は し が き 本 号 は 学 位 規 則 ( 昭 和 28 年 4 月 1 日 文 部 省 令 第 9 号 ) 第 8 条 による 公 表 を 目 的 として 2015 年 3 月 19 日 に 本 学 において 博 士 の 学 位 を 授 与 した 者 の 論 文 内 容 の 要 旨 及 び 論

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1 博 士 学 位 論 文 内 容 の 要 旨 及 び 論 文 審 査 結 果 の 要 旨 第 11 号 2015 年 3 月 武 蔵 野 大 学 大 学 院

2 は し が き 本 号 は 学 位 規 則 ( 昭 和 28 年 4 月 1 日 文 部 省 令 第 9 号 ) 第 8 条 による 公 表 を 目 的 として 2015 年 3 月 19 日 に 本 学 において 博 士 の 学 位 を 授 与 した 者 の 論 文 内 容 の 要 旨 及 び 論 文 審 査 の 結 果 の 要 旨 を 収 録 したものである

3 目 次 氏 名 学 位 記 番 号 学 位 の 種 類 論 文 題 目 ( 頁 ) 齊 藤 恵 子 博 士 甲 第 21 号 博 士 ( 薬 科 学 ) インターロイキン31を 標 的 とした アトピー 性 皮 膚 炎 の 制 御 に 関 する 研 究 1

4 氏 名 齊 藤 恵 子 学 位 の 種 類 博 士 ( 薬 科 学 ) 学 位 記 番 号 学 位 授 与 の 日 付 学 位 授 与 の 要 件 学 位 論 文 題 目 甲 第 21 号 2015 年 3 月 19 日 学 位 規 則 第 4 条 第 1 項 該 当 インターロイキン 31 を 標 的 としたアトピー 性 皮 膚 炎 の 制 御 に 関 する 研 究 論 文 審 査 委 員 主 査 武 蔵 野 大 学 教 授 棚 元 憲 一 副 査 武 蔵 野 大 学 教 授 土 方 貴 雄 副 査 武 蔵 野 大 学 教 授 山 下 直 美 論 文 内 容 の 要 旨 アトピー 性 皮 膚 炎 は 掻 痒 のある 湿 疹 を 主 病 変 とする 慢 性 疾 患 であり 角 層 の 異 常 に 起 因 す る 皮 膚 の 乾 燥 とバリア 機 能 障 害 を 伴 い 抗 原 物 質 に 対 する 免 疫 反 応 やその 他 の 機 械 的 刺 激 が 引 き 金 となって 発 症 する 掻 痒 に 伴 う 掻 破 は 皮 疹 を 悪 化 させる 増 悪 因 子 であることが 知 られて おり 掻 破 - 皮 膚 炎 悪 化 - 掻 痒 悪 化 の 悪 循 環 はitch-scratch-cycleと 呼 ばれ 病 態 の 慢 性 化 につな がることが 知 られている 従 って アトピー 性 皮 膚 炎 においては 皮 膚 のバリア 機 能 の 維 持 及 び 炎 症 への 対 処 と 同 様 に 掻 痒 のコントロールがQOL 向 上 及 び 皮 膚 炎 改 善 のために 非 常 に 重 要 であるといえる しかしながら アトピー 性 皮 膚 炎 に 付 随 する 掻 痒 行 動 を 誘 発 する 因 子 の 解 析 は 十 分 には 進 んでいないのが 現 状 で アトピー 性 皮 膚 炎 の 掻 痒 に 対 して 多 用 されている 抗 ヒス タミン 剤 においてもその 効 果 は 必 ずしも 十 分 でなく 補 助 療 法 に 位 置 づけられている 最 近 インターロイキン31(IL-31)が 掻 痒 を 誘 発 するサイトカインとして 注 目 されている IL-31は 主 に 活 性 化 したT 細 胞 から 産 生 されるサイトカインであり アトピー 性 皮 膚 炎 患 者 の 皮 膚 生 検 サンプルでIL-31 mrna 発 現 が 亢 進 していることが 報 告 されている また アトピー 性

5 皮 膚 炎 患 者 を 紫 外 線 照 射 で 治 療 することにより 有 意 な 臨 床 スコアの 改 善 とともに 皮 膚 のIL-31 mrna 発 現 の 減 少 が 認 められること IL-31 遺 伝 子 のハプロタイプが 内 因 性 アトピー 性 皮 膚 炎 と 関 連 していることが 報 告 されており アトピー 性 皮 膚 炎 の 病 態 におけるIL-31の 関 与 が 示 唆 され ている またマウスにおいても IL-31を 過 剰 発 現 させたトランスジェニックマウスがアトピー 性 皮 膚 炎 様 の 皮 膚 炎 や 著 しい 掻 破 行 動 を 示 すこと アトピー 性 皮 膚 炎 様 の 症 状 を 自 然 発 症 する NC/NgaマウスにおいてIL-31レベルと 掻 破 行 動 が 相 関 することなどから IL-31のアトピー 性 皮 膚 炎 や 掻 痒 発 生 への 関 与 が 動 物 実 験 レベルでも 示 されている しかしながら IL-31による 掻 痒 誘 発 のメカニズムについては 不 明 であり さらに IL-31のブロックによりitch-scratch-cycleの 悪 循 環 を 遮 断 することがアトピー 性 皮 膚 炎 の 病 態 に 治 療 効 果 を 有 するかについても 明 らかになっ ていない そこで 本 研 究 では IL-31をマウスに 投 与 した 時 に 誘 発 される 掻 痒 の 解 析 を 行 い 動 物 モデルや 臨 床 で 掻 痒 抑 制 効 果 を 有 することが 示 されている 既 存 薬 によりIL-31 誘 発 の 掻 痒 が 影 響 を 受 けるか 否 かを 検 討 した また IL-31レセプター 中 和 抗 体 の 慢 性 アトピー 性 皮 膚 炎 モデ ルにおける 治 療 効 果 についても 評 価 した IL-31 投 与 により 誘 発 される 掻 痒 の 解 析 初 めに IL-31による 掻 痒 誘 導 の 検 出 を 目 的 に IL-31をinfusion pumpにより 持 続 投 与 した IL-31はOsmotic pumpを 用 いて 0, 0.1, 1, 10 µg/dayでbalb/cマウスに14 日 間 皮 下 投 与 し 経 時 的 に 掻 痒 行 動 の 測 定 と 皮 膚 症 状 の 観 察 を 行 った 掻 痒 行 動 の 測 定 には 動 物 の 後 肢 に 挿 入 したマ グネットのアナログ 信 号 を 取 り 込 み 掻 痒 行 動 を 抽 出 解 析 するMicroAct 掻 痒 測 定 システム (Neuroscience)を 用 いた その 結 果 IL-31が 投 与 濃 度 依 存 的 に 掻 痒 行 動 を 誘 発 することが 検 出 で きた また 皮 膚 の 状 態 としては 投 与 数 日 後 から 全 身 の 脱 毛 がみられ 投 与 後 14 日 目 の 皮 膚 の 病 理 組 織 学 的 解 析 では 表 皮 の 肥 厚 と 皮 脂 腺 細 胞 の 増 加 を 認 めた また IL-31で 誘 発 される 掻 痒 は 投 与 終 了 後 も 数 日 間 持 続 した 上 記 試 験 においてIL-31 投 与 後 1 日 目 でMicroAct 掻 痒 測 定 システムによる 掻 痒 行 動 の 検 出 が 可 能 であったことから IL-31をsingle shotした 際 の 掻 痒 行 動 について 調 べることにした IL-31を 0, 0.1, 1, 10 µg/shotで 静 脈 内 もしくは 皮 下 に 投 与 した 結 果 投 与 量 依 存 的 な 掻 痒 行 動 の 増 加 が 認 められ どちらの 投 与 ルートにおいても 投 与 後 4-6 時 間 をピークとする 持 続 的 な 掻 痒 反 応 がみら れた このIL-31 投 与 により 誘 発 される 掻 痒 は IL-31レセプター 中 和 抗 体 であるBM095により 完 全 に 抑 制 されることを 確 認 した(Fig. 1 左 図 ) 2

6 IL-31 持 続 投 与 終 了 後 も 掻 痒 が 数 日 間 持 続 したこと IL-31 の single shot においても 持 続 的 な 掻 痒 行 動 が 誘 発 されたことから IL-31 がかゆみの 感 覚 刺 激 に 対 し 間 接 的 に 作 用 している 可 能 性 が 示 唆 された そこで IL-31 投 与 による 掻 痒 誘 発 のメカニズムを 調 べる 目 的 で 動 物 モデルや 臨 床 におい て 掻 痒 抑 制 効 果 が 示 されている 既 存 薬 がIL-31 誘 発 の 掻 痒 行 動 に 影 響 を 及 ぼすか 否 かを 検 討 した 抗 ヒスタミン 剤 である terfenadine(ter)を 30 mg/kg で IL-31 投 与 の 2 時 間 前 に 腹 腔 内 投 与 したと ころ terfenadine は IL-31 誘 発 の 掻 痒 行 動 に 影 響 を 及 ぼさなかった(Fig.1 左 図 ) 従 って ヒスタミ ンは IL-31 により 誘 発 される 掻 痒 行 動 には 関 与 しないと 考 えられた 同 様 に 免 疫 抑 制 剤 である dexamethasone (DEX, 3 mg/kg, i.p.)や tacrolimus (TAC, 0.1 mg/kg, i.p.) µ-opioid receptor antagonist である naloxone (NAL, 10 mg/kg, s.c.)についても 検 討 を 行 ったが これらの 薬 剤 によっ ても IL-31 誘 発 の 掻 痒 は 抑 制 されなかった(Fig.1 右 図 ) 以 上 の 結 果 から IL-31 は 既 存 薬 とは 異 な る 新 規 のメカニズムにより 掻 痒 を 誘 発 することが 示 唆 された アトピー 性 皮 膚 炎 の 病 態 に 対 するIL-31レセプター 中 和 抗 体 の 効 果 次 に IL-31の 阻 害 がアトピー 性 皮 膚 炎 の 病 態 に 対 し 治 療 効 果 を 有 するかを 検 討 する 目 的 で 病 態 の 発 症 率 がよく オンセットをコントロール 可 能 なモデルとして 知 られているハプテン 繰 り 返 し 塗 布 により 誘 導 する 慢 性 アトピー 性 皮 膚 炎 モデルを 用 いてIL-31レセプター 中 和 抗 体 BM095の 効 果 を 検 討 した 6 週 令 の 雌 性 BALB/c マウスに 20 µl の 0.5% 塩 化 ピクリル(acetone/olive oil (1:4 v/v) 溶 液 ) を 右 耳 に 塗 布 して 感 作 を 行 った 後 8 日 目 より 1 日 おきに 20 µl の 0.25% 塩 化 ピクリル (acetone/olive oil (1:4 v/v) 溶 液 )を 右 耳 に 塗 布 することにより 誘 発 を 繰 り 返 した BM095 の 予 防 効 果 評 価 群 には 感 作 前 日 より BM095 治 療 効 果 評 価 群 には 誘 発 開 始 後 20 日 目 より 10 mg/kg の BM095 を 週 1 回 腹 腔 内 に 投 与 した 経 時 的 に 耳 介 腫 脹 と 皮 膚 炎 スコア( 出 血 痂 皮 形 成 浮 腫 )を 測 定 することにより 病 態 の 評 価 を 行 った 3

7 塩 化 ピクリルの 塗 布 を 繰 り 返 すことにより 耳 介 の 腫 脹 が 増 大 し(Fig.2 左 図 ) 出 血 や 瘢 痕 痂 皮 形 成 を 伴 う 皮 膚 炎 が 悪 化 した(Fig.2 右 図 ) 病 態 悪 化 によりみられる 耳 の 腫 脹 や 皮 膚 炎 ス コアの 増 大 はBM095の 予 防 投 与 により 有 意 に 軽 減 した(Fig.2 左 図 右 図 ) さらに BM095は 予 防 効 果 を 示 すだけでなく 病 態 成 立 後 に 投 与 した 治 療 評 価 群 においても 耳 介 の 腫 脹 と 皮 膚 炎 スコアを 有 意 に 抑 制 した(Fig.2 左 図 右 図 ) 慢 性 アトピー 性 皮 膚 炎 モデルにおけるBM095の 効 果 が 塩 化 ピクリルによる 病 態 のオンセッ トに 寄 与 しているかを 調 べる 目 的 で 塩 化 ピクリル 誘 発 の 急 性 接 触 性 皮 膚 炎 モデルにおいて BM095の 効 果 を 検 討 した 雌 性 BALB/cマウスに 50 µlの7% 塩 化 ピクリル(ethanol/acetone (3:1 v/v) 溶 液 )を 腹 部 皮 膚 に 塗 布 して 感 作 を 行 った 後 5 日 目 に20 µlの1% 塩 化 ピクリル(acetone/olive oil (1:4 v/v) 溶 液 )を 耳 に 塗 布 することにより 誘 発 を 行 った 感 作 誘 発 のそれぞれ1 日 前 に10 mg/kgのbm095を 静 脈 内 に 投 与 した その 結 果 塩 化 ピクリルによる 誘 発 後 24 時 間 及 び48 時 間 で みられる 耳 の 腫 脹 にBM095は 効 果 を 示 さなかった このことから 慢 性 のアトピー 性 皮 膚 炎 モ デルで 見 られたBM095の 皮 膚 炎 治 療 効 果 は 抗 原 特 異 的 なT 細 胞 免 疫 応 答 の 抑 制 によるもので はなく itch-scratch cycleの 遮 断 によるものと 考 えられた 実 際 に 慢 性 アトピー 性 皮 膚 炎 モデ ルにおいてBM095は 皮 膚 炎 の 治 療 効 果 を 有 するが 皮 膚 病 変 部 位 への 炎 症 性 細 胞 の 浸 潤 には 影 響 しておらず 血 中 のIgE, IgG1, IgG2aのレベルにおいてもBM095 投 与 群 と 非 投 与 群 とで 差 はな かった 考 察 掻 痒 を 誘 導 または 増 悪 することが 知 られている 因 子 の 中 には 掻 痒 受 容 器 に 結 合 することに より 直 接 的 に 働 く 因 子 と 感 覚 神 経 を 活 性 化 する 他 の 因 子 を 誘 導 するなどして 間 接 的 に 働 く 因 子 が 知 られている IL-31のレセプターはIL-31 receptor A (IL-31RA)とオンコスタチンMレセプタ 4

8 ーのヘテロダイマーであり 感 覚 神 経 が 集 まる 後 根 神 経 節 並 びにかゆみの 感 覚 をつかさどる ことが 知 られている 脊 髄 や 皮 膚 の1 次 感 覚 神 経 に 高 い 発 現 が 認 められる そのため IL-31が 掻 痒 に 関 連 する 神 経 に 直 接 的 に 作 用 している 可 能 性 が 考 えられる 一 方 で IL-31RAは 皮 膚 表 皮 細 胞 や 好 酸 球 肥 満 細 胞 単 球 やマクロファージにも 発 現 していることが 知 られており 免 疫 反 応 や 細 胞 増 殖 など 幅 広 い 生 体 機 能 を 担 っていることが 報 告 されていることから IL-31が 間 接 的 に 掻 痒 を 誘 発 している 可 能 性 もあり IL-31がアトピー 性 皮 膚 炎 のitch-scratch-cycleにどのよう に 関 与 し 機 能 しているかは 興 味 深 い 本 研 究 において IL-31 誘 発 の 掻 痒 を 解 析 することによ り IL-31は 持 続 的 な 掻 痒 を 誘 発 し かゆみの 感 覚 刺 激 に 対 し 間 接 的 に 作 用 している 可 能 性 が 示 唆 された その 詳 細 なメカニズムは 未 だ 不 明 ではあるが 本 研 究 により 既 存 薬 とは 異 なる 新 規 のメカニズムを 介 している 可 能 性 が 考 えられ 今 後 さらなる 解 析 が 期 待 される IL-31がアトピー 性 皮 膚 炎 や 掻 痒 発 生 に 関 与 していることが 示 唆 されるが IL-31をブロックす ることによりアトピー 性 皮 膚 炎 の 病 態 に 対 し 治 療 効 果 を 有 するかは 明 らかではなかった 2009 年 のExp. Dermatol. 誌 では NC/Ngaマウスを 用 いたアトピー 性 皮 膚 炎 の 自 然 発 症 モデルにおいて 抗 IL-31 中 和 抗 体 は 掻 痒 を 抑 制 するものの 皮 膚 炎 に 対 しては 効 果 を 示 さないことが 報 告 されて いる 本 研 究 では ハプテン 繰 り 返 し 塗 布 による 慢 性 アトピー 性 皮 膚 炎 モデルを 用 い IL-31レ セプター 中 和 抗 体 が 皮 膚 炎 の 病 態 を 軽 減 すること さらには 病 態 成 立 後 に 抗 体 の 投 与 を 開 始 し ても 治 療 効 果 を 示 すことを 明 らかにした 以 上 本 研 究 の 結 果 より IL-31 はアトピー 性 皮 膚 炎 の 掻 痒 及 び 皮 膚 炎 の 治 療 における 新 規 の 治 療 ターゲットとなる 可 能 性 があり IL-31 レセプターのブロックが 現 在 の 治 療 では 十 分 に 掻 痒 のコントロールができない 患 者 の 治 療 オプションになる 可 能 性 を 示 した 5

9 論 文 審 査 結 果 の 要 旨 アトピー 性 皮 膚 炎 は 掻 痒 のある 湿 疹 を 主 病 変 とする 慢 性 炎 症 性 疾 患 であり アレルギ ー 炎 症 の 側 面 と 角 層 の 異 常 に 起 因 する 皮 膚 の 乾 燥 とバリアー 機 能 障 害 を 特 徴 とする 病 態 の 慢 性 化 には 掻 破 皮 膚 炎 悪 化 掻 痒 悪 化 の 悪 循 環 は itch-scratch-cycle が 大 きな 役 割 を 果 たしている 最 近 掻 痒 誘 発 因 子 の 一 つとして IL-31 が 注 目 されてきているが その アトピー 性 皮 膚 炎 病 態 形 成 への 寄 与 はいまだ 不 明 である 本 研 究 では 1)IL-31 による 誘 発 される 掻 痒 の 特 徴 の 解 析 2)IL-31 の 皮 膚 ケラチノサイトに 対 する 作 用 3) 皮 膚 炎 モデルに おける IL-31 レセプター 中 和 抗 体 の 効 果 を 検 討 し IL-31 の 作 用 を 遮 断 することが アト ピー 性 皮 膚 炎 の 新 たな 治 療 標 的 となるかを 明 らかにすることを 目 的 として 施 行 された IL-31 投 与 は 投 与 ルート( 静 脈 内 皮 下 皮 内 )に 関 係 なく 4-6 時 間 をピークとする 掻 痒 を 誘 発 した その 掻 痒 は 抗 ヒスタミン 薬 免 疫 用 製 薬 µ-opioid receptor antagonist によって 抑 制 されず 新 規 のメカニズムが 介 在 する 掻 痒 であることが 明 らかになった IL-31 は 皮 膚 に 対 する 慢 性 炎 症 惹 起 に 関 与 し 表 皮 ケラチノサイトのアポトーシスを 誘 導 し バリアー 機 能 低 下 に 関 与 することが 明 らかとなった さらに アトピー 性 皮 膚 炎 マ ウスモデルを 用 いた 検 討 では IL-31 レセプター 中 和 抗 体 が 皮 膚 炎 に 対 する 予 防 効 果 およ び 治 療 効 果 を 発 揮 することを 示 した 本 研 究 は アトピー 性 皮 膚 炎 の 新 たな 治 療 手 段 として 抗 IL-31 レセプター 中 和 抗 体 が 有 用 であることを 示 すものであり 掻 痒 および 慢 性 炎 症 の 画 面 からの 効 果 を 明 らかにした 新 規 の 知 見 である 難 渋 するアトピー 性 皮 膚 炎 の 治 療 におけるインパクトは 高 く 今 後 さ らなる 発 展 性 が 期 待 できる 本 研 究 を 発 信 する 意 義 は 大 きく 本 論 文 は 学 位 論 文 ( 博 士 薬 科 学 )に 値 するものと 考 えた さらに 審 査 にて 申 請 者 は 博 士 ( 薬 科 学 )の 学 位 にふさわ しい 見 識 を 有 していると 評 価 した 6

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