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- りさこ わくや
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2 第42巻 第6号,2003年 445 抱 え る 問 題 は 少 な くな い 今 回 わ れ わ れ は,県 立 が ん セ ン タ ー 新 潟 病 院 にお け る 胃癌 手 術 症 例 の 細 胞 診 成 績 を ま とめ,こ III. す る. 日本 臨 床 細 胞 学 会 に よ る 胃癌 の 腹 腔 洗 浄 細 胞 診 の 検 体 処 理,標 II. 対 象 と方 法 か ら2000年 ま で の10年 間 の当 院 胃 癌 手 術 例 の う ち 術 中 細 胞 診 が 実 施 さ れ た698例 性459例,女 性239例 62歳(21 88歳)で 潤)と であ で 男 女 比2.1,年 あ っ た.洗 で 壁 深 達 度 がT2以 上(筋 浄 方 法 は,術 50ml回 全 量(約50ml)を200Orpm,3分 グ ラ ス 窩 よ り洗 浄 液 を 腹 膜 因 子 を 調 べ,細 織 分 化 度, 胞 診 判 定 との 関 連 性 を検 討 した. の327例 に つ い て は,生 存 率 をKaplan- 下,HEと 略 す)染 本2枚,Pap を 作 製 して い る.手.標 本2枚 術 室 よ り提 出 さ れ た 検 体 間 遠 心 し沈 渣 を得 に 風 乾 塗 沫 標 本 を2枚 作 製 した の ち,血 検 体 の 場 合 は1.2%シ 溶 血 後 遠 心 し,そ 性 ュ ウ酸 ア ン モ ニ ウ ム で 混 和 し て, の 沈渣 か らオ ー トス メ ア 標 本 を4枚 作 製 して い る.2枚 当 手 術 材 料 の 癌 の 深 達 度,組 年 て,HE用 速 時 に はDiff- 院 で は腹 腔 洗 浄 細 胞 診 は ほ と ん ど が 迅 速 で 提 出 さ れ,HE標 前検索 収 し た. 方 法 は,該 やHematoxylin-Eosin(以 色 も推 奨 さ れ て い る.当 の 計4枚 層 あ るい は さ らに深 い癌 浸 腹 腔 内 に注 入 し,ダ 色 を基 本 と さ れ,迅 齢平 均 判 断 され た 胃癌 手 術 例 の 開 腹 直 後 に生 理 食 塩 水 100mlを 本 作 製 法 の ガ イ ドラ イ ン10)で は,Pap.染 色,May-Giemsa染 Quik法 対 象 は,1991年 る.男 標 本 作 製 か ら結 果 報 告 ま で れ らの諸 問題 につ い て考察 したので 報告 にPap.染 ル コ ー ル で 保 存 し,数 色 を施 し,2枚 は95%ア 日後 の免 疫 染 色 用 に供 して い る. HE標 本 は 短 時 間 の 染 色 が 可 能 で,赤 血 球 が邪 魔 に Meier法 に て 求 め,log-rank testで 有 意 差 を検 定 した. な らず 標 本 全 体 の 細 胞 像 が 把 握 しや す い 癌 細 胞 集 団 な お,細 胞 診 判 定ClassIIIは 規 約 上CYOに は 重 積 性 が あ る た め 風 乾 して も半 乾 燥 状 態 で,結 合性 の 強 い 大 型 異 型 細 胞 集 団 と な っ て 認 め られ る.す なわ た め 陰 性 に 含 め,ClassIV,Vを 分 類 され る 細 胞 診 陽 性 と し た. 1998年 か らは 免 疫 染 色 も併 用 し た.1998年1月 2000年12月 ま で の227例 未 染 標 本 を 作 製 し,数 ロ ー ナ ル 抗 体(II-7, で は,細 希 釈CEAモ る. ノク 用 いて 下,Pap.と 略 す) 染 色 との 陽 性 率 と の 関 係 につ い て 検 討 を行 っ た.免 疫 染 色 の判 定基準 は周 囲 の細胞 と明瞭 に区 別 され るほ ど に 強 陽 性 に 染 色 さ れ た細 胞 の み を 陽 性 と し た.使 たCEAモ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 はCEA対 を も ち,血 色 は結 合性 のあ る細胞 集 団 の観 察 に適 して お り,術 前 の 生 検 組 織 標 本 な ど と の 比 較 も容 易 で あ Cytomation社)を 免 疫 染 色 を 行 い,Papanicolaou(以 ち,HE染 胞診 標 本作 製 時 に 日 後200倍 Dako か ら Pap.標 本 は,通 常 細 胞 診 標 本 の 約 半 分 の 時 間 で染 色 し て い る が,染 色 性 は ほ と ん ど変 わ らな い (Photo.1).な 分 化 癌 が推 定 され る細 胞 や疑 わ お,低 し い 細 胞 が 認 め ら れ た 場 合 は,Alcian-blue(以 下, 用 し して高 い特異 性 液 系 細 胞 と は 反 応 しな い が 内 因 性 ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ 阻 害 が 不 十 分 な 場 合backgroundが 非 特異 的 に 軽 く染 色 さ れ る こ と が あ る.し の基準 に か し,こ よ っ て腫 瘍 細 胞 の 陽 性 陰 性 判 定 に は 困 らな か っ たさ ら に,2000年4月 MOC-31モ か ら12月 の66例 ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体(Dako で は100倍 希釈 Cytomation社) も 追 加 し て 同 様 に 免 疫 染 色 し,細 胞 診 判 定,CEAと MOC-31の 染 色 結 果 の 比 較 検 討 を 行 っ た. な おCEAとMOC-31の CEA染 比 較 の た め,細 色 の 結 果 が 一 致 しな か っ た26例 以 前 の37例 で は,Pap.染 疫 染 色 を 行 っ た.免 胞 診判 定 と を 含 む2000年 色 標 本 を 脱 色 してMOC-31免 疫 染 色 はISH-20自 動 免 疫 染 色装 a Photo.1 b Peritoneal dicated 置(サ ク ラ)を タ ー ナ ー 社)に 使 用 し,SAB法(マ て 行 っ た. キ シ ダ グ,日 本 clusters Pap. the of stain, ~40). by cytology. arrow mesothelial heads. cells Tumor Note (a: cells the HE are in- sheet-like stain, b:
3 Table 1 Time required for final report of peritoneal cytology results HE stain 11 `38 (average, 20) minutes PAP stain 17 `48 (average, 30) minutes Report time 22 `92 (average, 39) minutes Table 2 Results of peritoneal cytology according to depth of tumor invasion (1991 `2000)
4 Table 3 Relation between depth of invasion and histological differentiation (1991 `2000) Table 4 Results of peritoneal cytology according to histological differentiation (1991 `2000) Abbreviations: W/d=well differentiated M/d=moderatey differentiated P/d=poorly differentiated Abbreviations: W/d=well differentiated M/d=moderately differentiated P/d=poorly differentiated Fig.1 Survival curves for various factors
5 日本 臨床 細 胞 学 会雑 誌 448 Table 5 Relation and between CEA peritoneal immunocytochemistry cytology results (1998 `2000) Table 6 Results of to depth peritoneal of tumor cytology invasion, improved according by CEA im- munocytochemistry (1998 `2000) Photo.2 Peritoneal large nuclei logically *: including one positive **: including four positive ***: including twelve (-)の13例 cytology. and abundant identified they were CEA (a: as Isolated cells cytoplasm malignant cells. immunocytochemically Pap. stain, b: with were cyto- However, negative for CEA, ~100). case for CEA cases positive for CEA cases for CEA を再 鏡 検 した が,い ず れ も細 胞 学 的 に は 腫 瘍 細 胞 と認 識 可 能 な異 型 を備 え た 細 胞 で あ っ た (Photo.2).一 方,細 (10%)がCEA(+)で 胞 診(-)の176例 あ っ た.こ で は,17例 の17例 を詳 し くみ Photo.3 る と(Table (6%),深 6),深 達 度seま がCEA(+)で た はsiで あ っ た.今 あ り 細 胞 診(-)に (36%)あ 達 度ssま っ た.腹 で で は83例 は91例 Peritoneal 中5例 中12例(13%) 回ClassIIIは698例 中11例 little cytological cally showed stain. b: 水 中 の 低 分 化 型 腺 癌 細 胞 は,異 胞 診 判 定 が む ず か し く な る(Photo.3).seま 型 た はsi 31例 中,細 胞 診(+)ま MOC-31とCEAの お い て(Table 85%,MOC-31とCEAの な み に,CEA(+)を 偽 陰性 例 が 多 く 細 胞 診 判 定 と 同列 に扱 っ て 腫 瘍 細 胞 陽性 と し た 場 合,細 胞 診 陽 性 率 は約 肉 眼 的 腹 膜 播 種 の み ら れ な いP(-)196例 StageIVに of CEA (a: Pap. た はCEA(+)が26例 細 胞 診(-)70例 あ っ た(Table であ 7). 8),MOC-31と 細胞 診 の判 定 一致 率 は 判 定 一 致 率 は75%で の う ちCEAとMOC-31が 性 で あ っ た 症 例 が4例 に あ っ た. ともに陽 あ り,再 鏡 検 し た と こ ろ,1例 の み で あ る が 見 落 と し と判 断 さ れ る症 例 も存 在 し た. 上 した. る と,計42例(21%)が with 両 者 の 免 疫 染 色 を施 し た103例 の 症 例 で 細 胞 診(-),CEA(+)の 胞 診(+)が25例 expression cells imunocytochemi- CEA. ~100). り,そ の 一 致 率 は84%で で は 低 分 化 型 腺 癌 の 割 合 が 増 す た め に,深 達 度 が 高 度 8%向 the Isolated that 含 ん だ が,CEA(+)が4例 性 の 乏 しい 単 離 性 細 胞 と な っ て 出 現 す る こ とが 多 く細 出 現 した.ち cytology. atypia あ り,CEAの 中,細 み 陽 性 の17例 を含 め 新 規 約 で はCY1と な り 分 類 さ れ る こ と と な っ た.な お,P(+) CEAとMOC-31は お お よそ相 関 す るが 染 色 結果 の 異 な る 例 も少 な か ら ず 存 在 し た.CEA(+),MOC31(-)は14例 た.細 あ り,う ち 細 胞 診 陰 性 は13例 胞 診 陰 性,CEA(-),MOC-31(+)の5例 を数 え の
6 Table 7 Relation between peritoneal cytology results and P factor (1998 `2000) Photo.4 Peritoneal cytology. Small isolated cells, negative for CEA and positive for MOC-31, exhibiting slight irregularities in their nuclear contours (a: Pap. stain, b: MOC-31, ~100). Table 8 Relation between peritoneal cytology and immunocytochemistry results (1998 `2000) Table 9 Tumor recurrence within two years of surgery (1998)
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8 Abstract Objective: Peritoneal cytology provides valuable information for the staging of gastric cancer. The aim of this study was to evaluate the predictive value of intraoperative peritoneal cytology in patients with gastric cancer in Nii- gata Cancer Center Hospital. Study Design: During the past 10 years, 698 patients with gastric cancer underwent a gastrectomy. Peritoneal cytology was requested for these patients. Using HE staining and the Papanicolaou technique, specimens were cytologically examined. Immunocytochemical studies for CEA and MOC-31 were also performed during the last three years. Results: Patients with positive results for malignant cells had a significantly poor prognosis that was not related to tumor developement. As the extent of tumor invasion deepened, the rate of poorly differentiated adenocarcinoma increased. In poorly differentiated tumors, single tumor cells with cytologi- low-grade atypia were apt to be observed in the peritoneal cally s. The recurrence rate in patients with positive resutls for CEA or MOC-31 was significantly high. When immunocyto- positivity was applied on a malignant cytology basis, chemical the rate of positivity was 11%.
9 Conclusions: Peritoneal cytology is important predicting the prognosis and possibility of relapse in patients with gastric cancer. However, morphological examinations, such as HE and the Papanicolaou technique, rarely fail to detect cancer cells. To improve diagnostic accuracy, immunocytochemical studies are needed. Iitsuka, Y., kaneshima, S., Tanida, O., et al. Intraperitonal 11) free cancer cells their viability in gastric cancer. and Cancer 1979; 44: 1476 ` ) Sampson, J.A. Implantation peritoneal carcinomatosis of ovarian origin. Am J Pathol 1981; 7: 423 ` ) Kodera, Y., Nakanishi, H., Yamamura, Y., et al. Prognostic Value and Clinical implication of disseminated can- cer cells in the peritoneal cavity detected by reverse transcriptase-polymerase chain reaction and cytology. Int J Cancer 1998; 79: 429 ` ) Nomoto, S., Nakao, A., Takeuchi, Y., et al. Intraoperative peritoneal cytology with the rapid immunoperoxidase method using microwave irradiation Oncol 1995; 60: 30 `34.. Jsurg 19) Burke, E.C., Karpeh, M.S., Brennan, M.F. Laparoscopy 8) Kodera, Y., Yamamura, Y., Shimizu, Y., Torii, A., Harai, T., et al. Peritoneal cytology: prognostic value of positive finding in patient with carcinoma undergoing gastric apotentially curative resection. J Surg Oncol 1999; 72 (2): 60 `64. in the management of gastric adenocarcinoma. Ann Surg 1996; 225: 262 `267.
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