アセチル化脱アセチル化酵素関連試薬 tone etylation Assay Kit アセチル化ヒストンを認識する抗体を用いて細胞内のヒストンのアセチル化レベルを Cell ELISA 法により測定するキットですヒストンのアセチル化はヒストン脱アセチル化酵素 (HDAC) 阻害剤により亢進さ

Size: px

Start display at page:

Download "アセチル化脱アセチル化酵素関連試薬 tone etylation Assay Kit アセチル化ヒストンを認識する抗体を用いて細胞内のヒストンのアセチル化レベルを Cell ELISA 法により測定するキットですヒストンのアセチル化はヒストン脱アセチル化酵素 (HDAC) 阻害剤により亢進さ"

さみかがんじ
5 years ago
Views:

1 MBL RUO TOPICS vol.4 Feb

2 アセチル化脱アセチル化酵素関連試薬 tone etylation Assay Kit アセチル化ヒストンを認識する抗体を用いて細胞内のヒストンのアセチル化レベルを Cell ELISA 法により測定するキットですヒストンのアセチル化はヒストン脱アセチル化酵素 (HDAC) 阻害剤により亢進されますがこのキットを用いることにより HDAC 阻害剤の培養細胞に対する作用を直接検討できます株式会社サイクレックスはアセチル化部位特異的抗体を用いたアセチル化関連酵素活性および A HDAC 阻害剤 TSA 処理によるヒストンアセチル化レベルの変化 MCF7 HeLa BALB/c 3T3 アセチル化レベルの測定原理について米国で特許を取得しています米国特許番号 6,884, Reaction time (h) ー N 価格 C-1140 C-M1029 Cellular tone etylation Assay Kit Anti-etylated tone/p assays2 100 g 70,000 50,000 HDAC Deacetylase Fluorometric Assay Kit クラス I ヒストン脱アセチル化酵素群 HDACs (HDAC1 2 3 および 8) は酵母 RPD3 と相同性を持ち普遍的に発現していますこれらの HDACs は癌抑制遺伝子産物 Rb などと結合し転写抑制を担っています細胞内ではヒストンは低アセチル化状態にあり HDACs の作用は広範かつ強力であると考えられます HDAC 阻害物質は抗癌剤として期待されておりその探索や臨床開発が活発に行われています HDAC8 は HDAC1 や HDAC3 とは 43 % しか相同性がなく既存の HDAC 阻害剤の HDAC8 に対する選択性は HDAC1 や HDAC3 とは異なっていることが報告されています HDAC8 もヒト腫瘍細胞株の増殖に重要でありこのサブタイプに選択的な阻害剤は新しい抗癌剤として有望であると考えられています株式会社サイクレックスは世界に先駆けペプチダーゼのペプチド分解活性がリジン残基のアセチル化によって変化することを利用してアセチル化 / 脱アセチル化酵素活性を測定できることを見出し日本ヨーロッパカナダおよび米国で特許を取得しています日本国特許 4,267,043 米国特許番号 7,033,778 7,256,013 ヨーロッパ特許番号 1,243,658 カナダ特許番号 2,392,711 1 HDACが基質に結合 2 アセチル基 ( 脱アセチル化 ) リジルンドペプチダーゼ () によるリジン残基後方の結合断 AMC の強度測定 HDAC HDAC HDAC HDAC AMC MCA MCA MCA MCA : 4-methyl-coumaryl-7-amide AMC : 7-amino-4-methylcoumarin ー N 価格 C-1150 HDACs Deacetylase Fluorometric Assay Kit 58,000 C-1158 HDAC8 Deacetylase Fluorometric Assay Kit 70,000 C-P1011 Anti-HDAC1 100 g 40,000 C-P1012 Anti-HDAC2 100 g 40,000 2

3 SIRT1 は長寿関連遺伝子としても注目されています SIRT Deacetylase Fluorometric Assay Kit ヒストン脱アセチル化酵素はクラスⅠ II Ⅲの3つのファミリーに分類されていますクラスⅢに属する Sir2/SIRT ファミリーはクラスⅠやⅡとは異なりトリコスタチン A に非感受性であり酵素の活性化には NAD + (Nicotinamide adenine dinucleotide) を必要とします SIRT ファミリーの活性を制御する薬剤は種々の疾患治療薬として期待されています SIRT1 は核に局在し p53 NF- κb forkhead 転写調節因子およびヒストンを脱アセチル化しますまた酸化還元状態に対応して筋肉分化の抑制に関与することが報告されています SIRT3 はその N 末端の 25 アミノ酸残基を介してミトコンドリアに局在します不活性型のタンパク質として合成された後ミトコンドリアマトリクスでペプチダーゼ処理され 28 kda の活性化型酵素に変換されることが報告されています DnpによりNmaのが収 SIRTとNADによる脱アセチル化リジルンドペプチダーゼ () Nmaの強度測定によるリジン残基後方の結合断 Dnp Nma 収 Dnp Nma 収 Dnp SIRT NAD SIRT NAD Nma 収 Dnp SIRT NAD Nma CycLe SIRT1 Deacetylase Fluorometric Assay Kit では他社製を用いて報告されてきた Reseratrol によるアーファクトである脱アセチル化酵素活性の作用は検出されませんこれは CycLe 社自のアセチル化基質ペプチドのインとその採用によるものであり本製を用いることにより SIRT1 本の脱アセチル化酵素活性をに測定できることをしています本製は SIRT1 の活性化物質や阻害物質のスクリーングにしていると考えられます ( ただしての化合物や薬剤によるアーファクトが生ないことを保証するものではありません ) 考 (1) Kaeberlein, M. et al. J. Biol. Chem., 280: , 2005 (2) Borra, M. T. et al. J. Biol. Chem., 280: , 2005 (3) Pacholec, M. et al. J. Biol. Chem., 285: , 2010 (4) Ledford H. News "Ageing: Much ado about ageing." Nature 464: , 2010 Deacetylase activity (% untreated) SIRT1Resveratrol Resveratrol conc. (M) C-1151 SIRT1/Sir2 Deacetylase Fluorometric Assay Kit 64,000 C-1152 SIRT2 Deacetylase Fluorometric Assay Kit 64,000 C-1153 SIRT3 Deacetylase Fluorometric Assay Kit 64,000 C-1156 SIRT6 Deacetylase Fluorometric Assay Kit 64,000 C-E1151 NAD + -Dependent Deacetylase SIRT1 100 g 50,000 C-E1152 NAD + -Dependent Deacetylase SIRT2 100 g 50,000 C-E1153 NAD + -Dependent Deacetylase SIRT3 100 g 50,000 C-E1156 NAD + -Dependent Deacetylase SIRT6 100 g 50,000 C-P1016 Anti-SIRT1 100 g 50,000 3

4 メチル化 DNA 濃縮 Kit Methyl Hunter -based Methylated DNA Enrichment Kit タンパク質を利用した新しいタイプのメチル化 DNA 濃縮 Kit です高収率! 抗体や他の MBD タンパク質を使用した方法よりも高い濃縮度を実現しました locus に偏りなく効率良く二本鎖メチル化 DNA が濃縮ができますとビーズメチル化 DNAの解析 Real-time RCR Microarray Net eneration Seuence フラグメント化した genomic DNA と精製 (-tag) を合しますが CpG DNA メチル化部位に特異的に結合しますメチル化部位がいどたくさんのが結合し濃縮効率が高まります -tag に特異的に結合するビーズを使用しに結合したメチル化 DNA のみを出します回収したメチル化 DNA は々な解析にお使いいただけます 800 メチル化 DNA の濃縮マウス非メチル化領域に対する相対コー回収溶液内に含まれる非メチル化ノム領域の相対コー (3 ローカスの) を 1 とした時のメチル化ローカス (locus 13) のコーをしていますを使った実では Locus 13 いれももの高い濃縮率が認されました locus 1 12 CpG/436 bp, 90 methylated locus 2 20 CpG/367 bp, 90 methylated, multicopy locus (3,000 copies) locus 3 12 CpG/308 bp, 90 methylated 0 locus1 locus2 locus3 locus1 locus2 locus3 ther MBD family based kit locus1 locus2 Antibody based locus3 ータご提供学生体御学研究先生ー N 価格 -based / Methylated DNA Enrichment Kit 25 tests 48, とはセットでのとなりますまたとは保存度が異なりますのでごくださいまたは Kit 成 Code: Code: キットに含まれない必要試薬 protein Control Genomic DNA ( マウスノム DNA) Positie Control Primers ( メチル化 DNA 用 ) Negatie Control Primers ( 非メチル化 DNA 用 ) 200 L 20 L 20 L 20 L 10 MBD buffer 50 Glycerol 10 ash Buffer Elute Buffer 800 L 800 L 15 ml 6 ml Dynabeads -Tag Isolation and Pulldown Magnetic Rack (MBL) east trna 5M NaCl Phenol/Chloroform Ethanol 70 Ethanol DNase-free water Reagents for PCR assay 4

エピジェネティクス解析受託サービス 2 本鎖メチル化 DNA プルダウンアッセイ受託サービスプルダウンアッセイは 2 本鎖 CpG メチル化 DNA を分離精製するためのサービスです CpG メチル化 DNA に対し特異的かつ結合能力の高い精製タンパク質 (MBL code No.

5 エピジェネティクス解析受託サービス 2 本鎖メチル化 DNA プルダウンアッセイ受託サービスプルダウンアッセイは 2 本鎖 CpG メチル化 DNA を分離精製するためのサービスです CpG メチル化 DNA に対し特異的かつ結合能力の高い精製タンパク質 (MBL code No , ) を使用し効率的にメチル化 DNA を集積する事ができます自動機 (S-8G) や専用試薬を導入し高効率でばらつきの少ない解析用サンプルの提供が可能となりましたイメージ D1-i-t ビーズ Solution S- Tip Magnet Magnetic beads ell 回収率 16% 12% 8% 4% 0% SBR Green で測定 18% メチル化領域 0.01% 非メチル化領域 PCR 領域メチル化領域 H19ICR 非メチル化領域 HISTIH3B サンプル Jurkat 細胞出ノム注意事項 MBD-pull down 用の試薬費用は含まれております細胞からご依頼の場合染色体 DNA を精製致します沈降作業のみをご依頼の場合 TE 溶液に断片化 DNA を溶解させてお送りください Jurkat 細胞をコントロールとして使用して同時に作業をおこないメチル化領域 (H19ICR) 非メチル化領域 (HISTIH3B) で差が見られることを成功基準としています Pull down 後の DNA の回収量については保証していません MeDIP 1 本鎖メチル化 DNA 免疫沈降受託サービス MeDIP (Methylated DNA Immunoprecipitation) は 5- メチルシトシン (5mC) 抗体を用いて 1 本鎖メチル化 DNA を分離精製するサービスです特異性と結合能力が高い Diagenode 社のモノクローナル抗体を使用し高い濃縮率を実現しています自動機 (S-8G) や専用試薬を導入し高効率でばらつきの少ない解析用サンプルの提供が可能となりましたイメージビーズ Solution S- Tip Magnet Magnetic beads ell 回収率 8% 6% 4% 2% 0% SBR Green で測定 8.1% メチル化領域 0.06% 非メチル化領域 PCR 領域メチル化領域 H19ICR 非メチル化領域 HISTIH3B サンプル Jurkat 細胞出ノム注意事項 MeDIP 用の試薬費用は含まれております細胞からご依頼の場合染色体 DNA を精製致します沈降作業のみをご依頼の場合 TE 溶液に断片化 DNA を溶解させてお送りください Jurkat 細胞をコントロールとして使用して同時に作業をおこないメチル化領域 (H19ICR) 非メチル化領域 (HISTIH3B) で差が見られることを成功基準としています免疫沈降後の DNA の回収量については保証していません価格につきましては 6 ページをご参照ください 5

6 ChIP クロマチン免疫沈降受託サービス ChIP ( クロマチン免疫沈降 ) サービスは目的タンパク質が結合している DNA 断片を分離精製するためのサービスですお手持ちの抗体を使用する事もできます自動機 (S-8G) によるクロマチン免疫沈降と DNA 精製を採用しばらつきの少ない解析用サンプルの提供が可能となりましたイメージ A S- A ンクにす 20% ビーズ Solution Tip Magnet Magnetic beads ell 回収率 16% 12% 8% 4% 0% SBR Green で測定 17% H3K4me3 4% Mouse IgG 使用抗体 MBL 社 anti-trimethyl tone H3 (4)(H3K4me3) (code No.MABI0304) Normal mouse IgG PCR 領域セルシグナリング社 Positie primer (code No.7014) サンプル Jurkat 細胞出ノム注意事項 ChIP 用の試薬費用は含まれておりますが使用する抗体は含まれておりませんご提供ください本サービスで使用可能な ChIP 用おすすめ抗体を紹介しております詳しくは下記 ChIP 用おすすめ抗体をご覧ください沈降作業のみをご依頼の場合専用 buffer をお送りいたしますのでご連絡下さい Ba/F3 細胞をコントロールとして使用して同時に作業をおこない H3K27me3 抗体とアイソタイプコントロール抗体を用いて p16 プロモーター領域で差が見られることを成功基準としています免疫沈降後の DNA の回収量については保証していません受託サービス価格サンプル化まは DNA 化 MeDIP ChIP すて同となります S- に沈降 ,000 40,000 50,000 60,000 70,000 92, , , , , , , , , , ,000 IP すす頼と実の ChIP 用の抗ヒストンモノクローナル抗体モノクローナル抗体研究の抗体を MBL から発本受にも使用可能ですー N ー N 1 2 MABI0301 MABI0302 MABI0303 MABI0304 MABI0305 MABI0306 MABI0307 MABI0308 MABI0310 MABI0301S MABI0302S MABI0303S MABI0304S MABI0305S MABI0306S MABI0307S MABI0308S MABI0310S 抗ヒストン H3 抗モノメチルヒストン H3 (4) 抗ジメチルヒストン H3 (4) 抗トリメチルヒストン H3 (4) 抗アセチルヒストン H3 (9) 抗モノメチルヒストン H3 (9) 抗ジメチルヒストン H3 (9) 抗トリメチルヒストン H3 (9) 抗アセチルヒストン H3 (9/27) ー N ー N 1 2 MABI0309 MABI0309S MABI0321 MABI0321S MABI0323 MABI0323S MABI0331 MABI0331S MABI0332 MABI0332S MABI0333 MABI0333S MABI0312 MABI0312S MABI0251 MABI0251S 1 2 抗アセチルヒストン H3 (27) 抗モノメチルヒストン H3 (27) 抗トリメチルヒストン H3 (27) 抗モノメチルヒストン H3 (36) 抗ジメチルヒストン H3 (36) 抗トリメチルヒストン H3 (36) 抗リン酸化ヒストン H3 (Ser10) 抗リン酸化ヒストン H2B (Ser14) 100 L (1mg/mL) 20 L (1mg/mL) 58,000 (100 L) 18,000 (20 L) 用 Immunoprecipitation, Immunostaining, Immunoblot 6

7 RNA-RNP ネットワーク RiboCluster Profiler TM 遺伝子発現の転写後調節の新規解析ツール RNA 結合タンパク質 (RBP) は mrna のスプライシング核外輸送細胞質内局在安定性及び翻訳効率の調節などの転写後遺伝子発現制御において重要な働きをしていますまた特定の疾患や機能に関連した mrna や mirna などは RBP を介してクラスター (RiboCluster) を形成していると考えられています RiboCluster Profiler TM は特定の疾患や生物学的に関連した遺伝子群を網羅的に解析するツールですどの分野で研究している方でもスムーズに RNA 研究分野に入っていただけるように設計されています Brain TM RiboChi Lung Heart Breast Adipose RIP-Chip は Ribonomics, Inc. の特許 (SP 6,635,422 SP 7,504,210 ) です MBL は Ribonomics, Inc. からールドイドな実を得てキットを開発していますに RP をつい Liver Muscle Colon Testicular and Ovarian Bone Reference Dale L. Beach and Jack D. Keene, Methods Mol. Biol., (2008) in vitro transcription によりある RNA を Br で識しますその RNA に結合する RNP 合体を抗 Brd 抗体結合ビーズを使って精製します RNA と結合しているタンパク質を動して分離し質量分析によって同定します RIP-Chi RP の RP にてを受てい RNA サセット RNAiRNA をしい RIP-Assay Kit RIP-Assay Kit for microrna RIP-Certified Antibody 1 RNA 結合タンパク質 (RBP-) に対する特異的抗体を選択します RiboChip を使ってある細胞や疾患で発現している RBP を調細胞あるいは疾患特異的な RBP を見つけた後 Cycle に入ります RNA 結合タンパク質 Br 識 RNA Ribonomic Discovery Cycle 2 RNA 結合タンパク質 (RBP-) に対する抗体を用いて結合している特定の RNA サブセット (mrna/mirna) を免疫沈降しますある RNA RiboTra Sequencing 遺伝子の RNA のに関連すンク子をしい RiboTrap Kit Microarray RT-PCR 特定の RBP(RBP-) に結合している RNA サブセットを免疫沈降物から離しマイクロアレイや RT-PCR またはシークンシングなどの方法で同定しますー N 価格 RN1001 RN1005 RN1011/RN1012 RIP-Assay Kit RIP-Assay Kit for microrna RiboTrap Kit 10 assays 10 assays 10 assays 40,000 60,000 78,000 RN1011 と RN1012 はセットとなっておりますまた RN1011 と RN1012 は保存度が異なりますのでごください RN RN しくは RIP-Certified Antibody RBP antibodyも種取りえております詳細はこちらから tttitii-t RIP 検索 7

Information Copyright 2012 Medical & Biological Laboratories,

論文題目　　腸管分化に関わるmiRNAの探索とその発現制御解析

論文題目　　腸管分化に関わるmiRNAの探索とその発現制御解析論文題目腸管分化に関わる microrna の探索とその発現制御解析氏名日野公洋 1. 序論 microrna(mirna) とは細胞内在性の 21 塩基程度の機能性 RNA のことであり部分的相補的な塩基認識を介して標的 RNA の翻訳抑制や不安定化を引き起こすことが知られている mirna は細胞分化や増殖ガン化やアポトーシスなどに関与していることが報告されておりこれら以外にも様々な細胞諸現象に関与していると考えられている