バイオ解析チーム教育セミナーMS04
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- ありさ しろみず
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2 LTQ Orbitrap Shotgun proteomics Large scale proteomics by orbitrap technology. Thermo fisher scientific K.K SID C&MS Application OMICS Team
3 TMT 2
4 Proteome Cell and Tissue Protein Peptide Extraction Protease Bodily Fluids Sample Database Search Mass spectrometer 3
5 LC-MS/MSn m/z0.2 LTQ Relative Abundance VAQDR VAKDR m/z 3ppm ~m/z m/z0.003~ LTQ Orbitrap Relative Abundance VAQDR VAKDR m/z 4
6 Proteome etc. In-gel digest In-Solution digest SILAC, TMT etc. 5
7 Thermo Scientific / Mass Spec Sample Handbook Cell and Tissue Cell Lysis and Protein Extruction Bodily Fluids High Abundant Protein Removal Pre-fractionation & Enrichment Gel Separation In-Gel Digestion Sample Clean up Peptide Enrichment Peptide Clean up Mass Spectrometry In-Solution Digestion 6 Mass Spec Sample Handbook
8 Cell and Tissue Bodily Fluids In-Solution Digestion 7
9 Cell and Tissue Bodily Fluids In-Solution Digestion 8
10 LC-MS/MS LC-ESI-MS/MS Intensity Chromatogram m/z R.T. / MS spectrum K N A G MS/MS spectrum 9
11 LC-ESI-MS/MS MS/MS 10
12 LC-ESI-MS/MS HPLC-ESI MALDI-MS or MS/MS MALDI 11
13 5 ppm Orbitrap Quality Albumin False positive Albumin 2 Da Unit MS system 12
14 2 Da False positive Albumin 0.1 Da False positive Albumin 100 ppm False positive Albumin 5 ppm Orbitrap Quality Albumin 13
15 False Discovery Rate ( FDR ) Protein Database Database search results ( ) Data file Decoy Database Decoy database Search results Criteria Criteria FDR<5% FDR = Nature Methods 2, (2005) Published online: 23 August 2005; doi: /nmeth785 Comparative evaluation of mass spectrometry platforms used in large-scale proteomics investigations Decoy database Search results Database search results 14
16 LC-MS/MSn Database search results ( ) Decoy database Search results LTQ Criteria FDR<5% Database search results ( ) LTQ Orbitrap Decoy database Search results Criteria FDR<5% 15
17 LTQ Orbitrap E.coli 100ng Database search results ( ) Decoy database Search results LTQ Criteria FDR<5% LTQ Orbitrap 16
18 Pierce Biotechnology is Part of Thermo Scientific TMT (Tandem Mass Tag) TMT reagent (229Da) Reporter Balance N-term and K 126 Da ペプチドレベルでラベル化 N-末端 / Kのアミノ基に結合 多群間での比較定量が一度の分析結 果から解析可能 同定はMS/MSから 定量もMS/MSス ペクトルから解析 129 Da 127 Da 130 Da 128 Da Da
19 アイソバリックタグ試薬を用いた手法 ラベル化試薬 18
20 TMT Cleavable Linker Mass Reporter Mass Normalizer Reactive Group MS/MS spectra TMT126 (229Da) m/z TMT127 (229Da)
21 TMT exp. ratio 1:2:4:6:8:3 obs. ratio1:2:4:7:8: Reporter ppm ppm ppm ppm ppm ppm Relative Abundance y b b b a b y a a b y a b a ~ ~ m/z m/z
22 TMT LC-ESI-MS/MS 126~ ~ ~ ~ MS/MS
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