The future of liquid biopsy is here
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- せせら じゅふく
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1 The future of liquid biopsy is here
2 CTC Ion Torrent LiquidBiopsy Platform p4 DNA cfdna MagMAX Cell-Free DNA Isolation Kit p6 MagMAX Sample Preparation p6 KingFisher p7 Total Exosome Isolation p7 Ion S5 / Ion S5 XL p8 Ion PGM p9 Ion AmpliSeq p10 cfdna Oncomine cfdna Assay p12 p14 p15 PCR TaqMan Mutation Detection Assays p16 PCR QuantStudio 3D PCR p17 NanoDrop One & Qubit 3 Fluorometer p18 Thermo Fisher Cloud p19
3 liquid biopsy biopsy Circulating Tumor Cell: CTC DNA cell-freedna: cfdna CTC 10 ml cfdna DNA cfdna CTC cfdna CTC 回収 CTC 染色 計数 10ml 全血 LiquidBiopsy Flow Chip EVOS FL Cell Imaging System がん関連遺伝子領域増幅 NGS ライブラリ作製 変異解析 (NGS) P4-5 LiquidBiopsy Blood Collection Kit P4-5 cfdna 抽出 cfdna 自動抽出 Ion AmpliSeq Panel Oncomine cfdna Assays P10-13 Ion Torrent System P 変異定量 ( デジタル PCR) MagMAX cfdna Isolation Kits P6 KingFisher Flex P7 QuantStudio 3D P16-17
4 CTC Ion Torrent LiquidBiopsy Platform Ion Torrent LiquidBiopsy Platform CTC CTC CTC EpCAM EMT ml CTC cfdna Germline Control White Blood Cell 96 CTC Ion Torrent LiquidBiopsy Instrument Graphical User Interface 82 cm Slide/Chip Tray Assembly 4 Pumps 82 cm 58 cm CTC CTC EDTA2K mL cfdna 4
5 1, % 3-5 cells cells/ml CTC CTC cells/ml H H H H H H HH H H H ,000 cells/ml 7.5mL MCF-73, 9, 30, 90, 300, 900 cells/ml LiquidBiopsy Platform 1 target cell/ml 1000 cells/ml Iohexol PBS Variants Variant frequency Position Gene Reference Variant WBCs CTCs cfdna chr3: PIK3CA A G chr4: FGFR3 A G Not present chr4: FGFR3 G A chr4: PDGFRA A G chr4: PDGFRA C T chr4: KDR C T chr5: APC G A chr5: CSF1R TG GA chr7: EGFR G A NC chr11: HRAS A G chr13: FLT3 A G chr18: SMAD4 C T CTC cfdna DNA LiquidBiopsy PlatformCTC, cfdna WBCs) 3DNA Ion AmpliSeq Cancer Hotspot Panel v2 Ion 318 Chip 1 COSMIC COSM760 WBC LiquidBiopsy Instrument 2 1 CVLB ,500,000 LiquidBiopsy Blood Collection Kit 1 A ,400 CTC LiquidBiopsy Reagents and Consumables Kit, Part 1 8 A ,800 LiquidBiopsy Reagents and Consumables Kit, Part 2 8 A ,000 EpCAM Capture Antibody 8 A ,000 Her2 Capture Antibody 8 A ,000 Trop2 Capture Antibody 8 A ,000 Bi Label Epcam + Trop2 Capture Antibodies 8 A ,000 Bi Label Epcam + Her2 Capture Antibodies 8 A ,000 Bi Label Her2 + Trop2 Capture Antibodies 8 A ,000 Tri Label Epcam + Her2 + Trop2 Capture Antibodies 8 A ,000 5
6 DNA cfdna MagMAX Cell-Free DNA Isolation Kit Applied Biosystems MagMAX Cell-Free DNA Isolation Kit cfdna cfdna 500 µl-10 ml µl KingFisher7 40 K DNA 170 bp cfdna DNA cfdna 4 ml 50 µl 50 bp DNA 2 ng/µl 60 µl Dynabeads MyOne Silane DNA / 50 µl 1 µl1 µl DNA Agilent Bioanalyzer 2100 HS dsdna bp DNA 100% MagMAX Sample Preparation MagMAX Sample Preparation RNA RNA RNA 20 µl RNasePCR KingFisher RNA small RNA RNA mirna RNA DNA DNA/RNA / MagMAX for Stabilized Blood, Tempus MagMAX for Stabilized Blood, Paxgene MagMAX Blood RNA Isolation MagMAX mirvana Total RNA Isolation Kit MagMAX DNA Multi-Sample Ultra Kit MagMAX Cell-Free DNA Isolation Kit MagMAX Pathogen RNA/DNA Kit MagMAX Cell-Free DNA Isolation Kit 1 A ,000 MagMAX for Stabilized Blood Tubes RNA Isolation Kit, ,100 compatible with Tempus Blood RNA Tubes MagMAX for Stabilized Blood Tubes RNA Isolation Kit, ,300 compatible with PAXgene Blood RNA Tubes MagMAX-96 Blood RNA Isolation Kit 96 AM ,600 MagMAX mirvana Total RNA Isolation Kit 96 A ,000 MagMAX DNA Multi-Sample Ultra Kit 500 A ,700 MagMAX Pathogen RNA/DNA Kit ,000 6
7 純度 累積率 純度 累積率 KingFisher Thermo Scientific KingFisher MagMAX Sample Preparation 96 MagMAX Preperlation Kit BindIt KingFisher Duo Prime 30-5,000 µl well KingFisher Flex 20-5,000 µl well PCR KingFisher Duo Prime ,000,000 KingFisher Flex 96DW * ,040,000 * 3 Total Exosome Isolation Invitrogen Total Exosome Isolation Kit Invitrogen Total Exosome RNA & Protein Isolation Kit RNA [Total Exosome Isolation 試薬 ] [ 超遠心法 ] 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% HeLa Nanosight LM10 300nm nm 30% 30% 20% 20% 10% 10% 粒子サイズ 粒子サイズ 900 Total Exosome Isolation Reagent 6 ml ,500 Total Exosome Isolation Kit 6 ml ,700 Total Exosome Isolation Reagent 50 ml ,500 Total Exosome Isolation Reagent 6 ml ,700 Total Exosome RNA & Protein Isolation Kit ,500 7
8 Ion S5 / Ion S5 XL FFPE Ion S5 /S5 XL Ion Torrent DNA RNA Ion AmpliSeq Panel Ion Torrent Oncomine Cancer Assay CNV 400 bp 6 8 Gb bp bp 4 Ion S5 Ion S5 XL Ion 520 Ion 530 Ion 540 Ion 520 Ion 530 Ion ,500 2,000 6,000 8, ,500 2,000 6,000 8,000 * 200 bp Gb 3 4 Gb Gb Gb 3 4 Gb Gb 400 bp Gb 6 8 Gb Gb 6 8 Gb 200 bp bp bp bp * >99%/ Aligned BAM Ion S5 Ion S5 Ion OneTouch 2.0 Duo Ion S5 Ion S5 Ion Chef Ion S5 XL Ion S5 XL Torrent Ion OneTouch 2.0 Duo Ion S5 XL Ion S5 XL Torrent Ion Chef 1 S5-001OT2S2 2 13,300,000 1 S5-001CS2 2 17,700,000 1 S5XL-001OT2S2 2 26,100,000 1 S5XL-001CS2 2 29,800,000 8
9 Ion PGM Ion PGM 3 Ion 314 /316 / bp30 Mb 2 Gb 1 5 Ion 314 v2 Ion 316 v2 Ion 318 v bp Mb Mb 600 Mb-1 Gb 400 bp Mb 600 Mb-1 Gb Gb bp bp Ion PGM Ion PGM Ion Torrent Ion OneTouch 2.0 Duo 1 PGM11-020S2 2 9,600,000 Ion PGM Ion PGM Ion Torrent Ion Chef 1 PGM11-C01S2 2 13,400,000 9
10 Ion AmpliSeq Panel Ion AmpliSeq Panel PCR Ion Torrent DNA Ion AmpliSeq Cancer Hotspot Panel v NCI 50 2,790 1 ng 1 PCR Ion 314 / 316 / 318 FFPE bp 154 bp 1 DNA 10 ng 10 ng x 1 10 * >95% ** >90% NA * 20% **1 KRAS BRAF EGFR TP53 PIK3CA CSF1R JAK2 NRAS PTPN11 ERBB2 SRC FGFR3 NPM1 CDKN2A RET HNF1A SMAD4 GNAS PDGFRA MPL ABL1 PTEN FLT3 STK11 SMARCB1 KIT MET NOTCH1 FGFR2 RB1 JAK3 VHL KDR SMO EZH2 HRAS AKT1 ALK MLH1 FBXW7 FRBB4 GNA11 ATM CDH1 IDH1 CTNNB1 APC FGFR1 GNAQ IDH2 Ion AmpliSeq Comprehensive Cancer Panel ,000 4 DNA CDS DNA 1 4 ng DNA 4 PCR 41 Ion 318 FFPE bp 155 bp 4 DNA 40 ng 10 ng x 4 16 * >90% ** >95% NA * 20% **1 10
11 Ion AmpliSeq Community Panel RNA web 1 ng DNA 500 FFPE CNV TP53 Panel TP BRCA1 and BRCA2 Panel BRCA1, BRCA Colon & Lung Cancer Research Panel v2 NRAS, PTEN, PIK3CA AML Research Panel DNMT3A, RUNX RNA Fusion Lung Cancer Research Panel ALK, RET, ROS1,NTRK Ion AmpliSeq Custom Panel Ion AmpliSeq Cancer Hotsopt Panel v2 Comprehensive Cancer Panel Inherited Disease Panel Ion AmpliSeq Designer ,144 6,144 10kb Ion AmpliSeq , or 200bp , well 1,500 6,000 Ion AmpliSeq Cancer Hotspot Panel v ,000 Ion AmpliSeq Comprehensive Cancer Panel ,000 Ion AmpliSeq Colon and Lung Cancer Research Panel v ,000 Ion AmpliSeq TP53 Panel ,000 Ion AmpliSeq BRCA1 and BRCA2 Panel 3 3, ,250 Ion AmpliSeq AML Research Panel ,000 Ion AmpliSeq RNA Cancer Panel ,000 Ion AmpliSeq RNA Lung Fusion Cancer Research Panel 8 CP ,000 Ion AmpliSeq Custom Panel 750 3,
12 cfdna Oncomine Cell-Free DNA Assay Ion Torrent Oncomine cfdna Assay Ion Torrent Oncomine Knowledgebase Ion Torrent SNVs PCR cfdnacfdna 0.1% 1-20 ng cfdnadna 2 cfdna NSCLC cfdna DNA Oncomine cfdna Assays cfdna Limit of Detection 1 ng 0.6 % 5 ng 0.25 % 10 ng 0.15 % 20 ng 0.1 % 30 ng 0.05 % Oncomine cfdna Assays cfdna 20ng 0.1% cfdna cfdnamagmax Cell-Free DNA Isolation Kit 6 KingFisher 7 12
13 Oncomine Lung cfdna Assay NSCLC ALK,BRAF,EGFR,ERBB2,KRAS, MAP2K1,MET,NRAS,PIK3CA, ROS1,TP53 EGFR T790M, C797S, L858R, Exon 19 del KRAS G12X, G13X, Q61X BRAF V600E ALK Exon PIK3CA E545K, H1047R, E542K Oncomine Colon cfdna Assay AKT1, BRAF, CTNNB1, EGFR, ERBB2, FBXW7, GNAS, KRAS, MAP2 K1, NRAS, PIK3CA, SMAD4, TP53, APC KRAS/NRAS: G12/G13/Q61 BRAF: V600E PIK3CA: E545K, H1047R TP53: R175H R273H/C/L Recurrent deleterious APC mutations including p.r876*, p.r1114*, p.q1378*, and p.r1450* SMAD4: R361C/H CTNNB1: S45F, T41A Oncomine Breast cfdna Assay AKT1, EGFR, ERBB2, ERBB3, ESR1, FBXW7, KRAS, PIK3CA, SF3B1, TP53 PIK3CA: E545K and H1047R AKT1: E17K ESR1: Mutations associated with anti-estrogen resistance TP53: Mutations associated with loss of function ERBB2: Mutations associated with sensitivity to anti-erbb2 therapies Oncomine Lung cfdna Assay 8 A ,000 Oncomine Colon cfdna Assay 8 A ,000 Oncomine Breast cfdna Assay 8 A ,000 Tag Sequencing BC Set BC 10 A ,000 Tag Sequencing BC Set BC 10 A ,000 MagMAX Cell-Free DNA Isolation Kit 1 A ,000 KingFisher Duo Prime ,000,000 KingFisher Flex 96DW ,040,000 13
14 96 Ion Xpress Barcode Adaptor Kit Ion Xpress Barcode Adaptor Kit Ion Torrent DNA Ion Xpress Barcode Adapters 1-96 Kit 96BC ,000 Ion Xpress Barcode Adapters 1-16 Kit 16BC ,000 Ion Xpress Barcode Adapters Kit 16BC ,000 Ion Xpress Barcode Adapters Kit 16BC ,000 Ion Xpress Barcode Adapters Kit 16BC ,000 Ion Xpress Barcode Adapters Kit 16BC ,000 Ion Xpress Barcode Adapters Kit 16BC ,000 Tag Sequencing BC Set BC 10 A , IonCode Barcode Adapters Kit IonCode Barcode Adapters Kit 384BC 10 A ,152,000 Ion AmpliSeq Ion AmpliSeq Library Kit 2.0 Ion AmpliSeq Library Kit 2.0 Ion AmpliSeq AmpliSeq Ion AmpliSeq 11 Ion AmpliSeq 96LV 384LV Ion AmpliSeq Library Kit ,000 Ion AmpliSeq Library Kit LV ,020,000 Ion AmpliSeq Library Kit LV ,720,000 3 Ion Library Equalizer Kit Ion Library Equalizer Kit 3 PCR Ion Torrent DNA Ion AmpliSeq Library Kit 2.0 Ion Plus Fragment Library Kit Ion Xpress Plus Fragment Library Kit Ion Library Equalizer Kit ,000 14
15 Ion Reporter Software Ion Torrent Torrent Suite Software Ion Reporter Software Ion Torrent 3 CNV Ion Reporter Software ID Sign In Launch analysis Next Next Next Launch Analysis 15
16 PCR TaqMan Mutation Detection Assays Applied Biosystems TaqMan Mutation Detection Assays Competitive Allele-Specific TaqMan PCR castpcr MGB log 3 1 TaqMan Mutation Detection Assay Reference Assay Mutant Assay Mutant Allele Assay EGFR_exlqdels_mu 19 MGB EGFR exon19 deletion Wild type Assay Mutant Assay EGFR Reference Assay EGFR Exon19 Deletion Assay Wild type Allele Assay Gene Reference Assay MGB Mutation Detector TaqMan Mutation Detection Assay ASP: LST: TaqMan LSP: MGB: ASB: MGB FP: RP: * TaqMan Mutation Detection Assays µl / ,800 TaqMan EGFR Exon 19 Deletions Assay 1 EGFR µl/ ,800 TaqMan Mutation Detection Reference Assays µl / ,200 TaqMan Mutation Detection IPC Reagent Kit 1 kit/ ,800 *20µL sher.com/taqman TaqMan Mutation Detection Assays 16
17 PCR QuantStudio 3D PCR PCR PCR Applied Biosystems QuantStudio 3D PCR0.1% 0.1% Applied Biosystems Custom TaqMan SNP Genotyping Assays 20,000 PCR 0.1% Custom TaqMan SNP Genotyping Assays KRAS G12V A. DNA 10% PCR % 8.235% % B. DNA 1% PCR 1.393% 0.772% % C. DNA 0.1% PCR 0.142% 0.064% % D. QuantStudio 3D PCR EGFR, KRAS, BRAF, PIK3CA, JAK2 QuantStudio 3D PCR PCR QuantStudio 3D PCR ProFlex PCR QuantStudio PCR ProFlex PCR QuantStudio 3D ChipLoader 1 QS3D-PF 2 6,400,000 QuantStudio 3D PCR Chips v2 12 A ,880 QuantStudio 3D PCR Master Mix v2 1.5 ml A , ml A ,000 Custom TaqMan SNP Genotyping Assays Custom TaqMan SNP Genotyping Assays for Rare Mutation Analysis 40x, Medium scale ,900 17
18 NanoDrop One & Qubit 3 Fluorometer DNA Thermo Scientific NanoDrop One Invitrogen Qubit 3 Fluorometer NanoDrop One NanoDrop One µl UV 1-2 µl 3 Qubit 3 Fluorometer Qubit 3 Fluorometer 2 DNA RNA Qubit 3 NanoDrop One NO DNA A260 /A280 NO RNA, dntps, NO DNA NO DNA NO 100 ng/µl 1,000 ng/µl YES YES YES YES YES NanoDrop One Qubit 3 Qubit 3 NanoDrop One NanoDrop One NanoDrop One 1 ND-ONE-W 1,750,000 NanoDrop One C 1 ND-ONEC-W 2,050,000 Qubit 3.0 Fluorometer 1 Q ,000 Qubit 3.0 Quantitation Starter Kit 1 Q ,100 Qubit 3.0 NGS Starter Kit 1 Q ,100 18
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