22-1.indb

Transcription

1 HLA HLA HLA-QC 12 DNA Luminex 16 DNA SSO INNO-LiPA 18 DNA SSP 20 DNA SBT 22 FlowPRA 25 LABScreen 26 WAKFlow DNA-QC QCWS 35 総説 HLA T MHC Major Histocompatibility Complex Official Journal of Japanese Society for Histocompatibility and Immunogenetics JSHI

2 Major Histocompatibility Complex 2015; 22 (1): 1 2 第 24 回日本組織適合性学会大会の御案内 会期 会場 TEL: 演題応募 大会内容 2 2 QCWS HLA 演題募集 1 2 MHC

3 MHC 2015; 22 (1) 大会事務局 大会ホームページ 2

4 Major Histocompatibility Complex 2015; 22 (1): 年度学会賞ならびに学術奨励賞の募集について 会員の皆様 助成内容 応募資格

5 MHC 2015; 22 (1) MHC 応募 推薦方法 jshijimu@kumamoto-u.ac.jp tokunaga@ m.u-tokyo.ac.jp 1 A4 1 FAX 2 A A jshijimu@kumamoto-u.ac.jp tokunaga@m.utokyo.ac.jp FAX 選考および結果通知について

6 2015 MHC 2015; 22 (1) 5. 受賞者にかかる義務について 助成金の使途 7. 問い合わせ先 Tel: Fax: jshijimu@kumamoto-u. ac.jp tokunaga@m.u-tokyo.ac.jp 5

7 Major Histocompatibility Complex 2015; 22 (1): 6 組織適合性検査技術者認定制度平成 27 年度認定 HLA 検査技術者講習会のお知らせ 日時 : 会場 : TEL テキスト : 1 受講証明書 : 1 1 内容 : 35 (1)HLA に関する基礎医学的な講演 HLA (2)HLA タイピングあるいは抗 HLA 抗体検査に関する講演 HLA HLA (3) 臓器移植の臨床医学に関する講演 HLA 6

8 Major Histocompatibility Complex 2015; 22 (1): 7 初心者講習会の開催及び参加希望者募集について QC HLA HLA 1 HLA

9 Major Histocompatibility Complex 2015; 22 (1): 8 10 平成 26 年度認定 HLA 検査技術者講習会アンケート集計結果 :00 12:

10 26 HLA MHC 2015; 22 (1) 29 - : : :

11 MHC 2015; 22 (1) 26 HLA HP 10

12 Major Histocompatibility Complex 2015; 22 (1): 11 組織適合性技術者認定制度委員会 部会名簿 (2015) QC WG HLA WG HLA WG WG 11

13 Major Histocompatibility Complex 2015; 22 (1): 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 全体経過およびサンプルの総合結果 1) 1) QCWS # 1) 1. ワークショップの経過 26 1 QCWS HP DNA-QC 69 QC 54 1 DNA-QC QC 22 QCWS QCWS DNA-QC 68 QC QCWS MHC 2.QCWS のテーマおよび試料選択について DNA-QC DNA 2 DNA DNA HLA ambiguity 5 QCWS HLA HLA 4 DNA QC 3 4 # QCWS 1) 1) 2) 3) 4) 5) 6) 2) 7) 8) 9) 10) 11) 12) 13) 14) 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) 10) 11) 12) 13) 14) 12

14 18 HLA-QC MHC 2015; 22 (1) 表 1 18 QCWS HLA HLA-C IgM HLA 2 QCWS QC QC DNA-QC 3. 解析方法 DNA-QC Luminex SSO SSO SSP SBT QC FlowPRA Lab Screen WAK Flow ICFA 4 HLA-QC 1 Luminex SSO SSO SSP 13

15 MHC 2015; 22 (1) 18 HLA-QC 表 2 18 HLA-QC DNA SBT 2 FlowPRA Lab Screen WAK Flow 3 DNA DNA 1 DNA Ambiguity IMGT/ HLA January 17 HLA HLA 0.1% 0.1% QCWS サンプルの総合結果 DNA 14

16 18 HLA-QC MHC 2015; 22 (1) 表 3 18 HLA-QC 15

17 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 18 HLA-QC DNA Luminex 1) 1) 1. 概要 Luminex DNA-QC % OneLambda LABType 10 LABType HD 12 WAKFlow 26 5 HLA-A, B HLA-C % HLA-DRB % HLA-DRB3/4/ % HLA-DQA % HLA-DQB % HLA-DPA % HLA-DPB % 2. 解析方法 HLA-A, B, C, DRB %CV Pmin/Nmax P/N 3 18 QC 3. 結果と考察 1 ambiguity 2 CSV 4 H2601 H2604 HLA- A Exon3 %CV 50.8% Pmin/Nmax CSV False Negative False Positive HLA 16

18 18 HLA-QC MHC 2015; 22 (1) QCWS HLA 2 HLA-C H2603 HLA-A, B, DR A3/24, B44/60, DR13/15 A3-B44-Cw5-DR13 HLA A*03:01- B*44:02-C*05:01-DRB1*13:01 A*33:03-B*44:03- C*14:03-DRB1*13:02 FN 1 4. まとめ QCWS QCWS 17

19 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 18 HLA-QC DNA SSO INNO-LiPA 1) 1) 1. はじめに INNO-LiPA QCWS QCWS 1 4 QCWS INNO-LiPA 2. 解析結果 4 1 SSP HLA-C DQ 1 HLA-DR DRB3/4/5 decoder 1) 結果判定 I HLA-A B ambiguity 4 ambiguity 2 HLA-C ambiguity II HLA-DRB1 H2601 H2604 H2602 H2603 ambiguity HLA-DQB1 1 2 ambiguity QCWS 2) 反応状態について I 4 II HLA-DRB1 2 PCR PCR 3. おわりに QCWS INNO-LiPA INNO-LiPA 18

20 18 HLA-QC MHC 2015; 22 (1) INNO-LiPA INNO-LiPA QCWS 19

21 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 18 HLA-QC DNA SSP 1) 1) 1. 概要 1.1 参加状況 SSP 30 43% 1 SSP 参加部門 SSP 1.3 使用試薬 low resolution OneLambda MicroSSP 28 Invitrogen AllSetGold 2 medium resolution OneLambda MicroSSP 2 Invitrogen AllSetGold UniTray 2 MicroSSP MicroSSP JPN SSP 24 SSP 80% 2. 解析結果および考察 Consensus Allele 1 2 false positive false negative 2.1 判定ミス (miss assign) 3 false positive false negative ambiguity ambiguity 2.2 相対的反応データの不備 まとめ SSP HLA- DRB1 3 SSP 20

22 18 HLA-QC MHC 2015; 22 (1) SSP 1 2 表 SSP 21

23 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 18 HLA-QC DNA SBT 1) 1) 1. はじめに (HP 掲載の解析報告集 : 図 1) SBT SBT SBT-NGS SS-SBT 3 SBT Exon Class I Exon 2, 3, 4 PCR Exon F R 2 PCR SNP phase ambiguity SBT-NGS Class I Exon 2, 3, 4 Exon PCR Exon Exon Exon phase ambiguity Exon 2, 3, 4 Exon phase ambiguity SS-SBT HLA - 5'UT Exon Intron 3' UT PCR Exon Intron phase ambiguity 2 SBT Assign SBTengin SBT-NGS SS- SBT 2. 参加施設 使用キットについて ( 図 3) SBT 2 SS-SBT 1 SBT 6 AlleleSEQR HLA typing Kits CELERA 1 SeCore Sequencing Kits invitrogen HLA-A B C DRB1 DQB1 DPB1 AlleleSEQR HLA typing Kits SeCore DPB1 Locus Sequencing Kits Exon SBTengin 4 Assign 3 SBT-NGS 1 Miseq class I+class II kits Scisco genetics Miseq SS-SBT 2 1 GS Junior GS Junior Titanium sequencing Kit Roche 1 Ion PGM Ion PGM 400 Sequencing Kit Life Technologies Omixon Target SeaBass Suzuki 22

24 18 HLA-QC MHC 2015; 22 (1) 3. 結果及び考察 1)SBT 法での解析結果と考察 QCWS IMGT/HLA HLA-DRB1 3 Exon 2 Forward, Exon 2 Reverse Codon 86 Codon 86 HLA-DRB1 86 GTG Assign Codon 86 GTG QCWS H2603 Codon 86 HLA-DRB1* 13:01/105/117/+ DRB1*15:02:01 8 H2604 Codon 86 HLA-DRB1*14:12 DRB1*15:02:01 9 AlleleSEQR HLA typing kits Exon 2 3' 13 bp HLA-DRB1*14:12:01 HLA-DRB1*14:12:02 Kit SBT ambiguity QCWS SBT 1 ambiguity 4 H2603 HLA-C Exon 2, 3, 4 H2602 HLA-DQB1 Exon 2, 3 H2601 HLA-A Exon 2, 3, 4 H2604 HLA-B Exon 2, 3, 4 1 ambiguity / H2602 HLA-DQB1 Exon 2, 3 DQB1*03:03, DQB1*04:01 DQB1*03:25, DQB1*03:100 1 ambiguity DQB1*03:03/25/30, DQB1*03:100/04:01/+ DQB1*03:100 IMGT H2601 HLA-A Exon 2, 3, 4 A*31:79 A*66: ) 方法別による HLA-DPB1 のアリル判定の違いと結果表記 ( 図 13) SBT SBT SBT-NGS SS-SBT HLA-DPB1 HLA-DPB1 SBT AlleleSEQR HLA typing Kits Exon 2, 3 ambiguity SeCore DPB1 Locus Sequencing kits Exon 2, 3, 4 H2601 H2604 SBT-NGS Exon 2, 3 DPB1*05:01:01 DPB1*135:01 DPB1*05:01/135:01 2 SS-SBT Exon Intron 1 1 DPB1* 05:01:01 DPB1*135:01 ambiguity Exon 4 1 3) 判定ミス ( 図 14) H2604 HLA-C SBT Exon 2, 3, 4 ambiguity SBT- NGS SS-SBT C*03:03:01 SBT C*12:02:02 C*12:112 SS-SBT 1 C*12:02:01 23

25 MHC 2015; 22 (1) 4) コードによる表記 G P SBT- NGS QCWS HLA WHO Nomenclature Committee for Factors of the HLA System nomenclature HLA G I Exon 2 3 II Exon 2 ambiguity HLA P I Exon 2 3 II Exon 2 ambiguity H2603 HLA-B SBT-NGS B*40:01: 01G, B*44:02:01G SS-SBT B*40:01:02, B*44:02:01:01 nomenclature SS-SBT SBT H2601 H2602 H2604 HLA-DQA1 SBT- NGS DQA1*03:02P DQA1*05:03P nomenclature SBT-NGS DQA1 Exon 2, 3 nomenclature DQA1*03:02P DQA1*05:03P nomenclature 18 HLA-QC 4. まとめ SBT SBT-NGS SS-SBT 3 SBT DNA 17 SBT SBT ambiguity ambiguity ambiguity HLA SBT-NGS 1 SS-SBT 2 SS-SBT ambiguity null 4 HLA 1 DNA QC HLA 24

26 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 18 HLA-QC FlowPRA 1) 1) / 1. はじめに 18 HLA-QCWS HLA FlowPRA 試薬キットと測定機器 I Lot.16 2 Lot.15 II Lot.18 Lot 13 FACS Calibur 8 Canto II 5 12 NAVIOS 5 FC500 4 EPICS XL 3 3. 解析方法 4 %PRA I II LABScreen Single Antigen 4. 解析結果 I II SH2601 SH2602 SH2603 SH2604 I II 100% %PRA %PRA SD CV Antigen Distribution 5. まとめ FlowPRA 100% %PRA 25

27 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 18 HLA-QC LABScreen 1) 1) 1) 1. はじめに QC 52 LABScreen % QC LABScreen 32 DNAQC % LABScreen Single Antigen SA 4 2. 結果解析 1) 抗体の有無 H2601, H2602, H2603 H2604 Class I 32 Class II H2601 Class II Class II H2602, H2603 H2604 Class II 31 2) 抗体種類の一致 IgG Class I % 97.7% Class II % 97.9% 3)PC/NC およびカットオフ設定 PC/NC Class I Class II )Consensus IgG 3 2 Consensus Class I SH SH SH Consensus Class II SH SH Consensus 5) その他 Class I H2602 H2601 H2603 H2602 EDTA 3. まとめ LABScreen QC Class I Class II 1 QC PC/NC PC/NC Baseline Normalized Value: PC/NC Consensus 26

28 18 HLA-QC MHC 2015; 22 (1) 500 2,000 27

29 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 18 HLA-QC WAKFlow 1) 1) 1. はじめに WAKFlow HLA WAKFlow MR I 13 II WAKFlow HR 2 Fig. 1 WAKFlow MR I N0C 10 N0B 3 11 WAKFlow MR II N0B 6 Table 1 18 QC HLA WAKFlow 2.WAKFlow MR クラス I 2-1) ビーズの反応性について Fig. 2 SH2602 BB Fig. 2 2 HLA Fig SH2601 SH2602 Index Fig. 3 4 BB SH Index Fig. 5 SH2604 Pc Fig. 6 Index 3 N0B 2-2) 判定結果について I Table 2 Table 3 6 SH2601 SH2602 SH2604 Table 3, 4, 6 SH2603 Index 1.5 2, 38 Table Table ) 抗原別判定不一致例等について Table 7 8 SH2601 SH2602 SH B46 Table 7 2 SH2601 SH2602 SH2604 Index 28

30 18 HLA-QC MHC 2015; 22 (1) 4 Table 7, 8 SH2603 Index 29 Table 7 3.WAKFlow MR クラス II Fig. 7 BB Fig I II Index Fig Table 9 Table 10 Index 4.WAKFlow HR WAKFlow HR One Lambda LABScreen Single Antigen LS-SA 53 Fig. 11 Table 12 LS-SA WAKFlow HR SH2602 B35 SH2603 Cw5 SH2604 B46 B56 LS-SA LS-SA WAKFlow- HR 4 LS-SA WAKFlow-HR 2 ICFA 2 4 LS-SA WAK- Flow HR non-hla 5. まとめ I II Index C SH

31 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 18 HLA-QC 1) 1) 1. その他検査法 FlowPRA, LABScreen, WAKFlow SH2601 SH AHG- LCT 1 MPHA 4 LIFECODES 1 QCWS AHG-LCT C1qScreen AHG-LCT C1qScreen MPHA 2. クロスマッチ LCT, FCM, ICFA SH2602 LCT 6 AHG-LCT 2 FCM 8 ICFA 12 FCM FCS ICFA LCT FCM ICFA SH DNA H2601 H2602 SH2602 H2601 A26 B61 LABScreen 1,000 SH2602 H2602 DNA HLA HLA 2 30

32 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 18 HLA-QC DNA-QC 1) 1) / 1. はじめに 18th DNA-QC % % % % 15th QC テーマと配布サンプル DNA-QC 1 DNA 2 DNA 3 4 DNA HLA 5 Ambiguity DNA 4 10 µg 20 µg HLA HLA 3. 使用タイピング SSP SSO Luminex, INNO-LiPA SBT Luminex SSO SSP 結果評価 HLA-QC HLA-A -B -C -DRB 判定結果の評価 ( 基本評価点 60 点 ) th th 結果表記の評価 ( 基本評価点 40 点 ) th 38.7 HLA HLA ac.jp/standarization/index.html 4-3. 試験 検査状況の評価 (3 段階評価 ) A B C 3 C B 1 2 False Positive False Negative 5. 総合評価 ( 判定結果 60 点 + 結果表記 40 点 ) A 100 B C

33 MHC 2015; 22 (1) B % A 42 62% 10% 6. 結語 18thQCWS DNA 18 HLA-QC QC 32

34 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 18 HLA-QC 1) 1) 1. 部門別解析 1.1. 概要 thQCWS % 60 70% 2/3 67% 1/ % 1 LABScreen WAKFlow Flow PRA LABScreen 1.2. 抗体検出結果 17thQCWS HLA II 1 100% HLA I SH % HLA II SH % 100% HLA I II 1.3. 抗体特異性同定検査実施状況 100 HLA I 72.5% 71.4% HLA II 58.8% 53.5% HLA I 85% HLA II 75% 2. 結果評価 2.1. 抗体 QC 結果比較について Consensus Result 1 8 FP 8 1 FN 1 HLA I SH2602 FP SH2604 FN LABScreen single antigen cut off C SH2603 FP 33

35 MHC 2015; 22 (1) FN HLA II SH2602 FN HLA-DQ 2 LABScreen FP FN single antigen FN 抗体 QC 部門別評価について HLA 0.1% HLA 0.67 HP 2.3. 評価内容 1 A HLA-QC 92.2% B % C % C A % B 2 5.4% C 3 8.1% A B C 3. 結語 18QCWS QCWS QCWS QC 34

36 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 第 18 回 HLA-QC ワークショップレポート 追加発言 血液を用いた クロスマッチ の実施報告 日本組織適合性学会 QCWS との連携 1) 1) / 1. 概要 経過 18thQCWS QCWS T ACD-A thQCWS 3. 検査方法および試料選択について CDC 22 AHG- CDC 7 FCXM 24 ICFA 11 HLA QCWS QC 4 2 #2602 # 検査結果 HLA 5. まとめ CDC FCXM 35

37 MHC 2015; 22 (1) 18 HLA-QC 36

38 Major Histocompatibility Complex 2015; 22 (1): 総 説 HLA T 1,2) 1) 1,3) 1) 1,4) 1,4) 1) 1) 1) 2) 3) 4) HLA T DC DC CD14 + cmyc BMI1 M-CSF GM-CSF 3 5 1,000 CD14-ML 12 9 CD14-ML CD14-ML IL-4 TNFa OK432 DC CD14-ML-DC CD14-ML-DC CMV MART1 CD8 + T T CD14-ML in vitro DC キーワード :CD14-ML DC cmyc BMI1 はじめに HLA T DC DC DC 1 3) DC 4,5) DC DC ips DC DC ips 1 ips DC 1 6,7) ips DC TEL: FAX: r5109@st.kumamoto-u.ac.jp 37

39 MHC 2015; 22 (1) HLA 拘束性 T 細胞を誘導可能な末梢血モノサイト由来樹状細胞の大量産生法の開発 この技術が実用化されれば DC ワクチン療法におけ る患者負担の軽減につながり 白血球数が少ないために DC ワクチン療法を受けることができない癌患者も DC 療法を受けることができるようになると期待される ま た ペプチドワクチンの開発研究において in vitro で抗 原に対する T 細胞反応を解析するためにも DC が多数必要 であるが T 細胞と DC の HLA 型が一致していなければ ならないため DC の調整のために同一の健常人や癌患者 から何度も血液採取をしなくてはならず 血液ドナーの 負担が大きいという問題も合わせて解決できることが期 待される 以上のことから我々はヒトの単球を生体外で 図1 CD14-ML の形態 文献 20 より引用 単球および CD14-ML の位相差顕微鏡画像 左 と May Giemsa 染色像 右 を示す 増殖させる技術を開発した 研究方法と結果 1 CD14-ML の作製および CD14-ML-DC の作製 健常人末梢血から Ficoll Paque を用いた比重遠心によ り末梢血単核細胞 PBMC を分離し 抗ヒト CD14 抗体 がコートされた磁気マイクロビーズを用いて CD14+ 単球 を分離した 分離した CD14+ 単球を 20% ウシ胎仔血清含 有 amem に M-CSF 50 ng/ml と GM-CSF 50 ng/ml を 添加した培養液中で 個 /0.5 ml/well 24-well 培養 プレート で培養を開始した さらにポリブレン 8 ng/ ml を添加し ヒト cmyc および BMI1 遺伝子の発現ベク 図2 ターで組み換えたレンチウイルスを感染させた 翌日に CD14-ML-DC の形態 文献 20 より引用 Mo-DC および CD14-ML-DC の位相差顕微鏡画像 左 と May Giemsa 染色像 右 を示す 培養液を 0.5 ml 添加し これ以降は 1 2 日毎に 0.5 ml 培 養液置換を行った 培養開始後 3 5 週に細胞増殖を認め 2 細胞表面マーカーの解析 最大 1,000 倍程度に増殖させることが可能であった こ の現象は健常人ドナー 12 人中 9 人で認められ この増 CD14-ML CD14-ML-DC および Mo-DC について共刺 殖細胞を CD14-ML CD14 cell-derived myeloid cell line と 激分子である CD80 CD86 DC の成熟マーカーである 命名した 増殖した CD14-ML に IL-4 20 ng/ml を添 CD83 DC の活性化刺激分子である CD40 DC に多量 8,9) 加し その 3 日後に OK µg/ml に発現している HLA クラス I HLA クラス II ケモカ を添加すること インレセプターである CCR7 の発現についてフローサイ により DC に分化させた CD14-ML-DC 図 1 2 は単球 CD14-ML 単球に IL-4 OK432 を添 トメトリーで解析した 図 3 において黒色のラインは特 加して DC に分化させた Mo-DC CD14-ML-DC の位相差 異的抗体による染色を 灰色塗りつぶしはアイソタイプ 顕微鏡画像と May Giemsa 染色像を示す CD14-ML は末 対照抗体による染色を示す CD14-ML に IL-4 と OK432 梢血より分離した単球と比較すると大きく 核の形状は単 を添加し DC としての成熟を誘導した細胞ではほとん 球とは異なりノッチがなく丸くなっていた 一方単球 どの分子の発現が CD14-ML と比較して増加しており CD14-ML にそれぞれ IL-4 と OK432 を添加し DC に分化 Mo-DC と同等の発現を認めた させた CD14-ML-DC は より生理的な DC に近い Mo-DC と同様の突起を有しており 核の形状も類似していた 38

40 HLA T MHC 2015; 22 (1) 図 3 CD14-ML-DC 20 CD14-ML CD14-ML-DC Mo-DC CD40 CD80 CD86 CD83 HLA I HLA II CCR7 図 4 CMV TCR CD8 + T 20 A tetramer day 0 CMV CMV TCR CD8 + T day 9 CMV CMV TCR CD8 + T B ELISPOT day 0 CMV CMV TCR CD8 + T T day 9 CMV CMV TCR CD8 + T 3.HLA-A24 陽性ドナー由来の CD14-ML-DC を用いた CMV ペプチドに特異的な TCR を発現する CD8 + T 細胞の誘導 CMV HLA-A24 CMVpp65 CMVpp QYDPVAALF 10) HLA-A24 CD14-ML IL-4 TNFa 5 ng/ml DC CD8 + T CD14-ML-DC AIM-V 5% IL-7 10 ng/ml 2 IL-2 20 u/ml 9 T HLA-A24 CMVpp65 HLA-A24 tetramer 11) CMVpp65 TCR CD8 + T 4A CD14-ML-DC day 0 CMVpp65 CD8 + T 0.03% 9 CD8 + T 1.67% CMVpp65 TCR CD8 + T 9 T CMVpp HLA-A24 HIV RYLRDQQLL HLA-A24 C1R 16 IFN-g T ELISPOT 4B IFN-g 39

41 MHC 2015; 22 (1) HLA T 9 CMV pp C1R ELISPOT CMVpp65 TCR CD8 + T CD14-ML-DC 4.HLA-A2 陽性ドナー由来の CD14-ML-DC を用いた癌抗原 MART1 ペプチドに特異的な TCR を発現する CD8 + T 細胞の誘導 HLA-A2 MART1 MART EAAGIGILTV 12) HLA-A2 CD14-ML IL-4 OK432 DC CD8 + T CD14-ML-DC AIM-V 5% IL-7 10 ng/ml 2 IL-2 20 u/ml T HLA-A2 MART1 dextramer MART1 TCR CD8 + T 5A CD14-ML-DC day 0 MART1 TCR CD8 + T 0.01% 27 CD8 + T 0.96% MART1 TCR CD8 + T MART1 TCR CD8 + T CD14-ML-DC 21 T MART HLA-A2 HIV SLYNTYATL HLA-A2 T2 16 IFN-g T ELISPOT 5B IFN-g 21 MART1 T2 ELISPOT MART1 TCR CD8 + T CD14-ML-DC 考察 DC 1,13,14) DC DC ips-ml cmyc BMI1 ips 15) ips-ml DC cmyc BMI1 図 5 MART1 TCR CD8 + T 20 A day 0 MART1 MART1 TCR CD8 + T day 21 MART1 MART1 TCR CD8 + T B ELISPOT day 0 MART1 MART1 TCR CD8 + T day 21 MART1 MART1 TCR CD8 + T 40

42 HLA T MHC 2015; 22 (1) ips-ml 12 cmyc BMI , ,000 3 CD14-ML CD14-ML cmyc BMI1 CD14-ML DC Mo-DC 1 2 TCR CD8 + T Mo-DC 3 4 DC HLA-A2 HLA-A ) HLA-A2 HLA-A24 CD14-ML CD14-ML CD14-ML-DC HLA I HLA CTL CD14-ML CD14-ML 2 CD14-ML- DC IL-4 CD14-ML CD14-ML-DC CD14-ML 略語一覧 CD14-ML: CD14 cell-derived myeloid cell line CMV: cytomegalovirus CTL: cytotoxic T lymphocyte DC: dendritic cell ELISPOT: Enzyme-Linked ImmunoSpot HIV: human immunodeficiency virus ips-ml: ips cell-derived myeloid cell line Mo-DC: monocyte-derived dendritic cell OK432: penicillin-killed Streptococcus pyogenes PBMC: peripheral blood mononuclear cells 引用文献 1) Higano CS, Schellhammer PF, Small EJ, et al.: Integrated data from 2 randomized, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trials of active cellular immunotherapy with sipuleucel-t in advanced prostate cancer. Cancer (115): , ) Kantoff PW, Higano CS, Shore ND, et al.: Impact study investigators. Sipuleucel-T immunotherapy for castration-resistant prostate cancer. N Engl J Med (363): , ) Rosenberg SA, Yang JC, Restifo NP: Cancer immunotherapy: moving beyond current vaccines. Nature Med (10): , ) Van Voorhis WC, Hair LS, Steinman RM, et al.: Human dendritic cells. Enrichment and characterization from peripheral blood. J Exp Med (155): , ) Freudenthal PS, Steinman RM: The distinct surface of human blood dendritic cells, as observed after an improved isolation method. Proc Natl Acad Sci USA (87): , ) Senju S, Haruta M, Matsumura K, et al.: Generation of dendritic cells and macrophages from human induced pluripotent stem cells aiming at cell therapy. Gene Therapy (18): , ) Choi KD, Vodyanik M, Slukvin II: Hematopoietic differentiation and production of mature myeloid cells from human pluripotent stem cells. Nat Protoc (6): , ) Itoh T, Ueda Y, Okugawa K, et al.: Streptococcal preparation OK432 promotes functional maturation of human monocytederived dendritic cells. Cancer Immunol Immunother (52): , ) Nakahara S, Tsunoda T, Baba T, et al.: Dendritic cells stimulated with a bacterial product, OK-432, efficiently induce cytotoxic T lymphocytes specific to tumor rejection peptide. Cancer Res (63): , ) Kuzushima K, Hayashi N, Kimura H, et al.: Efficient identification of HLAA*2402-restricted cytomegalovirus-specific CD8 (+) T- cell epitopes by a computer algorithm and an enzyme-linked immunospot assay. Blood (98): , ) Watanabe K, Suzuki S, Kamei M, et al.: CD137-guided isolation and expansion of antigen-specific CD8 cells for potential use in 41

43 MHC 2015; 22 (1) HLA T adoptive immunotherapy. Int J Hematol (88): , ) Kawakami Y, Eliyahu S, Sakaguchi K, et al.: Identification of the immunodominant peptides of the MART-1 human melanoma antigen recognized by the majority of HLA-A2-restricted tumor infiltrating lymphocytes. J Exp Med (180): , ) Oshita C, Takikawa M, Kume A, et al.: Dendritic cell-based vaccination in metastatic melanoma patients: phase II clinical trial. Oncol Rep (28): , ) Phuphanich S, Wheeler CJ, Rudnick JD, et al.: Phase I trial of a multi-epitope-pulsed dendritic cell vaccine for patients with newly diagnosed glioblastoma. Cancer Immunol Immunother (62): , ) Haruta M, Tomita Y, Yuno A, et al.: TAP-deficient human ips cellderived myeloid cell lines as unlimited cell source for dendritic cell-like antigen-presenting cells. Gene Ther (20): , ) Uemura H, Fujimoto K, Tanaka M, et al.: APhase I Trial of Vaccination of CA9-Derived Peptides for HLA-A24-Positive Patientswith Cytokine-Refractory Metastatic Renal Cell Carcinoma. Clin Cancer Res (12): , ) Yoshitake Y, Fukuma D, Yuno A, et al.: Phase II Clinical Trial of Multiple Peptide Vaccination for Advanced Head and Neck Cancer Patients Revealed Induction of Immune Responses and Improved OS. Clin Cancer Res (21): , ) Schwartzentruber DJ, Lawson DH, Richards JM, Conry RM, Miller DM, Treisman J, et al.: gp100 peptide vaccine and interleukin-2 in patients with advanced melanoma. N Engl J Med (364): , ) Suzuki N, Hazama S, Ueno T, et al.: A phase I clinical trial of vaccination with KIF20A-derived peptide in combination with gemcitabine for patients with advanced pancreatic cancer. J Immunother (37): 36 42, ) Haruta M, Tomita Y, Imamura Y, et al.: Generation of a large number of functional dendritic cells from human monocytes expanded by forced expression of cmyc plus BMI1. Hum Immunol (74): ,

44 HLA T MHC 2015; 22 (1) Development of a Method for Generation of Immune Competent Dendritic Cells in a Large Scale by Using Human Peripheral Blood Monocytes with Gene Modifications Yuya Imamura 1,2), Miwa Haruta 1), Yusuke Tomita 1,3), Keiko Matsumura 1), Tokunori Ikeda 1,4), Koutaro Takamatsu 1,4), Yasuharu Nishimura 1) and Satoru Senju 1) 1) Department of Immunogenetics, Graduate School of Medical Sciences, Kumamoto University 2) Department of Orthopaedic Surgery, Faculty of Life Sciences, Kumamoto University 3) Department of Respiratory Medicine, Faculty of Life Sciences, Kumamoto University 4) Department of Neurology, Faculty of Life Sciences, Kumamoto University In cancer immunotherapy, it is the most important that the cancer antigen-specific T cells are derived by the peptide presented by HLA antigen, and dendritic cells (DC) are useful to drive them. For preparation of sufficient quantity of DC, a large number of monocytes are required, and apheresis, a somehow invasive procedure, is generally conducted. As a means to facilitate the generation of DC, we herein report a method to amplify human monocytes. We found that lentivirus-mediated transduction of cmyc along with BMI1 induced proliferation of CD14 + monocytes derived from 9 out of 12 blood donors, and we named this proliferating cell CD14 cell-derived myeloid cell line (CD14-ML). The proliferation of CD14-ML began after a culture start in 3 5 weeks in the presence of M-CSF and GM-CSF, resulting in fold amplification. When we added IL-4 and TNF a or OK432 in the expanded CD14-ML, the cell differentiated into DC (CD14-ML-DC) having strong T cell stimulation activity. We successfully stimulated autologous CD8 + T cells with CD14-ML-DC pulsed with cytomegalovirus peptide or MART-1 peptide to generate antigen-specific CTL lines. This is the first report describing the method for in vitro expansion of human peripheral blood monocytes. Key words: CD14-ML, DC, cmyc, BMI

45 Major Histocompatibility Complex 2015; 22 (1): 抄録集 TEL: TEL: yuketsu@med.kindai.ac.jp 44

46 第 13 回日本組織適合性学会近畿地方会 MHC 抄録集 参加費 1 正会員 2,000 円 生 1,000 円 2 学 3 世話人 3,000 円 会議等 1 総 会 2 月 7 日 土 12:50 13:00 2 世 話 人 会 2 月 7 日 土 11:30 12:50 3 意見交換会 2 月 7 日 土 17:00 会場地図 大阪府赤十字血液センター 7 階会議室 大阪市城東区森之宮 2 丁目 4 番 43 号 TEL JR 環状線 地下鉄中央線 地下鉄長堀鶴見緑地線 森ノ宮駅下車東へ 350 m ; 22 (1)

47 MHC 2015; 22 (1) 13 プログラム 9 30 受付開始 午前の部 モーニングセミナー ips ips 一般演題 (1) WAKFlow HLA I&II ICFA 1) 1) 1) 1) 2) 1) 2) 2 HLA-C 3 HPA-7new HPA-21bw 1) 2) 3) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1)4) 1) 1) 2) 3) 4) 一般演題 (2) NGS 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 2) 1) 1) HLA 1) NPO 2) 5 MiSeq HLA 2 1) 1) Wyatt Nelson 2)3) 3)4) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) Daniel E. Geraghty 2)3) 1) 5) 1) 1) 1) HLA 1) Fred Hutchinson Cancer Research Center 2) Scisco Genetics, Inc. 3) 4) NPO 5) 46

48 13 MHC 2015; 22 (1) 6 ips HLA 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 2) 3) 1) 1) HLA 1) 2) ips 3) 昼食 世話人会 総会 午後の部 テクニカルセミナー HLA NGS HLA SS-SBT シンポジウム HLA 1 DSA 2 HLA 3 HLA 1) 1) 2) 3) 1) 2) 3) 特別講演 ips WT1 17 懇親会 47

49 MHC 2015; 22 (1) 13 10:00 10:30 モーニングセミナー 座長 : 椿和央 ( 近畿大学医学部奈良病院血液内科 ) 幹細胞治療の現状と展望 :ips 細胞の臨床応用を中心に 木村貴文 ( 京都大学 ips 細胞研究所基盤技術研究部門 ) 48

50 13 MHC 2015; 22 (1) ips ips ips Cell, ips HLA HLA HLA T HLA universal HLA Class-I-null, β2mg-null 1 ES 2 ES HLA ips ips T ips 参考文献 1) Scalable generation of universal platelets from human induced pluripotent stem cells. Feng Q, et al. Stem Cell Rerports 3: , ) Human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium in patients with age-related macular degeneration and Stargardt s macular dystrophy: follow-up of two open-label phase 1/2 studies. Schwartz SD, et al. Lancet. published online October 15, doi.org/ /s (14)

51 MHC 2015; 22 (1) 13 10:30 11:00 一般演題 (1) 座長 : 荒木延夫 ( 兵庫県赤十字血液センター ) 演題番号 1)~ 3) 50

52 13 MHC 2015; 22 (1) 1 WAKFlow HLA I&II ICFA 1) 1) 1) 1) 2) 1) 2) HLA WAKFlow HLA I & II ICFA ICFA I&II HLA ICFA I&II II HLA II HLA II de novo DSA HLA II II 100 ul 500 ul HLA WAKFlow HLA II MR MFI ul 500 ul 100 ul 57.1% 12 / ul 95.2% 20 /21 I 500 ul

53 MHC 2015; 22 (1) 13 2 HLA-C HLA-LR HLA HLA-A, B HLA-C HLA-C HLA-C 1) 2) HLA-C PC-HLA 10, LAB- Screen single antigen HLA HLA-C HLA-C CCI 8 6 CCI 1 7,500/ µl 24 4,500/µL PC-HLA HLA-C HLA-Cw1 Cw4 Cw8 Cw9 HLA-Cw1 Cw9 LABScreen single antigen BNV 20,000 HLA-C HLA-C 3 HLA-C HLA-C CCI 1 参考文献 1) Transplantation Proceedings, 4: ) Vol. 53 No Vol. 2 52

54 13 MHC 2015; 22 (1) 3 HPA-7new HPA-21bw 1) 2) 3) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1)4) 1) 1) 2) 3) 4) HPA NAIT HPA 28 HPA NAIT HPA-7new HPA- 21bw HPA-1 HPA-6 HPA-7 HPA HPA-7new HPA-21bw PC-HLA HPA DNA HPA-7 17,287 10,540 1,951 4,795 HPA-21 4,473 1, ,802 HPA-7 HPA- 21 PCR-SS0 HPA-7new HPA-21bw HPA-7new 0.03% 0.04% 0.08% 0% HPA-21bw 0.48% 0.57% 0.28% 0.45% HPA-7new HPA-21bw 0.077% 7/ % 10/944 HPA-7new HPA-21bw HPA-21bw NAIT 53

55 MHC 2015; 22 (1) 13 11:00 11:30 一般演題 (2) 座長 : 石井博之 ( 日本赤十字社近畿ブロック血液センター ) 演題番号 4)~ 6) 54

56 13 MHC 2015; 22 (1) 4 NGS 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 2) 1) 1) HLA 1) NPO 2) Luminex NGS HLA 3 Luminex WAKFlow HLA Typing kit HLA Scisco Genetics Class I exon 2, 3, 4, Class II exon 2, 3 illumina Miseq 3 1 C*04:01V C*04: TCC TCT A*11:01:01 - C*04:01V - B*15:01:01G - DRB4*01:01:01G - DRB1*04:06:01 - DQA1*03:01:01 - DQB1*03:02:01 - DPA1*02:02:02 - DPB1*03:01:01G 2 C*12:02:02V C*12:02: GCG GTG 136 Class I α2 α β A*24:02:01G - C*12:02:02V - B*52:01:01G - DRB5*01:02 - DRB1*15:02:01 - DQA1*01:03:01G - DQB1*06:01:01 - DPA1*02:01:01 - DPB1*09:01:01 3 DPB1*02:01:02V DPB1*02:01:02 99 GTT GAT 99 Class II β2 A*24:02:01G - C*15:02:01G - B*40:02:01 - DRB3*02:02:01G - DRB1*14:06:01- DQA1*05:01:01G - DQB1*03:01:01G - DPA1*02:02:02 - DPB1*02:01:02V G IMGT C*12:02:02V DPB1*02:01:02V TCR CD4 CD8 T C*12:02:02V exon3 HLA-C Luminex WAKFlow HLA Typing kit 55

57 MHC 2015; 22 (1) 13 5 MiSeq HLA 2 1) 1) Wyatt Nelson 2)3) 3)4) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) Daniel E. Geraghty 2)3) 1) 5) 1) 1) 1) HLA 1) Fred Hutchinson Cancer Research Center 2) Scisco Genetics, Inc. 3) 4) NPO 5) NGS Next Generation Sequencing HLA Luminex exon Class I exon2, 3, 4 Class II exon2, 3 Ambiguity Ambinguity Class I A, B, C exon1-7 Class II DRB1, DRB3, 4, 5, DQA1, DQB1, DPA1, DPB1 exon1-4 Luminex HLA-A, B, C, DRB1 WAKFlow 47 4 Buccal Scisco Genetics PCR MiSeq HLA 47 Class I 3 Class II 6 4 genotype 423 genotype 419 genotype Luminex 2 HLA-A 1 HLA-B 2 HLA-C 4 HLA-DRB1 2 HLA-DQA1 6 HLA-DPB1 3 Ambiguity HLA 99% 419 /423 HLA 56

58 13 MHC 2015; 22 (1) 6 ips HLA 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 2) 3) 1) 1) HLA 1) 2) ips 3) ips ips HLA ips HLA ips HLA ,138 31,410 HLA HLA-A, B, DR 3 2,796 4,992 19,183 HLA HLA-A, B, C, DR 4 3,361 HLA-A, B, DR 3 HLA 68 70% % 46 HLA-A, B, C, DR % % ips : 参考文献 ips HLA Vol.23, No.8,

59 MHC 2015; 22 (1) 13 11:30 12:50 昼食 世話人会 12:50 13:00 総会 58

60 13 MHC 2015; 22 (1) 13:00 13:30 テクニカルセミナー 座長 : 小島裕人 ( 公益財団法人 HLA 研究所 ) 次世代シークエンシング (NGS) による HLA タイピング :SS-SBT 法の開発状況と今後の展望 尾崎有紀, 鈴木進悟, 重成敦子, 伊藤さやか, 桝屋安里, 光永滋樹, 猪子英俊, 椎名隆 東海大学医学部基礎医学系分子生命科学 59

61 MHC 2015; 22 (1) 13 次世代シークエンシング (NGS) による HLA タイピング : SS-SBT 法の開発状況と今後の展望 HLA PCR- SSOP Luminex PCR-SBT 2 cis trans phase ambiguity PCR-Luminex HLA NGS HLA DNA NGS 1 DNA cis-trans phase ambiguity HLA DNA Super high resolution Single molecule-sequence Based Typing; SS-SBT SS-SBT 1 PCR 2 NGS 3 3 HLA 11 A, B, C, DRB1/3/4/5, DQA1, DQB1, DPA1 DPB1 PCR kb PCR HLA allelic imbalance allelic imbalance PCR 157 PCR 3 SS-SBT SeaBass Omixon Target GeneDX Omixon Target % GeneDX % Sea- Bass 99.8% PCR HLA DNA SeaBass NGS replacement model 3 Multiplex PCR NGS HLA 60

62 13 MHC 2015; 22 (1) 13:30 15:30 シンポジウム HLA 抗体と移植 座長 : 谷慶彦 ( 日本赤十字社近畿ブロック血液センター ) 芦田隆司 ( 近畿大学医学部血液膠原病内科 ) 1)DSA 陽性症例の腎移植について西村憲二 ( 兵庫県立西宮病院腎疾患総合医療センター ) 2)HLA 抗体と肝臓移植井手健太郎 ( 広島大学大学院医歯薬保健学研究院応用生命科学部門消化器 移植外科学 ) 3)HLA 抗体と造血幹細胞移植佐藤壯 ( 社会医療法人北楡会札幌北楡病院臨床検査科 ) 61

63 MHC 2015; 22 (1) 13 1 DSA HLA Donor specific antibody; DSA de novo DSA Antibody-mediated rejection; AMR DSA DSA DSA AMR graft loss 1 T CD20 IVIG AMR IVIG DSA DSA IgA Flowcytometry crossmatch T 5 B 1 T, B 4 DSA class I 5 II 2 I, II 2 MMF 1000 mg mg mg 0.1 mg/kg IVIG 400 mg/kg 6 DSA MESF 12, ,532 2, Cr egfr mg/dl, 52.7 ml/min/1.73 m AMR 1 DSA de novo DSA 20% de novo DSA HLA class II de novo DSA DSA de novo DSA 17 DSA DSA class I 4 II 10 I, II 3 DSA 10 episode biopsy AMR IVIG graft loss 62

64 13 MHC 2015; 22 (1) 2 HLA HLA DSA HLA DSA DSA DSA ICFA HLA LABScreen Mixed Single Antigen ICFA FCXM CDC T-cell FCXM LABScreen Mixed Single Antigen HLA HLA 63

65 MHC 2015; 22 (1) 13 3 HLA 1) 1) 2) 3) 1) 2) 3) HLA HLA HLA 1970 HLA HLA HLA HLA2 HLA HLA HLA 2012 HLA HLA HLA HLA HLA HLA-A, B, DR HLA-C, DQ, DP HLA 64

66 13 MHC 2015; 22 (1) 15:40 16:40 特別講演 座長 : 木村貴文 ( 京都大学 ips 細胞研究所基盤技術研究部門 ) WT1 ペプチドを用いたがんワクチン療法 岡芳弘 ( 大阪大学大学院医学系研究科, 癌免疫学 ( 大塚製薬 ) 共同研究講座特任教授 ) 65

67 MHC 2015; 22 (1) 13 WT1 Wilms tumor gene WT1 WT1 WT WT1 cytotoxic T lymphocytes CTLs WT1-CTL WT1 in vivo 2001 WT1 WT1 WT1 WT1 WT1 WT1 WT1 Proof of Concept 600 WT1 WT1 promising WT1-CTL WT1- helper WT1 CD4 + T HSCT HSCT minimal residual disease MRD WT1 CTL effector CTL /target tumor or leukemia ratio E/T ratio HSCT WT1 WT1 CTL expand HSCT WT1 HSCT allo WT1 HSCT WT1 HSCT WT1 translational research WT1 reverse translational research 66

68 Major Histocompatibility Complex 2015; 22 (1): 日本組織適合性学会誌 MHC の投稿規定 I. 投稿について内容 :MHC 資格 : 倫理 : World Medical Assembly 1980 種類 : 審査 : 著作権 : 掲載料 : 別冊 : II. 原著執筆書式 1. 執筆要項 Microsoft Word Microsoft PowerPoint CD CD A 第 1 頁目 FAX Susceptibility gene for non-obstructive azoospermia in the HLA class II region: correlations with Y chromosome microdeletion and spermatogenesis. Tetsuya Takao 1), Akira Tsujimura 1), Masaharu Sada 2), Reiko Goto 2), Minoru Koga 3), Yasushi Miyagawa 1), Kiyomi Matsumiya 1), Kazuhiko Yamada 2), Shiro Takahara 1) 1) Department of Urology, Osaka University Graduate School of Medicine, Suita, Osaka, Japan 2) Department of Regenerative Medicine, National Cardiovascular Center, Suita, Osaka, Japan 3) Department of Urology, Osaka Central Hospital, Osaka, Japan FlowPRA HLA 1) 1) 2) 2) 3) 本文 1: 日本語での投稿 words 5 67

69 MHC 2015; 22 (1) cm, ml, g, Kg, pg, µl, %, C 4. 本文 2: 英語での投稿 words 5 3 Introduction Materials and Methods Results Discussion References cm, ml, g, Kg, pg, µl, %, C 5. 本文 3: 略語一覧の作成 作成要項 LCT lymphocyte cytotoxicity test 6. 引用文献 3 et al. 1 Shi Y, Yoshihara F, Nakahama H, et al.: A novel immunosuppressant FTY720 ameliorates proteinuria and aiterations of intrarenal adrenomedullin in rats with autoimune glomerulonephritis. Regulatory Peptides (127): , Tongio M, Abbal M, Bignon JD, et al.: ASH#18: HLA-DPB1. Genetic diversity of HLA Functional and Medical Implication (ed. Charron D), Medical and Scientific International Publisher, p , IVIG 1 17: 36 40, Medical View p , III. 短報 ( 研究速報, 技術速報などを含む ), 症例 1. 執筆要項 Microsoft Word Microsoft PowerPoint CD CD A 第 1 頁目 FAX 3. 本文 words

70 MHC 2015; 22 (1) IV. 総説, シリーズその他 V. 原稿送付先 J8 MHC tanimoto@att.med.osaka-u.ac.jp Tel: Fax: 総原稿枚数図表数文献数要旨 ( 図表, 文献含む ) 原稿タイトル所属, 著者 キーワード数 査読 著者校正 原著 30 枚以内 5~10 個以内 20 個以内 英文原著英文 250 words 以内和文原著英文 400 words 以内 和英併記 5 個有り 1 回 短報, 症例報告 15 枚以内 5 個以内 10 個以内和文 英文とも英文 200 words 以内和英併記 3 個以内有り 1 回 総説, その他その都度指定適宜 20 ~ 30 個前後和文 400 字以内和英併記 5 個なし 1 回 69

71 MHC 2015; 22 (1) 編集後記 18 HLA-QC HLA-QC HLA-QC HLA T 日本組織適合性学会ホームページ HLA 学会事務局からのお知らせ URL URL umin.ac.jp/ jshi@nacos.com FAX jshijimu@kumamoto-u.ac.jp FAX jshi@nacos.com 70