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ともみこしの
5 years ago
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5 1. Norovirus(NoV) NoV NoV NoV NoV NoV AM AM NoV 2. 1) S ) 77 1 AM AM n = 38 n = 39AM - 2.5mg/ml 37 2 RNA AM AM NoV genogroup(g) G PCR NoV 3) AM 1g NoV Mann-Whitney U 3. 1g NoV AM 5,432 3,707 G AM 4,519 3,195 G AM Mann-Whitney U 2 NoV AM p=0.055gg 2 p<0.01 NoV 2 n NoV G G [/g] [/g] [/g] AM ,432 3,707 4,519 3, U p- p = p = 0.10 p < 0.01 NoV AM

6 [ (A ) [ CPE:cytopathic effect 2 0.5% CPE AH 1 AH3 4 HI:hemagglutinin inhibition test HA(hemagglutinin) NA neuraminidase HA NA RT-PCR [] CPE 3 HI HI AH1 HI 10 AH3 AH3 4 HI 5 A/Hiroshima/52/ A/NewYork/55/ HI 2003 AH RT-PCR 2 H3N2 2 HA 354bp 100% % HANA H5 2

(EHEC) 16 20 12 5 96 20 3 EHEC(O121 VT2) (PFGE) 3 97 VT2 (OUTHNM) O157 EHEC (O157 VT1,2) O157 O157 O157 PFGE 13 ( )2

7 (EHEC) EHEC(O121 VT2) (PFGE) 3 97 VT2 (OUTHNM) O157 EHEC (O157 VT1,2) O157 O157 O157 PFGE 13 ( ) O EHEC (O26 VT1) PFGE 90( 1) PFGE A B B B C D D D C EHEC EHEC PFGE EHEC PFGE EHEC

9 % 10% mECEEMBPW 1 2 BPW 3748 mec 5 SSDHLX-Sal XMG mec PCR VT inva NGKG harf-fraser PALCAMOxford BBL API cfug cfug O18 7 O136 2 O8O26O91O114 1 VTLTSTaggReaeAEAST Staphylococcus aureus C Bacillus cereus 1 Listeria ivanovii 16 8 O157

10 µ µ µ µ µ µ µ µ µ

11 7. オンライン固相抽出 -LC/MS/MS による残留動物用医薬品の一斉分析生活化学部遠藤美砂子佐藤勤 1. 目的平成 18 年度からポジティブリスト制が施行され, 動物用医薬品については約 250 医薬品に暫定基準等が設定されたこれにより迅速に多くの医薬品を検査することが必要になるとともに, 定量値を求めることが要求されるようになった前回, オンライン固相抽出 -LC/MS/MS 分析を導入することで, 検査医薬品数を増加 (63 医薬品 ) させるとともに, 前処理の簡素化を図ることができた 1) 今回, さらなる検査医薬品数の増加 (110 医薬品 ) を図るとともに, 試料として魚介類, はちみつを追加して検討した結果について報告する 2. 方法試料は宮城県内で市販または生産されている鶏卵, 鶏肉, 豚肉, 牛肉, エビ, 銀鮭およびはちみつを用いた試料前処理は, 鶏卵, 鶏肉, 豚肉, 牛肉, エビ, 銀鮭については, アセトニトリル / メタノール (4:1) による抽出法を, はちみつは水で 2 倍希釈した LC は Agilent 社製 1100 シリーズを用い, オンライン固相抽出カラムには Waters 社製 Oasis HLB( mm,25μm) を, 分析カラムには Agilent 社製 ZORBAX SB-Aq( mm,3.5μm) を用いた試料注入量は 10μl, カラム温度は 40, 移動相は 0.1 % ギ酸とアセトニトリルのグラジェント溶出とした MS/MS は Applied Biosystems 社製 API3000 を用いたイオン化はエレクトロスプレーによるポジティブモード (POS) ならびにネガティブモード (NEG) で行い,multiple reaction monitoring 測定により定量した Dwell time の制限から,LC/MS/MS 分析は 3 系列 (POS 2 系列,NEG 1 系列 ) で行った 3. 結果検量線はほとんどの医薬品で,25~150 pg の範囲で直線性を示し, 相関係数は 0.9 以上であったまた, 検出下限値 (S/N=3) は試料換算で,0.005~0.02ppm であった添加回収試験の結果は表 1 に示したオラキンドックス, ホキシム, ロキサルソンは本分析法で分析することはできなかったまた, マラカイトグリーンとロイコマラカイトグリーンは, 告示試験法の検出下限値 (0.002ppm) を得られなかったテトラサイクリン, クロルテトラサイクリン, オキシテトラサイクリンは, アセトニトリル / メタノール抽出法では, 十分な回収率が得られなかったが, 水で希釈するだけで測定することができるはちみつでは, 良好な回収率が得られたその他の化合物は, 試料の種類により異なるものの, おおむね良好な回収率が得られたスクリーニング分析による許容条件を回収率 60~140%, 相対標準偏差 20% 以内とした場合, 本法により 82~96 物質の残留動物用医薬品の検査を行うことが可能となった市販試料 28 検体 ( 鶏卵 6, 鶏肉 6, 豚肉 5, 牛肉 5, エビ 1, 銀鮭 4, はちみつ 1) について本法による分析を行ったところ, 対象医薬品は検出されなかった本分析条件のみで判定不能な疑似ピーク等も検出されなかった 1) 遠藤美砂子, 栁田則明 : 分析化学,56, (2007)

12 (595) ( 356) ( 60%140%) 11 () 70%120% 20 (n=1) 70%120% GC/MS LC/MS/MS GC/MS (Mt) GC/MS/MS-MRM(Multiple Reaction Monitoring) 2.1 H GC/MSAgilent 6890/5973 inert GC/MS/MSVarian 1200,8400Autosampler 2.3 GC/MS/MS GC DB-5Ms(0.25mm i.d.30m 0.25m);70(2min)25/min 150(0)3/min200(0)8/min280(10) ;1.5mL/min;180 ;40psi;2L MS/MS GC/MS 263 ( )GC/MS/MS-MRM Dwell Time g STD200ng ( Carbograph+SAX/PSA 2mL GC/MS ) 5 GC/MS/MS 1/2Mt 0,10,20,50,100 ng/ml GC/MS-SCAN-TIC Mt GC/MS/MS-MRM GC/MS-SCAN-SIM (RT:21 25 )RT Mt GC/MS 28 GC/MS/MS 70120% (RT21 25 ) 7 5 GC/MS/MS-MRM 20ng/mL 10ng/mL RTGC/MS Mt GC/MS/MS-MRM 10ng/mL S/N>3 GC/MS/MS-MRM GC/MS 1/5 Mt 1/5 Mt GC/MS

13 14 PCDD/DF 4 PCB Co-PCB 14 PCDD/DF 209 PCB GC/MS 1) PCB KC ) N I PCB KC KC 2) 1) PCB 35 PCB 2 PCB 13 Co-PCB Co-PCB I PCB N PCB 3 4I PCB5KC-400KC p.142 (2007)

14 L 3L1 10ml 1 C-18 3M Empore TM 2315(FF 2 1,500psi150 n- 10L n- 100ml 1 8L 15mm 5g n- n-10%/ n- 30%/n-60%/n- 100ml GC/MS 1 1 (ER) GC/MS 4-1 ppt as E2 (-S9) mer her YTOX ppt as E2 ppt as E2 IC50(C.R.) ND ND (-S9) mer her mer her ppt as ppt as ppt as E2 E2 E2,n-Hex ND ND,n-Hex ND ND,10% ND ND,10% 3.7 ND,30% ND ND,30% ND ND,60% ,60% 5.7 ND,DCM ,DCM 1.6 ND,MeOH 1.2 ND,MeOH ND ND 1) 24 p26 2) 25 p12 3) 25, , 2007

17 O SPM NO SPM SPM SPM SPM (1 1 1 ) () (1)2(2)2 36 (7) 21 (4) (1) (1) 1 (3) (5) (1) 2 77 (1)2 1 (2)2 18 (15) 7 (6) (4) (3) (16) m 10km 10m m 4m SPM 10m SPM

19 PRTR (AIST-ADMER Ver.2) 100m 1/2 1/2 PRTR PRTR 100m IRIS 100m 0.5g/m 3 g/ 100m ()610 () (

1 PAHs [a] PAHs PAHs 40 PAHs PAHs PAHs PAHs PAHs PAHs PAHs 2 2.1 3 1 1 1 S K 2.2 19 8 1 2.

20 1 PAHs [a] PAHs PAHs 40 PAHs PAHs PAHs PAHs PAHs PAHs PAHs S K QFFPUF ACF 100 L ACF PUF 3g GC PAHs 17 3 QFF PAHs PAHs PUF PAHs PAHs ACF PAHs PUF PAHs PAHs PAHs 94

22 LCA CO2,SOX,NOX, BOD(or COD) LCA CO2 CO2 S K DIP CO CO2 S K (*1) (*2) DIP(*2) 50% CO2 2 CO2 S 10% CO2 2 S ( (*3) 2006 S K CO2 LCA CO CO2 SOX,NOX,BOD,COD LCA LCA LCA CO2 HP

23 , JJ kg J3

24 HBODATU-BODSS 3. (6/20)(7/30) No1 No2 No3 No3 No1No2 No1 No2 No3 A No5 BOD BOD No5 No4 No5 No5 No7 No3NoNo7 1.4km No7 HBOD SS No3 2 (6/20) 2 (7/30)

25 m GPS GPS 10 8 a

表 1. HPLC/MS/MS MRM パラメータ表 2. GC/MS/MS MRM パラメータ表 1 に HPLC/MS/MS 法による MRM パラメータを示します 1 化合物に対し定量用のトランジション確認用のトランジションとコーン電圧を設定しています表 2 には GC/MS/MS

表 1. HPLC/MS/MS MRM パラメータ表 2. GC/MS/MS MRM パラメータ表 1 に HPLC/MS/MS 法による MRM パラメータを示します 1 化合物に対し定量用のトランジション確認用のトランジションとコーン電圧を設定しています表 2 には GC/MS/MS ACQUITY UPLC TM /MS/MS と GC/MS/MS によるベビーフード中の残留農薬の分析 No. 720007 20001436J 概要 EU の Baby Food Directive 2003/13/EC 1) ではベビーフード中の使用が禁止されている残留農薬について明示していますその濃度が 0.003mg/kg を超えているのかあるいは 0.004-0.008mg/kg