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3 HMW-KGN: high melecular weight kininogen LMW-KGN: low molecular weight kininogen NR: not reported. Value* were determined by ELISA using MARKIT-A Bradykinin according to the method of Uchida et al. Value** by a bioassay maethod of Uchida et al.

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7 キニ ノ ゲ ン 欠 損 症 の イ ム ノ ブ ロ ッ テ ィ ン グ ン ドを 示 した. NRで 示 す 正 常 人 血 漿 で は, 120 kd, 105kd, 60kdの3本 の バ ン ドが 見 ら れ た が, B1 4で 示 す 高 分 子 低 分 子 両 キ ニ ノゲ ン 欠損 371 症 例 で は バ ン ドは検 出 で き な か っ た. H1で 示す 高 分 子 キ ニ ノゲ ン単 独 欠 損 症 例 で は,低 分 子 キ ニ ノゲ ンに 相 当 す る60kdの バ ン ドのみ が 見 られ, 高 分 子 キ ニ ノ ゲ ン に 相 当 す る120kdと105kdの バ ン ドは 検 出 さ れ なか っ た.こ の 家 系 の ヘ テ ロ 症 例(H1)で は,正 常 人 血 漿 と 同様 の パ ター ン を示 し た が,高 分 子 キ ニ ノ ゲ ン に 相 当 す る120kd と105kdの バ ン ドはfaintで あ り,量 的 な減 少 が 示 唆 さ れ た. 2) モ ノ クロ-ナ 図1に ル 抗 体HKGL7に よ る検 討 示 す 通 り,モ ノ ク ロー ナ ル抗 体HKGL 7は 高 分 子 キ ニ ノゲ ンに 特 異 的 なL鎖 の 陰性 荷 電 体 へ の 結 合 部 位 で あ る フ ラ グ メ ン ト1 2を 認 識 す る.こ の 抗 体 を用 い てimmunoblottingを 行 っ た 結 果 を図8に 示 す. HKGで 示 す精製 ヒ ト 高 分 子 キ ニ ノゲ ン は120kdと105kdの2本 ン ドを示 し た が, LKGで 図6 ポ リ ク ロ ー ナ ル 抗 体 を 使 用 した 免 疫 拡 散 法 に ニ ノ ゲ ン で は バ ン ドは 検 出 され な か っ た. NRで よ る解 析 示 す 正 常 人 血 漿 で は120kdの NR:正 常 人 血 漿, B1: Tachibana Kishino, trait, H1:塚 Fujiwara B3:宗 trait, B2: 像 ら の 症 例, れ た が, B1 4で B4: バ ン ドの み が 見 ら 示 す 高 分 子 低 分 子 両 キ ニ ノ ゲ ン 欠 損 症 例 で は,バ ン ドは検 出 さ れ な か っ た. 井 らの 症例 H1で 示 す 高 分 子 キニ ノゲ ン単 独 欠 損 症 例 で も, バ ン ドは検 出 さ れ な か っ た が,そ で は120kdにfaintな 図7 のバ 示 す 精 製 ヒ ト低 分 子 キ モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体HKG H12を のヘ テ ロ 症 例 バ ン ドを認 め,量 的 な減 使 用 した immunoblotting M:サ イ ズ マ ー カー, HKG:精 子 キ ニ ノ ゲ ン, LKG:精 ゲ ン, NR:正 B2: B4: 常 人 血 漿, B1: Tachibana Kishino, 製 ヒ ト高 分 製 ヒ ト低 分 子 キ ニ ノ trait, H1:塚 ら の ヘ テ ロ症 例 Fujiwara B3:宗 trait, 像 ら の 症 例, 井 ら の 症 例, H1:塚 井 図8 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体HKGL7を immunoblotting. 略 号 は 図7に 同 じ. 使用 した

8 372 石 丸 少 が 示 唆 さ れ た. 3) 彦 欠 損 し て い る もの も報 告 さ れ て い る15).そ して 文 モ ノ ク ロー ナ ル抗 体HKG 図1に 文 L17に よ る 検 討 示 す 通 り,モ ノクロー ナ ル抗 体HKG は 高 分 子 キ ニ ノゲ ン に 特 異 的 なL鎖 L17 のプ レカ リ 献 的 に み る 限 りで は 分 子 異 常 の 報 告 は な く,い ず れ も量 的 異 常 の よ うで あ る.し か し,量 的 異 常 と確 定 す る に は 現 実 に は 種 々 の 問題 点 が あ る, ク レ イ ン 第XI因 子 と複 合 体 を形 成 す る 部 位 を 例 え ば,質 認 識 す る.こ の 抗 体 を用 い てimmunoblottingを ン パ ク質 が 不 安 定 に な っ た場 合,そ 行 っ た 結 果 を 図9に ノ ク ロー ナ ル 抗 体 質 の 不 安 定 性.ア 示 す 精 製 ヒ ト高 分 よ り発 見 さ れ る ま で は,分 解 速 度 が 速 くな っ た HKG L7と 示 す.モ 同 様 に, HKGで 子 キ ニ ノ ゲ ン は120kdと105kdの2本 を 示 し, NRで のバ ン ド 示 す 正 常 人 血 漿 で は120kdの に バ ン ドが 見 られ, H1で み 示 す 高 分 子 キ ニ ノゲ ン 的 異 常 で あ る ア ミノ 酸 置 換 に よ り タ ミノ酸 置 換 が 技 術 的 な 進 歩 に た め の 量 的 な 減 少 の み が 検 出 さ れ る た め,量 的 異 常 と し て,今 ま で に 検 出 さ れ て い る変 異 タ 単 独 欠 損 症 の ヘ テ ロ症 例 で は120kdにfaintな バ ン ドを認 め た. よ う な 変 異 タ ンパ ク質 の 研 究 が,そ ミノ酸 置 換 で,こ れ ぞれ のア た30).高分 子 キ ニ ノゲ ン 欠 損 症 に お い て,従 来 か 在 まで に世 界 らの 検 討 方 法 と して は,高 分 子 キ ニ ノ ゲ ンの 凝 で15家 系 の 報 告 が あ り,う ち5家 系 は 本 邦 で の 固 活 性 に 由 来 す るFitzgerald 報 告 例 で あ る.本 邦 で の 報 告 例5家 遊 離 ブ ラ ジ キ ニ ン 量 の測 定 な ど,主 系 中,低 分 factorの ジ キニ ン領 域 及 び凝 固 活 性 を持 つL鎖 は4家 もの で, H鎖 分 子 キ ニ ノゲ ン 単 独 の 欠 損症 は 1家 系 で あ る.海 外 で はSan Franciscoや 測定や と して ブ ラ 子 キ ニ ノゲ ン の 欠 損 を伴 う両 キ ニ ノゲ ン 欠 損 症 系 で,高 の ミ ノ酸 残 基 の 役 割 の 解 明 に 大 き く貢 献 し て き 察 高 分 子 キ ニ ノゲ ン 欠 損 症 は,現 的 異 常 と し て取 り扱 わ れ る こ とに な る.実 際,質 ンパ ク質 の ほ とん ど は1ア 考 の タンパ ク に 関する につ い て は そ の機 能 が 近 年 に な る ま で不 明 で あ っ た た め,そ の異常 の有無 につ い Detroitの 症 例 の よ うに低 分 子 キ ニ ノゲ ンが 正 常 て は検 討 が行 われ て い な い.ま 量 存 在 す る もの か ら, Fitzgerald traitの よ う に て も, Ouchterlony法 約 半 量 存 在 す る もの, Williams traitの よ う に た抗原量 につ い やLaurell法 に よ り,ポ リ クロ ー ナ ル 抗 体 を 用 い て検 討 し た もの が 多 く, 技 術 的 な検 出 限 界 や 抗 体 の 認 識 部 位 な どに 問 題 点 が あ る 実 際,本 邦 で報告 されて いる高分子 キ ニ ノ ゲ ン 欠 損 症5家 系 を対 象 と し た市 販 の ポ リ クロ ー ナ ル 抗 体 を用 い たOuchterlony法 る検 討 で は,正 常 血 漿 とcomplete によ identityを 示 す 沈 降 線 が 全 家 系 に 認 め られ た.そ こで著者 は,分 子 異 常 の 有 無 に つ い て検 討 を加 え るた め, 大 久 保 博 士 よ り供 与 さ れ た キ ニ ノゲ ン の 各 ドメ イ ンに対 す るモ ノ クロー ナ ル抗 体 を使 用 して immunoblottingを 遊 離 能,凝 行 っ た.従 来 の プ ラ ジ キニ ン 固 法 で,高 分 子 低 分 子 両 キ ニ ノ ゲ ン 欠損 症 で は キニ ノ ゲ ン のL鎖 とは確 認 さ れ て い た,ま に異常 のあるこ た 高 分 子 キ ニ ノ ゲ ン単 独 欠損 症 で は トリプ シ ン 処 理 に よ り低 分 子 キ ニ ノ ゲ ン か ら正 常 量 の ブ ラ ジ キ ニ ン が 遊 離 さ れ る こ とに よ り,正 常 な低 分 子 キ ニ ノゲ ン の 存 在 と 高 分 子 キ ニ ノrン のL鎖 図9 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体HKG immunoblatting. 略 号 は 図7に 同 じ. L17を 使 用 し た た.そ の 異 常 は 確 認 され て い して 両 者 と も,両 キ ニ ノ ゲ ン に 共 通 なH 鎖 の 存 在 の 有 無 の 確 認 が 残 され て い た.今 回の

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10 1) Lottspeich F, Kellermann J, Henschen A, Foertsch B and Muller-Esterl W: The amino acid sequence of the light chain of human high-molecular-mass kininogen. Eur J Biochem (1985) 152, ) Kellermann J, Lottspeich F, Henschen A and Muller-Ester W: Completion of the primary structure of human high-molecular-mass kininogen. Eur J Biochem (1986) 154, ) Takagaki Y, Kitamura N and Nakanishi S: Cloning and sequence analysis of cdna for human high molecular weight and low molecular weight prekininogens. J Biol Chem (1985) 260, ) Kitamura N, Kitagawa H, Fukushima D, Takagaki Y, Miyata T and Nakanishi S: Structural organization of the human kininogen gene and a model for its evolution. J Biol Chem (1985) 260, ) Higashiyama S, Ohkubo I, Ishiguro H, Sasaki M, Matsuda T and Nakamura R: Heavy chain of human high molecular weight and low molecular weight kininogens binds calcium ion. Biochemistry (1987) 26, ) Ohkubo I, Kurachi K, Takasawa T, Shiokawa H and Sasaki M: Isolation of a human cdna for ƒ 2-thiol proteinase inhibitor and its identity with low molecular weight kininogen. Biochemistry (1984) 23, ) Sasaki M, Minakata K, Yamamoto H, Niwa M, Kato T, Ito N: A new serum component which specificaly inhibits thiol proteinases. Biochem Biophys Res Commun (1977) 76, ) Tait JF and Fujikawa K: Identification of the binding site for plasma prekallikrein in human high molecular weight kininogen. J Biol Chem (1986) 261, ) Tait JF and Fujikawa K: Primary structure requirements for the binding of human high molecular weight kininogen to plasma prekallikrein and factor XI. J Biol Chem (1987) 262, ) Saito H, Ratnoff OD, Waldmann R and Abraham JP: Fitzgerald trait. J Clin Invest (1975) 55, ) Colman RW, Bagdasarian A, Talamo RC, Scott CF, Seavey M, Guimaraes JA, Pierce JV and Kaplan AP: Williams trait. J Clin Invest (1975) 56, ) Wuepper KD, Miller DR and Lacombe MJ: Flaujeac trait. J Clin Invest (1975) 56, ) Lutcher CL: Reid trait. Clin Res (1976) 24, 47A. 14) Donaldson VH, Kleniewski J, Saito H and Sayed JK: Prekallikrein deficiency in a kindred with kininogen deficiency and Fitzgerald trait clotting defect. J Clin Invest (1977) 60, ) Proud D, Pierce JV and Pisano JJ: Radioimmunoassay of human high molecular weight kininogen in normal and deficient plasmas. J Lab Clin Med (1980) 95, ) Lefrere JJ, Horellou MH, Gozin D, Conard J, Muller JY, Clark M, Soulier JP and Samama M: A new case of high-molecular-weight kininogen inherited deficiency. Am J Hematol (1986) 22, ) Vicente V, Alberca I, Gonzalez R, Alegre A, Redondo C and Moro J: New congenital deficiency of high molecular weight kininogen and prekallikrein (Fitzgerald trait). Haematologia (1986) 19, ) Exner T, Barber S and Naujalis J: Fitzgerald factor deficiency in an Australian Aborigine. Med J Aust (1987) 146, ) Hayashi H, Koya H, Kuroda M, Kitazima K, Kimura I, Katori M and Ohishi S: The first cases of Fitzgerald factor deficiency in the orient: three cases in one family. Acta Haematol (1980) 63, 107

11 ) Nakamura K, Iijima K, Fukuda C, Kadowaki H, Ikoma H, Ohishi S, Uchida Y and Katori M Tachibana trait: human high molecular weight kininogen deficiency with diminished levels of prekallikrein and low molecular weight kininogen. Acta Haematol Jpn (1985) 48, ) Uchida Y and Katori M: Differential assay method for high molecular weight and low molecular weight kininogens. Thromb Res (1979) 15, ) Towbin H and Gordon J: Immunoblotting and dot immunobinding-current status and outlook. J Immunol Methods (1984) 72, ) Ishiguro H, Higashiyama S, Ohkubo I and Sasaki M: Mapping of functional domains of human high molecular weight and low molecular weight kininogens using murine monoclonal antibodies. Biochemistry (1987) 26, ) Laemmli UK: Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature (1970) 227, ) Towbin H, Staehelin T and Gordon J: Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc Natl Acad Sci USA (1979) 76, ) Lammle B, Berrettini M and Griffin JH: Immunoblotting studies of coagulation factor XII, plasma prekallikrein, and high molecular weight kininogen. Semin Thromb Hemostasis (1987) 13, ) Berrettini M, Lammle B, White T, Heeb MJ, Schwarz HP, Zuraw B, Curd J and Griffin JH Detection of in vitro and in vivo cleavage of high molecular weight kininogen in human plasma by immunoblotting with monoclonal antibodies. Blood (1986) 68, ) Mori K and Nagasawa S: Studies on human high molecular weight (HMW) kininogen. II. structural change of HMW kininogen by the action of human plasma kallikrein. J Biochem (1981) 89, ) Pierce JV and Guimaraes JA: Further characterization of highly purified human plasma kininogens; in Chemistry and Biology of the Kallikrein-Kinin System in Health and Disease, Pisano and Austen eds. Fogarty International Center Proc No. 27, Washington, US Govt Printing Office (1977) pp ) Thompson RE, Mandle R Jr and Kaplan AP: Characterization of human high molecular weight kininogen: procoagulant activity associated with the light chain of kinin-free high molecular weight kininogen. J Exp Med (1978) 147,

12 Molecular genetic survey of 5 kindreds with kininogen deficiency in Japan 1. Immunoblot analysis of kininogen deficiency Fumihiko ISHIMARU Second Department of Internal Medicine, Okayama University Medical School, Okayama 700, Japan (Director: Prof. I. Kimura) Analysis of kininogen molecule status in four Japanese families affected with total kininogen deficiency and one Japanese family with isolated high molecular weight kininogen deficiency was performed using an immuoblotting method with monoclonal antibodies to high molecular weight kininogen (HKG H12, L7, L17). The purified high molecular weight kininogen showed two bands with apparent mol wts of 120,000 and 105,000, respectively, and the purified low molecular weight kininogen showed a single band with an apparent mot wt of 60,000. In normal human plasma, these three bands were also detected. No variant molecule of the kininogens was present in either cases of total kininogen deficiency or isolated high molecular weight kininogen deficiency.

22 610407487 ロ ペ ミ ッ ク 小 児 用 0. 0 5 % 2319001C1072 23 610412059 ゲ シ ン L 錠 5 0 m g 2478001G1046 24 610412105 ソ レ ル モ ン S R カ プ セ ル 3 7. 5 m g 1147002N1

22 610407487 ロ ペ ミ ッ ク 小 児 用 0. 0 5 % 2319001C1072 23 610412059 ゲ シ ン L 錠 5 0 m g 2478001G1046 24 610412105 ソ レ ル モ ン S R カ プ セ ル 3 7. 5 m g 1147002N1 お 知 ら せ ( 薬 ) 0 0 5 平 成 2 0 年 8 月 2 9 日 医 薬 品 マ ス タ ー の 改 定 に つ い て 今 般 下 記 の と お り 医 薬 品 マ ス タ ー を 改 定 し ま し た の で お 知 ら せ し ま す 記 次 の 医 薬 品 に つ い て は 平 成 2 0 年 3 月 5 日 付 け 厚 生 労 働 省 告 示 第 7 2 号 に 基 づ

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