HPLC 1M KH 2 PO 4 ph ml Anthranilic acid: AnA 600 ml ml AnA 1.0 ml / min Anthranilic acid= PRESSURE 140 kgf / cm 2

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しょうぶかみこ
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1 HPLC 1M KH 2 PO 4 ph ml Anthranilic acid: AnA 600 ml ml AnA 1.0 ml / min Anthranilic acid= PRESSURE140 kgf / cm 2 TOSOH TSK-GEL ODS- 80 Ts 1) mg / ml AnA in (φ mm) AnA g ml SHIMADZU RF 10AXL 2) 50 1) 0.1 ml SHIMADZU CR- 8A 4.9 ml 340 nm 3) 2) 410 nm ε333nm= / 3990 = M 1) AnA M 20 µl 4) 50 2) 0.02 ml 27.4 pmol ml 50 pmol / 27.4 = /pmol M20 µl 2) AREA / 1 pmol (ml) / 0.02 ml 10-3 = nmol / day 0.02 ml= 1M KH 2 PO 4 (ph 3. 0) 3 = g / / = 32 nmol/day g 800 ml ph ph 2. HPLC Kynurenic ml acid: KA 2-1. KA 1-2. Kynurenic acid= ) 0.1 mg / ml KA in 0.6 M PCA 2000rpm5 min KA g 0.6 M PCA 4 ml LC µm 2) 20 1) 0.2 ml 0.6 M HPLC PCA 3.8 ml 94

2 3) 3) 2) 0.6 M 1 M 1 ml / min PCA ε243nm= HPLC 20 µl / = M ) KA M 20 µl 0.6 M PCA 183 pmol 1 Perchlonic acid= pmol / 183 = 8401 / pmol 70% PCA11.65 M1.0 ml ) AREA / 1 pmol ml (ml) / 0.02 ml 10-3 = nmol / day 0.02 ml= 0.5 M ph 4.5 Sodium Acetate Trihydrate= / / = 363 nmol / day 1) g 800 ml 3. HPLC 3-1 L 3-Hydroxyanthranilic acid: 3-HA, 0.5 M ) 2) 17.4 M1 ml 33.8 ml 0.5 M 3) 1) 2) ph 4.5 Xanthurenic acid: XA HA 3-Hydroxy anthranilic acid= M Zinc Acetate Dihydrate= ) 0.1 mg / ml 3-HA in 3-HA g g ml 800 ml 2) 5 1) 1.0 ml 1 L ml 2) ε340nm= / 3860 = rpm5 min M 4) 100 3) 0.01 ml, LC ml µm M 20 µl M - XA ph ml 980 ml Xanthurenic acid= ml 1) 0.1 mg / ml XA in XA 1.0 ml / min PRESSURE112 kgf / cm 2 TOSOH ODS-80Tsφ mm 40 HITACHI F HITACHI D g 8.0 ml 2) 1) ε340nm= µl / 8648 = M 344 nm 398 nm 1 M KH 2 PO 4 (ph 3. 0) 95

3 = g / / = 95 nmol / 800 ml ph day ph XA ml 1) XA M 20 l 3 mg / ml EDTA-2Na 1.31 nmol 1 nmol 13 EDTA-2Na= / 1.31 = / nmol 2) AREA / 1 nmol EDTA-2Na g 5.4 (ml) / 0.02 ml= nmol / day ml 0.02 ml= / / 0.02 = 227 nmol / day 4. HPLC Quinolinic 2000rpm5 min acid: QA LC µm QA HPLC Quinolinic acid= ) 0.1 mg / ml QA QA g 1 M KH 2 PO 4 (ph 3.0) 50 ml 19.0 ml 949 ml 3 mg / ml EDTA-2Na 1 ml 2) 5 1) 1.0 ml 100 ml 4.0 ml 1.0ml / min 3) 2) ε275nm= 4040 PRESSURE85kgf / cm 2 STR ODS- φ mm 20 µl / 4040 = M 15 3-HA SHISEIDO NANOSPACE SI M XA SHIMADZU SPD 10AVVP = g 3-HA SHIMADZU CR 8A 50 ml XA SHIMADZU CR 6A 1 M KH 2 PO 4 (ph was adjusted 3.8 by 0.2 M 3-HA citric acid) +500 mv = XA UV g nm 400 ml ph 3-HA XA HPLC 0.2 M 10 ph ml HA ) 3-HA M 20 l 30 pmol 1 pmol rpm5 min / 30 = / pmol LC-122 2) AREA / 1 pmol 0.45 µm (ml) / 0.02 ml 10-3 = nmol / day HPLC 0.02 ml= 96

4 M KH 2 POpH 4 was adjusted to 3.8 by 0.2 M citric acid 50 ml 40 ml 15% TMA Tetramethylammonium hydroxide solution30 µl 1 L 0.6ml / min PRESSURE56kgf / cm 2 Unisil Q C 81φ mm 30 SHIMADZU RF 10AXF SHIMADZU CR 6A 326 nm 380 nm ) QA M 20 µl 2.06 nmol 1 nmol / 2.06 = / pmol 2) AREA / 1 nmol (ml) / 0.02 ml = nmol / day 0.02 ml= / / 0.02 = 410 nmol / day 97

5 UV AnA HPLC 98

6 HPLC UV 99

7 HPLC 100

8 KA HPLC HPLC 101

9 3- UV UV 102

10 103-HA XA HPLC 103

11 3-HA HPLC HPLC 104

12 XA 13 HPLC 14 HPLC 105

13 15 UV QA 16 HPLC 106

14 17 HPLC 107

Microsoft Word - Ⅲ－2. Fukuoka.doc

Microsoft Word - Ⅲ－2. Fukuoka.doc 平成 17 年度厚生労働科学研究費 ( 循環器疾患等総合研究事業 ) 日本人の食事摂取基準 ( 栄養所要量 ) の策定に関する研究主任研究者柴田克己滋賀県立大学教授 Ⅲ. 分担研究者の報告書 2. ハンチントン病モデルマウスを用いたトリプトファン -NAD 変換系の解析分担研究者福岡伸一青山学院大学理工学部教授研究要旨食餌性 NAD の必要量を決定するためにはトリプトファンから変換されて合成される内的な