Database Center for Life Science Online Service The structure and function of nicotinic acetylcholine receptor

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1 The structure and function of nicotinic acetylcholine receptor

2 図3nAChRの チ ュー ブ状 結晶 受 容 体 分 子 は2量 体 と な って,チ ュー ブ の表 面 に らせ ん 対 称 性 を も っ て 配 置 して い る.そ の た め チ ュ ー ブ 状 結 晶 の 中 央 部 に は nachrを 上 か ら見 た 分 子 の 形(矢 印)を,ま 横 か ら見た 分 子 の形(矢 じ り)を,そ ケー ル バー:0.1μm)[文 献1よ た チ ュー ブ の 縁 に は れぞ れ 見 る こ とが で き る.(ス り許 可 を得 て 転 載] 変 化 が,ど の よ う に して 膜 貫 通 領 域 に伝 わ りイ オ ンチ ャ ネ ル の ゲ ー トを 開 口 させ るの か,そ の ア ロ ス テ リ ック な 仕 組 み に つ い て も ま っ た く解 明 され て い な か っ た. 図2シ ビレエ イ とそ の電気 器官 (a)こ の 写 真 にあ る Torpedo は,ヨ marmorata ー ロ ッパ 大西 洋 Ⅰ,電子顕微鏡法による構造解析 沿 岸 か ら地 中 海 に か け て生 息 して い る.そ の 他 に,米 国 カ リ フ ォ ル ニ ア 沿 岸 と 日本 近 海 にも 同 じ トル ペ ド類 の シ ビ レエ イ が い る. (b)発 生 学 的 に 筋 肉 に 由来 す る 電 気 器 官 は,シ ビ レエ イ の 身 体 の 左 右 に1つ ず つ 存在 してい る.最 大 で,お よ そ100Vの 放電を行 な うこ と がで き る.(ス ケー ル バ ー:50mm) 1,サ ン プル調製 nachrは,神 経 筋 接 合 部 の シナ プ ス 後 膜 に 高 密 度 に 存 在 し て い る.シ ビ レエ イ の 一 種 の 電 気 器 官(図2b)か らnAChRを 哺 乳 類 に至 る まで 高 い 相 同 性 を も っ て い る こ とが 知 られ ス 膜 を調 製 した,そ て い る.1次 カ コ ジ ル酸 ナ トリ ウ ム,1mM塩 構 造 の解 析 か ら疎 水 性 の 高 い 領 域 が 各 サ ブ ユ ニ ッ トに4ヵ 所 ず つ 同 定 され て い る.こ らM4と 名 づ け られ,こ の4つ れ らはM1か の 領 域 で 各 サ ブユ ニ ッ ト は 細 胞 膜 を貫 通 して い る と考 え られ て きた.そ 目の 膜 貫 通 領 域 で あ るM2が,細 して2番 胞 膜 の 内 外 をつ な ぐイ (Torpedo marmorata) 豊 富 に含 ん だ シナ プ して,こ の シ ナ プ ス 後 膜 を,100mM 化 カ ル シ ウム を含 むpH 6.8の リ ン酸 緩 衝 液 中 で 数 週 間 イ ンキ ュ ベ ー トす る こ と に よ り,"ら せ ん"対 称 性 を も っ たnAChRの チ ュ ー ブ状 結 晶(図3)を 作 製 し た1).こ の 結 晶 作 製 法 で は,高 塩濃 度 の 溶 液 処 理 や 界 面 活 性 剤 の 処 理 を ま っ た く して お ら オ ン の通 り道 を形 成 す る と と も に,イ オ ンチ ャ ネル の ゲ ー ト領 域 とな って い る と も予 測 さ れ て い た.こ れ まで 突 ず,チ 然 変 異 実 験 や 電 気 生 理 的 な解 析 に よ り,チ ャ ネ ル の イ オ 能 状 態 を 生 理 的 な 状 態 に 近 い 条 件 で研 究 す る こ とが で き ン輸 送 に 関与 して い る個 々 の ア ミノ 酸 残 基 の 役 割 や,膜 る.す で に こ れ ま で に も,nAChRの 貫 通 領 域 にお け る 相 対 的 な 配置 につ い て 多 くの情 報 が 蓄 性 化 状 態 に お い て,低 温 電 子 顕 微 鏡 を 用 い た構 造解 析 が 積 され て い る.し か し,そ れ らの 立 体 配 置 に関 す る 情 報 行 な わ れ て き て い る2 5). は,nAChRを は じめ他 の リ ガ ン ド開 閉 型 イ オ ンチ ャ ネ ル に お い て も,い まだ 明 らか に さ れ て い な か っ た.ま た, AChの 2 結 合 に よ りひ き起 こ され る 細 胞 外 領 域 で の 構 造 蛋 白 質 核 酸 酵素Vol.49No,1(2004) ュ ー ブ状 結 晶 中 で は受 容 体 や 脂 質分 子 が 生 体 内 に あ る状 態 で 保 た れ て い る.そ れ ゆ え,受 容 体 の 異 な る機 静止状 態 お よび活 2.電 子顕微鏡観察 nachrの チ ュ ー ブ 状 結 晶 を 含 む水 溶 液 を 銅 製 の グ リ

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4 (Lymnaea stagnails)

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9 1) Brisson, A., Unwin, P. N. T. : J. Cell Biol., 99, (1984) 2) Toyoshima, C., Unwin, N.: Nature, 336, (1988) 3) Unwin, N.: J. Mol. Biol., 229, (1993) 4) Unwin, N.: Nature, 373,37-43 (1995) 5) Miyazawa, A., Fujiyoshi, Y., Stowell, M., Unwin, N. : J. Mol. Biol., 288, (1999) 6) Fujiyoshi, Y., Mizusaki, K., Morikawa, K., Yamagishi, H., Aoki, Y., Kihara, H., Harada, Y. : Ultramicroscopy, 38, (1991) 7) Fujiyoshi, Y. : Adv. Biophys., 35, (1998) 8) Beroukhim, R., Unwin, N. : Ultramicroscopy, 70, (1997) 9) Miyazawa, A., Fujiyoshi, Y., Unwin, N. : Nature, 423, (2003) 10) Karlin, A. : Nature Rev. Neurosci., 3, (2002) 11) Frail, D. E., Mudd, J., Shah, V., Carr, C., Cohen, J. B., Merlie, J. P. : Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, (1987) 12) Brejc, K., Dijk, W. J., Klaassen, R. V., Schuurmans, M., Oost, J., Smit, A. B., Sixma, T. K. : Nature, 411, (2001) 13) Unwin, N., Miyazawa, A., Li, J., Fujiyoshi, Y. : J. Mol. Biol., 319, (2002) 14) Wick, M. J., Mihic, S. J., Ueno, S., Mascia, M. P., Trudell, J. R., Brozowski, S. J., Ye, Q., Harrison, N. L., Harris, R. A. :

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