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しほこうみのなか
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1 サンプル定量 Sample Quantitation タンパク質定量法の選択 14 プロテインスタンダードの選択 15 キュベット 23

2 タンパク質定量法の選択 See Also マイクロプレートリーダー : P.294 キュベット : P.23 タンパク質定量法の選択数々のタンパク質定量法が報告されていますがそれぞれ長所と短所を持っています方法の選択はタンパク質の種類バッファー含有物タンパク質濃度により行いまた測定波長により決定することもありますバイオラッドではタンパク質定量試薬として以下の4 種を販売していますこれらの測定方法は測定するタンパク質に応じて選択を行いますそれぞれのタンパク質定量方法には特長があります詳しくは下記プロテインアッセイ選択ガイドをご参照ください Quick Startプロテインアッセイ Quick Startプロテインアッセイは Bradford 法のプロテインアッセイを改良した比色定量法ですプロテインアッセイに比べて操作手順がより簡略化されており共存許容試薬の種類が増え共存許容濃度も高くなります DCプロテインアッセイ DCプロテインアッセイは Lowry 法に基づく比色定量法ですタンパク質と酒石酸銅およびFolin 試薬との呈色反応を応用しています界面活性剤やアルカリ試薬の存在下で使用可能ですが還元剤により測定に影響が出ますプロテインアッセイプロテインアッセイはBradford 法に基づく比色定量法ですタンパク質がクマシーブリリアントブルー G-250と結合することで最大吸収波長が465nmから595nmに移動することを応用していますサンプル中に糖類 dithiothreitol(dtt) β-メルカプトエタノールなどの還元剤を含むサンプルに使用可能ですしかし界面活性剤やアルカリ試薬の存在下では使用できません RC DCプロテインアッセイ RC DCプロテインアッセイは Lowry 法に基づいたDCプロテインアッセイにさらに改良を加えた比色定量法です界面活性剤だけでなく還元剤やアルカリ試薬存在下でも使用可能ですそのため一般に定量の難しいLaemmliサンプルバッファーや IEF 用に調製されたサンプルでも測定が可能になりますプロテインアッセイセレクションガイド Quick Start プロテインアッセイプロテインアッセイ DC プロテインアッセイ RC DC プロテインアッセイ ** 応用法 Bradford 法 Lowry 法測定波長 595nm 推奨 750nm( nm 可 ) 測定可能範囲 mg/ml BGG mg/ml BGG ( スタンダード mg/ml BGG&BSA mg/ml BGG&BSA mg/ml BSA mg/ml BSA アッセイ法 *) 測定可能範囲 μg/ml BGG μg/ml BGG ( マイクロ μg/ml BGG&BSA μg/ml BSA μg/ml BSA アッセイ法 *) 遠心操作無 15,000 g, 3-5min 使用可能試薬 *** 還元剤界面活性剤アルカリ試薬還元剤界面活性剤アルカリ試薬保存期間 1 年 (4 ) 6ヶ月 (4 ) 3ヶ月 (4 ) インキュベーション 5min 5min 15min 15min 時間 **** * BGG: ウシ γ グロブリン BSA: ウシ血清アルブミン ** RC DC プロテインアッセイはマイクロプレートを使用した測定には適していません *** 使用可能試薬には共存許容濃度があります詳しくは共存許容試薬濃度のリスト (P ) をご参照ください **** インキュベーション時間 : 染色液を加えてから測定可能な状態になるまでの時間共存許容試薬濃度化学物質 -タンパク質間化学物質- 色素間の相互作用により反応の干渉が起こります各タンパク質定量法の共存許容試薬濃度はP.16 P.18 P.20 P.21の表をご参照ください表中に含まれない物質がサンプル中のバッファー成分内にある場合はサンプルと同じバッファーでスタンダードを希釈して検量線を作成し直線性が得られるかどうか確認してください直線性が得られれば使用することができます 14 サンプル定量

プロテインスタンダードの選択プロテインスタンダードの選択タンパク質定量法のスタンダードとして使用される最適なタンパク質は測定しようとするタンパク質の精製標品ですこのような標準タンパク質がない場合はスタンダードとして別のタンパク質をする必要があります相対量だけを求める場合はどのスタンダードを選択してもかまいませんが絶対量を求める場合は

3 プロテインスタンダードの選択プロテインスタンダードの選択タンパク質定量法のスタンダードとして使用される最適なタンパク質は測定しようとするタンパク質の精製標品ですこのような標準タンパク質がない場合はスタンダードとして別のタンパク質をする必要があります相対量だけを求める場合はどのスタンダードを選択してもかまいませんが絶対量を求める場合は測定しようとするタンパク質と同じような発色を示すものを選択する必要がありますそこでバイオラッドではスタンダードに使用するタンパク質としてウシ γグロブリン (BGG,IgG) ウシ血清アルブミン (BSA) の2 種を販売していますプロテインスタンダード Ⅰ( ウシγ グロブリン ) Ⅱ( ウシ血清アルブミン ) は凍結乾燥品を20mlの精製水またはサンプルのバッファーで溶解して使用されますタンパク質の濃度はロット毎に異なり 20mlで溶解した時の濃度がボトルに貼付されているラベルに記載されています未開封凍結乾燥状態の場合 4 で1 年間保存できます溶解した後は小分けして保存し凍結融解を繰り返さないようにご注意ください Quick Startプロテインアッセイ用のスタンダードは一定の濃度の溶液となります 2mg/mlと7 段階の濃度 (0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml) に希釈された溶液の2 種類計 4 種類のスタンダードがあります 4 保存で1 年以内に使用してくださいプロテインアッセイ Quick Startプロテインアッセイ (Bradford 法 ) で使用するスタンダードについて Bradford 法ではウシ血清アルブミンはウシ γグロブリンなどの他のタンパク質に比べて発色量がかなり大きくなりますしたがって広範囲のタンパク質の測定にはウシ γグロブリンを使用しますアルブミン濃度の高いサンプルにはウシ血清アルブミンの使用をお勧めいたします DCプロテインアッセイ RC DCプロテインアッセイ (Lowry 法 ) で使用するスタンダードについて Lowry 法ではウシ血清アルブミンとウシγグロブリンの発色量がほぼ同じになります他の定量法での測定も行うのであればその時のスタンダードと同じものを使用することをお勧めいたしますまた文献ではかなりの割合でアルブミンが使用されていますのでスタンダードの選択に困ったときはウシ血清アルブミンをお勧めいたします注意 1: スタンダードは測定するサンプルと同じバッファーで希釈して使用してくださいサンプル溶液中の化学物質がタンパク質および色素と相互作用を起こし測定値に影響を与える可能性があります注意 2: プロテインスタンダードにはタンパク質を溶解させるためにバッファー塩が含まれていますバイアルから計り取っての使用は行わないでください注意 3: それぞれタンパク質定量法によりアミノ酸構造に基づき試薬とタンパク質との反応が異なりますしたがってタンパク質濃度を測定する比色定量実験には1 種類のスタンダードを選択することをお勧めいたします Quick Start プロテインアッセイ (Bradford 法 ) Quick Startプロテインアッセイはプロテインアッセイを改良しより簡単な手順でタンパク質の定量を行えるキットです 1 の染色液と7 種類の濃度 (0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ ml) のスタンダードからなるReady-to-useの試薬により希釈をせずに検量線を引くことができますまた 2mg/mlのスタンダードから希釈系列を作成することも可能です P.16の共存許容試薬濃度はスタンダードアッセイ法での値ですマイクロアッセイ法で許容される試薬濃度は表中の濃度の1/25です 1 種類の試薬を加えるだけの簡単操作ですスタンダードや染色液を希釈する必要はありません試薬は4 で1 年間保存可能です呈色は1 時間安定です ( 注 1) メルカプトエタノールやDTTなどの還元剤とコンパチブルです ( 注 2) スタンダードとしてBSAとIgGの2 種類をご用意しましたスタンダードセットは7 種類の濃度 (0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml) を用意しており希釈系列を作成する必要がありません 2mg/mlのスタンダードから希釈系列を作成することも可能です ( 注 1) 色安定性は誤差 5% の範囲内で判定しています ( 注 2) 種々の共存する試薬に対する許容濃度はアッセイ法により異なります測定方法 QuickStartプロテインアッセイはサンプルのタンパク質濃度に応じてスタンダードアッセイ法とマイクロアッセイ法を行うことが可能ですまたサンプルの容量に応じて試験管とマイクロプレートを選択することが可能です下記フォーマットの測定範囲サンプル量に従いアッセイ法を選択してくださいサンプル定量 15

4 プロテインスタンダードの選択 Quick Startプロテインアッセイフォーマット試験管マイクロプレートスタンダードアッセイ法測定範囲 mg/ml mg/ml サンプル量 100μl 5μl 染色液量 5ml 250μl 測定回数 200 回 / キット 4,000well/ キットマイクロアッセイ法測定範囲 μg/ml μg/ml サンプル量 1ml 150μl 染色液量 1ml 150μl 測定回数 1,000 回 / キット 6,666well/ キット左 :Quick Start プロテインアッセイスタンダードアッセイ法による検量線例 ( 試験管 ) 右 :Quick Start プロテインアッセイマイクロアッセイ法による検量線例 ( 試験管 ) Quick Start プロテインアッセイの共存許容試薬濃度 ( スタンダードアッセイ法 ) Acetone, 10% Acetonitrile, 10% Ammonium sulfate, 1M Ampholytes, ph 3 10, 0.5% ASB-14, 0.025% Ascorbic acid, 50mM Bis-Tris, ph 6.5, 0.2M Calcium chloride, 40mM CHAPS, 10% CHAPSO, 10% Deoxycholic acid, 0.2% Dithioerythritol(DTE), 10mM Dithiothreitol(DTT), 10mM DMSO, 5% Eagle s MEM Earle s salt solution EDTA, 0.2M EGTA, 0.2M Ethanol, 10% Glucose, 20% Glycerol, 5% Glycine, 0.1M Guanidine-HCl, 2M Hank s salt solution HCl, 0.1M HEPES, 0.1M Imidazole, 0.2M Magnesium chloride, 1M β-mercaptoethanol, 1M MES, 0.1M Methanol, 10% Modified Dulbecco s PBS MOPS, 0.1M NAD, 2mM Nonidet P-40(NP-40), 0.25% Octyl-β-glucoside, 0.5% Octyl β-thioglucopyranoside, 1% PBS Phenol red, 0.5mg/ml PIPES, 0.2M PMSF, 2mM Potassium chloride, 2M Potassium phosphate, 0.5M SB 3-10, 0.1% SDS, 0.025% Sodium acetate, ph 4.8, 0.2M Sodium azide, 0.5% Sodium bicarbonate, 0.2M Sodium carbonate, 0.1M Sodium chloride, 2.5M Sodium citrate, ph 4.8 or 6.4, 0.2M Sodium hydroxide, 0.1M Sodium phosphate, 0.5M Sucrose, 10% TBS, 0.5 (12.5mM Tris, 75mM NaCl, ph 7.6) TCEP, 20mM Thiourea, 1M Tributylphosphine(TBP), 5mM Tricine, ph 8, 50mM Triethanolamine, ph 7.8, 50mM Tris, 1M Tris-glycine(25mM Tris, 192mM glycine) Tris-glycine-SDS, 0.25 (6.25mM Tris, 48mM glycine, 0.025% SDS) Triton X-100, 0.05% Tween 20, 0.01% Urea, 4M 共存許容濃度は染色液を混和する前のサンプル中の濃度です Ordering Information カタログ番号品名価格保存 Quick Startプロテインアッセイキット JA Quick Startプロテインアッセイキット1 25,500 4 構成内容 :1 染色液 1L スタンダード( ウシ血清アルブミン )2ml(2mg/ml)5 本 JA Quick Startプロテインアッセイキット2 28,500 4 構成内容 :1 染色液 1L スタンダード( ウシ血清アルブミン )2ml(0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml) 各 2 本 JA Quick Startプロテインアッセイキット3 25,500 4 構成内容 :1 染色液 1L スタンダード( ウシγグロブリン )2ml(2mg/ml)5 本 JA Quick Startプロテインアッセイキット4 28,500 4 構成内容 :1 染色液 1L スタンダード( ウシγグロブリン )2ml(0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml) 各 2 本染色液 JA Quick Startプロテインアッセイ染色液 1L 15,500 4 関連商品 Quick Start BSAスタンダード 2ml(2mg/ml)5 本 14, Quick Start BSAスタンダードセット 2ml(0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml) 各 2 本 17, Quick Start IgGスタンダード 2ml(2mg/ml)5 本 14, Quick Start IgGスタンダードセット 2ml(0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml) 各 2 本 17, B05 ディスポーザブルキュベットスタンダード 1-3.5ml(100 個 5) 14, B05 ディスポーザブルキュベットセミマイクロ 500-1,500μl(100 個 5) 14, サンプル定量

プロテインスタンダードの選択プロテインアッセイ (Bradford 法 ) プロテインアッセイはタンパク質が色素クマシーブリリアントブルー G250と結合すると最大吸収波長が465nmから595nm に移動することを応用していますこの色素は主として塩基 ( 特にアルギニン ) や芳香族アミノ酸残基に吸着しますこの方法は分子量 3,000-5,000Da

5 プロテインスタンダードの選択プロテインアッセイ (Bradford 法 ) プロテインアッセイはタンパク質が色素クマシーブリリアントブルー G250と結合すると最大吸収波長が465nmから595nm に移動することを応用していますこの色素は主として塩基 ( 特にアルギニン ) や芳香族アミノ酸残基に吸着しますこの方法は分子量 3,000-5,000Da 以上のタンパク質およびポリペプチドの測定に適しています数々の界面活性剤や塩基性バッファーがこの測定法を妨害することが報告されています干渉はこれらの化学薬品のタンパク質間相互作用色素間相互作用に起因します P.18の共存許容試薬濃度はスタンダードアッセイ法での値ですマイクロアッセイ法で許容される試薬濃度は表中の数値の1/40ですこれはスタンダードアッセイ法とマイクロアッセイ法では試料と色素の比率が異なるためです 1 種類の試薬を加えるだけの簡単操作です試薬を加えてから5 分待つだけです 1キットで最高 11,250 回の測定が可能です呈色は1 時間安定です ( 注 1) スタンダードとして BSAとIgGの2 種類をご用意しましたメルカプトエタノールやDTTなどの還元剤とコンパチブルです ( 注 2) 3,000Da 以下のペプチドアミノ酸やDNAとはほとんど反応しません SDSなどのイオン性界面活性剤やTritonX-100などの非イオン性界面活性剤などにより大きな影響を受けます ( 注 1) 呈色安定性は誤差 5% の範囲内で判定しています ( 注 2) 種々の共存する試薬に対する許容濃度はアッセイ法により異なります測定方法プロテインアッセイはサンプルのタンパク質濃度に応じてスタンダードアッセイ法とマイクロアッセイ法を行うことが可能ですまたサンプルの容量に応じて試験管とマイクロプレートを選択することが可能です下記フォーマットの測定範囲サンプル量に従いアッセイ法を選択してくださいプロテインアッセイフォーマット試験管マイクロプレートスタンダードアッセイ法測定範囲 mg/ml mg/ml サンプル量 100μl 10μl 染色液量 * 5.0ml 200μl 測定回数 450 回 / キット 11,250well/ キットマイクロアッセイ法測定範囲 μg/ml 8 80μg/ml サンプル量 800μl 160μl 染色液量 200μl 40μl 測定回数 2,250 回 / キット 11,250well/ キット *5 倍希釈した染色液 ( マイクロアッセイは原液を使用 ) 左 : プロテインアッセイスタンダードアッセイ法による検量線例 ( 試験管 ) 右 : プロテインアッセイマイクロアッセイ法による検量線例 ( 試験管 ) サンプル定量 17

6 プロテインスタンダードの選択プロテインアッセイの共存許容試薬濃度 ( スタンダードアッセイ法 ) Acetate, 0.6 M Acetone Acid ph Adenosine, 1mM Amino acids Ammonium sulfate, 1 M Ampholytes, ph 3 10, 0.5% ATP, 1mM Barbital BES, 2.5 M Boric acid Cacodylate-Tris, 0.1 M CDTA, 50mM Citrate, 50mM Deoxycholate, 0.1% Dithiothreitol(DTT), 1 M DNA, 1mg/ml Eagle s MEM Earle s salt solution EDTA, 0.1 M EGTA, 50mM Ethanol Formic acid, 1 M Fructose Glucose Glutathione Glycerol, 99% Glycine, 0.1 M Guanidine-HCl Hank s salt solution HEPES, 0.1 M Magnesium chloride, 1 M Malic acid, 0.2 M β-mercaptoethanol, 1 M MES, 0.7 M Methanol MOPS, 0.2 M NAD, 1mM NaSCN, 3 M Peptones Phenol, 5% Phosphate, 1 M PIPES, 0.5 M Polyadenylic acid, 1mM Polypeptides(MW <3,000Da) Potassium chloride, 1 M Pyrophosphate, 0.2 M rrna, 0.25mg/ml trna, 0.4mg/ml Total RNA, 0.3mg/ml SDS, 0.1% Sodium chloride, 5 M Sodium phosphate Streptomycin sulfate, 20% Thymidine, 1mM Tricine Tris, 2 M Triton X-100, 0.1% Tyrosine, 1mM Urea, 6 M Vitamins 共存許容濃度は染色液を混和する前のサンプル中の濃度です Ordering Information カタログ番号品名価格保存プロテインアッセイキット JA プロテインアッセイキットI 28,500 4 構成内容 : 染色液 450ml スタンダードI( ウシγグロブリン ) JA プロテインアッセイキットII 28,500 4 構成内容 : 染色液 450ml スタンダードII( ウシ血清アルブミン ) 染色液 JA プロテインアッセイ染色液 450ml 24,500 4 関連商品プロテインスタンダードI ウシγグロブリン (20mlに溶解約 1.4mg/ml) 10, プロテインスタンダードII ウシ血清アルブミン (20mlに溶解約 1.4mg/ml) 10, B05 ディスポーザブルキュベットスタンダード 1-3.5ml(100 個 5) 14, B05 ディスポーザブルキュベットセミマイクロ 500-1,500μl(100 個 5) 14, サンプル定量

7 プロテインスタンダードの選択 DC プロテインアッセイ (Lowry 法 ) DCプロテインアッセイは Lowry 法 [Lowry, O. et.al., J.Biol.Chem., 193, 265(1951)] に基づきタンパク質と酒石酸銅およびFolin 試薬との呈色反応を利用し測定までの時間が短くなるよう改良を加えてあります界面活性剤を含むサンプルでも問題無く測定することが可能です操作も 3 種類の試薬を加えるだけです 3 種類の試薬を加えるだけの簡単操作です遠心等の操作はありません試薬を加えてから15 分インキュベートするだけです 1キットで最高 25,000 回の測定が可能です ( 注 1) 呈色は1 時間安定です ( 注 2) スタンダードとして BSAとIgGの2 種類をご用意しました SDSなどのイオン性界面活性剤やTritonX-100などの非イオン性界面活性剤とコンパチブルです ( 注 3) アミノ酸やトリスなどのアミノ基を持つものにより影響されますメルカプトエタノールやDTTなどの還元剤などにより大きな影響を受けます ( 注 1) 試験管によるスタンダードアッセイ法では 500 回同マイクロアッセイ法では 2,500 回測定できます ( 注 2) 呈色安定性は誤差 5% の範囲内で判定しています ( 注 3) 種々の共存する試薬に対する許容濃度はアッセイ法により異なります測定方法 DCプロテインアッセイはサンプルのタンパク質濃度に応じてスタンダードアッセイ法とマイクロアッセイ法を行うことが可能ですまたサンプルの容量に応じて試験管とマイクロプレートを選択することが可能です下記フォーマットの測定範囲サンプル量に従いアッセイ法を選択してください DC プロテインアッセイフォーマット試験管スタンダードアッセイ法マイクロプレート測定範囲 mg/ml mg/ml サンプル量 100μl 5μl 試薬量 A' 試薬 500μl B 試薬 4.0ml A' 試薬 25μl B 試薬 200μl 測定回数 500 回 / キット 10,000well/ キットマイクロアッセイ法測定範囲 5 250μg/ml 5 250μg/ml サンプル量 200μl 20μl 試薬量 A' 試薬 100μl B 試薬 800μl A' 試薬 10μl B 試薬 80μl 測定回数 2,500 回 / キット 25,000well/ キット A' 試薬 =A 試薬 +S 試薬 (1ml A 試薬 /20μl S 試薬 ) DC プロテインアッセイスタンダードアッセイ法による検量線例 ( 試験管 ) サンプル定量 19

8 プロテインスタンダードの選択 Table1. DC プロテインアッセイの共存許容試薬濃度 ( スタンダードアッセイ法 ) 10% SDS 0.5M NaOH 1% CHAPS 0.5M HCl 1% CHAPSO 0.5M(NH 4 ) 2 SO 4 1% Triton X M EDTA 1% Triton X M CaCl 2 2% NP M guanidine HCl 1% Thesit 4M urea 1% Tween % sodium azide 1% octyl glucoside 1% deoxycholate 1% Brij % digitonin 0.2% C 12 E 8 * 1mM DTT 0.1M Tris, ph M NaCl 2- メルカプトエタノールは使用できません *octaethyleneglycol dodecyl ether Table2. DCプロテインアッセイの共存許容試薬濃度 ( マイクロアッセイ法 ) 10% SDS 4M urea 1% CHAPS 0.025M Tris, ph % digitonin 0.05% sodium azide 1% Triton X-100 1% deoxycholate 1% Triton X-114 2% NP M(NH 4 ) 2 SO 4 0.1% Thesit 0.1mM EDTA 1% Tween M CaCl 2 1% octyl glucoside 1% CHAPSO 0.05% Brij メルカプトエタノールジチオトレイトールグアニジン塩酸は使用できません Ordering Information カタログ番号品名価格保存 DCプロテインアッセイキット JA DCプロテインアッセイキットI 32,500 4 構成内容 :A 試薬 250ml B 試薬 2L S 試薬 5ml スタンダードI( ウシγグロブリン ) JA DCプロテインアッセイキットII 32,500 4 構成内容 :A 試薬 250ml B 試薬 2L S 試薬 5ml スタンダードII( ウシ血清アルブミン ) 試薬 DCプロテインアッセイA 試薬 250ml 6,500 室温 DCプロテインアッセイB 試薬 1L 11,500 室温 DCプロテインアッセイS 試薬 5ml 3,500 室温 JA DCプロテインアッセイ試薬セット 25,500 室温構成内容 :A 試薬 250ml B 試薬 2L S 試薬 5ml 関連商品プロテインスタンダードI ウシγグロブリン (20mlに溶解約 1.4mg/ml) 10, プロテインスタンダードII ウシ血清アルブミン (20mlに溶解約 1.4mg/ml) 10, B05 ディスポーザブルキュベットスタンダード 1-3.5ml(100 個 5) 14, B05 ディスポーザブルキュベットセミマイクロ 500-1,500μl(100 個 5) 14, サンプル定量

9 プロテインスタンダードの選択 RC DC プロテインアッセイ (Lowry 法 ) RC DCプロテインアッセイは Lowry 法 [Lowry,O.et.al., J.Biol. Chem., 193, 265(1951)] に基づき界面活性剤だけでなく還元剤にもコンパチブルに改良したタンパク質定量キットです今まで難しかったLaemmliのサンプルバッファーに溶解したタンパク質の濃度評価にもそのまま使用可能ですまた2 次元電気泳動用のサンプルにも応用可能ですすべての試薬がこの1 つのキットに含まれていますので購入後すぐにお使いいただけます See Also タンパク質サンプル調製 : P.2 キュベット : P.23 界面活性剤や還元剤のどちらにもコンパチブルです ( 注 1) 最高で DTTなら350mMまでメルカプトエタノールなら 10% までコンパチブルです Ureaなどを含む2 次元電気泳動の1 次元目の等電点電気泳動用のサンプルにも応用可能です 15,000 gが行える遠心機をご用意ください遠心操作を必要とするためマイクロプレートには適していません呈色は1 時間安定です ( 注 2) 1キットで最高 2,000 回の測定が可能です ( 注 3) ( 注 1) 種々の共存する試薬に対する許容濃度はアッセイ法により異なります ( 注 2) 呈色安定性は誤差 5% の範囲内で判定しています ( 注 3) 試験管によるアッセイ法では 500 回マイクロチューブによるアッセイ法では 2,000 回測定できます測定方法 RC DCプロテインアッセイはサンプルの容量に応じて試験管とマイクロチューブで測定を行うことが可能です遠心を行い沈殿を回収するステップがあるためマイクロプレートでの操作には適していません沈殿溶解後はマイクロプレートでの操作測定が可能です RC DC プロテインアッセイフォーマット試験管マイクロチューブ測定範囲 mg/ml mg/ml サンプル量 100μl 25μl 試薬量 RC I 試薬 RC II 試薬 A' 試薬 B 試薬 l 500μl 500μl 510μl 4.0ml 125μl 125μl 127μl 1.0ml 測定回数 500 回 / キット 2,000 回 / キット還元剤共存下 / 非共存下における Carbonic Anhydrase の検量線例左 :350mM DTT 右 :5% メルカプトエタノールを含む Laemmli サンプルバッファー RC DC プロテインアッセイの共存許容試薬濃度 One Wash* Two Wash* ( オプション ) One Wash* Two Wash* ( オプション ) Dithiothreitol 100mM 350mM EDTA 100mM - Tributylphosphine 2mM - Imidazole 500mM - β-mercaptoethanol 5.0% 10.0% Tris, ph mM - Laemmli Sample Buffer 使用可能 - NaOH 2.5M - CHAPS 2% - ReadyPrep Reagent2 使用不可使用可能 Tween-20 2% - ReadyPrep Reagent3 使用不可使用可能 Triton X-100 2% - ReadyPrep Reagent 2 : 40mM Tris, 8M ウレア, 4%(W/V)CHAPS, 0.2%(W/V)Bio-Lyte 3-10, 2mM TBP ReadyPrep Reagent 3 : 40mM Tris, 5M ウレア, 2M チオウレア, 2%(W/V)CHAPS, 2% SB3-10, 0.2%(W/V)Bio-Lyte 3-10, 2mM TBP *One Wash は P.28 の操作方法における wash 操作を 1 回 Two Wash は wash 操作を 2 回行うことですサンプル定量 21

10 プロテインスタンダードの選択 Ordering Information カタログ番号品名価格保存 RC DCプロテインアッセイキット JA RC DCプロテインアッセイキットI 49,500 4 構成内容 :A 試薬 250ml B 試薬 2L S 試薬 5ml RC I 試薬 250ml RC II 試薬 250ml スタンダードI( ウシγグロブリン ) JA RC DCプロテインアッセイキットII 49,500 4 構成内容 :A 試薬 250ml B 試薬 2L S 試薬 5ml RC I 試薬 250ml RC II 試薬 250ml スタンダードII( ウシ血清アルブミン ) 試薬 DCプロテインアッセイA 試薬 250ml 6,500 室温 DCプロテインアッセイB 試薬 1L 11,500 室温 DCプロテインアッセイS 試薬 5ml 3,500 室温 JA DCプロテインアッセイ試薬セット 25,500 室温構成内容 :A 試薬 250ml B 試薬 2L S 試薬 5ml JA RC DCプロテインアッセイ試薬セット 42,500 室温構成内容 :A 試薬 250ml B 試薬 2L S 試薬 5ml RC I 試薬 250ml RC II 試薬 250ml RC 試薬セット 19,500 室温構成内容 :RC I 試薬 250ml RC II 試薬 250ml RC I 試薬 250ml 10, RC II 試薬 250ml 10,500 4 関連商品プロテインスタンダードI ウシγグロブリン (20mlに溶解約 1.4mg/ml) 10, プロテインスタンダードII ウシ血清アルブミン (20mlに溶解約 1.4mg/ml) 10, B05 ディスポーザブルキュベットスタンダード 1-3.5ml 100 個 5 14, B05 ディスポーザブルキュベットセミマイクロ 500-1,500μl 100 個 5 14, サンプル定量

11 キュベットキュベットキュベット石英製キュベットは nmの波長域で測定可能ですポリスチレン製キュベットは nmの波長域で測定可能です UV 測定可能なディスポーザブルキュベットは truview( トゥルービュー ) キュベットになりますスペクトロフォトメーターキュベットセレクションガイド Min. Volume, µl Max. Volume, µl Cuvette Type Pathlength, mm カタログ番号 1, ,500 1, ,500 スタンダードキュベットセミマイクロキュベットマイクロキュベットサブマイクロキュベット truview キュベット truview キュベットこのディスポーザブルキュベットはほとんどの紫外可視分光分析に適しています truview( トゥルービュー ) キュベットは透明度が高く DNA RNA タンパク質を高い精度で測定することが可能ですキュベットは個包装されているので汚染の心配がなく DNase RNase パイロジェンフリーであることが保証されています少量のサンプル (50μl) で測定可能なため限られたサンプルを節約できます個包装によって傷や汚染を防ぎます 260nmにおける光透過率は最大 70% であり正確な核酸測定が可能です Ordering Information カタログ番号品名価格 truviewキュベット 50 個 12, B02 truviewキュベット 50 個 2セット 18, truviewキュベット用 HEIGHTアダプター (Z-dimension 15mmの分光光度計用 ) 15,000 SmartSpec 用プリンターペーパー SmartSpec 用プリンターペーパー 5 本 8,000 サンプル定量 23

12 キュベットスタンダードキュベットおよびセミマイクロキュベット標準的な3.5mlキュベットはタンパク質アッセイに最適ですガラスキュベットや石英キュベットに比べてクマシーブルー色素の吸着が少なくまたキュベット内でアッセイ試薬を直接混合させることができます試薬の量を抑えられるため 1キットで実施可能なアッセイ数を多くすることができます 1.5mlセミマイクロキュベットは少量サンプルの高精度測定を行うのに理想的ですスタンダードキュベットもセミマイクロキュベットもほとんどの分光光度計に合う大きさに作られていますキュベット表面は光学的に滑らかであり安定した正確な測定が可能です他にもバイオラッドでは石英キュベットや少量のDNA RNA タンパク質サンプルの高精度測定に用いるtrUView ディスポーザブルキュベットなど特殊なアプリケーション用のキュベットもご用意しています Ordering Information カタログ番号品名価格ディスポーザブルキュベット B05 ディスポーザブルキュベットスタンダード 1-3.5ml(100 個 5) 14, B10 ディスポーザブルキュベットスタンダード 1-3.5ml(100 個 10) 19, B05 ディスポーザブルキュベットセミマイクロ 500-1,500μl(100 個 5) 14, B10 ディスポーザブルキュベットセミマイクロ 500-1,500μl(100 個 10) 19,800 石英キュベットスタンダードキュベット 1-3.5ml Quartz 35, セミマイクロキュベット 500-1,400μl Quartz 55, マイクロキュベット μl Quartz 55, サブマイクロキュベット μl Quartz 95,000 VersaFluor 用ディスポーザブルキュベット VersaFluor 用スタンダードディスポーザブルキュベット 3,000 構成内容 : ポリスチレン ml mm 100 個 VersaFluor 用マイクロディスポーザブルキュベット 9,500 構成内容 : ポリスチレン μl mm 100 個 24 サンプル定量

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04_サンプル定量_P indd サンプル定量タンパク質定量 20 光学測定機器 29 キュベット 31 タンパク質定量 See Also SmartSpec Plus スペクトロフォトメーター : P.29 マイクロプレートリーダー : P.338 キュベット : P.31 タンパク質定量法の選択数々のタンパク質定量法が報告されていますがそれぞれ長所と短所を持っています方法の選択はタンパク質の種類バッファー含有物タンパク質濃度により行い

総合カタログ ー サンプル定量

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