 を 分 光 光 度 計 を 使 用 し 数 式 に 基 づ いて 求 めることにした 仮 説 実 験 Ⅱから 葉 の 色 が 黄 色 みがかっているものは クロロフィルの 量 が 尐 なく 逆 に 濃 い 緑 のものは クロロフィルの 量 が 多 いと 考 えられる 材 料 実 験 Ⅱの 葉 のサンプル ジメチルホルムアミド[HCON(CH 3 ) 2 ] 方 法 実 験 Ⅱで 採 取 した 葉 (0.033g)を ジメチルホルムアミド(1.5ml)に 入 れて 冷 蔵 庫 に 一 晩 入 れてクロ ロフィルの 抽 出 を 行 う 分 光 光 度 計 で 抽 出 したサンプルの 663.8nm と 646.8nm の 吸 光 度 を 測 定 し 出 てきた 数 値 を 基 に 数 式 を 使 ってクロロフィル a クロロフィル b の 量 を 求 める 数 式 は 以 下 の 通 りである 数 式 Ⅰ:a=12, の 数 値 -3, の 数 値 Ⅱ:b=20, の 数 値 -4, の 数 値 結 果 646.8nm での 吸 光 度 663.8nm での 吸 光 度 クロロフィル a (μ g/ml) クロロフィル b (μ g/ml) 水 MS P なし P Mg なし Mg ハイポ ハイポ1/ ハイポ

7 (μ g/ml) 水 a b MS Pなし P 10 Mg 10 Mgなし ハイポ ハイポ 分 の1 考 察 緑 色 に 見 えていた 水 で 栽 培 したサンプルのクロロフィル 量 に 比 べ 黄 色 に 見 えていた Pなし や Mgなし のサンプルのクロロフィル 量 のほうが 多 かった 私 たちは 葉 が 黄 色 いものはクロロ フィル 量 が 尐 ないとためと 考 えていたが 緑 色 の 濃 さとクロロフィル 量 は 単 純 な 比 例 の 関 係 ではない ことが 分 かった また 黄 色 いサンプルではクロロフィルaの 量 に 対 してクロロフィルbの 量 が 多 く 見 た 目 の 色 はクロロフィルの 量 とクロロフィルa bの 比 によって 決 まっているのではないかと 考 え た 実 験 Ⅳ リンが 植 物 の 成 長 に 与 える 影 響 実 験 Ⅱにおいて P の 濃 度 を 変 えた 場 合 P を 入 れなかったものと 10 倍 にしたものでは 成 長 に 大 きな 違 いが 出 た よって 私 たちは P が 植 物 の 成 長 を 促 進 させると 考 え P の 濃 度 をさらに 細 かく 設 定 し 実 験 を 行 うことにした 仮 説 MS 培 地 において P の 濃 度 を 10 倍 20 倍 にしていくと ある 濃 度 までは 葉 の 成 長 を 促 進 する しかし ある 濃 度 を 超 えると 浸 透 圧 の 影 響 で 通 常 より 育 たない あるいは 枯 れてしまうと 考 えた さらに 私 達 はその 枯 れてしまう 濃 度 は 30 倍 であると 仮 定 した 材 料 MS 培 地 野 沢 菜 の 種 バーミキュライト 水 耕 栽 培 装 置 方 法 実 験 Ⅱと 同 様 に 行 った 培 地 は 標 準 の MS 培 地 以 外 に P の 濃 度 を 10 倍 20 倍 30 倍 にした 培 地 を 調 整 し 使 用 した 野 沢 菜 を 同 様 の 手 順 で 育 て 葉 の 長 さを 測 定 する この 実 験 は 12 月 末 に 行 ったため 生 物 教 室 の 室 温 が 野 沢 菜 の 生 育 には 低 すぎると 考 え 人 工 気 象 機 を 24 に 設 定 しその 中 で 育 てた 2-7

8 結 果 葉 の 大 きさの 平 均 値 ( 最 終 測 定 時 ) (cm) 生 存 数 MS MS( 通 常 の P の 10 倍 ) MS( 通 常 の P の 20 倍 ) MS( 通 常 の P の 30 倍 ) (cm) MS P 10 P 20 P 30 葉 の 大 きさ(cm) 考 察 リンはある 範 囲 の 濃 度 で 植 物 の 成 長 を 促 進 することが 分 かり その 範 囲 は 標 準 のMS 培 地 に 含 まれ る 量 が 10 倍 の 前 後 で さらに 細 かく 濃 度 を 変 えた 時 にピークが 現 れると 考 えた 20 倍 以 上 で 成 長 が 阻 害 されているが 原 因 が 浸 透 圧 なのかそれ 以 外 の 理 由 なのか 今 回 の 実 験 では 分 からない Ⅳ すべての 実 験 を 通 してのまとめ 今 回 私 たちは 水 耕 栽 培 で 一 度 にたくさんのデータを 得 るための 装 置 を 作 成 した( 実 験 Ⅰ) 植 物 に 対 して 無 機 塩 類 がどのような 影 響 を 与 えるかを 調 べた 実 験 Ⅱでは 無 機 塩 類 の 組 成 の 差 を 葉 の 成 長 葉 の 色 の 差 として 観 察 することができた 三 大 栄 養 素 の 1 つであるリンについては 予 想 通 り 成 長 を 促 進 することを 確 認 したが 予 想 外 に 葉 の 色 に 対 しても 影 響 することがわかった 実 験 Ⅲでクロロフィルの 量 を 測 定 してみると リンの 量 の 違 いはクロロフィルa 量 の 差 として 現 れ た このことはクロロフィルaの 生 合 成 経 路 に 材 料 としてのマグネシウムは 当 然 であるが リンが 何 らかの 形 で 働 いていることを 予 想 させる 以 上 のことから 私 たちは 植 物 中 の 無 機 イオンは 単 独 ではなく 相 互 に 影 響 しあって 成 長 をは じめとする 様 々な 生 命 現 象 に 関 与 している と 考 えた 実 験 Ⅳではリンの 濃 度 にのみ 注 目 し 成 長 促 進 について 調 べたが リンとそれ 以 外 の 無 機 塩 類 の 組 み 合 わせで 成 長 を 観 察 しても 面 白 いのではないかと 思 う Ⅴ 反 省 植 物 観 察 測 定 時 に 測 定 方 法 が 研 究 者 でそれぞれ 違 っており さらに そのことに 気 付 くのが 遅 れてしまったために データを 平 均 値 で 出 さざるを 得 なくなり 細 かなデータを 取 得 し 研 究 に 使 う ことができなかった 秋 以 降 に 植 物 を 材 料 として 実 験 を 行 ったので すべての 実 験 で 十 分 なデータを 得 ることができなかっ た そのため 目 的 としていた 定 量 的 な 議 論 ができなかった 2-8

9 Ⅵ 参 考 文 献 URL ( 参 考 文 献 ) 植 物 生 理 学 入 門 培 風 館 桜 井 英 博 柴 岡 弘 郎 清 水 碩 植 物 分 子 生 理 学 入 門 学 会 出 版 センター 1999 横 田 明 穂 奈 良 先 端 科 学 技 術 大 学 院 大 学 バイオサ イエンス 研 究 科 植 物 系 全 教 員 新 版 土 壌 肥 料 用 語 事 典 農 文 協 2005 藤 原 俊 六 郎 安 西 徹 郎 小 川 吉 雄 加 藤 哲 郎 図 解 植 物 バイオテクノロジー 実 教 出 版 2007 吉 川 仁 朗 鎌 田 博 中 野 優 前 川 孝 昭 三 位 正 洋 ( 参 考 URL) 光 合 成 の 森 2-9

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