グルコースは膵 β 細胞内に糖輸送担体を介して取り込まれて代謝され A T P が産生される その結果 A T P 感受性 K チャンネルの閉鎖 細胞膜の脱分極 電位依存性 Caチャンネルの開口 細胞内 Ca 2+ 濃度の上昇が起こり インスリンが分泌される これをインスリン分泌の惹起経路と呼ぶ イ

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1 薬効薬理 1. 作用機序 アナグリプチンはジペプチジルペプチダーゼ -4(DPP-4) の競合的かつ可逆的な選択的阻害剤である インクレチンであるグルカゴン様ペプチド-1(GL P-1) 及びグルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド (GI P) は グルコース依存的なインスリン分泌促進作用やグルカゴン分泌抑制作用等 ( 主にGLP-1の作用 ) を有するが 24) DPP-4により分解されて活性を失う 25) アナグリプチンは DPP- 4の阻害によって内因性インクレチンの分解を抑制し その作用を高めることで血糖コントロールを改善する スイニーの作用機序 インクレチン (GLP-1 G IP ) は糖質や脂質など食事由来の刺激によって 小腸や大腸から分泌される たんぱく質 脂質 糖質 GIP インスリン分泌促進 K 細胞 GLP-1 膵臓 ランゲルハンス島膵 β 細胞血糖コントロールが改善される膵 α 細胞 グルカゴン分泌抑制 小腸 L 細胞 DPP-4 スイニー スイニーが DPP-4 を阻害することで血中インクレチン濃度が上昇し インクレチンの作用が増強される インクレチンは DPP-4 によってすぐに分解される 66

2 グルコースは膵 β 細胞内に糖輸送担体を介して取り込まれて代謝され A T P が産生される その結果 A T P 感受性 K チャンネルの閉鎖 細胞膜の脱分極 電位依存性 Caチャンネルの開口 細胞内 Ca 2+ 濃度の上昇が起こり インスリンが分泌される これをインスリン分泌の惹起経路と呼ぶ インクレチンは膵 β 細胞に発現する各々の受容体に作用し 細胞内 camp 濃度を上昇させる campはpkaや Epac2を活性化し インスリン分泌の効率を高める これをインスリン分泌の増幅経路と呼ぶ スイニーは DPP- 4を阻害し 血中インクレチン濃度を上昇させることで増幅経路を活性化し グルコース刺激による惹起経路を増強する そのため グルコース依存的にインスリンが分泌される 膵 β 細胞に対するインクレチンの作用 ( スイニー投与時 ) Ca 2+ GLP-1 スイニーによる DPP-4 の阻害 GIP グルコース ATP 感受性 Kチャンネル閉鎖 電位依存性 Ca チャンネル 開口 GLP-1 受容体 糖輸送担体 脱分極 GIP 受容体 K + Ca 2+ camp ATP 惹起経路 PKA Epac2 膵 β 細胞 増幅経路 インスリン分泌 2 型糖尿病患者では グルコース代謝による ATP 産生及び GIP によるインスリン分泌が減少している 監修 : 秋田大学大学院医学系研究科内分泌 代謝 老年内科学教授山田祐一郎 67

3 薬効薬理 2. 非臨床試験 (1)DPP-4 阻害作用 (in vitro) 26) アナグリプチンの DPP-4 阻害作用について評価したところ アナグリプチンはラット血漿 DPP-4 イヌ血漿 DPP-4 及びヒト DPP-4( 血漿 Caco-2 細胞分画及び組換え ) 活性を濃度に依存して阻害した また アナグリプチンの DPP-4に対する阻害様式について ヒト組換え DPP-4を用いて検討したところ slow-binding inhibitorであることが示された DPP-4に対する阻害作用 酵素源ラット血漿 IC5(nmol/L) 5.8±.4 イヌ血漿 6.4±.1 ヒト血漿 5.4±.2 ヒト腸管上皮細胞株 Caco-2 細胞 3.5±.3 ヒト組換え 3.3±.3 n=3 方法 : DPP-4 活性は 合成基質である Gly-Pro-MCAを用い DPP-4により切断され遊離した蛍光物質 AMCの濃度を定量することにより測定した (2) 酵素選択性 (in vitro) 26) DPP-4と類似した基質特異性を有するプロリン特異性ペプチダーゼに対するアナグリプチンの阻害作用を評価したところ DPP-4 類縁酵素に対するアナグリプチンの IC 5 値はいずれも5μmol/L 以上であった 各酵素に対する I C 5 値をヒト組換えDPP- 4に対する IC 5 値 (. 3 3 μ m o l / L ) を 1 として比較すると 最も低い値を示した DPP-9に対するIC 5 値でも17, 倍であり アナグリプチンはDPP-4 に対して高い選択性を有していることが示された DPP-4 類縁酵素に対する阻害作用 酵素 IC5(μmol/L) アナグリプチンビルダグリプチンシタグリプチン DPP ±9.8[25,7] 6.4±.8[2,56] 84.8±11.6[5,73] DPP ±5.3[17,] 1.1±.1[44] 299.4±17.1[2,2] FAP 72.7±1.2[22,] 54.6±.5[21,8] DPP ±16.1[53,5] 129.3±4.5[8,74] POP 229.2±31.8[69,5] APP Prolidase ACE LAP 参考ヒト組換え DPP-4 IC5(μmol/L).33±.3.25±.3.148±.6 (n=3 ただし IC5μmol/Lの場合はn=1) [ ]: 各 IC5 値をヒト組換えDPP-4に対するIC5 値を1として比較した相対強度 次式に従って算出 相対強度 =DPP-4 類縁酵素に対するIC5/ ヒト組換え DPP-4に対する IC 5 D P P - 8: ジペプチジルペプチダーゼ - 8( ヒト組換え ) D P P - 9: ジペプチジルペプチダーゼ - 9( ヒト組換え ) FA P: 線維芽細胞活性化タンパク質 α( ヒト組換え ) D P P -2: ジペプチジルペプチダーゼ -2(C a c o -2 細胞分画 ) P O P: プロリルオリゴペプチダーゼ ( 微生物由来 ) A P P: アミノペプチダーゼ P( ヒト血漿 ) p ro l i d a s e( ブタ腎臓由来 ) AC E: アンジオテンシン Ⅰ 変換酵素 ( ブタ腎臓由来 ) LAP: ロイシルアミノペプチダーゼ ( ブタ腎臓由来 ) 68 方法 : アナグリプチン ビルダグリプチン又はシタグリプチンに各基質を加え混和して各酵素を添加し 生成した物質量を蛍光法又は吸光度法により測定した

4 (3) 肥満インスリン抵抗性モデルにおける血糖低下作用 ( ラット ) 27) 肥満インスリン抵抗性モデルである Zucker Fatty ラットを用いて経口グルコース負荷試験を行ったところ アナグリプチンは血漿 DPP-4 活性を用量依存的に阻害し アナグリプチンを 3mg/kg 以上投与した群ではFatty 対照群と比較して有意な血漿 DPP-4 活性抑制作用を示した また アナグリプチンの単回経口投与によりグルコース負荷後 ~12 分の血漿インスリン濃度の AUC が増加し 血漿グルコース濃度変化量の AUCは用量依存的に減少した 経口グルコース負荷後の Zucker Fatty ラットにおける血漿 DPP-4 活性 血漿インスリン濃度の AUC 及び血漿グルコース濃度の ΔAUC a) 血漿 DPP-4 活性 (%) 経口グルコース負荷 分 ( 薬物投与後 3 分 ) ( n g min/ml) 12 5, 血漿 DPP-4 活性 Lean Fatty (n=7) (n=7) (n=7) (n=7) (n=6) 血漿インスリン濃度の AUC -12min 4, 3, 2, 1, Lean 対照群 血漿インスリン濃度の AUC ( 経口グルコース負荷後 分から 12 分 ) ### Fatty 対照群 アナグリプチン (mg/kg) (n=7) (n=7) (n=7) (n=7) (n=6) ( m g min/dl) 16, 血漿グルコース濃度の AUC-12min 12, 8, 4, 血漿グルコース濃度の ΔAUC ( 経口グルコース負荷後 分から 12 分 ) ### Lean Fatty (n=7) (n=7) (n=7) (n=7) (n=6) a) :p<.1(vs. Fatty 対照群 )Dunnett 型多重比較 :p<. 1 ###:p<.1(vs. Lean 対照群 )t 検定 :p<.5(vs. Fatty 対照群 )Dunnett 型多重比較 ###:p<.1(vs. Lean 対照群 )t 検定 :p<.1(vs. Fatty 対照群 )Dunnett 型多重比較 方法 : 一晩絶食した雄性 Zucker Fattyラット (12 週齢 各群 6 又は7 例 ) にアナグリプチン (1 3 1mg/kg) 又はFatty 対照群として精製水を単回経口投与し 3 分後に経口グルコース負荷試験を行った 正常対照群 (Lean 対照群 ) として雄性 Zucker Leanラット (12 週齢 7 例 ) を使用した 69

5 薬効薬理 (4) 自然発症糖尿病モデルにおける血糖低下作用 ( ラット ) 28) 自然発症糖尿病モデルである GKラットを用いて経口グルコース負荷試験を行ったところ アナグリプチンはグルコース負荷時の血漿 DPP-4 活性を用量依存的に阻害し アナグリプチンを 3mg/kg 以上投与した群ではGK 対照群に比べて有意な抑制作用を示した また アナグリプチンの単回経口投与によりグルコース負荷後 ~12 分の血漿インスリン濃度の AUC が用量依存的に増加し 血漿グルコース濃度変化量の AUCは減少した 経口グルコース負荷後の GK ラットにおける血漿 DPP-4 活性 血漿インスリン濃度の AUC 及び血漿グルコース濃度の ΔAUC a) 血漿 DPP-4 活性 血漿インスリン濃度の AUC 経口グルコース負荷 分及び負荷後 12 分 ( 経口グルコース負荷後 分から12 分 ) (%) ( 薬物投与後 3 分及び 15 分 ) ( n g min/ml) 12 4 分 1 12 分 3 8 血漿 DPP-4 活性 Wistar GK (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) 血漿インスリン濃度の AUC -12min 2 1 # Wistar GK (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) ( m g min/dl) 25, 血漿グルコース濃度の AUC-12min 2, 15, 1, 5, 血漿グルコース濃度の ΔAUC ( 経口グルコース負荷後 分から 12 分 ) ### Wistar GK (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) a) :p<.1(vs. GK 対照群 )Dunnett 型多重比較 :p<. 1 #:p<.5(vs. Wistar 対照群 )t 検定 :p<.5(vs. GK 対照群 )Dunnett 型多重比較 ###:p<.1(vs. Wistar 対照群 )t 検定 :p<.5(vs. GK 対照群 )Dunnett 型多重比較 方法 : 一晩絶食した GKラット (1 週齢 各群 8 例 ) にアナグリプチン (1 3 及び1mg/kg) 又はGK 対照群として精製水を単回経口投与し 3 分後に経口グルコース負荷試験を行った 正常対照群 (Wistar 対照群 ) として雄性 Wistar 系ラット (1 週齢 8 例 ) を使用した 7

6 (5) 膵 β 細胞に対する作用 ( ラット ) 29) ( 参考情報 ) STZ 誘発糖尿病ラットにアナグリプチンを 4 週間持続皮下投与したところ 膵臓インスリン含量及び膵 β 細胞量は用量依存的に増加し アナグリプチン 5μg/h 投与群では対照群と比較していずれも有意に増加した アナグリプチンの持続的皮下投与による膵臓インスリン含量 膵 β 細胞量 a) 膵臓インスリン含量 (μg) (%) 6.4 膵 β 細胞量 膵臓インスリン含量 4 2 膵 β 細胞量 対照群 75 5 対照群 75 5 アナグリプチン (μg/h) アナグリプチン (μg/h) (n=1) (n=1) (n=1) (n=1) (n=1) (n=1) a) :p<.1(vs. 対照群 )Dunnett 型多重比較 :p<.5(vs. 対照群 )Dunnett 型多重比較 方法 : STZ 誘発糖尿病ラット (8 週齢 各群 1 例 ) に浸透圧ポンプを用いてアナグリプチン (75 5μg/h) 又は対照群として生理食塩水を 4 週間持続的に皮下投与した 投与開始後 4 週間のラットより膵臓を採取し 膵臓を破砕して調製した膵臓抽出液のインスリン濃度を ELISA 法にて測定した 膵 β 細胞量は抗インスリン抗体を用いて免疫染色を行った病理標本の膵臓総面積に対するインスリン陽性面積比 ( % ) を測定した 71

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ピルシカイニド塩酸塩カプセル 50mg TCK の生物学的同等性試験 バイオアベイラビリティの比較 辰巳化学株式会社 はじめにピルジカイニド塩酸塩水和物は Vaughan Williams らの分類のクラスⅠCに属し 心筋の Na チャンネル抑制作用により抗不整脈作用を示す また 消化管から速やかに ピルシカイニド塩酸塩カプセル 50mg TCK の生物学的同等性試験 バイオアベイラビリティの比較 辰巳化学株式会社 はじめにピルジカイニド塩酸塩水和物は Vaughan Williams らの分類のクラスⅠCに属し 心筋の Na チャンネル抑制作用により抗不整脈作用を示す また 消化管から速やかに吸収され 体内でもほとんど代謝を受けない頻脈性不整脈 ( 心室性 ) に優れた有効性をもつ不整脈治療剤である

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