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ゆきひらありはら
6 years ago
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京都大学 ) Issue Date 1994-03-23 URL https://doi.org/10.

1 Title スルホキシドを用いた新規酸化法によるシスチン及びセレノシスチン含有ペプチドの合成研究 ( Dissertation_ 全文 Author(s) 小出, 隆規 Citation Kyoto University ( 京都大学 ) Issue Date URL Right Type Thesis or Dissertation Textversion author Kyoto University

3 ~l ~íj 反応機 t~ についての JS 娯 ~~: 項 MIJJX)~~ について ~3 釘スチン合イ f ペプチドのイ ~rlx: j 位制 { のシステインタ V,~IIIJ でのシメルツィド紡介形成 5- 仏 : はシステイン ~V.l~IHJ でのシスルフィドネムイ j" jl~hk ンメチルスルホキシド. トリフル ;~. ~ J'~'i;. "tt: ;f~ によるノスル )f~j& 2お :~ J.x.'.~ 機 W~ についてのど保 ~

4 _II;~ セレノシスチン合イf ペプチドトこ泊する従来の研究慨 ~ セレノシスチン Jí;J~~ 体としての N 9 nuorenylm clhoxycarbonyl - 化させることによりその泊料の発現 ~:. jn 設な役川 ; を ~I など生理的に irl_'~ な役刻を来たしているものが少なくない ~ な j ぇ此 : である J'I~ ANP の {;~l 主活性中日泊に! 却する従 -* の研究概要の介成に応 JIJ した史に村々のス jレホキシドとシリ Jレ化斉 IJ の斜 l み介わせ ~:. よを碓 ; 忍すると点にペプチド ". のシセレエド結合の般化 jm;é Jj_).~ における化学これらの ~li Q を ~,~ にしてラ y ト心 }jj ナトリウ ì~ に均する尖駿いるアミノ酸ペプチド中のアミノ酸減 J,~ は特にぷ械の 11E

5 その他の試 ~ の略ひ純作剤 1 ~ よび泊 ili 試 f 誌の略ひ

6 反のペノチド鎖を椛築した後システイン残 ).~UIJ でのジス j レフィド結介形成を qr うこ ~ においても故もよく月 j いられている )i1. よであるこの J:i. (~J とするシスチン合為ペプチド以外にグ ).~9) 写によってシステイン側鎖を保品し七ペフ F ドか仏政接的かっ剣持 IUj でシスルフィド体 ~ ),~ のヨウふとの J.i. J 必性はJlJ 問題点として Tyr HI 九 T 叩側鎖官能 ~ のヨウ本化 12) 及び Cy 君側鎖と T 叩側鎖との UIJ

8 ~ ~ 第 2~ 頁 S- 脱 ~& と同時にジス Jレフイド粘合が形成されるものと与えられる ~ ~ ~ ~ ~

9 T 叩側 inr:- 能 )~ がヨウボイヒされることがある 12) そこで 10% ~ ',~; によるメヲオエンスルホキシドの遣 J じ 25) を行う必要があるまた T ゅ減 J 左をフイド結合をイ f する下垂体後 :x:1 ホルモンオキシトシン及びヒト α )~! カルシトユン泣 )~JI,', I,f 11 介 J&iL J!;. び Tyr 列島の側鎖保設 ).~ にはそわそわ MB 1.J I-Bu いた全保設 )~ の除よと樹脂からのペプチドの切断は 1 TFA 系 28)γ より行った乙うして f!ij られた j.ii_ ji: )~J オキシトシンを I メ l,t は ~f7 品 l 的とする般化 }~J オーやシトシンが幼 -r よく '1 起こっていな ρζ とか確 P2, された ( 凶 5) 千 1U'~ 成物,J: P し C により ui 攻し C~ 端

11 第 2~ 頁第 3~ 頁 ~ みのへ /1 ド J 空気般化され易く通常の大気イ 1 抗 : ドではその取り扱いに注意 ; を式する従って $H 体を経由しない $- 保護システイン残 )~I:IJ でのジス l レフする反 T.î:..~ 主に大さな.Hi ì 主があることが分かったこのことから D \1 $O 内 rト A 系によ橋を形成す, ることができるのではないかとイ与え以ド! こ述べるような ;~ 斗シトシンのいた l 在住的ヅスルフィド結合形成を検持した )~f~ には分 {. 内の 2 例の )~Im と $-Acm Cys 伐必を 1 :; 心の ~~ 技法で thl& した 2 粍の $- 保護オキシトシンを JII )~Hlil,f 日法により構築したこの際 Ty r の側鎖は I Bu H)6 1 oxylocln のペプナド鎖はが ~Jj!lIiJ 桜 Fmoc )~q/.[1'1 日 : んによりた 6 位の Cys の側鎖 U; 准 ),~ には ~~ い般により切断される Trl) たをは川した ζ の ~'. より判裂した 'UJ.lè. したオキメトシンの収 :t.; および残存原料 ~ii

12 )~ と SH 般に宅気酸化では天然 I~J の 5 思崎係式の物が ì o

13 明アパミンの生成は般化 ~J に依存するものでなく 8.55 である従って TFA のような非常に疎水性の,~I~J' い治蹴小では考えると彼らのイ ~þ)w ミが他のペプチドにおいても天然理! のシスルフィド架橋仏式を

18 み合わせを選択することにより向収 )~ さに目的物を作たしかし MeS (O) Ph と TMS C I 本 11/1~ 成物の HPLC 分析において k 生成物は ccf の標品と HP し C 上共に治 111 しそ ~O w~h (~~O 40%/0 30 ノド章において :t.:~ は DMS O TFA 系によるジス lレフィド結合形成法を史に発展させ ( あるいは M es ici 3 ) TFA 系による l{~ 接的な S-Acm

19 ~~ 解除の角的集中心を形成している 39) またセレノシステインはその伯述化 7 (~J~iちレノシスチンおよびシステイン ) を 1f~1 瓦寸る -するシス 7 インのチオー J レ )t~ よ般にセレノールは対応するチオー Jレよりもかなり {l); ぃ般化還式 ~l {i ~ ト伴うため現犯のペプチド令 j 氏にははとん )~ を用い B )~111HH 介成法による / ミノ酸の結合引示 tjt く HF によゐ脱 thlje

20 )~ は S-MBz l と N~S e2 より調製した次いでこれを水酸化ナトリウム水溶液中 NaBH 4 ~ こて還元しセレノシステインとした一般に遊離のセレノールは大気中の酸 ~ により容 }~.! ペプチド合成に使 J[J 中の P-Se(MB z l) と P-S (MB zl) がほぼ ItiJ~~. の純度 (>90% ) であることから結合 Jff.r.. 中

21 長 8 にノ J~ すようにヨウ京を JIj" t- ~ 品目介 S (MBz1) 問でのジセレヱド鮎介形成はは w~h ~ 頁ってセレノシスチン合イj ペプチドの合成にはセレノール ~.&lきを除く全保品法を除去した後保 ~ Scc 成 )~IIU で ((1. 接的なジセレニド結什形成をす f うルートが有効である

22 ~(l O 叫. ~ ~ ~ 間を要したまた平衡状態においてセレノシスチン合イ i ペプチドは対 1.~. するシスチ -~ ~ 抗体ペプチドと還正体ペプ,-ト伊-ScH ま t- ~t 体のそデルペプチド : 経時的に反応液の却を HPLC で分析し反 1.~. 雄 qj の 2~ 外ペプチドの濃度をそのピ

23 ~ こおいてはセレノ

24 ~. よって形成される 53.u 環が ANP の活性発現に if~ 世な役割を -* たしていることが 1) ミ I 凌された現を有しているにもかかわらず抗しい利尿机件の低ドをぶした 62) 心 [IIH,'f< の ir,~ 換はオキ ì:~ なシトシン 63) あるいはウナギカルントニン 64) の生理話作にはさほど人きな j~~ ~',~ を与え ~ こ置換したアナログを合成し血管 '-y.r,'t 筋弛緩活十 i は 23 付の Cys 側鎖 )~l ナトリウム利尿ペプチド (CNP)58) と共に体液の恒常性の維持および血圧の訓節に重 ~12

25 )~66} をJlI いることが多かったがこの基は TFA による脱保 "'~ こ長時間の処理において S および Sc MB/l~ は安定に保たれた各 M Bzl 体ペプチドは HPLC イルを凶 L~ ~2

26 / 〆 J し )I~/ f(l!~ を ANP e~pcnments

27 cg~1p conten~ 成にス j レホキシドの般化 )J を利川した新しい 2 つの Jx. J.~. 系 DMSO ~ たノド法は以ドに述べるような優れた判徴をイ i している ~) $- 脱似 'l\tに II/tt の t~1tj い市 : 令 J,'~ を JI) いないため ']: 外に対する '_i;: イ ~ti: も I~ ド性 I~ ;~IV, の介 J 主にも }Jl\, ~i; ~ 即売しセレノシスチンを合布するモデルペプチドの般化還 J C: JxJ.~~ における述 l.3t, 命的解析はペプチド '1 ' のジセレニド結合の 'j:1'{μ ついて興味ある )~ 礎的立 IIJi 争 'J- えた pr- 'I ~ ノシステイン民法への i 在換は Jl: のな科 m 造を人さく変化させない己とが /J~ 峻された c 己の合成? よをJ1J" てセレノシスチンタl;)~~:: による川辺学的研究にも役 i~ つものととえられると非常に似ており Cy~ 伐 ),lの Scc 政必へのí( i 換はì.! 日方の合体桃迭をはとんと変化さ乙れらの U~ 尖を総合すると }I]!.i,fit'tを完成していることがぷ I~ される ~ 6 ~

28 (5 μ1 ) を用いて ~.t fl : 民行中 1l 0'Cで 20 時間反止させた白 ~l の保護基をイfする Nα-Fmoc アミノ酸を

29 rn l) で ~i 品処却した ~ こは Acm Cys6 には Tn 基を用いた

30 収量収 E 事及び物 E 理化乍的! 日 j 定の結果を表 12-14~ こぶす C49H7~ JlI!,~ イ1 11

31 成物の一部を HPLC にて.t"f~ し凍結乾般することにより吸出性の粉末を得た J.~ の ~h は経時的に j メル浪を掠取し HPLC で分析することによりモニターした ~m()1 ml) で 'J!i :i 品処月! した経時的,~ 50μl をサンプリングし I ~I ちに 10ml のぷに ~j.m 収 :i;~ レーションにより除き樹的を油 J~' 1 位と 31 L 二 Cy~(Tn) を A,cOH で前 w した起も述く市山するピークのフヲクンロンを 1J~ めアンモユ

32 ーク lflï 献の比より求めた結果 ~}X 1 に /J ミす般を Ji. I.~ 被の色が無色になるまで加えることにより J:x. I. むを停止し室温で MeOH を収 jí~ ~~ ~!: 凍結乾燃した...g J~)~l アパミン ( 約 5 μg) は 10ちもいIv) ml) で宇治 2 時間処珂し J:iJ.t~ }~'! アパミンと HPLC )~Jのジ ~ 以トの A 薬系 (2 μ1) で処〆 R した

33 Nα-pMZ-[Cy~(M B/I)I.6, oxylocin l4 ) ml) で 15 分処均した後 :.ij.î:.'? まに冷エーテルを加え ;fu ペプチドを ~!: 主生 þ)~ 物は HPLC で綿製し凍結乾 μ することによりオキシトシンを f!ja た }~! 附相法により行った f!j られたペプザド-hl1 同様に脱保 & Nj~ した TM~OTf 収 ~: J.il.î:.~ 液に冷エーテルを加えて析 IB する沈殿を j 主心沈降し ~! のオキシトシンを得たり

34 ~

35 ~ こ希釈メンプランフィルターで独過..:.~ 体ペプチド (p-$csc-p および P-$$-p) の棋品は以ドのよう P-Sc$~ 2S~2 l\ a, し必故を成 /1 ; ii:: ~fl し七 ~X:I: P-S~(Mß/I): IO~q のヨウ来京 j 品 J,~ 体ペプチドの濃度は対 1.Î:,. するピークの ([1 川 J'( より

36 9 に示した結 ~ は 3 問の実験の V. 均他である fi.'ji~.[,hi 法により構築した Arg 伐必の側鎖は Pmc j 去で保設し Cys および Sα の -ül! 鎖 ~ 準法に li ~ 主生成物 ~~ ~ こノ j ミした

37 -~~8) 7 Sec~ 偲 z1)23) ~) 仁 ~ys S 民

39 した恩師点都大学張学部藤 )1 1d 本教授矢島治 IYl 才 'J~ 語教授 ( 現新潟発科人? 学長 ) に心から ~\ 酎甜いたします本研究は 11I ド 11; 修 -J: をはじめとする点都大テ業?;~I)~ 集品製造学教本の品氏の協 )J1!~ また本研究をまとめる, こ吋たりイ i 益な御 WJ ~ i' を臨りました京都必科大学亦路健本研究に際し終始心のこもった ILヒ l 陀激励を孤きました点都大学米子 ì~i)j I: 探俊郎助 "Ji Y. ÆIII~~ I ~ m 松 I 母 1: J~~!f ;j~pa! 疑株式会 4υ, J llk 之 Á: まじならびに元主分析を híl!h された京都大学 }í:;~ 分析ーセンターの ; 占氏二怯 I~; いたします

~

Title 変動社会における中国の独学試験制度の変容 Author(s) 高, 益民 Citation 京都大学生涯教育学図書館情報学研究 (2006), 5: 7-18 Issue Date 2006-03-31 URL http://hdl.handle.net/2433/43885 Right Type Departmental