2.6.6 毒性試験の概要文 目次 毒性試験の概要文 まとめ 試験概要 単回投与毒性試験 反復投与毒性試験 遺伝毒性試験 生殖発生毒性試験 その他の毒性試験...

Transcription

1 CS-866AZ 毒性試験の概要文 第一三共株式会社

2 2.6.6 毒性試験の概要文 目次 毒性試験の概要文 まとめ 試験概要 単回投与毒性試験 反復投与毒性試験 遺伝毒性試験 生殖発生毒性試験 その他の毒性試験 単回投与毒性試験 ラット単回経口投与毒性試験 ( ,TK: ) イヌ単回経口投与毒性試験 ( ,TK: ) 反復投与毒性試験 ラット 28 日間反復経口投与毒性試験 ( ,TK: ) ラット 6 箇月間反復経口投与毒性試験 ( ,TK: ) イヌ 28 日間反復経口投与毒性試験 ( ,TK: ) イヌ 9 箇月間反復経口投与毒性試験 ( ,TK: ) 遺伝毒性試験 細菌を用いる遺伝子突然変異試験 ( ) 哺乳類培養細胞を用いる染色体異常試験 ( ) げっ歯類を用いる小核試験 ( ) がん原性試験 生殖発生毒性試験 ラット胚 胎児発生への影響に関する試験 ( ,TK: ) マウス胚 胎児発生への影響に関する試験 ( ,TK: ) 局所刺激性試験 その他の毒性試験 イヌ心血管系への影響に関する試験 ( ,TK: ) 考察及び結論 参考 CS-866 の毒性試験の概要 CS-905 の毒性試験の概要 引用文献 i

3 2.6.6 毒性試験の概要文 表の目次 表 毒性試験プログラム... 2 表 ラット単回経口投与毒性試験成績... 4 表 イヌ単回経口投与毒性試験成績... 5 表 ラット 28 日間反復経口投与毒性試験成績... 7 表 ラット 6 箇月間反復経口投与毒性試験成績... 9 表 イヌ 28 日間反復経口投与毒性試験成績 表 イヌ 9 箇月間反復経口投与毒性試験成績 表 イヌ心血管系への影響に関する成績 表 CS-866 の毒性試験成績一覧 表 CS-905 の毒性試験成績一覧 ii

4 2.6.6 毒性試験の概要文 略号一覧略号 略していない表現 ( 英 ) 略していない表現 ( 日 ) ACE Angiotensin converting enzyme アンジオテンシン変換酵素 AII Angiotensin II アンジオテンシン II ALT Alanine aminotransferase アラニンアミノトランスフェラーゼ ALP Alkaline phosphatase アルカリホスファターゼ AST Aspartate aminotransferase アスパラギンアミノトランスフェラーゼ AUC 0-24h Area under the plasma concentration-time curve up to 24h 投与後 24 時間までの血漿中濃度 - 時間曲線下面積 BUN Blood urea nitrogen 血液尿素窒素 CHL 細胞 Chinese hamster lung cell チャイニーズハムスター雌肺組織由来線維芽細胞 C max Maximum plasma concentration 最高血漿中濃度 CMC-Na Carboxymethylcellulose sodium カルボキシメチルセルロースナトリウム CPK Creatine phosphokinase クレアチンホスホキナーゼ Cre Creatinine クレアチニン DMSO Dimethyl sulfoxide ジメチルスルフォキシド DNA Deoxyribonucleic acid デオキシリボ核酸 EPO Erythropoietin エリスロポエチン FCA Freund s complete adjuvant フロイド完全アジュバンド Hb Hemoglobin ヘモグロビン HCT Hematocrit ヘマトクリット KO Knockout ノックアウト LD 50 50% Lethal dose 50% 致死量 LDH Lactate dehydrogenase 乳酸脱水素酵素 MLA Mouse lymphoma assay マウスリンフォーマ細胞を用いた遺伝子突然変異試験 PCA Passive cutaneous anaphylaxis 受身皮膚アナフィラキシー RA Renin angiotensin レニン アンジオテンシン RBC Red blood cell 赤血球 S9 Supernatant at 9000g 9000g 上清 SANA Systemic anaphylaxis 全身アナフィラキシー SHE assay Syrian hamster embryo cell transformation assay ハムスター胚細胞を用いた形質転換試験 TK Toxicokinetics トキシコキネティクス Tg マウス Transgenic mouse トランスジェニックマウス iii

5

6 2.6.6 毒性試験の概要文 毒性試験の概要文 1. まとめ 1.1 試験概要 CS-866AZ は, 既承認成分であるアンジオテンシン II(AII) 受容体拮抗薬の CS-866 ( オルメサルタンメドキソミル ) とジヒドロピリジン系カルシウムチャネル拮抗薬の CS-905( アゼルニジピン ) を有効成分とする新医療用配合剤である 非臨床毒性試験における CS-866AZ の検討は,CS-866AZ の有効成分である CS-866 及び CS-905 の併用により行った 各有効成分の臨床における常用量 (CS-866: 10~20 mg,cs-905: 8~16 mg) を参考として, 主な非臨床毒性試験における CS-866 と CS-905 の併用比は 5:4 に設定した 毒性試験として, 単回投与毒性試験, 反復投与毒性試験, 遺伝毒性試験及び生殖発生毒性試験を実施した CS-866AZ の毒性試験プログラムの概略を表 に示す 胚 胎児発生への影響に関する試験では, ウサギが AII 受容体拮抗薬に対し高感受性を示し, 母動物において毒性が強く発現することから ( 参考資料 ), ラットに加え第二動物種としてマウスを用いた がん原性試験については, 各単剤にがん原性がないこと, 及び CS-866AZ において遺伝毒性がないことが示されたため, 実施しなかった また,CS-905 のラット及びイヌ反復投与毒性試験では心臓への影響が認められていることから,CS-866 投与量比を増加させ併用した際に CS-905 による心血管系への影響に変化があるか否かを検討するため, イヌを用いたテレメトリー試験をその他の毒性試験として実施した CS-866AZ の反復投与試験の一部では CS-866 あるいは CS-905 の単独投与との毒性プロファイルを同一試験内で比較し, その他の毒性試験では既に報告されているそれぞれ単剤のプロファイルと比較した なお, 単剤の毒性試験概要を参考資料として に示す 以上の試験より,CS-866AZ において CS-866 あるいは CS-905 の毒性試験における変化と質的に異なる新たな変化は発現せず, また単剤において確認されている既知の変化の増強も認められなかった 1

7 2.6.6 毒性試験の概要文 表 毒性試験プログラム 試験の種類及び期間投与経路動物種被験物質 単回投与毒性 * 経口 ラット CS-866AZ 経口 イヌ CS-866AZ 反復投与毒性 * 28 日間 経口 ラット CS-866AZ 6 箇月間 経口 ラット CS-866AZ,CS-866,CS 日間 経口 イヌ CS-866AZ 9 箇月間 経口 イヌ CS-866AZ,CS-866,CS-905 遺伝毒性 * 遺伝子突然変異試験 in vitro サルモネラ菌, 大腸菌 CS-866AZ 染色体異常試験 in vitro チャイニーズハムスター CS-866AZ 肺線維芽細胞 小核試験 ( 単回 ) 経口 マウス CS-866AZ 生殖発生毒性 * その他 * : GLP 遵守試験 胚 胎児発生への影響に関する試験 心血管系への影響に関する試験 (4 日間 ) 経口経口 ラットマウス CS-866AZ CS-866AZ 経口イヌ CS-866AZ,CS 単回投与毒性試験ラット単回経口投与試験では, 軟便 下痢や活動性の低下 腹臥位姿勢などの一般状態の変化や体重増加抑制傾向が観察されたが, 投与に起因した死亡例はなく, 最小致死量は雌雄とも CS mg/kg + CS mg/kg [ 以下 1800 mg/kg (O/A=1000/800 mg/kg) として記載 ] より大きいと考えられた ( ) イヌ単回経口投与試験では, 投与に起因すると考えられる嘔吐が認められたが, 死亡例はなく, 最小致死量は 1800 mg/kg より大きいと考えられた また, ラット及びイヌで認められた変化は,CS-866 あるいは CS-905 単剤で認められている変化と質的に同じと判断した ( ) 1.3 反復投与毒性試験ラットの 28 日間反復経口投与試験では, 一般状態の変化は観察されず, 投与に起因した死亡例も認められなかった 一方,CS-866 の薬理作用に関連すると思われる二次的変化として, 尿たん白, 赤血球系パラメータ,BUN 及び電解質, 心臓 腎臓重量の軽度な変化が観察された ( ) CS-866 あるいは CS-905 の単独投与群を併設した 6 箇月間反復経口投与試験では, これらの変化に加え, 摂水量及び尿量の増加, 尿浸透圧の低下, 軽度の尿細管再生などの変化が観察されたが, 休薬によりそれらは回復することが確認された CS-866AZ のラット 6 箇月間反復経口投与試験の無毒性量は,22.5 mg/kg と考えられた 比較のために設けた CS-866 あるいは CS-905 単独投与群でも同質の変化が観察され, ラットにおける CS-866AZ の毒性プロファイルは CS-866 あるいは CS-905 の単独投与により発現する変化と質的に同じであり, CS-866 と CS-905 の併用により毒性の増強や新たな毒性の発現はないと結論した ( ) 2

8 2.6.6 毒性試験の概要文 イヌの 28 日間及び 9 箇月間反復経口投与試験では,CS-866AZ 群あるいは単剤群のいずれにおいても一般状態の変化は観察されず, 投与に起因した死亡例も認められなかった また, 体重, 摂餌量, 尿検査, 血圧, 心電図, 眼科学的検査, 血液学的検査, 血液化学的検査, 病理解剖学的及び病理組織学的検査においても投与に起因した変化は認められず,CS-866AZ のイヌ 9 箇月間反復経口投与試験の無毒性量は最高用量である 6.75 mg/kg と考えられた また,CS-866 と CS-905 の併用投与による毒性の増強や新たな毒性の発現はないと結論した ( , ) 以上より,CS-866AZ のラット及びイヌ反復投与試験では,CS-866 あるいは CS-905 の単独投与時に観察されている所見以外の毒性学的な異常は発現しないと判断され, CS-866 と CS-905 の併用投与による毒性の質的変化及び増強が起こる可能性は低いと考えられた また,TK データより, 毒性の質的変化及び増強を起こさない用量でのラットの RNH-6270 の曝露並びにラット及びイヌの CS-905 の曝露は, 臨床におけるこれら化合物の曝露と同等あるいはそれ以上であることが示された ( , ) 1.4 遺伝毒性試験 CS-866AZ の遺伝毒性の有無を検索する目的で,in vitro 試験として細菌を用いる遺伝子突然変異試験及び哺乳類培養細胞を用いる染色体異常試験を,in vivo 試験としてマウス小核試験を実施した その結果, 遺伝子突然変異試験, 染色体異常試験, 及びマウス小核試験のいずれにおいても陰性であったことから,CS-866AZ には遺伝毒性はないと結論した ( , , ) 1.5 生殖発生毒性試験ラットを用いた胚 胎児発生に関する試験では,67.5 mg/kg 投与群で, 母動物に対する影響として体重増加抑制傾向及び摂餌量の減少が認められたが,CS-866AZ の投与に起因した胎児の外表異常, 内臓異常, 及び骨格異常は認められず,CS-866AZ のラットに対する催奇形性は認められなかった 次世代に対する無毒性量は 67.5 mg/kg であった なお,CS-866AZ 投与による母動物の死亡例については,CS-905 単剤のラット器官形成期投与試験においても同用量で死亡例が認められていることから, CS-866 との併用による毒性の増強ではないと結論した ( ) マウスを用いた胚 胎児発生に関する試験においては,675 mg/kg 投与群で, 母動物に対する影響として摂餌量の減少が認められたが,CS-866AZ の投与に起因した胎児の外表異常, 内臓異常, 及び骨格異常は認められず,CS-866AZ のマウスに対する催奇形性は認められなかった 次世代に対する無毒性量は 675 mg/kg であった ( ) 以上より,CS-866AZ には,CS-866 あるいは CS-905 単剤同様に, 催奇形性はないものと判断した 1.6 その他の毒性試験 CS-905 のラット及びイヌ反復投与毒性試験では心臓への影響が認められていることから,CS-866 投与量比を増加させ併用した際に CS-905 による心血管系への影響に 3

9 2.6.6 毒性試験の概要文 変化があるか否かを検討するため, テレメトリー送信器を埋め込んだイヌを用い CS-866AZ を 4 日間反復投与した その結果, 臨床における RNH-6270 の曝露を上回る CS-866 用量においても, 薬理作用である血圧低下以外の心血管系への影響は認められず,CS-866 を併用投与しても CS-905 による心血管系への影響には変化がないものと判断した ( , ) 2. 単回投与毒性試験 2.1 ラット単回経口投与毒性試験 ( ,TK: ) 方法 : ラット (F344,7 週齢,1 群雌雄各 5 例 ) に CS-866AZ を 180,540, 及び 1800 mg/kg の投与量で単回経口投与し, 一般状態の観察及び体重測定を行い, 投与 15 日後に解剖して病理学的検査を実施した 本試験における最高投与量は, 単剤の単回投与試験の結果,CS-866AZ の臨床での配合比, 及び医薬品毒性試験法ガイドラインの単回投与試験における技術的投与可能最大量を考慮して,1800 mg/kg に設定した また, 血漿中薬物濃度測定群 (1 群雌雄各 4 例 ) を設け, 同様に CS-866AZ を投与し血漿中薬物濃度を測定した 結果 : 試験成績を表 に示す 投与に起因した死亡例は認められなかった 一般状態では, 軟便 下痢が 180 mg/kg 以上の投与群で, 活動性低下 腹臥位姿勢が 1800 mg/kg 投与群で観察されたが, 下痢 軟便は投与 2 日目に, 活動性の低下 腹臥位姿勢は投与 3 時間後に回復した 病理解剖学的検査では異常は認められなかった また,1800 mg/kg 投与群において体重の増加抑制傾向が認められた 以上の結果から, 最小致死量は雌雄とも 1800 mg/kg より大きいと結論した 表 ラット単回経口投与毒性試験成績 動物種, 系統, 週齢ラット F344/DuCrj 7 週齢 投与期間経路単回経口 性投与量結果例数 (mg/kg) 死亡例 : なし最小致死量 : >1800 mg/kg( ) 一般状態 : 下痢, 軟便 ( 180 mg/kg) 体重の増加抑制傾向, 活動性低下, 腹臥位姿勢 (1800 mg/kg) 各 5 180(O/A=100/80) 病理解剖学的検査 : 異常なし (TK 群 : 540(O/A=300/240) TK パラメータ (1800 mg/kg, 数値は / ): 各 4) 1800(O/A=1000/800) C max (ng/ml); 2237 / 2535(RNH-6270) 2018 / 2251(CS-905) AUC 0-24h (ng h/ml); / 40075(RNH-6270) / 41099(CS-905) 4

10 2.6.6 毒性試験の概要文 2.2 イヌ単回経口投与毒性試験 ( ,TK: ) 方法 : イヌ ( ビーグル,9~10 箇月齢,1 群雌雄各 1 例 ) に CS-866AZ を 180 及び 1800 mg/kg の投与量で単回経口投与し, 一般状態の観察, 体重 摂餌量測定, 血液学的検査, 血液化学的検査, 及び血漿中薬物濃度の測定を行い, 投与 15 日後に解剖して病理学的検査を実施した 本試験における最高投与量は, 単剤の単回投与試験の結果,CS-866AZ の臨床での配合比, 及び医薬品毒性試験法ガイドラインの単回投与試験における技術的投与可能最大量を考慮して,1800 mg/kg に設定した 結果 : 試験成績を表 に示す 死亡例は認められなかった 一般状態の変化として,180 及び 1800 mg/kg 投与群において, 投与に起因した嘔吐が観察された 体重, 摂餌量, 血液学的検査, 血液化学的検査, 病理解剖学的検査, 及び標的器官である心臓の病理組織学的検査において投与に起因した変化は認められなかった 以上の結果から, 最小致死量は雌雄ともに 1800 mg/kg より大きいと結論した 表 イヌ単回経口投与毒性試験成績 動物種, 品種, 投与期間月齢経路イヌ単回ビーグル経口 9~10 箇月齢 性例数 各 1 投与量結果 (mg/kg) 死亡例 : なし最小致死量 : >1800 mg/kg( ) 一般状態 : 嘔吐( 180 mg/kg) 病理解剖学的検査 : 異常なし病理組織学的検査 ( 心臓 ): 異常なし 180(O/A=100/80) TK パラメータ (1800 mg/kg, 数値は / ): 1800(O/A=1000/800) C max (ng/ml); 1702 / 2263(RNH-6270) 1494 / 1725(CS-905) AUC 0-24h (ng h/ml); / 29261(RNH-6270) / 29921(CS-905) 3. 反復投与毒性試験 3.1 ラット 28 日間反復経口投与毒性試験 ( ,TK: ) 方法 : ラット (F344,7 週齢,1 群雌雄各 10 例 ) に CS-866AZ を 0,6.75,22.5, 及び 67.5 mg/kg の投与量で 28 日間反復経口投与した 本試験における最高投与量は, CS-905 のラット 14 日間反復経口投与毒性試験 ( 投与量 :0,3,10,30,100 mg/kg) の結果 (100 mg/kg 群で死亡例あり ) 及び CS-866AZ の臨床での配合比を考慮して 67.5 mg/kg に設定した 投与期間中に一般状態の観察, 体重 摂餌量の測定, 尿検査, 及び眼科学的検査を行い, 投与期間終了時に血液学的検査, 血液化学的検査, 及び病 5

11 2.6.6 毒性試験の概要文 理学的検査を実施した また, 血漿中薬物濃度測定群 (1 群雌雄各 4 例 ) を設け, 同様に CS-866AZ を投与し, 血漿中薬物濃度を測定した 結果 : 試験成績を表 に示す 投与期間を通して死亡例及び投与に起因した一般状態の変化は認められなかった 体重増加率の軽度な抑制が 22.5 mg/kg 以上の投与群の雄で観察された 尿検査では, 尿たん白の減少が 22.5 mg/kg 以上の投与群で観察された 血液学的検査では RBC,Hb, 及び HCT の軽度減少 (CS-866 起因 ) が 67.5 mg/kg 投与群で観察され, 血液化学的検査では BUN 及び K の上昇 ( それぞれ CS-866/CS-905 起因及び CS-866 起因 ) が 67.5 mg/kg 投与群で,Ca 及び P の低下 (CS-905 起因 ) が 22.5 mg/kg 以上の投与群で,Na の軽度低下 (CS-866/CS-905 起因 ) が 6.75 mg/kg 以上の投与群でそれぞれ認められた これらの変化はいずれも薬理作用に関連した変化と考えられ,CS-866 及び CS-905 単剤のラット反復投与毒性試験で認められている変化と質的に同じであり, 併用投与による変化の増強も認められなかった 器官重量では, 心臓重量の減少 (CS-866 による減少作用と CS-905 による増加作用の相殺として ) 及び腎臓重量の増加 (CS-866/CS-905 起因 ) が認められたが, 変化の程度は軽度であり, 病理解剖学 組織学的検査では投与に起因した変化は認められなかった 血漿中薬物濃度については,RNH-6270 及び CS-905 の C max 及び AUC 0-24h は投与量に伴って増加し, これら TK パラメータには明らかな性差は認められなかった 以上の結果から, 無毒性量は雌雄ともに 67.5 mg/kg と判断した また,CS-866AZ では,CS-866 及び CS-905 単剤でそれぞれ認められている変化の増強あるいは質的に異なる新たな変化の発現もないものと判断した なお,67.5 mg/kg 投与群の投与 27 日目における RNH-6270 の C max 及び AUC 0-24h は, 雄がそれぞれ 1646 ng/ml 及び ng h/ml, 雌がそれぞれ 1964 ng/ml 及び ng h/ml であった 同様に CS-905 の C max 及び AUC 0-24h は, 雄がそれぞれ 710 ng/ml 及び ng h/ml, 雌がそれぞれ 806 ng/ml 及び ng h/ml であった 6

12 2.6.6 毒性試験の概要文 動物種, 系統, 週齢 ラット F344/DuCrj 7 週齢 投与期間経路 28 日間反復経口 表 ラット 28 日間反復経口投与毒性試験成績 性例数 投与量 (mg/kg) 媒体 各 (O/A=3.75/3) (TK 群 : 22.5(O/A=12.5/10) 各 4) 67.5(O/A=37.5/30) 結 死亡例 : なし無毒性量 :67.5 mg/kg 一般状態 : 変化なし体重増加率 : 減少 ( 22.5 mg/kg) 摂餌量 : 変化なし尿検査 : 尿たん白減少 ( 22.5 mg/kg) 眼科学的検査 : 異常なし血液学的検査 : RBC,Hb,HCT; 減少 ( 67.5 mg/kg) 血液化学的検査 : BUN; 上昇 (67.5 mg/kg) K; 上昇 ( 67.5 mg/kg) Na; 減少 ( 6.75 mg/kg) Ca,P; 減少 ( 22.5 mg/kg) 器官重量 ( 相対 ): 心臓 ; 減少 (67.5 mg/kg) 腎臓 ; 増加 ( 6.75 mg/kg) 病理解剖学的検査 : 異常なし病理組織学的検査 : 異常なし TK パラメータ (67.5 mg/kg, 数値は D1/D27): C max (ng/ml); 1885 / 1646, 1729 / 1964(RNH-6270) 544 / 710, 828 / 806(CS-905) AUC 0-24h (ng h/ml); 7716 / 10267, 7660 / 10162(RNH-6270) 7179 / 10073, / 10637(CS-905) 果 3.2 ラット 6 箇月間反復経口投与毒性試験 ( ,TK: ) 方法 : ラット (F344,6 週齢,1 群雌雄各 15 例 ) に CS-866AZ を 0,6.75,22.5, 及び 67.5 mg/kg の投与量で 6 箇月間反復経口投与した 本試験における最高投与量は, CS-866AZ のラット 28 日間反復経口投与毒性試験における無毒性量が 67.5 mg/kg であったことから,67.5 mg/kg に設定した また,CS-866AZ との比較を目的に CS-866 を 37.5 mg/kg, あるいは CS-905 を 30 mg/kg の投与量でそれぞれ単独投与する群を設けた さらに,CS-866AZ の 0 及び 67.5 mg/kg 投与群については 1 箇月間の休薬群を設け変化の回復性を検討した 投与期間中に一般状態の観察, 体重 摂餌量の測定, 尿検査 ( 摂水量を含む ), 及び眼科学的検査を行い, 投与期間もしくは休薬期間終了時に血液学的検査, 血液化学的検査, 及び病理学的検査を実施した また, 血漿中薬物濃度測定群 (1 群雌雄各 4 例 ) を設け, 同様に CS-866AZ を投与し, 血漿中 RNH-6270 及び CS-905 濃度を測定した 結果 : 試験成績を表 に示す 投与期間及び休薬期間を通して死亡例及び投与に起因した一般状態の変化は認められなかった また, 体重 摂餌量, 眼科学的検査, 及び剖検においても投与に起因した変化は認められなかった 尿検査では, 摂水量及び尿量の増加, それにともなう尿浸透圧の低下が 67.5 mg/kg 投与群で観察さ 7

13 2.6.6 毒性試験の概要文 れた ( 主に CS-905 起因 ) 血液学的検査では RBC,Hb, 及び HCT の軽度減少が 22.5 mg/kg 以上の投与群で観察された (CS-866 起因 ) 血液化学的検査では,BUN 及び K の上昇 ( それぞれ CS-866/CS-905 起因及び CS-866 起因 ) がそれぞれ 67.5 mg/kg 投与群及び 22.5 mg/kg 以上の投与群で認められ,Na の減少 (CS-866/CS-905 起因 ) が 22.5 mg/kg 以上の投与群,Ca 及び P の低下 (CS-905 起因 ) がそれぞれ 22.5 mg/kg 以上の投与群及び 67.5 mg/kg 投与群で認められた 器官重量では, 心臓重量の減少 (CS-866 による減少と CS-905 による増加作用の相殺として ) 及び腎臓重量の増加 (CS-866/CS-905 起因 ) が 6.75 mg/kg 以上の投与群で観察された 以上の変化は薬理作用に関連するものと考えられた さらに, 病理組織学的検査でも, 薬理作用に伴う二次的変化と考えられる腎臓の輸入細動脈及び葉間動脈壁の軽微な肥厚が 22.5 mg/kg 以上の投与群で観察された 67.5 mg/kg 投与群では, 軽度な再生尿細管が数例で観察された 上記変化はいずれも CS-866 あるいは CS-905 単独投与でも認められている変化であり, また, 薬理作用に起因する腎臓の輸入細動脈及び葉間動脈壁の肥厚を除いては休薬後に回復し, 可逆性であった 血漿中薬物濃度については, RNH-6270 及び CS-905 の C max 及び AUC 0-24h は CS-866AZ の投与量に伴って増加した また CS-866AZ 反復投与後の RNH-6270 及び CS-905 の C max 及び AUC 0-24h は, 投与約 4 週後に定常状態であり, これら TK パラメータには明らかな性差は認められなかった RNH-6270 曝露量は,CS-866AZ の 67.5 mg/kg 投与群 (CS-866 として 37.5 mg/kg 投与 ) では CS-866 の 37.5 mg/kg 単独投与群に比べて高値 (C max で 1.8~3.3 倍,AUC 0-24h で 3.2~4.8 倍 ) であった この曝露上昇については,CS-905 の薬理作用による腸管の平滑筋弛緩が薬物懸濁液の消化管内貯留をもたらし, 消化管からの CS-866 の吸収を増加させたためと考えられた ( 参考資料 , 参考資料 ) 以上の結果から, 本試験における CS-866AZ の無毒性量は, 腎臓における再生尿細管の出現に基づき,22.5 mg/kg と判断した また,CS-866AZ では,CS-866 及び CS-905 単剤でそれぞれ認められた変化の増強はなく, 質的に異なる新たな変化の発現もないものと判断した なお,22.5 mg/kg 投与群の投与 26 週目における RNH-6270 の C max 及び AUC 0-24h は, 雄がそれぞれ 1012 ng/ml 及び 3910 ng h/ml, 雌がそれぞれ 938 ng/ml 及び 3373 ng h/ml であった 同様に CS-905 の C max 及び AUC 0-24h は, 雄がそれぞれ 366 ng/ml 及び 3365 ng h/ml, 雌がそれぞれ 398 ng/ml 及び 4145 ng h/ml であった これら TK データより,RNH-6270 あるいは CS-905 の曝露は, 臨床における曝露に対しそれぞれ同等あるいはそれ以上であることが示された 8

14 2.6.6 毒性試験の概要文 動物種, 系統, 週齢 ラット F344/Jcl 6 週齢 投与期間経路 6 箇月間反復経口 表 ラット 6 箇月間反復経口投与毒性試験成績 性例数 各 15 (TK 群 : 各 4) 投与量 (mg/kg) 媒体 6.75 (O/A=3.75/3) 22.5 (O/A=12.5/10) 器官重量 ( 相対 ): 心臓 ; 減少 (CS-866AZ 6.75 mg/kg,cs mg/kg), 67.5 増加 (CS mg/kg) (O/A=37.5/30) 腎臓 ; 増加 (CS-866AZ 6.75 mg/kg,cs mg/kg) CS-866:37.5 CS-905:30 結 死亡例 : なし無毒性量 :22.5 mg/kg 一般状態 : 変化なし体重増加率 : 変化なし摂餌量 : 変化なし尿検査 : 摂水量 ; 増加 (CS-866AZ 67.5 mg/kg,cs mg/kg,cs mg/kg) 尿量 ; 増加 (CS-866AZ 67.5 mg/kg,cs mg/kg) 尿浸透圧 ; 減少 (CS-866AZ 67.5 mg/kg,cs mg/kg) 眼科学的検査 : 異常なし血液学的検査 : RBC,Hb,HCT; 減少 (CS-866AZ 22.5 mg/kg,cs mg/kg) 血液化学的検査 : BUN; 上昇 (CS-866AZ 67.5 mg/kg,cs mg/kg,cs mg/kg) K; 上昇 (CS-866AZ 22.5 mg/kg,cs mg/kg) Na; 減少 (CS-866AZ 22.5 mg/kg,cs mg/kg, CS mg/kg) Ca; 減少 (CS-866AZ 22.5 mg/kg,cs mg/kg) P; 減少 (CS-866AZ 67.5 mg/kg,cs mg/kg) 病理解剖学的検査 : 異常なし病理組織学的検査 : 輸入細動脈 / 葉間動脈壁肥厚 (CS-866AZ 22.5 mg/kg, CS mg/kg) 再生尿細管 (CS-866AZ 67.5 mg/kg) TK パラメータ無毒性量 (CS-866AZ 22.5 mg/kg, 数値は D1/W26): C max (ng/ml); 1189 / 1012, 1133 / 938(RNH-6270) 267 / 366, 532 / 398(CS-905) AUC 0-24h (ng h/ml); 4238 / 3910, 3153 / 3373(RNH-6270) 2496 / 3365, 6351/ 4145 (CS-905) 単剤群との比較 (CS-866AZ 67.5 mg/kg,cs mg/kg, CS mg/kg, 数値は W26 の CS-866AZ/ 単剤 ): C max (ng/ml); 3575 / 1069, 2536 / 1375(RNH-6270) 902 / 955, 892 / 1245(CS-905) AUC 0-24h (ng h/ml); / 4114, / 5056(RNH-6270) / 13411, / 18666(CS-905) 果 9

15 2.6.6 毒性試験の概要文 3.3 イヌ 28 日間反復経口投与毒性試験 ( ,TK: ) 方法 : イヌ ( ビーグル,8~9 箇月齢,1 群雌雄各 3 例 ) に CS-866AZ を 0,0.675, 2.25, 及び 6.75 mg/kg の投与量で 28 日間反復経口投与した 本試験における最高投与量は,CS-905 の 12 箇月間反復経口投与毒性試験の結果 (10 mg/kg 群で投与 9 日に死亡例あり ) 及び CS-866AZ の臨床での配合比を考慮して,6.75 mg/kg に設定した 投与期間中に一般状態の観察, 体重 摂餌量の測定, 尿検査, 血圧 心電図の測定, 眼科学的検査, 血液学的検査, 血液化学的検査, 及び血漿中薬物濃度測定を行い, 投与期間終了時に病理学的検査を実施した 結果 : 試験成績を表 に示す 投与期間を通して死亡例及び投与に起因した一般状態の変化は認められなかった また, 体重, 摂餌量, 尿検査, 血圧, 心電図, 眼科学的検査, 血液学的検査, 血液化学的検査, 病理解剖学的, 及び病理組織学的検査においても投与に起因した変化は認められなかった 血漿中薬物濃度については,RNH-6270 及び CS-905 の C max 及び AUC 0-24h は投与量に伴って増加し, これら TK パラメータには明らかな性差は認められなかった 以上の結果から, 無毒性量は雌雄ともに 6.75 mg/kg と判断した また,CS-866AZ では, これまでに CS-866 及び CS-905 単剤でそれぞれ報告されている変化の増強あるいは質的に異なる新たな変化の発現もないものと判断した なお,6.75 mg/kg 投与群の投与 28 日目における RNH-6270 の C max 及び AUC 0-24h は, 雄がそれぞれ 49.9 ng/ml 及び 331 ng h/ml, 雌がそれぞれ 56.7 ng/ml 及び 416 ng h/ml であった 同様に CS-905 の C max 及び AUC 0-24h は, 雄がそれぞれ 54.0 ng/ml 及び 731 ng h/ml, 雌がそれぞれ 57.1 ng/ml 及び 860 ng h/ml であった 動物種, 品種, 月齢 イヌビーグル 12 箇月齢 投与期間経路 28 日間反復経口 表 イヌ 28 日間反復経口投与毒性試験成績 性例数 各 3 投与量結果 (mg/kg) 死亡例 : なし無毒性量 :6.75 mg/kg 一般状態 : 変化なし体重増加率 : 変化なし摂餌量 : 変化なし尿検査 : 異常なし眼科学的検査 : 異常なし血圧 心電図 : 異常なし 媒体血液学的検査 : 異常なし 0.675(O/A=0.375/0.3) 血液化学的検査 : 異常なし 2.25(O/A=1.25/1) 器官重量 ( 相対 ): 変化なし 6.75(O/A=3.75/3) 病理解剖学的検査 : 異常なし病理組織学的検査 : 異常なし TK パラメータ (6.75 mg/kg, 数値は D1/D28): C max (ng/ml); 100 / 49.9, 84.2 / 56.7(RNH-6270) 32.4 / 54.0, 39.9 / 57.1(CS-905) AUC 0-24h (ng h/ml); 925 / 331, 748 / 416(RNH-6270) 426 / 731, 486 / 860(CS-905) 10

16 2.6.6 毒性試験の概要文 3.4 イヌ 9 箇月間反復経口投与毒性試験 ( ,TK: ) 方法 : イヌ ( ビーグル,14~16 箇月齢,1 群雌雄各 4 例 ) に CS-866AZ を 0,0.675, 2.25, 及び 6.75 mg/kg の投与量で 9 箇月間反復経口投与した 本試験における最高投与量は,CS-905 の 12 箇月間反復経口投与毒性試験の結果 (10 mg/kg 群で投与 9 日に死亡例あり ) 及び CS-866AZ の臨床での配合比を考慮して,6.75 mg/kg に設定した また,CS-866AZ との比較を目的に CS-866 を 3.75 mg/kg, あるいは CS-905 を 3 mg/kg の投与量でそれぞれ単独投与する群を設けた 投与期間中に一般状態の観察, 体重 摂餌量の測定, 尿検査, 血圧 心電図の測定, 眼科学的検査, 血液学的検査, 血液化学的検査, 及び血漿中薬物濃度測定を行い, 投与期間終了時に病理学的検査を実施した 結果 : 試験成績を表 に示す 投与期間を通して死亡例及び投与に起因した一般状態の変化は認められなかった また, 体重, 摂餌量, 尿検査, 血圧, 心電図, 眼科学的検査, 血液化学的検査, 病理解剖学的, 及び病理組織学的検査においても投与に起因した変化は認められなかった 血液学的検査では RBC,Hb, 及び HCT の減少が 6.75 mg/kg 投与群の雌で投与 37 日目に観察されたが, 投与 9 箇月目にはこれら変化に関する有意差はなかった これら血液パラメータの減少は, 相当する CS-866 及び CS-905 の単剤投与群の雌でも同様の傾向が認められた 血漿中薬物濃度については,RNH-6270 の C max 及び AUC 0-24h は CS-866AZ の投与量に伴い増加し, CS-905 のこれらパラメータについては投与量を上回る増加であった CS-866AZ 反復投与後の RNH-6270 及び CS-905 の C max 及び AUC 0-24h は, 投与 28 日後にほぼ定常状態であり, また, 明らかな性差は認められなかった なお, ラットの併用群で認められた RNH-6270 の曝露上昇は, イヌでは観察されなかった 以上の結果から, 本試験における CS-866AZ の無毒性量は雌雄ともに 6.75 mg/kg と判断した また, 本試験においては単剤群においても毒性所見は認められなかったものの, これまでに CS-866 及び CS-905 の単剤でそれぞれ報告されている変化の増強あるいは質的に異なる新たな変化の発現もないものと判断した なお,CS-866AZ の 6.75 mg/kg 投与群の投与 94 日目における RNH-6270 の C max 及び AUC 0-24h は, 雄がそれぞれ 166 ng/ml 及び 1326 ng h/ml, 雌がそれぞれ 77.4 ng/ml 及び 513 ng h/ml であった 同様に CS-905 の C max 及び AUC 0-24h は, 雄がそれぞれ 79.1 ng/ml 及び 883 ng h/ml, 雌がそれぞれ 93.1 ng/ml 及び 1223 ng h/ml であった これら TK データより, CS-905 の曝露は臨床における曝露を上回ることが示された 11

17 2.6.6 毒性試験の概要文 動物種, 品種, 月齢 イヌビーグル 14~16 箇月齢 投与期間経路 9 箇月間反復経口 表 イヌ 9 箇月間反復経口投与毒性試験成績 性例数 各 4 投与量 (mg/kg) 媒体 0.675(O/A=0.375/0.3) 病理解剖学的検査 : 異常なし 2.25(O/A=1.25/1) 6.75(O/A=3.75/3) CS-866:3.75 CS-905:3 結 死亡例 : なし無毒性量 :6.75 mg/kg 一般状態 : 変化なし体重増加率 : 変化なし摂餌量 : 変化なし尿検査 : 異常なし眼科学的検査 : 異常なし血圧 心電図 : 異常なし血液学的検査 : RBC,Hb,HCT; 減少 (CS-866AZ 6.75 mg/kg の投与 37 日目 ただし, 減少傾向は CS mg/kg 及び CS mg/kg の 37 日目でも認められた ) 血液化学的検査 : 異常なし器官重量 ( 相対 ): 変化なし 病理組織学的検査 : 異常なし TK パラメータ無毒性量 (6.75 mg/kg, 数値は D1/D94): C max (ng/ml); 89.5 / 166, 99.8 / 77.4(RNH-6270) 61.5 / 79.1, 107 / 93.1(CS-905) AUC 0-24h (ng h/ml); 460 / 1326, 484 / 513(RNH-6270) 808 / 883, 1269 /1223(CS-905) 単剤群との比較 (CS-866AZ 6.75 mg/kg,cs mg/kg,cs mg/kg, 数値は W13 の CS-866AZ/ 単剤 ): C max (ng/ml); 166 / 62.8, 77.4 / 77.6(RNH-6270) 79.1 / 72.7, 93.1 / 41.6(CS-905) AUC 0-24h (ng h/ml); 1326 / 401, 513 / 503(RNH-6270) 883 / 816, 1223 / 530(CS-905) 果 4. 遺伝毒性試験 4.1 細菌を用いる遺伝子突然変異試験 ( ) 方法 : 4 種のサルモネラ菌 (TA1535,TA1537,TA98,TA100) 及び 1 種の大腸菌 (WP2uvrA) を用い, ラット肝 S9 添加による代謝活性化系の存在下及び非存在下で検討した CS-866AZ の用量は, 用量設定試験 ( 投与量 :9.77~5000 μg/plate) での復帰変異コロニー数並びに菌床観察の結果を参考にして,4.88~5000 µg/plate 濃度で添加し,48 時間処理後に出現する復帰変異コロニー数を計数した 陽性対照として 5 種の既知変異原物質, 及び陰性対照として媒体対照を設けた 結果 : 代謝活性化の有無にかかわらず,CS-866AZ を処理した全菌全用量で復帰変異コロニー数の増加は観察されなかったことから,CS-866AZ には復帰突然変異誘発性はないと判断した 12

18 2.6.6 毒性試験の概要文 4.2 哺乳類培養細胞を用いる染色体異常試験 ( ) 方法 : 雌チャイニーズハムスター肺組織由来の線維芽細胞 (CHL 細胞 ) を用い, ラット肝 S9 添加による代謝活性化系の存在下及び非存在下で検討した CS-866AZ の用量は, 用量設定試験 ( 投与量 :23.6~250 μg/ml) での細胞増殖抑制の結果を参考にして, 栄養増殖培地中 59.2~168 µg/ml の濃度とし, 連続処理法では 24 時間, 短時間処理法では 6 時間 ( その後 18 時間の回復時間設定 ) の処理後, 染色体構造異常細胞及び数的異常細胞の出現頻度を求めた 陽性対照として 2 種の既知変異原物質, 並びに陰性対照として媒体対照及び無処置対照を設けた 結果 : 代謝活性化の有無にかかわらず,CS-866AZ のすべての用量において染色体の構造異常及び数的異常の増加は認められなかったことから,CS-866AZ には染色体異常誘発性はないと判断した 4.3 げっ歯類を用いる小核試験 ( ) 方法 : マウス (ICR: 雄性,8 週齢,1 群 6 例 ) に CS-866AZ を 0,450,900, 及び 1800 mg/kg の投与量で単回経口投与した 本試験の最高投与量は, 用量設定試験 ( 投与量 :112.5~1800 mg/kg) において 1800 mg/kg 群で死亡例が認められなかったことから,1800 mg/kg に設定した 投与 48 時間後にマウス尾部より採血し, 小核保有網赤血球出現頻度及び網赤血球出現頻度を求めた 陽性対照としてマイトマイシン C を単回腹腔内投与した 結果 : CS-866AZ のすべての投与量において小核保有網赤血球出現頻度の有意な増加は認められず,CS-866AZ に小核誘発性はないと判断した 5. がん原性試験該当資料なし 6. 生殖発生毒性試験 6.1 ラット胚 胎児発生への影響に関する試験 ( ,TK: ) 方法 : 妊娠ラット (SD,10 週齢,1 群 20~21 例 ) に CS-866AZ を 0,6.75,22.5, 及び 67.5 mg/kg の投与量で, 妊娠 7~17 日まで 11 日間反復経口投与し, 母体及び胚 胎児発生への影響について検討した 本試験における最高投与量は,CS-866AZ のラット胚 胎児発生に関する用量設定試験 ( 参考資料 , 投与量 :22.5,67.5, 225 mg/kg) の結果 (225 mg/kg 群で死亡例あり ) を考慮して,67.5 mg/kg に設定した また, 血漿中薬物濃度測定群 (1 群 4 例 ) を設け, 同様に CS-866AZ を投与し, 血漿中 RNH-6270 及び CS-905 濃度を測定した 結果 : 母体に対する影響では,67.5 mg/kg 群の 1 例が妊娠 20 日に一般状態の悪化を伴い死亡した その他の動物では一般状態の変化は認められなかった また, 67.5 mg/kg 群で体重増加抑制傾向及び摂餌量の減少が認められた 胚 胎児に対する影響では, 妊娠 20 日の剖検において胎児体重の変化及び胚 胎児に対する致死作用 13

19 2.6.6 毒性試験の概要文 は観察されなかった また, 投与に起因した外表異常, 内臓異常, 及び骨格異常は認められなかった 血漿中 RNH-6270 及び CS-905 濃度は投与量に伴って増加した 以上の結果から,CS-866AZ はラットに対して催奇形性作用はないと判断した また, 母動物に対する無毒性量は 22.5 mg/kg, 次世代発生に対する無毒性量は 67.5 mg/kg と判断した 6.2 マウス胚 胎児発生への影響に関する試験 ( ,TK: ) 方法 : 妊娠マウス (ICR,12 週齢,1 群 17~20 例 ) に CS-866AZ を 0,67.5,225, 及び 675 mg/kg の投与量で, 妊娠 6~15 日まで 10 日間反復経口投与し, 母体及び胚 胎児発生への影響について検討した 本試験における最高投与量は,CS-905 のマウス 14 日間反復経口投与毒性試験 ( 投与量 :0,3,10,30,100,300 mg/kg) の結果 (300 mg/kg 群で死亡例あり ) 及び CS-866AZ の臨床での配合比を考慮して 675 mg/kg に設定した また, 血漿中薬物濃度測定群 (1 群 3 例 ) を設け, 同様に CS-866AZ を投与し, 血漿中 RNH-6270 及び CS-905 濃度を測定した 結果 : 母体に対する影響では, 投与に起因すると考えられる死亡例, 一般状態, 及び体重の変化は認められなかったが,675 mg/kg 投与群で摂餌量の低下が認められた 胚 胎児に対する影響では, 妊娠 18 日の剖検において胎児体重の変化及び胚 胎児に対する致死作用は観察されなかった また, 投与に起因した外表異常, 内臓異常, 及び骨格異常は認められなかった 血漿中 RNH-6270 及び CS-905 濃度は投与量に伴って増加した 以上の結果から,CS-866AZ はマウスに対して催奇形性作用はないと判断した また, 母動物に対する無毒性量は 225 mg/kg, 次世代発生に対する無毒性量は 675 mg/kg と判断した 7. 局所刺激性試験該当資料なし 8. その他の毒性試験 CS-905 のラット及びイヌ反復投与毒性試験では心臓への影響が認められていることから,CS-866 投与量比を増加させ併用した際に CS-905 による心血管系への影響に変化があるか否かの検討を行った また,CS-866AZ 投与時に認められた RNH-6270 曝露量上昇に関する検討を行った ( 表 に結果を示す ) 8.1 イヌ心血管系への影響に関する試験 ( ,TK: ) 方法 : テレメトリー送信器を埋め込んだイヌ ( ビーグル,14 箇月齢, 雌雄各 2 例 ) に, カプセルのみ,CS mg/kg,cs-866az(o/a=37.5/3 mg/kg,o/a=75/3 mg/kg) の順に漸増経口投与した なお,CS-905 の用量は臨床での CS-905 曝露量を上回る用量である 3 mg/kg で固定し, 併用する CS-866 用量を増加させた際の CS-905 の心臓への影響増悪の有無を確認することとした 各用量を 4 日間反復投与し, 各用量間の休 14

20 2.6.6 毒性試験の概要文 薬は 3 日間とした 心拍数及び血圧は,5 分間隔にて 10 秒間のデータを毎日収集した 心電図は各用量の投与 2 及び 3 日目にそれぞれ 24 時間のデータを取得した 投与期間中, 一般状態の観察及び体重 摂餌量の測定を行い, 血漿中薬物濃度測定を各用量の投与 1 日目に, 病理学的検査を最終投与終了時に実施した 結果 : 試験成績を表 に示す 一般状態, 体重 摂餌量, 及び心拍数には投与に起因した有意な変化は認められなかった 平均血圧では, 媒体投与群と比較し,O/A=37.5/3 mg/kg 及び O/A=75/3 mg/kg 群で薬理作用による低下傾向が認められたが, 心電図ではすべての投与群で投与に起因した変化は認められず, 心臓に病理学的変化はなかった CS-866 の活性代謝物である RNH-6270 の AUC 0-24h は, O/A=37.5/3 mg/kg 及び O/A=75/3 mg/kg 群でそれぞれ ng h/ml 及び ng h/ml であり, 臨床での曝露を大きく上回るものであった これらの結果より,CS-866 投与量比を増加させた場合でも薬理作用である血圧低下以外の心血管系への影響は認められず,CS-866 併用投与において CS-905 による心血管系への影響に変化がないものと判断した 動物種, 品種, 月齢 イヌビーグル 14 箇月齢 投与期間経路 4 日間反復経口 ( 漸増 ) 表 イヌ心血管系への影響に関する成績 性例数 各 2 投与量 (mg/kg) 媒体 CS-905:3 CS-866AZ: O/A=37.5/3 O/A=75/3 結 死亡例 : なし一般状態 : 変化なし体重 摂餌量 : 変化なし心血管系 : 心拍数 ; 変化なし 血圧 ; O/A=37.5/3 mg/kg で低下傾向 心電図 ; 変化なし病理解剖学的検査 : 異常なし TK パラメータ (O/A=75/3 群, 数値は 平均 ): C max (ng/ml); 1531(RNH-6270) 59.0(CS-905) AUC 0-24h (ng h/ml); 16421(RNH-6270) 533(CS-905) 果 9. 考察及び結論 CS-866AZ は,AII 受容体拮抗薬の CS-866 及び Ca 拮抗薬の CS-905 の配合剤である 本剤の毒性評価として, 単回及び反復投与毒性試験を実施した結果,CS-866 及び CS-905 の単独投与毒性試験において観察された既知の変化の増強は認められず, また質的に異なる新たな変化の発現も認められなかった また,CS-866AZ には, 遺伝毒性及び催奇形性はないものと判断された さらに,CS-866 投与量比を増加させた場合, 臨床における RNH-6270 の曝露を上回る CS-866 の用量においても, 薬理作用である血圧低下以外の心血管系への影響は認められなかった したがって,CS-866AZ は CS-866 及び CS-905 と同じ毒性プロファイルを有するものと考えられる 15

21 2.6.6 毒性試験の概要文 なお, ラットで CS-866 と CS-905 の併用投与時に RNH-6270 の曝露上昇が認められた この上昇は,CS-905 の薬理作用による腸管の平滑筋弛緩が薬物懸濁液の消化管内貯留をもたらし, 消化管からの CS-866 の吸収を増加させたためと考えられたが, イヌの反復投与毒性試験や CS-866AZ の臨床試験では認められておらず, 臨床への外挿性のない事象と判断した これらのことから,CS-866AZ におけるリスク アセスメントとして,CS-866 単独投与時に投与起因性と判断された赤血球系パラメータ及び腎臓の変化 ( CS-866 の毒性試験の概要 ), 及び CS-905 単独投与時に投与起因性と判断された心臓の変化 ( CS-905 の毒性試験の概要 ) についてそれぞれ以下に考察した 赤血球系パラメータへの影響 CS-866AZ のラット 28 日間及び 6 箇月間反復投与毒性試験において認められた赤血球系パラメータ (RBC,Hb,HCT) の低値については,CS-866 のラット 28 日間及び 6 箇月間反復経口投与毒性試験においても認められており,CS-866 に基づく変化と考えられた この変化は, レニン アンジオテンシン (RA) 系に作用する AII 受容体拮抗薬あるいはアンジオテンシン変換酵素 (ACE) 阻害薬に共通して認められ, 薬理作用に関連した変化と考えられている また, その機序はエリスロポエチン (EPO) の減少に基づくことが示唆されており 1~3),EPO 減少には薬理作用に基づく腎血流量増加に対するフィードバック機構の関与が考えられている 2, 3) なお, CS-866AZ の第 III 相比較試験では, 単剤群に対し併用群で治験責任医師より臨床的に有意と判断された赤血球パラメータの異常変動が増加する傾向は認められなかった 以上のことから,CS-866 と同様 CS-866AZ についても, 臨床において赤血球系パラメータに影響を及ぼす可能性が考えられるが, ラットにおける赤血球系パラメータの変化は CS-905 併用により増強されなかったことから, その作用が CS-866 単独投与時よりも強く現れる可能性は低く, 重篤な副作用に至る可能性は低いものと推察される 腎臓への影響 CS-866AZ のラット 28 日間及び 6 箇月間反復投与毒性試験において,BUN 及び K の高値,Ca 及び P の低値,Na の軽度低値, 並びに腎臓の重量増加及び病理組織学的変化 ( 輸入細動脈及び葉間動脈壁の肥厚, 再生尿細管 ) が認められた これら腎臓への影響を示唆する所見は CS-866 のラット反復経口投与毒性試験においても認められている しかしながら, これらの変化は RA 系に作用する AII 受容体拮抗薬あるいは ACE 阻害薬に共通して認められる変化で, 血圧低下あるいは体液中 Na 平衡の変化に起因した薬理作用に基づく変化と考えられることから 4~12), 毒性学的な意義はないものと判断している したがって,CS-866AZ についても,CS-866 と同様に薬理作用 16

22 2.6.6 毒性試験の概要文 に基づく変化であり毒性学的な意義はないものと判断した また,CS-866AZ の第 III 相比較試験でも, 単剤群に対し併用群で治験責任医師より臨床的に有意と判断された BUN 上昇が増加する傾向は認められなかった 以上のことから,CS-866 と同様 CS-866AZ についても, 臨床において腎機能に影響を及ぼす可能性が考えられるが, ラットにおける変化が CS-905 併用により増強されなかったことから, その作用が CS-866 単独投与時よりも強く現れる可能性は低く, 腎臓への影響が重篤な副作用に至る可能性は低いと推察される 心臓への影響 CS-905 のラット及びイヌ反復投与毒性試験では心臓への影響が認められており, ラットでは心臓重量の増加, イヌでは心臓乳頭筋の変性 壊死, 線維化あるいは石灰化病巣が認められている イヌで認められた心臓乳頭筋の変化は, 血圧低下に対する二次的な生理的反射性頻脈により発現することが知られており 13), ジヒドロピリジン系 Ca 拮抗薬に共通した変化で類薬でも同様の変化が認められている しかしながら, 本作用は副交感神経による心臓支配が優位なイヌに発現しやすい変化であり, 交感神経支配が優位な高血圧症患者ではそのリスクは低いものと考えられている 実際, CS-905 の臨床試験では顕著な心拍数の増加は認められておらず, 心臓への影響に起因した重篤な副作用も認められていない さらに,CS-866 と CS-905 の併用投与において CS-866 投与量比を増加させた場合, CS-905 によるイヌ心血管系への影響に変化があるか否かを検討したところ, 臨床における RNH-6270 の曝露を上回る CS-866 用量においても, 薬理作用である血圧低下以外の心血管系への影響は認められなかった また,CS-866AZ の第 III 相比較試験でも, 単剤群に対し併用群で血圧低下を含め心血管系の自覚症状 他覚所見の発現が増加する傾向は認められなかったことから,CS-866AZ の臨床で心臓への影響が認められる可能性は低いと考えられる 以上のことから,CS-905 で認められている心臓への作用は,CS-866 併用により CS-905 単独投与時よりも強く現れる可能性は低く, 心臓への影響が重篤な副作用に至る可能性は低いと推察される 10. 参考 10.1 CS-866 の毒性試験の概要 CS-866 の毒性試験の概要を以下に示し, 各試験成績の一覧を表 に示した 単回投与毒性試験ラット (500,1000,2000 mg/kg) 及びイヌ (1000,2000 mg/kg) のいずれにおいても最高用量まで死亡例は認められず, 最小致死量は 2000 mg/kg より大きいと判断した 17

23 2.6.6 毒性試験の概要文 反復投与毒性試験ラット 28 日間 (100,300,1000 mg/kg) 及び 6 箇月間 (30,100,300,1000 mg/kg), イヌ 3 箇月間 (30,60,125,250,500 mg/kg) 及び 12 箇月間 (10,40,160 mg/kg) の試験を実施した その結果, 無毒性量はラットでは 28 日間投与試験が 1000 mg/kg, 6 箇月間投与試験が雄 100 mg/kg, 雌 1000 mg/kg と判断し, イヌでは 3 箇月間投与毒性試験が 60 mg/kg,12 箇月間投与試験が 160 mg/kg と判断した これらの試験では, 尿細管上皮の再生あるいは管腔の拡張, 傍糸球体細胞顆粒指数あるいは傍糸球体細胞の過形成 / 傍糸球体細胞顆粒の増加, 及び BUN の高値が, ラット及びイヌに共通して認められた また, ラットでは体重増加抑制及び摂餌量の抑制, 摂水量及び尿量の増加, 尿たん白の減少, 赤血球系パラメータ (RBC,Hb,HCT) の低値,K 及びクレアチニンの高値,Na の低値, 心臓重量の低値及び腎臓重量の高値, 並びに腎臓動脈壁肥厚が認められた これらの変化の多くは腎臓への影響を示すものであり, CS-866 の主な標的臓器は腎臓と考えられた このうち, ラット及びイヌに認められた尿細管上皮の再生あるいは管腔の拡張は, 腎臓の器質的変化を示すことから, CS-866 投与による毒性所見と判断した 遺伝毒性試験 In vitro 試験として細菌を用いた遺伝子突然変異試験, チャイニーズハムスター雌肺由来線維芽細胞を用いた染色体異常試験, マウスリンフォーマ細胞を用いた遺伝子突然変異試験 (MLA), 及びシリアンハムスター胚細胞を用いた形質転換試験 (SHE assay) を,in vivo 試験としてマウス小核試験, ラット肝臓不定期 DNA 合成試験, 及びトランスジェニック (Tg) マウスを用いた遺伝子突然変異試験を実施した その結果,in vitro の染色体異常試験及び MLA においてのみ陽性応答が認められ, RNH-6270あるいは側鎖エステル由来の代謝物であるジアセチルの陽性応答に基づく反応と考えられた しかしながら,RNH-6270 の陽性応答は過度の細胞毒性に起因した反応であること, ジアセチルは速やかに分解されるため CS-866 投与による生体内ジアセチル濃度の顕著な増加は認められないことから,CS-866 の陽性応答は生体における遺伝毒性を示唆するものではないと判断した がん原性試験ラットを用いた 24 箇月間混餌投与試験 (200,600,2000 mg/kg),p53 がん抑制遺伝子ヘテロ欠損マウスを用いた 26 週間投与試験 (100,300,1000 mg/kg), 及びヒトプロト型発がん遺伝子 c-ha-ras 導入 Tg マウスを用いた 26 週間投与試験 (1000 mg/kg) を実施した その結果, いずれの試験においても催腫瘍性は認められず,CS-866 に発がん性はないものと判断した 生殖発生毒性試験ラットを用いた妊娠前及び妊娠初期投与試験 (Seg.I:40,200,1000 mg/kg), 胎児の器官形成期投与試験 (Seg.II:40,200,1000 mg/kg), 周産期及び授乳期投与試験 (Seg.III:0.3,1.6,8,40,200 mg/kg), 及びウサギを用いた胎児の器官形成期投与 18

24 2.6.6 毒性試験の概要文 試験 (Seg.II:0.3,1,3 mg/kg) を実施した その結果, 親動物の体重増加抑制及び摂餌量減少が認められ, 出生児では体重増加抑制及び腎盂拡張など既存の AII 受容体拮抗薬に共通した所見が認められた他, 生後分化及び発育抑制等が認められたが, 催奇形性を示唆する所見は認められなかった その他の毒性試験マウスを用いた受身皮膚アナフィラキシー (PCA) 試験 (0.02,0.2 mg/body), 並びにモルモットを用いた PCA 及び全身アナフィラキシー (SANA) 試験 (0.1, 1 mg/body) を実施した結果, マウス及びモルモットともに抗原性はないと判断した 19

25 2.6.6 毒性試験の概要文 試験の種類 単回投与毒性試験 反復投与毒性試験 動物種 (1 群例数 ) ラット ( 各 5) イヌ ( 各 1) ラット ( 各 15) ラット ( 各 15) イヌ ( 各 3) イヌ ( 各 4) 表 CS-866 の毒性試験成績一覧 投与期間経路 投与量 (mg/kg) 経口 経口 日間反復経口 6 箇月間反復経口 3 箇月間反復経口 12 箇月間反復経口 試験結果 死亡例 : なし主な所見 : 特記すべき所見なし最小致死量 :>2000 mg/kg 死亡例 : なし主な所見 : 一過性の摂餌量減少 ( 1000 mg/kg, 2000 mg/kg) 最小致死量 :>2000 mg/kg 無毒性量 :1000 mg/kg 死亡例 : 投与に起因する死亡例なし主な所見 : 体重増加抑制, 摂餌量減少, 摂水量 尿量増加, 尿たん白減少,RBC Hb HCT 減少,BUN K Cre 上昇,Na 低下, 心臓重量減少, 腎臓重量増加, 傍糸球体細胞顆粒指数増加無毒性量 : 100 mg/kg, 1000 mg/kg 死亡例 : 投与に起因する死亡例なし主な所見 : 体重増加抑制, 摂餌量減少, 摂水量 尿量増加, 尿たん白減少, 尿比重 浸透圧低下,RBC Hb HCT 減少,BUN K Cre 上昇,Na 低下, 心臓重量減少, 腎臓重量増加, 傍糸球体細胞顆粒指数増加, 腎臓血管壁肥厚, 尿細管上皮再生 (300 mg/kg 以上の ) 無毒性量 :<125 mg/kg 死亡例 :500 mg/kg の 1 例 ( 腎障害 ) 主な所見 :BUN 上昇, 傍糸球体細胞過形成 顆粒増加, 尿細管上皮再生 拡張 ( 125 mg/kg) 無毒性量 :60 mg/kg 死亡例 : 投与に起因する死亡例なし主な所見 : 傍糸球体細胞顆粒増加 ( 30 mg/kg) 無毒性量 :160 mg/kg 死亡例 : なし主な所見 : 傍糸球体細胞の過形成 (160 mg/kg), 顆粒増加 ( 40 mg/kg) 遺伝毒性試験 遺伝子突然変異 in vitro 156~5000 μg/plate 陰性 ( サルモネラ, 大腸 RNH-6270:200~5000 μg/plate 陰性 菌 ) diacetyl:200~5000 μg/plate 陽性 acetoin:200~5000 μg/plate 陰性 染色体異常 in vitro 直接法 24h:43.8~350 μg/ml 直接法 24h 48h, 代謝活性化法 S9(-) で陽性 (CHL 細胞 ) 直接法 48h:30.9~248 μg/ml S9(+):495~1980 μg/ml S9(-):124~990 μg/ml RNH-6270: 0.313~1.25 mm(dmso 溶液 ) CMC-Na 懸濁で直接法 48h 及び代謝活性化法 S9(+) において陽性 ~10 mm(cmc-na 懸濁 ) diacetyl:0.0781~10 mm 直接法 24h, 代謝活性化法 S9(-) S9(+) で陽性 acetoin:1.25~10 mm 陰性 遺伝子突然変異 in vitro 31.25~750 μg/ml S9(-) S9(+) ともに陽性 ( マウスリンフォーマ細胞 ) 50~700 μg/ml RNH-6270:156~2500 μg/ml S9(-) で陽性 diacetyl:3.13~50 μg/ml S9(-) S9(+) ともに陽性 30~90 μg/ml SHE assay ( シリアンハムスター胚細胞 ) in vitro 10~50 μg/ml 陰性 マウス小核 腹腔内 500, 1000, 陰性 2000 ラット不定期 DNA 合成 経口 600, 2000 陰性 Tg マウス遺伝子突然変異 (Muta TM Mouse) 5 日間反復経口 100, 1000, LacZ 遺伝子を検索対象とした小腸粘膜遺伝子突然変異 : 出現頻度の軽 2000 度増加 2000 LacZ 及び cii 遺伝子を検索対象とした小腸粘膜遺伝子突然変異 : 陰性, 変異スペクトルの変化なし 20

26 2.6.6 毒性試験の概要文 試験の種類 がん原性試験 生殖発生毒性試験 抗原性試験 動物種 (1 群例数 ) ラット ( 各 50) p53 KO マウス ( 各 15) Tg Hras2 マウス ( 各 15) ラット Seg.I ( 各 25) ラット Seg.II ( 34~39) ラット Seg.III ( 22~24) ( 26~28) ウサギ Seg.II ( 9~25) マウス ( 各 6) モルモット ( 6) 表 CS-866 の毒性試験成績一覧 ( 続き ) 投与期間経路 24 箇月間混餌 26 週間反復経口 26 週間混餌 経口 : 交配前 9 週間 ~ 交配期間 2 週間 : 交配前 2 週間 ~ 妊娠 7 日経口妊娠 7~17 日 経口妊娠 17 日 ~ 出産 21 日 経口妊娠 6~18 日 経口 : 5 回 / 週 3 週間腹腔 (+Alum): 1 週間隔 3 回 経口 : 5 回 / 週 4 週間皮下 (+FCA): 10 日間隔 3 回 投与量 (mg/kg) 200, 600, 催腫瘍性なし , 300, 催腫瘍性なし 催腫瘍性なし , 0.2 mg/body 0.1, 1 mg/body 試験結果 無毒性量 : 親一般 ;<40 mg/kg, 親生殖 次世代発生 ;>1000 mg/kg 主な所見 : 親動物で体重増加抑制 摂餌量減少 催奇形性なし無毒性量 : 親一般 親生殖 次世代発生 ;40 mg/kg 主な所見 : 親動物 ; 体重増加抑制 摂餌量減少, 一般状態悪化を伴う死亡, 母性行動不良, 出生児 ; 体重減少 生後分化抑制, 生存胎児 ; 体重減少 尾椎化骨核数減少無毒性量 : 親一般 ;8 mg/kg, 親生殖 ;40 mg/kg, 次世代発生 ;0.3 mg/kg 主な所見 : 親動物 ; 体重増加抑制 摂餌量減少, 出生児 ; 母体の一般状態悪化に伴う死亡, 体重増加抑制, 生後分化遅延, 発育抑制, 腎盂拡張 ( 死亡例 ) 催奇形性なし無毒性量 : 親一般 ;0.3 mg/kg, 親生殖 次世代発生 ;>1 mg/kg 主な所見 : 親動物で一般状態悪化及び体重増加抑制 摂餌量減少 ( 死亡例 ) PCA 反応 : 陰性 PCA 反応 : 陰性 (0.1 mg/body FCA 併用免疫群の 1/6 例に 10 倍の PCA 抗体価が認められたが,1 mg/body はすべて陰性 ) SANA 反応 : 陰性 10.2 CS-905 の毒性試験の概要 CS-905 の毒性試験の概要を以下に示し, 各試験成績の一覧を表 に示した 単回投与毒性試験ラット経口投与の LD 50 値は, 雄 1971 mg/kg, 雌 1267 mg/kg であった イヌ経口投与では 800 mg/kg まで死亡例は認められず, 雌雄ともに嘔吐及び血圧低下に伴う活動性の低下が認められた 反復投与毒性試験ラット 3 箇月間 (1,3,10,30 mg/kg) 及び 12 箇月間 (0.3,1,3,10 mg/kg), イヌ 3 箇月間 (1,3,10 mg/kg) 及び 12 箇月間 (1,3,10 mg/kg) の試験を実施した その結果, 無毒性量はラットでは 3 箇月間投与試験で 1 mg/kg,12 箇月間投与試験で 3 mg/kg と判断し, イヌでは 3 箇月間投与試験で 3 mg/kg,12 箇月間投与試験で 1 mg/kg と判断した ラットでは,3 箇月間及び 12 箇月間投与試験ともに心重量の増加及び尿量の増加が認められた その他,3 箇月間投与試験では肝重量の増加が, ラット 12 箇月間投 21

27 2.6.6 毒性試験の概要文 与試験では副腎球状帯細胞の肥大が認められた 副腎の変化は類薬でも報告されており, ジヒドロピリジン系 Ca 拮抗薬に共通した変化と考えられた イヌでは,3 箇月間及び 12 箇月間投与試験ともに心筋の変性 壊死が認められた このような心筋の障害は類薬でも報告されており, 血圧の急激な低下に対する反射性頻脈がその原因と考えられている 遺伝毒性試験 In vitro 試験として細菌を用いた遺伝子突然変異試験及び哺乳類培養細胞を用いた染色体異常試験を,in vivo 試験としてマウス小核試験を実施した その結果, いずれの試験も陰性であった がん原性試験ラット 24 箇月間がん原性試験 (1,3,10 mg/kg), マウス 18 箇月間がん原性試験 (3,10,30 mg/kg) を実施した その結果, 催腫瘍性は認められず,CS-905 に発がん性はないものと判断した 生殖発生毒性試験ラットを用いた妊娠前及び妊娠初期投与試験 (Seg.I:1,3,10,30 mg/kg), 胎児の器官形成期投与試験 (Seg.II:3,10,30 mg/kg), 周産期及び授乳期投与試験 (Seg.III: 1,3,10 mg/kg), 及びウサギを用いた胎児の器官形成期投与試験 (Seg.II:10,30, 100 mg/kg) を実施した その結果, ラットの Seg.III 試験において妊娠期間の延長及び難産が認められたが, その他いずれの試験においても催奇形性を示唆する所見は認められなかった その他の試験抗原性試験として, マウスを用いた PCA 試験 (0.01,0.1 mg/body), モルモットを用いた PCA 及び SANA 試験 (0.1,1 mg/body), 並びにウサギを用いた PCA 及び遅延型皮膚反応試験 (0.2,1 mg/kg) を実施した その結果, ウサギの FCA 併用免疫 ( 皮下及び筋肉内投与 ) において, 弱い遅延型皮膚反応が認められたが, そのほかの試験はいずれも陰性であることから, マウス, モルモット及びウサギともに抗原性はないものと判断した In vitro 光毒性試験及び in vivo 光感作性試験 ( モルモット ) を実施した結果, いずれも陰性であった 光学異性体を用いたマウス単回経口投与試験を実施した結果, 概略の LD 50 値は R 体が 250~500 mg/kg,s 体が 2000 mg/kg より大きいと判断された 類縁物質 R4(TUK-9300) 及び R5(UBS-0653) について,14 日間反復投与毒性試験及び in vitro 遺伝毒性試験 ( 細菌を用いた復帰突然変異試験及び哺乳類培養細胞を用いた染色体異常試験 ) を実施した結果, 毒性所見は認められず, また遺伝毒性も陰性であった 22

28 2.6.6 毒性試験の概要文 試験の種類 単回投与毒性試験 反復投与毒性試験 動物種 (1 群例数 ) ラット ( 各 10) イヌ ( 各 1) ラット ( 各 15, 休薬 : 各 5) ラット ( 各 20) イヌ ( 各 3) イヌ ( 各 3) 表 CS-905 の毒性試験成績一覧 投与期間経路 投与量 (mg/kg) 経口 : 769~3713 : 350~2856 経口 箇月間反復経口 + 28 日間休薬 12 箇月間反復経口 3 箇月間反復経口 12 箇月間反復経口 遺伝毒性試験遺伝子突然変異 ( サルモネラ, 大腸菌 ) in vitro 50~5000 μg/plate 陰性 染色体異常 in vitro 直接法 9.8~24.3 μg/ml 陰性 (CHL 細胞 ) S9(-) 16.3~40.5 μg/ml S9(+) 28.1~70.0 μg/ml マウス小核 腹腔内 347, 417, 500 陰性 がん原性試験 マウス 18 箇月間 3, 10, 30 催腫瘍性なし ( 各 50) 経口 ラット 24 箇月間 1, 3, 10 催腫瘍性なし ( 各 50) 経口 生殖発生毒性試験 ラット Seg.I ( 各 25) ラット Seg.II ( 34~37) ラット Seg.III ( 23~35) ウサギ Seg.II ( 12~14) 経口 : 交配前 9 週間 ~ 交配期間 2 週間 : 交配前 2 週間 ~ 妊娠 7 日 経口妊娠 7~17 日 経口妊娠 17 日 ~ 出産 21 日経口妊娠 6~18 日 試験結果 LD 50 : 1971 mg/kg (1619~2474 mg/kg) 1267 mg/kg (1021~1623 mg/kg) 主な所見 : 水様便 腹部膨満 ( 生存例及び死亡例 ), 肝臓及び肺の鬱血, 胸水の増加, 消化管の拡張 膨満 ( 死亡例 ), 生存例での剖検では異常なし死亡例 : なし主な所見 : 嘔吐 活動性の低下 (200, 800 mg/kg の ), 左心室乳頭筋の線維化,AST LDH CPK 上昇 ( 800 mg/kg), 体重増加抑制 摂餌量減少最小致死量 :>800 mg/kg 無毒性量 :1 mg/kg 死亡例 :30 mg/kg の 各 1 例 ( 循環障害 ) 主な所見 : 尿量 摂水量増加, 尿比重低下 ( 10 mg/kg),rbc HCT Hb 増加, 血清 Na Cl の低下 (30 mg/kg),ast ALT ALP 上昇 (30 mg/kg), 肝重量増加 ( 3 mg/kg), 心重量増加 ( 10 mg/kg), 腎糸球体の腫大 ( 30 mg/kg), 近位尿細管の再生と硝子円柱の出現 ( 30 mg/kg) 無毒性量 :3 mg/kg 死亡例 : 投与に起因する死亡例なし主な所見 : 尿量増加 尿中電解質増加と尿比重低下 血清 Cre 及び BUN 上昇 (10 mg/kg), 心臓重量増加 (10 mg/kg), 軽微な歯肉の過形成 (10 mg/kg), 副腎皮質球状帯細胞の軽微ないし軽度な肥大 ( 10 mg/kg) 無毒性量 :3 mg/kg 死亡例 : なし主な所見 : 心拍数の増加, 心筋の変性 壊死及び線維化 ( いずれも 10 mg/kg) 無毒性量 :1 mg/kg 死亡例 :10 mg/kg の雄 1 例主な所見 : 死亡例 ; 心臓乳頭筋の心筋細胞の壊死及び周囲間質の細胞浸潤, 全葉性の浸出性肺炎, 肝細胞の萎縮及び空胞変性, 生存例 ; 心臓乳頭筋の石灰沈着 (3 mg/kg の 1 例 ) 無毒性量 : 親一般 親生殖 ;>30 mg/kg, 次世代発生 ;10 mg/kg 主な所見 : 着床前及び後の死亡胚数の増加 (30 mg/kg) 催奇形性なし無毒性量 : 親一般 次世代発生 ;10 mg/kg, 親生殖 ;>30 mg/kg 死亡例 :30 mg/kg 群の 1 例が妊娠 18 日に死亡主な所見 : 親動物 ; 心臓の肥大 ( 死亡例 ), 摂餌量減少及び一過性体重減少 (30 mg/kg), 出生児 ; 体重減少 (30 mg/kg) 無毒性量 : 親一般 親生殖 ;3 mg/kg, 次世代発生 ;>10 mg/kg 主な所見 : 親動物で死亡例及び摂餌量減少 体重増加抑制 (10 mg/kg) 催奇形性なし無毒性量 : 親一般 ;30 mg/kg, 親生殖 次世代発生 ;>100 mg/kg 主な所見 : 親動物で摂餌量減少 (100 mg/kg) 23

29 2.6.6 毒性試験の概要文 試験の種類 抗原性試験 光毒性試験 光感作性試験 光学異性体の単回投与毒性試験類縁物質 R4 (TUK-9300) の毒性試験 類縁物質 R5 (UBS-0653) の毒性試験 動物種 (1 群例数 ) モルモット ( 5~6) マウス ( 6) ウサギ ( 3) 培養細胞 (3T3 NRU) モルモット ( 5) マウス ( 各 5) ラット ( 各 10) 遺伝子突然変異 ( サルモネラ, 大腸菌 ) 染色体異常 (CHL 細胞 ) ラット ( 各 10) 遺伝子突然変異 ( サルモネラ, 大腸菌 ) 染色体異常 (CHL 細胞 ) 表 CS-905 の毒性試験成績一覧 ( 続き ) 投与期間経路経口 : 5 回 / 週 4 週間皮下 (+FCA): 10 日間隔 3 回 経口 : 5 回 / 週 3 週間腹腔 (+Alum): 1 週間隔 3 回 経口 : 5 回 / 週 4 週間 皮下 筋肉内 (+FCA): 10 日間隔 3 回 in vitro Adjuvant and Strip 法単回経口 14 日間反復経口 投与量 (mg/kg) mg/body mg/body PCA 反応 : 陰性 SANA 反応 : 陰性 PCA 反応 : 陰性 試験結果 PCA 反応 : 陰性遅延型皮膚反応 :FCA 併用免疫で陽性 紫外線非照射 :0.316~1000 μg/ml 紫外線照射 :0.0316~100 μg/ml 光感作 :0.15% 光惹起 :0.075%, 0.25% R 体 :125, 250, 500 mg/kg S 体 :500, 1000, 2000 mg/kg 陰性 陰性 概略の LD 50 値 : R 体 250~500 mg/kg S 体 >2000 mg/kg 3,10,30,100 mg/kg 無毒性量 :100 mg/kg 死亡例 : なし主な所見 : なし in vitro 156.3~5000 μg/plate 陰性 in vitro 直接法 12.5~200 μg/ml 陰性 S9(-) S9(+) 25~400 μg/ml 14 日間 3,10,30,100 mg/kg 無毒性量 :100 mg/kg 反復経口 死亡例 : なし 主な所見 : なし in vitro 39.1~5000 μg/plate 陰性 in vitro 直接法 12.5~200 μg/ml S9(-) S9(+) 25~400 μg/ml 陰性 11. 引用文献 1) Gould AB, Goodman S, DeWolf R, Onesti G, Swartz C. Interrelation of the renin system and erythropoietin in rats. J Lab Clin Med 1980 ; 96 : ) Gould AB, Goodman SA. Effect of an angiotensin-converting enzyme inhibitor on blood pressure and erythropoiesis in rats. Eur J Pharmacol 1990 ; 181 : ) Naeshiro I, Sato K, Chatani F, Sato S. Possible mechanism for the anemia induced by candesartan cilexetil (TCV-116), an angiotensin II receptor antagonist, in rats. Eur J Pharmacol 1998 ; 354 : ) 橋本虎六, 今井清, 吉村慎介, 大滝恒夫.Angiotensin I 変換酵素阻害剤 captopril の実験的毒性研究 第 3 報ラットに於ける 12 ヶ月慢性毒性について.J Toxicol Sci 1981 ; 6 : ) 高岡雅哉, 木村邦男, 山下和男, 宮腰昶宏, 真鍋淳, 松沼尚史, 他.Temocapril Hydrochloride (CS-622) の 1 年間連続経口投与によるラットに対する慢性毒性試験. 薬理と治療 1991 ; 24

30 2.6.6 毒性試験の概要文 19 : ) 奈良間功, 中島裕夫, 藤島寛, 栗尾和佐子, 前田博, 尾崎清和, 他.Trandolapril(RU44570) のラットを用いた 12 か月の経口反復投与毒性試験および 3 か月間の回復試験.J Toxicol Sci 1993 ; 18 : ) Greaves P, IX. Urinary Tract. In: Histopathology of preclinical toxicity studies: Interpretation and relevance in drug safety evaluation. Amsterdam : Elsevier ; ) Owen RA, Molon-Noblot S, Hubert MF, Kindt MV, Keenan KP, Eydelloth RS. The morphology of juxtaglomerular cell hyperplasia and hypertrophy in normotensive rats and monkeys given an angiotensin II receptor antagonist. Toxicol pathol 1994 ; 22 : ) 清水憲次, 坂口晶紀, 稲毛美智雄, 市川敦子, 正木文夫, 小尾一, 他.Trandolapril(RU44570) のイヌにおける 13 週間反復経口投与毒性試験および 4 週間回復試験.J Toxicol Sci 1993 ; 18 : ) 大滝恒夫, 今井清, 吉村慎介, 橋本虎六.Angiotensin I 変換酵素阻害剤 captopril の実験的毒性研究 第 4 報ビーグル犬における 3 ヵ月亜急性毒性について. J Toxicol Sci 1981 ; 6 : ) Jackson DG, Jones HB. Histpathological and ultrastructual changes in the juxtaglomerular apparatus of the rat following administration of ZENECA ZD6888 (2-ethyl-5,6,7,8-tetrahydro-4-[(2'-(1H -tetrazol-5-yl)biphenyl-4-yl)-methoxy]quinoline), an angiotensin II antagonist. Toxicol Pathol 1995 ; 23 : ) 松本浩良, 鈴木順, 佐村惠治. アンジオテンシンⅡ 受容体拮抗薬ロサルタンカリウムの毒性研究 ( 第 3 報 ). 基礎と臨床 1994 ; 28 : ) Dogterom P, Zbinden G, Reznik GK. Cardiotoxicity of vasodilators and positive inotropic/vasodilating drugs in dogs: an overview. Crit Rev Toxicol 1992 ; 22 :

31 CS-866AZ 毒性試験の概要表 第一三共株式会社

32 2.6.7 毒性試験の概要表 表の目次 表 毒性試験 : 一覧表... 1 表 トキシコキネティクス : トキシコキネティクス試験の一覧表... 3 表 トキシコキネティクス : トキシコキネティクス試験成績の一覧... 4 表 毒性試験 : 被験物質 ( バッチ毎 ) 一覧... 6 表 単回投与毒性試験 : ラット単回経口投与毒性試験... 7 表 単回投与毒性試験 : イヌ単回経口投与毒性試験... 9 表 反復投与毒性試験 : 重要な試験以外の試験 表 反復投与毒性試験 : 重要な試験 : ラット 28 日間反復経口投与毒性試験 表 反復投与毒性試験 : 重要な試験 : ラット 6 箇月間反復投与試験 表 反復投与毒性試験 : 重要な試験 : イヌ 28 日間反復投与試験 表 反復投与毒性試験 : 重要な試験 : イヌ 9 箇月間反復投与試験 表 In vitro 遺伝毒性試験 : 細菌を用いる遺伝子突然変異試験 表 In vitro 遺伝毒性試験 : 哺乳類培養細胞を用いる染色体異常試験 表 In vivo 遺伝毒性試験 : げっ歯類を用いる小核試験 表 がん原性試験 表 生殖発生毒性試験 : 重要な試験以外の試験 表 生殖発生毒性試験 : 受胎能及び着床までの初期胚発生に関する試験 表 生殖発生毒性試験 : 胚 胎児発生に関する試験 : ラット胚 胎児発生への影響に関する試験 表 生殖発生毒性試験 : 胚 胎児発生に関する試験 : マウス胚 胎児発生への影響に関する試験 表 生殖発生毒性試験 : 出生前及び出生後の発生並びに母体の機能に関する試験 40 表 新生児を用いた試験 表 局所刺激性試験 表 イヌ心血管系への影響に関する試験 表 トキシコキネティクスへの影響に関する試験 i

33 2.6.7 毒性試験の概要表 略号一覧 項目略号名称 AUC 0-24h Area under the plasma concentration-time curve up to 24h BUN Blood urea nitrogen 血液尿素窒素 CHL 細胞 C max CMC-Na Chinese hamster lung cell Maximum plasma concentration Carboxymethylcellulose sodium 投与後 24 時間までの血漿中濃度 - 時間曲線下面積 チャイニーズハムスター雌肺組織由来線維芽細胞 最高血漿中濃度 Cre Creatinine クレアチニン カルボキシメチルセルロースナトリウム DMSO Dimethyl sulfoxide ジメチルスルフォキシド ECG Electrocardiogram 心電図 Hb Hemoglobin ヘモグロビン HCT Hematocrit ヘマトクリット RBC Red blood cell 赤血球 S9 Supernatant at 9000g 9000g 上清 TG Triglyceride トリグリセリド TK Toxicokinetics トキシコキネティクス T max Time to reach maximum plasma concentration TP Total protein 総たん白 最高血漿中濃度到達時間 ii

34 2.6.7 毒性試験の概要表 化合物一覧 略号 ( 一般名 ) 化学式構造式 CS-866( オルメサルタンメドキソミル ) 原薬 C 3 H 7 H 3 C CH O 3 N OH O O N CO 2 CH 3 N N N NH RNH-6270 CS-866 の活性代謝物 C 3 H 7 H 3 C CH 3 N OH N COOH N N N NH CS-905( アゼルニジピン ) 原薬 O (H 3 C) 2 HC OC NO 2 O CO N CH H 3 C N H NH 2 iii

35 ー ~ ('n 〆司.11.

36

37 ~ 適 L 合 P

38 2.6.7 毒性試験の概要表 RNH-6270 の AUC0-24h (ng h/ml) 表 トキシコキネティクス : トキシコキネティクス試験成績の一覧 被験物質 :CS-866AZ CS-866AZ 配合比 CS-866:CS-905=5:4 のラットイヌ妊娠マウス投与量 (mg/kg) 雄雌雄雌雌 c) 61.9 c) c) 172 c) a) 765 a) 1326 c) 513 c) a) 3373 a) a) a) e) b) 8625 b) 9245 d) d) e) b) b) e) b) b) d) d) CS-905 の AUC0-24h (ng h/ml) CS-866AZ 配合比 CS-866:CS-905=5:4 のラットイヌ妊娠マウス投与量 (mg/kg) 雄雌雄雌雌 c) 54.8 c) c) 239 c) a) 619 a) 883 c) 1223 c) a) 4145 a) a) a) 7751 e) b) b) d) d) e) b) b) e) b) b) d) d) a)- ラットにおける 6 箇月間反復投与毒性試験 ( 投与 26 週 ) b)- ラットにおける単回投与毒性試験 ( 投与初日 ) c)- イヌにおける 9 箇月間反復投与毒性試験 ( 投与 94 日 ) d)- イヌにおける単回投与毒性試験 ( 投与初日 ) e)- マウスにおける胚 胎児発生に関する試験 ( 妊娠 15 日 ) 4

39 2.6.7 毒性試験の概要表 RNH-6270 の Cmax (ng/ml) 表 トキシコキネティクス : トキシコキネティクス試験成績の一覧 ( 続き ) 被験物質 :CS-866AZ CS-866AZ 配合比 CS-866:CS-905=5:4 のラットイヌ妊娠マウス投与量 (mg/kg) 雄雌雄雌雌 c) 17.5 c) c) 24.3 c) a) 235 a) 166 c) 77.4 c) a) 938 a) a) 2536 a) 3934 e) b) 1367 b) 951 d) 1397 d) e) b) 1352 b) e) b) 2535 b) 1702 d) 2263 d) CS-905 の Cmax (ng/ml) CS-866AZ 配合比 CS-866:CS-905=5:4 のラットイヌ妊娠マウス投与量 (mg/kg) 雄雌雄雌雌 c) 5.63 c) c) 15.9 c) a) 74.7 a) 79.1 c) 93.1 c) a) 398 a) a) 892 a) 576 e) b) 785 b) 1627 d) 1532 d) e) b) 1124 b) e) b) 2251 b) 1494 d) 1725 d) a) ラットにおける 6 箇月間反復投与毒性試験 ( 投与 26 週 ) b) ラットにおける単回投与毒性試験 ( 投与初日 ) c) イヌにおける 9 箇月間反復投与毒性試験 ( 投与 94 日 ) d) イヌにおける単回投与毒性試験 ( 投与初日 ) e) マウスにおける胚 胎児発生に関する試験 ( 妊娠 15 日 ) 5

40 2.6.7 毒性試験の概要表 表 毒性試験 : 被験物質 ( バッチ毎 ) 一覧 被験物質 :CS-866 CS-905 CS-866 のロット番号 CS-866 の含量 (%) 資料番号試験の種類 CS-905 のロット番号 CS-905 の含量 (%) 036C C ラット単回投与毒性試験 イヌ単回投与毒性試験 ラット 28 日間反復投与毒性試験 イヌ 28 日間反復投与毒性試験 細菌を用いる遺伝子突然変異試験 哺乳類培養細胞を用いる染色体異常試験 マウスを用いる小核試験 ( 参考 ) ウサギ胚 胎児発生に関する試験 ( 予備試験 ) ラット 6 箇月間反復投与毒性試験 イヌ 9 箇月間反復投与毒性試験 ラット胚 胎児発生に関する試験 マウス胚 胎児発生に関する試験 イヌ心血管系への影響に関する試験

41

42 2.6.7 毒性試験の概要表 表 単回投与毒性試験 : ラット単回経口投与毒性試験 ( 続き ) Dose (mg/kg) Number of Animals M:5 F:5 M:5 F:5 M:5 F:5 Noteworthy Findings Dead or Sacrificed Moribund Clinical Observations Decrease in activity Prone position Diarrhea Abnormal substances (white) in feces Soft feces Decrease in feces Smudge of perioral area Smudge of perianal area Body Weight (g) Day 15 a) Gross Pathology : No noteworthy findings a): At the end of observation period 8

43

44 2.6.7 毒性試験の概要表 表 単回投与毒性試験 : イヌ単回経口投与毒性試験 ( 続き ) Dose (mg/kg) Number of Animals M:1 F:1 M:1 F:1 Noteworthy Findings Dead or Sacrificed Moribund Body Weight Food Consumption Clinical Signs Vomitus Total number of frequency Hematology (Examined on Day 8) Blood Chemistry (Examined on Day 8, 14) Gross Pathology Histopathology (Heart) : No findings 10

45 2.6.7 毒性試験の概要表 表 反復投与毒性試験 : 重要な試験以外の試験 該当資料なし 11

46 ~oay ~nax

47 2.6.7 毒性試験の概要表 表 反復投与毒性試験 : 重要な試験 : ラット 28 日間反復経口投与毒性試験 ( 続き ) Dose (mg/kg/day) 0 (Control) a) Number of Animals M:10 F:10 M:10 F:10 M:10 F:10 M:10 F:10 Noteworthy Findings Died, Sacrificed, Moribund Clinical Observations Body Weight (g/δ%) b) g g 233.2/ / */ / **/ /-2 Food Consumption (g/δ%) b) 15.6 g 11.6 g 16.6/ / / / / /0 Urinalysis (Fresh, Day 23) Protein (=< +/-) 1 c) c) 5 5 c) Ophthalmology d) (Day 23) Hematology RBC (M/μL) ** Hb (g/dl) ** HCT (%) ** Blood Chemistry BUN (mg/dl) ## 32.30## Ca (mg/dl) ** 10.01## 10.26** 9.82## P (mg/dl) ** ** 3.799## Na (meq/l) ** ** ** K (meq/l) ** -: No noteworthy findings. Statistics (vs Control): * P<0.05, ** P<0.01 (Dunnett s test), ## P<0.01 (Dunnett s rank test). a): 0.5% CMC-Na solution was treated for control group. b): At the end of dosing period. Δ%: For controls, group means are shown. For treated groups, percent differences from controls are shown. Statistical significance is based on actual data (not on the percent differences). c): N=9 d): N=5 (Continued) 8 c) 13

48 2.6.7 毒性試験の概要表 表 反復投与毒性試験 : 重要な試験 : ラット 28 日間反復経口投与毒性試験 ( 続き ) Dose (mg/kg/day) 0 (Control) a) Number of Animals M:10 F:10 M:10 F:10 M:10 F:10 M:10 F:10 Organ Weights Heart Absolute Weight (g/δ%) b) g g 0.687/ / */ **/ **/ **/-12 Relative Weight (g%/δ%) b) g% g% 0.296/ / / / **/ **/-10 Kidney R Absolute Weight (g/δ%) b) g g 0.828/ / /+3 Relative Weight (g%/δ%) b) g% g% 0.355*/ / **/+8 Kidney L Absolute Weight (g/δ%) b) g g 0.837/ / /+5 Relative Weight (g%/δ%) b) g% g% 0.359*/ / **/ / / */ **/ **/ **/ ##/ / #/ **/ **/ **/+11 Gross Pathology Micro Pathology : No noteworthy findings. Statistics (vs Control): * P<0.05, ** P<0.01 (Dunnett s test), # P<0.05, ## P<0.01 (Dunnett s rank test). a): 0.5% CMC-Na solution was treated for control group. b): Δ%: For controls, group means are shown. For treated groups, percent differences from controls are shown. Statistical significance is based on actual data (not on the percent differences). 14

49 ~

50 2.6.7 毒性試験の概要表 表 反復投与毒性試験 : 重要な試験 : ラット 6 箇月間反復投与試験 ( 続き ) Test Article CS-866AZ CS-866 CS-905 Dose (mg/kg/day) Number of Animals M:4 M:4 F:4 Toxicokinetics F:4 M:4 F:4 M:4 F:4 M:4 F:4 CS-905: C max (ng/ml) Day NE NE Week NE NE Week NE NE Week NE NE t max (h) NE NE Day NE NE Week NE NE Week NE NE Week NE NE AUC 0-24h (ng h/ml) NE NE Day NE NE Week NE NE Week NE NE Week NE NE NE: Not examined (Continued) 16

51 2.6.7 毒性試験の概要表 表 反復投与毒性試験 : 重要な試験 : ラット 6 箇月間反復投与試験 ( 続き ) Test Article Control CS-866AZ CS-866 CS-905 Dose (mg/kg/day) 0 a) Number of Animals M:20 F:20 M:15 F:15 M:15 F:15 M:20 F:20 M:15 F:15 M:15 F:15 Noteworthy Findings Dead or Sacrificed Moribund Clinical Observations Body Weight ( %) b), c) 311 g 171 g Food Consumption ( %) b), c) 17 g 12 g ** +6 +8* +18** +8* Ophthalmology d) Water Intake (ml/day) b), e) ** 24 29* 21 36** 30* b), e) Urinalysis Urine Volume (ml/20 h) ** ** 7.9** Osmolality (mosm/kg) ** 1560* ** 1024** -: No noteworthy findings Statistics (vs Control) The CS-866AZ treated group: Homogeneous data were assessed using Dunnett s test. Heterogeneous data were assessed using a Dunnett-type mean rank test. The CS-866 or CS-905 treated group: Homogeneous data were assessed using Student s t-test. Heterogeneous data were assessed using Aspin-Welch s t-test. (*: P<0.05, **: P<0.01) a): 0.5% CMC-Na solution was given to the control group. b): At the end of the dosing period (Month 6). c): %: For controls, group means are shown. For treated groups, percent differences from controls are shown. Statistical significance is based on actual data (not on the percent differences). d): All animals for the control and CS-866AZ 67.5 mg/kg groups, but N=10 for other groups. e): Mean (N=10) (Continued) 17

52 2.6.7 毒性試験の概要表 表 反復投与毒性試験 : 重要な試験 : ラット 6 箇月間反復投与試験 ( 続き ) Test Article Control CS-866AZ CS-866 CS-905 Dose (mg/kg/day) 0 a) Number of Animals M:15 F:15 M:15 F:15 M:15 F:15 M:15 F:15 M:15 F:15 M:15 F:15 Noteworthy Findings Hematology b) RBC ( 10 4 /μl) ** 833* 858** 793** 888** 843* c) Hb (g/dl) ** 15.6* 15.5** 14.8** 16.0** c) Ht (%) * 47* 46** 44** 48** 47 Blood Chemistry b) c) TG (mg/dl) ** ** 13 BUN (mg/dl) ** 25** 17** 19 19** 26* Na (mmol/l) * 143** 143* 144* 143* ** K (mmol/l) ** 4.9** 4.8* 4.8* 4.7** Ca (mg/dl) * 9.5* 9.5** 9.5** ** 9.6* P (mg/dl) * ** 4.5 TP (g/dl) ** * Albumin (g/dl) * 2.7* Statistics (vs Control) The CS-866AZ treated group: Homogeneous data were assessed using Dunnett s test. Heterogeneous data were assessed using a Dunnett-type mean rank test. The CS-866 or CS-905 treated group: Homogeneous data were assessed using Student s t-test. Heterogeneous data were assessed using Aspin-Welch s t-test. (*: P<0.05, **: P<0.01) a): 0.5% CMC-Na solution was given to the control group. b): At the end of the dosing period (Month 6). c): N=14 (Continued) 18