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1 T 国立療養所南九州病院における進行性筋ジストロフィー患児の遺伝子解析と保因者診断を施行した 家系 A() 田中, 主美 C 鹿児島大学医学雑誌 =Md K Uy, (-) - D -- URL dd km-

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3 官日 比唄 ~ 教授 ) によって {~ \L された これはマルチプレックス PCR 染色体劣性で, 調 í ~ ~ 非 UíX 化乍 ( ~}, ~ より進行性筋ジストロフィーと診断され ~ 棟に入院 の忠 -Pí 名の で臨床抗状

4 [ ) 鹿 児 島 大 学 院 学 雑誌 第 巻第 & L年 月 サ 進行性筋ジストロフィ ー患児の遺伝子解析と保困者診断 限酵素 Tq で C 処 理 し た 産 物 を % 巾 ( % )で x - の 部 位 で の 欠 失 で あ っ 見 よ り 進 行 性 筋 ジストロフ イーと 診 断された 名である を用い電気泳動した た その他 の欠失部位は x ま で の 広 範 囲 の も 歳 か ら 歳 ま で の 男 児 で 平 均 年 齢 は 成 で 年 齢は N ) m ー CA ( F R) を 用 い 検 査 所員~ ジ ストロフ ィ ン染色などの 免 疫組織 化学的所 あ ったま た この中の 家 系 に 対 し 保 因 者 診 断 を 家 族 m により DNA を増 ~国後 の希望により施行した を用い電気泳動した )? 去 )DMD遺伝一 子 解 析 フ ェ ノール ク ロ ロ ホ ル ム 去 に よ り 血紫ーより DNA Uを 行 い 年 B % y d ) 次 に 保 困 者 診 断 を 施 行 し た 家 系 (A B) に 関 す る結呆を示す A 家 系 は 父 吋 忠 児 妹の 名 に つ い て 解 析 を 施 行 し た 図 は X m で 処 理 後 の も の で あ る % ymdを用い電気泳動した の バ ン ド が と に切 断 さ れ る ア リ PC *Cmm(PCRd) と に切 断されるアリルを 非切 断アリルを とした同 は BmH処理 後 で あ る の バ ン P C のアリルを とした凶 は m DYS - の C ( d ) PCR産 物 の 泳 動 写真 で ある アリルの CA-の 速 C ( ) いによ り泳動距離の 差 が み ら れ る 長 い CA- の C m( ) アリルを 短 い ア リ ル を とした 図 は k ( m ) C C - C をm 冶 し x の検出がロ 能である m C ( d) C ( ) k ( m) 体 例 を 示 し た も の で あ る む に ぶ す コントロールではそ C れぞれ 結 果 を は に 示 す 刈 は あ る 症 例 の Cm と Bのマルチ プ レッ クス PCR の 具 m S 同 マ ル チ プ レ ックス PCR法による ジストロフィン遺 伝子の欠失部 ~ を不す ( 数値は欠失 x) C ユよ健愚月 思児母父妹 B 妹 P Cm *Bm(PCRd) 同 PCR 産物を BmH で d 後 % _ で 従気泳動した m m H ドが と に 切 断 さ れ る ア リ ル を 非 切 断 C Tqで処理後の泳動写真である の バ ン ド が ルを 非切 断アリルを と し て 示 し で あ る 図 は 結 果 )進行性筋ジス トロフイ ー忠者 の遺伝 子 解 析 の プログラムを略記 する の 欠 失 が 名であった ) m DYS - 田 ( F R) を 用 い プレ ックス PCR 去に準じて解析を施行 した以下 妹父母恵児 の が 名 x 前 後 に 認 め た も の が 名 単 x Cmに よ り DNAを増 幅 後 Cm 年 B ら が 報 倍 し た マ ル チ C ) C し x mを 本 の バ ン ド を 認 め る が m YS (F R) m H 症例では C で x B で x の欠矢を認める こ の 痕 例 に お い て 全 体 ヌ > < PCR産物を % y m d _ で電気泳動 した PCR産物を Xm で d 後 % で電気泳動 した およ び m の検が可能 である 妹父母~児 Cm お よ び Bm による PCR 雌 妹 x俗悪児 物 は % を)い屯気泳動を行 った ) 保 大 打 診 断 PCRRFLP L お よ び PCRNTR 去を)甘いて異なる 棺 傾 の } で 診断を行 っ を略記す る た 以下 ) m PH PH を ) い C m により DNA を 円 後 m 出両手ぷ X m で C 処 瑚 した 産 物 を % を - 屯勾泳動した ~ x m ) m PH PH を ) い Cm m によ り DNA を { 後 SO E O dy 災 泊三 例で 認められたジストロフ イン遺伝 をぶす の欠失点目 山静止ミB H で TC 処 聞 し た 名物を % では x の欠失が存点している 泣 { ぶ[科析を し 低気体勤 した を) 田 m PH PH をい Cm m に よ り DNA を W ~\ 後 m H 施行 し た q ~〆 ( %)に 欠 失 が 忠められた 各 ú~例の欠火?~\ を ヌ にノ~ す 欠失を E めた ~ゾ 災 PCR産物を Tqで d 了後 % -で屯気泳動した m CA(FR) 火 [ PCR産物を % ymdト ー で 電気泳動 した

5 ( 鹿児島大学医学雑誌 る 同 解析結果より A家系の各個人の持つアリルを模式化 した 口 任を飼う限り大きな倫理的問題はないと考える しか PCR法と 呼 ばれている この方法に よ り遺 ム子欠失の %まで検 出可能 と報告さ し 親が診断を依頼する~ 合 結果によっては子どもに 対する益育に影響を与えかねず倫理的な問題を合んでい れている 今回著者は この ) 法で 遺伝チ 析を施行し を考慮 る子供が大人になって結婚や生硝に 射する計山 y クス 名中 名 ( %)に認められた た遺伝子欠失は する段附になって診断価航がイ了在することを考えると仰 %に欠失を 荒畑ら 自 は進行性筋ジストロフイーの 人が成人するまで検脊を~らせる方が良いかもしれない 認めると報告しており 今同の解析でも 同様の結巣が得 今 の 家系の解析において本人は成人しており 家族 られた を合めた 口 が q られた 司寺に 家系とも ) ~~ 大 ー 進行性筋ジス トロフイーは臨床症状より D DMDであり 百 蛋向の構造異常や発現異常が BMDで ら は遺伝子欠夫部位の検 ある ことが判明した B オ{より DMD ではジス ト ロフィン遺伝 子 の ~x 前 x 前後に欠失のホットスポット 後に BMDでは の部位で欠うたがみられた なお 今 回 の 解 析 で は ロー O つた 千符 行 才 ~〆 ( %)にジストロフイン遺伝 の欠 夫を認めた 欠 失 ) は x - に多くみられ その頻度は令欠失の %であった この解析結果は出 とほぼま 似していた T -欠失を認めなかっ 家の幸町 どによる突然変呉の解析も考慮中である の) で あると考えられた なお め保 大 者診断は重安である 品 近 で は PCR-RFLP ) 科 y [ の進行行 門 筋ジス卜ロフイ一の忠宇者 お 才を 弁 対 象に遺伝二 子拘 角 解 ヰ 析を施行した 叶 川 判 司 H 川 た 〆 ( % ) は {戸 _ ~ の }~ 突然変興ー が推 定 された 進行性筋ジストロフイーは X染色体劣性遺伝であるた す χ B家系の構成をノよ ( ~圃 は先端名である 司 正 凶 刈 五 エ 立 工 療 義庁 川? 升 砕 南 九州病 院 淀 引筋 めちジス トロフイ一病棟に入院ち覧主中 刊 ヤ DMDBMDに分類しての欠失部位の同定は施行してい ない 名 ( %)で遺伝子欠失を認めなか っ 児 Uでで はジス トロフイン造 ι 伝 E γイ [ 卜 一 の た これらの思 変異が存右在すると考えられる今後 PCR SSCP法な 人点 ( 土 巾口 遺伝子解析とジストロフィンの免疫染色 より遺伝子上 x に集 名 -才(%) でこ しており であったことは幸いであった 担 ( DMD)と B k 型 ( BMD)に分類されている の欠失や変異によるジストロフイン蛋 コの完全欠 叫 が その結果に ~ 分で立 と B により 忠であり その子法は Cm が存存すると報(片している 著者の解析でも欠矢部位は た女 性 が 円 分で依頼の決定を行い ヨ 同 - CA による PCR産物である アリルによる泳動 差を認めなか った 叫 は上記の結果より各個人の持つ アリルを模式化したものである キャリアー遺伝 は忠 )であり 妹の持つ ( 児付税の持つ ( 進行性筋ジス トロフィーの保 大 者診断は 大人になっ 進行性筋ジストロフィーは遺伝子診断の先駆け 的 な長 確立されマルチプレ U 進行性筋ジストロフイー忠児の 宣伝子解析と保 )~ } > 診 断 考 察 " 成 年 ) 号 妹 父 母 悪党 第 巻 第 法 と CA- を利用しての PCRNTR法 q が主 流 仇~ ( 者 会 析を PCF トRFLP{ 去 と PCRNTR 去を m いて 家系を対象に施行した この千 U は従米行われて と比較して簡便でありきわめて いたサザンプロット ~~ での筋ジストロフィー に則する保 大 打診断の耕作は初めてと忠われる 謝 辞 を終わるに際し 本研究を (按御指導いただいた 吋 )は = キマリアー遺伝子である引が判明した 次に B となっているこれらの方法は従米行われていたサザン に示す保 者診断の日的は の k児であったがu L 夜が確保されず イ 入 国の保 大者診 プロット法に比較して簡便であり柿めて有川と忠われた 断を施行することにより間接的に結果が得られた ( 似子で あるため %の確率で 疾忠遺伝子 との来L み換えを 成を倒 いただいた [ ) 学医学部小 U科学教 丸 山 されている 起こすと報 ( 川弘 山 教授に深謝の立を長します 家系の家族構成をじ~ このため若者は つの方法を組み合わせて保利者診断 kにもおよぶ日大 立 シストロフイン遺伝子は 凶 U } 析結果より B家系の科個人の持つアリルを棋 A化 した は各(同人の持つアリルを 記 械に模式化したものであ る 占 人 目はキャリアー遺伝 を持たず従 って 占 入 カキャリアーでないことカ咋 した を施行したカ六結果に関しては危険率を考慮する必~が ある また X 染色体の不活性化 の研 究から父親の X 染色体山米で 発病する孤発 E 女性 DMD( 保 大 -となる) も知られるようになった そこで診断にあたっては 従来行われてきた L クレアチニンキナーゼ の M や作一検筋のがしジストロフィン抗イ本による免民組 細 化学な どの所 川 も与隠する必裂がある 今 "]施行した B 家系の保 大打診断では対象となる 市 人の ~{}í は未施行であったがÆ主家 ~ の組み介わせ では診断 T 能であるまた 発端 折が死 亡 している場介 F や州 ~{ 本をポ 川しての診断幸 もみられ でも)内 ι 療長 ) N 九 州病院制永秀敏 ~d乙鹿児向大学 刷版病院 第内科 R 宏 り } ~ に感謝致します また本論文作 文 献 ) 塚 (俊 文 イ - 荒 ヰ 点以 AR w 神経 Dy 外 ネ 天 寸 Xむの DNA ( 並行性筋ジストロ ) d 宍ー フィー ) ~ ポ科学 " 荒畑? イー 前 ジストロフイー ( DMD )武 川 BMD) B N MBy FMKk LM )BAHK D % DMDBMDd y ym mg ( ) - E )Cm S G ~A R D D m dy y m x DNA m N A dr T 与ー 杉 川秀 夫 B k 担筋ジストロフイー )荒 とジストロフィン R w神経 京五( 外 欠字社 mepsyd R A K ) BAHH Ex m y m w Bk m dy ydy d d AmHmG dl R M S日 ) Z k w zesm d M Ld D C m D m dy yw " DNA ym ml ym CACA )B^H KkLMA d dy N A dr )OdCH AC m PC く yt Tw mm MdL DMD w d HmMG ) P E Smk N A K Dy y m Am HmG 下 後藤加奈子 仁 川{ 他長 )Td -~与 ) ミ ヰ M保存された汗口及び筋 両県標本によるジスト ι 三 村 筋ジストロフィー ロフィンの泣伝 診断 及び 見 A扶忠の成大と 年度手~~ 続開発に関する研究 勺 北

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