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4 26 蛋 白質 核酸 酵素 Vol.44 No.2(1999) は 見 られ な い TBPはN末 端 側 の モ チ ー フ にLys97, Arg98,Thr112を もち,C末 端 側 の モ チ ー フ は対 応 す る位 置 にGlu,Leu,Va1を そ海 そ れ も つ こ う したN末 端側 と C末 端 側 の モ チ ー フ間 の 電 荷 や 疎 水 性 の わ ず か な違 い を認 識 してdTAFⅡ が 性 を もってTBPに 方向 結 合 して い る と 思 わ れ る TBP結 図2 立 体 構 造(ス 分 子 表 面 に大 き な疎 水性 パ ッ チ(青 テ レ オ 図)1) で 表 示)が 合 に 伴 な うunfold foldの 形 成 され て い る 誘 導 適 合 と よ く似 た 現 象 は VP16のTAFへ CREBの の 結 合37), コ ア クチ ベ ー タ ー CBPのKIXド メ イ ンへ の 結 合51)に も見 られ る また転 写 因 子 のDNAへ の結合 にお い て も 頻 繁 に 見 ら れ52),詳 細 な 熱 力 学 的 解 析 も行 な わ れ て い る53) 図3 dtafⅡ tbp複 鞍 状 のTBPの スDNAと DNAへ 結 合 して い る 右 の 図 は左 の 図 を下 か ら見 た も の の 複 合 体 の 解 析 か ら明 らか に な っ た よ うに, の 結 合 面 と な っ て い る17,18) TBPは を使 っ てDNA副 作 用 面 の74%は この 凹 面 溝 を押 し広 げて 副 溝 内 の塩 基,糖 い 疎 水 性 相 互 作 用 を す る TBP-DNA複 TBP相 Ⅶ. 合 体 の 構 造1) 凹 面 にTAFⅡ230が と強 合 体 での 相 互 疎 水 的 で あ る17) dtafⅡ 互 作 用 もお も に疎 水 的 で あ る 1,475?2に ぶ相 互 作 用 面 の 約70%は この 大 き な 疎 水 性 結 合 面 が 解 離 定 数 が10-9Mに dtafⅡ tbp間 も及 疎 水 性 相 互 作 用 となっ ている 及ぶ の 強 い 結 合 を もた らす ので あ ろ う 前 述 の とお り結 合 に 伴 いdTAFⅡ が 誘 導適 分 子 擬態 dtafⅡ ,,はtbpの 凹 面 に結 合 す る お もに疎 水 性 相 互 作 用 に よ る とい っ た 点 で,TBP-TATAボ ク ス 相 互 作 用 と共 通 点 を もつ TBPと 複 合 体 中 のTATAボ 分 子 表 面 は,TBP-TATAボ ック スDNAの ッ の 複合 体 で の ックス 副 溝 を広 げて激 し く湾 曲 し た 構 造 と よ く似 て い る(図4) また,dTAFⅡ のAsp29,Glu31,Glu51,Glu70,Asp73と い っ た疎 水 面 を 挟 む よ う に位 置 す る 酸 性 残 基 側 鎖 の 負 電 荷 は,複 合 体 中 でTATAボ ッ クスDNAの リン酸 骨 格 中 の リ ン原 子 の 位 置 と似 通 った と ころ に存 在 す る(図 合 に よ り大 き な 構 造 変 化 を示 す の に対 し て,複 合 体 中 2,4) 複 合 体 中 のTATAボ のTBPの TBPと 同 様 に 対 称 性 が 高 い の に 対 し て,dTAFⅡ 立 体 構 造 は単 独 の 場 合 やDNAと の複合体 中 鞍 状 構 造 は2つ の よ く似 た α/β構 造 のモ チー フ か ら な り,分 子 内 に 疑 似 の2回 対 して, 126 構造 は の 立 体 構 造 は対 称 性 が 低 い とい う差 異 はあるが, の もの と大 き く は変 わ ら な い TBPの ッ ク スDNAの 対 称 軸 を もつ16)の に 複 合 体 中 の 構 造 に は対 称 性 dtafⅡ は 非 常 に巧 妙 にTATAボ ッ クスDNA を分 子 擬 態 し て い る これ ま で 構 造 解 析 され た い くつ かのTBP-TATAボ ッ クスDNA複 合 体 で の,TATA

5 TFⅡDの サブユニットTAFは 擬態 により転写抑制を行なう 込 み,ATP-Cdk2に 27 見 られ る の とよ く似 た相 互 作 用 をCdk2 と行 な って い る50) ATPの 分 子 擬 態 を行 な っ て い る わ け で あ る こ う し て み る と蛋 白質 が分 子擬 態 によ って さま ざ ま な種 類 の イ ン ヒビター として 働 くの は,広 く見 られ る 現 象 で あ る こ と が わ か る し か し これ ら の 例 で 分 子 全 体 の 形 状 と分 子 間 相 互 作 用 が と も に 高 い 類 似 性 を示 す の はRNAの 分 子 擬 態 を す るEF-Gと DNAの 分 子 擬態 を す る みで ある Ⅷ転写抑制の解除 そ れ で はdTAFⅡ230に TBPのDNA結 よる 合の抑 制 の 解 除 は ど の よ う に して 起 こ る 図4 ク ス 複 合 体 TATAボ 合 体 dtafⅡ は ッ ク スDNAは の 正 の 荷 電 子 を 青,負 の で あ ろ うか dtafⅡ230の 分 子 擬 態1) (A,C).dTAFⅡ TBP複 分 子 表 面 を 表 示,,(B,D)TBP-TATAボ 分 子 表 面 を 表 示, dtafⅡ230,tataボ の 荷 電 子 赤 で 示 す.C,DはA,Bを の 分 子 表 面 の 形 状 や 荷 電 分 布 がTATAボ ッ ッ クスの 分 子 表 面 で そ れ ぞ れ 横 か ら 見 た も の で あ る TAFⅡ230 C末 端 部 分 がN末 る抑 制 解 除 を行 な って い る こ と が 示 さ れ て い る47) ま た ッ ク ス と似 て い る TBPは ボ ックスDNAの 列 やTBPの 立 体 構 造 は よ く似 通 って お り,塩 基 配 生 物 種 に 大 き く依 存 しな い した が っ て, 今 回 見 られ た のDNA結 分 子 擬 態 に よ るTBP 合 抑 制 は一 般 的 な も の で あ ろ う38) 蛋 白質 の 分 子 擬 態 に はい くつ か の例 が 知 ら れ て い る Thermus GTPと aquaticusの 複 製 伸 長 因 子EF-GはEF-Tu- 結 合 す る と きにEF-Tu-GTPと のtRNAと の 複合 体 中で そ っ くりの全 体 構 造 を とる54 55) またDNA 修 復 酵 素 の1つ で あ る ウ ラ シ ルDNAグ リコシ ダ ーゼ と その イ ン ヒ ビ タ ー 蛋 白 質 との 複 合 体 で は,イ ン ヒ ビタ 結 合 面 と同 じ,TBPの に結 合 す る こ とが,TBPの 230のTBP結 変 異 体 の 実 験 な どか ら示 さ 合 を 競 争 阻 害 す る こ とに よ って 転 写 活 性 化 を行 なって い るこ とを示 唆 す る(図5) GAL4,GCN4 な ど多 くの ア ク チ ベ ー タ ー ドメ イ ン は 酸性 残 基 を 多 く も ち,dTAFⅡ やVP16と 同 様 に 負 電 荷 を分 子 表 面 に もつ と思 わ れ る これ ら の 酸 性 ア ク チ ベ ー タ ー の 多 くもTBPの 凹 面 と相 互 作 用 す る こ とに よ りdTAFⅡ 230のTBP結 って い る と考 え られ る 合 を競 争 阻 害 し,転 写 抑 制 の解 除 を行 な い る56 58) た だ しイ ン ヒ ビ ター は グ リ コ シダ ー ゼの ウ ラ dtafⅡ (図5の シル 特 異 的 ポ ケ ッ トに は 入 り込 ん で い な い サ イ ク リ dtafⅡ230,2-156(図5の ンA-Cdk2-p27KiPE複 い る49,60) 領 域Ⅱ は基 本 転 写 因 子TFⅡAの 合 体 に お い て もp27Kip1のTyrの 側 鎖 芳 香 環 を含 む 部 分 がCdk2のATP結 合 部位 に入 り 凹 面 に競 争 的 れ て い る49,39) これ らの 実 験 の 結 果 は,VP16はdTAFⅡ ゼ のDNA結 擬 態 を して 多 くの 転 写 活 性 化 ドメ イ ン の タ ー ゲ ッ ト と な っ て い る VP16はDNAや ー の ロ イ シ ン な ど を含 む β ス トラ ン ドが グ リコ シ ダ ー 合 部 位 に入 り込 み,DNAの 端部 分 によ もあ るTBP上 領 域1)のTBPへ の結合 は 領 域Ⅱ)に よ って 安 定 化 され て 部(凸 面)の ヘ リ ッ ク スH2付 結 合部 位で 近 に結 合 127

6 28 蛋 白質 す る と 考 核酸 酵素 え ら れ て お Vol.44 NO.2(1999) り, dtafⅡ230はtfⅡaのtbp へ の 結 合 を 阻 害 す る60) こ れ はdTAFⅡ230のN末 端 の2 つ の 領 域,Ⅰ,Ⅱ 下 を 押 でTBPの 上 さ え 込 み,TFⅡA, TATAボ ッ ク スDNAへ の双 方 の 結 合 を阻 害 して い る こ と を 示 し, hand-off モ デル と 図5 よ ば れ て い る(図5)38,48,49) in vivoで は こ のdTAFⅡ230- TBP,あ 端 の領 域1(2 81)と 領 域Ⅱ(82 156)はTBPの2力 り転 写 抑 制 を行 な う ア クチ ベ ー タ ー やTFⅡAの 所 に 結合 す る こ とに よ 結 合 に よ り転 写抑 制 は解 除 され る る い はyTAFⅡ145- TBP間 hand-off モ デ ル に よ る転 写 抑 制 と 活 性 化 の機構48,691 dtafⅡ230のn末 の2つ の 相 互 作 用 は単 独 で は安 定 で な く,両 方 Ikura,M.:Cell,94, (1998) 揃 っ て 初 め て安 定 で あ る と考 え られ て い る し た が っ て,ア ク チベ ー タ ー や コ ア ク チベ ー ター がTBPの ら か 一 方 のTAFⅡ230結 230のTBP結 TBPか どち Matthews,B.W.:Nature,290, (1981) 3)McKay,D.B.,Steitz,T.A.:Nature,290, 合 部 位 と 結 合 し,dTAFⅡ (1981) 合 を 競 争 祖 害 す れ ば,dTAFⅡ230は ら離 れ,DNAやTFⅡAと 2)Anderson,W.F.,Ohlendorf,D.H.,Takeda,Y., 4)Lee,M.S.,Gippert,P.,Soman,K.V.,Case,D.A., Wright,P.E.:Science,245, (1989) 置 き換 わ って転 写 抑 5)Kissinger,C.R.,Liu,B.S.,Martin-Blanco,E., 制 の 解 除 が 行 な わ れ る とい うモ デ ル が 考 え られ て い る Kornberg,T.B.,Pabo,C.0.:Cell,63, (1990) (図5) 6)Luisi,B.F.,Xu,W.X.,Otwinowski,Z.,Freedman, L.P.,Yamamoto,K.R.,Sigler,P.B.:Nature,352, (1991) おわ りに っ てTAFに 今 回 のdTAFⅡ230-TBPの 複 合体 解析 によ よ る転 写 抑 制 の hand-off 機 構 が 示 さ れ, 7)Lee,M.S.,Kliewer,S.A.,Provencal,J.,Wright, P.E.,Evans,R.M.:Science,260, (1993) 8)Schwabe,J.W.,Chapman,L.,Finch,J.T., Rhodes,D.:Cell,75, (1993) ア ク チ ベ ー タ ー に よ る転 写 活 性 化 の 研 究 に 強 力 な 指 針 9)Ellenberger,T.E.,Brand1,C.J.,Struhl,K.,Har- を与 え た こ の 知 見 は真 核 生 物 の 転 写 の 活 性 化,抑 制 の分 子 機 構 の研 究 に 大 き く寄 与 す る またdTAF11230 のTATAボ ッ ク スDNAの 分 子 擬 態 は,こ れ まで 見 ら れ な か っ た 種 類 の もの で あ りEF-Gの Burley,S.K.:Nature,363,38-45(1993) --)Ferre-D'Amare,A.R.,Pognonec,P.,Roeder,R. 分子 擬態 ととも に 構 造 生 物 学 研 究 に 重 要 な 知 見 を 与 え る unfold fold遷 移 も転 写 因 子 間 の 複 合 体 形 成 に 多 く見 られ る も の で あ る が,原 rison,s.c.:cell,71, (1992) 10)Ferre-D'Amare,A.R.,Prendergast,G.,Ziff,E.B., G.,Burley,S.K.:EMBOJ.,13, (1994) 12)Clark,K.L.,Halay.E.D.,Lai,E.,Burley,S.K.: Nature,364, (1993) 13)BioScience用 語 ラ イ ブ ラ リ ー 転 写 因 子(田 梅 園 和 彦 子 レベ ル で 議 論 で き る 最 初 の デ ー タ の 編),羊土 14)Shirakawa,M.:蛋 1つ で あ る 今 後 の ア クチベ ー ター に よ るdTAF11230の TBP結 合 阻 害 解 除 の 機 構 の 原 子 レベ ル での 解 明 が待 た 白 質 核 酸 15)白 川 昌 宏 中 西 義 信:積 白川 図 を提 供 して くだ さ った トロ ン ト大学 伊 倉 光 彦 博 士,図 の提 供 論 を して くだ さ った 奈 良 先 端 科 学 技 術 大 学 院 大 学 古 久 立 出 版(1996) Hoffmann,A.,Horikoshi,M.,Chua,N.H., Roeder,R.G.,Burley,S.K.:Nature,360,40-46 (1992) 保 哲 朗 博 士 に感 謝 す る l7)kim,j.l.,nikolov,d.b.,burley,s.k.:nature, 365, (1993) 18)Kim,Y.,Geiger,J.H.,Hahn,S.,Sigler,P.B.: 文 献 )Liu,D.,Ishima,R.,Tong,K.I.,Bagby,S.,Kokubo, 1 T.,Muhandiram,D.R.,Kay,L.E,.Nakatani,Y., 128 酵 素,41, み 木 細 工 の 生 物 学(永 編),pp,9-38,共 16)Nikolov,D.B.,Hu,S.H.,Lin,J.,Gasch,A., と査 読,議 (1996) 中 西 れ る 村 隆 明 社(1995) Natrare,365, (1993) 19)Bagby,S.,Kim,S.,Maldonado,E.,Tong,K.I., Reinberg,D.,Ikura,M.:Cell,82, (1995) 田

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45 癌抑制遺伝子PTEN 酵 素活 性 を阻害 す る活性 中心 後述 付 近 で の ミス セ ン 者 に は 乳 癌 甲状 腺 癌 卵 巣 癌 が 発 生 しや す い こ とが ス 変 異 が 多 く 子 宮 内 膜 腫 で 頻 繁 に観 察 さ れ る よ うな 知 ら れ て い る Cowden病 ナ ン セ ン ス フ レ ー ム シ フ ト変 異 は あ ま り検 出 さ れ な

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