研究成果報告書(基金分)

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2 DNA cdna mrna DNA ( /) (PS) (PS-tag: RIIIRRIRR) PS scfv PS-tag PS-tag scfv (PMMA)(PC) -S- (GST)PC PMMA GST GST PMMA-tag: DVEGIGDVDLVNYFEVGAT- YTFNK PC-tag: NSNFFGLVDGLNF- AVQYLGK) -S- PS-tag PMMA-tagPC-tag 3 (scfv)c 3-1 GST PSPMMAPC (phi-psphi-pmmaphi-pc) 3 GST QCM GST (wt-gst) GST GST GST 3-2 PMMA (scfv)anti-cea scfv anti-rnase scfv scfv PMMA-tag scfv(scfv-pm) 8MUrea His Trap HP anti-rnase scfv scfvscfv-pm 8MUrea PBS scfv ph NaCl scfv scfv-pm 500g/ml scfv-pm MUrea 0.05M TAPS 500g/ml scfv-pm 0.05M TAPS(pH8.5) 0.5M Urea 3-3 PMMA

3 scfv-pm scfv-pm scfv-d5 (D10) PMMA ELISA Micro BCA PMMA scfv PMMA-tag 3-4 scfv-pm PMMA Anti-CEA scfv-pm anti-cea scfv-d5 100g/ml 370 g/ml 1l PMMA Anti-RNase scfv-pm scfv-d g/ml 320g/ml 1l 3-5 scfv-pm PMMA 1l 10nl GST Fig.1 QCM PBS GST-PM GST-PS wt-gst GST-PC PC GST-PS GST-PM phi-ps phi-pc PBST GST-PS (phi-psphi-pmma phi-pc) GST GST GST PSPC PMMA wt-gst PMMA-tag GST PMMA PMMA-tag Fig. 1 QCM GST (a) PS, (b) PMMA, (c) PC (a) PS (b) PMMA (c) PC 4-2 PMMA Fig.2 anti-cea scfv SDS-PAGE anri-cea scfv anti-cea scfv-pm

4 kda Fig.2 scfv scfv-pm SDS-PAGE scfv scfv-pm PMMA-tag scfv anti-cea scfv-pm 100% anti-rnase scfv-pm anti-rnase scfv anti-cea scfv anti-rnase scfv anti-cea scfv anti-rnase scfv 2 scfv anti-cea scfv scfv PMMA-tag scfv-pm 4.85 ph(7.2) ph-pi 2.4 anti-cea scfv-pm PMMA-tag ph anti-cea scfv-pm anti-rnase scfv-pm scfv-pm scfv-pm anti-cea scfv anti-cea scfv-pm ph NaCl 6 Anti-CEA scfv ph8.0~ph8.5 PMMA-tag C scfv-pm ph7.0~ph8.5 ph anti-rnase scfv anti-rnase scfv-pm anti-cea scfv PMMA-tag scfv-pm ph8.0ph8.5 0M NaCl 0.05M TAPS(pH8.5) 0.5M Urea Table M TAPS (ph8.0nacl 0M) Urea anti-cea scfv-pm anti-rnase scfv-pm 100% PMMA-tag scfv scfv-pm Table 1 scfv scfv-pm anti-cea scfv anti-cea scfv-pm anti-rnase scfv anti-rnase scfv-pm (%) 4-3 PMMA scfv-pm (a) (b) Fig. 3 PMMA scfv (a) Anti-CEA Ab, (b) Anti-RNase Ab

5 Fig.3 (a) Anti-CEA scfv-d5 scfv-pm PMMA ELISA scfv-d5(scfv-d10) scfv-pm Fig.3 (b) anti-rnase scfv-pm scfv-d10 PMMA-tag scfv PMMA MicroBCA PMMA plate scfv anti-cea scfv-pm anti-cea scfv-d5 anti-rnase scfv-pm anti-rnase scfv-d10 scfv PMMA-tag PMMA scfv 4-4 scfv-pm PMMA Fig.5 anti-cea scfv-pm anti-cea scfv-d5 100 anti-cea scfv-pm CEA 2.5ng/ml Fig.21 anti-rnase scfv-pm anti-rnase scfv-d10 10 anti-rnase scfv-pm RNase 2.5ng/ml PMMA scfv PMMA-tag Fig.6 anti-cea scfv-pm 1l anti-cea scfv-d5 1l anti-cea scfv-pm PMMA Fig.5 1 L scfv PMMA 4-5 scfv-pm PMMA Fig.6 scfv PMMA anti-rnase scfv anti-rnase scfv-pm 1

6 l anti-rnase scfv-d10 anti-rnase scfv-pm PMMA-tag 1l PMMA-tag 0.05M TAPS (ph8.5) PMMA-tag anti-cea scfv-pm anti-rnase scfv-pm PMMA scfv-pm anti-cea scfv-pm 0.05M ADA NaCl 0M anti-rnase scfv-pm 0.05M MOPS NaCl 50mM 1l scfv-pm PMMA scfv-pm scfv-d5 100 anti-rnase scfv-pm anti-rnase scfv-d Y. Kumada, K. Hamasaki, A. Nakagawa, E. Sasaki, T. Shirai, M. Okumura, M. Inoue, M. Kishimoto, Immobilization and functional reconstitution of antibody Fab fragment by solid-phase refolding, Journal of Immunological Methods, (2014) 2. Y. Kumada, T. Ootsuka, M. Asada, S. Yoshizuka, M. Chiyama, M. Sakane, F. MD Hasan, K. Sawada, K. Okumura, M. Kishimoto, Identification and characterization of peptide fragments for the direct and site-specific immobilization of functional proteins onto the surface of silicon nitride, Journal of Biotechnology, in press PMMA-tag scfv C PMMA scfv PMMA scfv-pm 1l scfv-pm

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