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せとかままだ
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1 ISSN 東京大学アイソトープ総合センター VOL. 37 NO アイソトープ総合センターの将来展望 /

2 生きた細胞内の分子過程を時間空間計測する蛍光プローブの開発 1. はじめに Fura-2 Fura-2 198 1, 2 3, 4 2.

2 2 生きた細胞内の分子過程を時間空間計測する蛍光プローブの開発 1. はじめに Fura-2 Fura , 2 3, 4 2. 生体脂質分子の機能とその分析 3,4,- phosphatidylinositol 3,4,-triphosphate; PI (3,4,) P 3 1 PI 3,4, P 3 PI 3,4, P 3 PI 3,4, P 3 PI 3,4, P 3 PI 3,4, P 3 100

VOL. 37 NO. 4 2007. 3. 26 3 PI 3,4, P 3 PI 3,4, P 3 Fllip 3.

3 VOL. 37 NO PI 3,4, P 3 PI 3,4, P 3 Fllip 3.PI(3,4,5)P 3 の蛍光プローブの設計 Fllip 2 Fluorescence Resonance Energy Transfer; FRET PI 3,4, P 3 CFP YFP CFP YFP Green Fluorescent Protein; GFP 6 PI 3,4, P 3 Grp1 Pleckstrin Homology Domain; PHD CFP PHD YFPGlu-Ala-Ala-Ala-Arg 図 1 ホスファチジルイノシ PI 3,4, P 3 トール 3,4,5- 三リン酸 (PI (3,4,5)P 3 ) の構造 hinge PHD-CFP PI 3,4, P 3 Fllip PHD PI 3,4, P 3 PHD-CFP CFP YFP FRET FRET CFPYFP 図 2 PI(3,4,5)P 3 の蛍光プローブ (Fllip; フリップ ) の原理 Ex, ; Em, ; MLS,, CFP, ; YFP, ; PHD, ; FRET, FRETCFP YFP CFPFRET YFP YFP FRET

4 4 4.PI(3,4,5)P 3 の可視化計測 PI 3,4, P 3 Fllip-pm PDGF 3 CFP/YFP PI 3,4, P 3 Fllip Fllip Fllip PI 3,4, P 3 plasma membrane; pm Gln-Gly-Cys-Met-Gly- Leu-Pro-Cys-Val-Val-Met endomembranes; em Gln-Gly-Ser-Met-Gly-Leu-Pro-Cys-Val-Val-Met PI 3,4, P 3 Fllip-pm, Fllip-em PDGF Fllippm FRET PDGF PI 3,4, P 3 PI 3,4, P 3 Fllip-em PDGF Fllip-em2 FRET 3 図 3 PI(3,4,5)P 3 の細胞内動態 PI 3,4, P 3 PI 3,4, P 3 Fllip-pm Fllip-em PI 3,4, P 3 PI 3,4, P 3 2 PI 3,4, P 3 PI 3,4, P 3 Fllip PI 3,4, P 3 PI 3,4, P 3 Fllip Fllip Fllip PI 3,4, P 3 Fllip PHD PI 3,4, P 3 PHD 7 5. おわりに

5 VOL. 37 NO 文献 1 ) Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, R.Y., A new generation of Ca 2+ indicators with greatly improved fluorescence properties. J. Biol. Chem. 198, 260, ) Tsien, R.Y., Fluorescence imaging creates a window on the cell. Chem. Eng. News 1994, 18, ) Umezawa, Y., Genetically encoded optical probes for molecular processes in living cells. Trac-Trends Anal. Chem. 200, 24, ) Sato, M., Imaging molecular events in single living cells. Anal. Bioanal. Chem. 2006, 386, ) Sato, M.; Ueda, Y.; Takagi, T.; Umezawa, Y., Production of PtdInsP 3 at endomembranes is triggered by receptor endocytosis. Nature Cell Biol. 2003,, ) Miyawaki, A.; Tsien, R.Y., Monitoring protein conformations and interactions by fluorescence resonance energy transfer between mutants of green fluorescent protein. Method. Enzymol. 2000, 327, ) Sato, M.; Ueda, Y.; Umezawa, Y., Imaging diacylglycerol dynamics at organelle membranes. Nature Methods 2006, 3, システインの酸化的修飾による蛋白機能の調節はじめに Cys -SOH -SO 2 H -SO 3 H -S-S- Cys

6 6 OxyR ジスルフィド結合の形成と開裂による転写因子 OxyRの活性制御 OxyR OxyR OxyR OxyR RNA OxyR OxyR OxyR OxyR OxyR 6 Cys Cys 2 Cys OxyR SDS SDS-PAGE Cys Cys Cys Cys Cys SDS-PAGE Cys OxyR 199-Cys 208-Cys in vivo 1 OxyR OxyR C2S 2 CysC143S C180S C29S OxyR C199S C208S

7 VOL. 37 NO 図 1 システインセリンのアミノ酸置換を持つ変異型 OxyR でのジスルフィド結合形成 OxyR Cys 30 1µM 30µM OxyR OxyR OxyR おわりに Yap1 Cys Cys 平成 18 年度受託研究等の受入について 4,998,000 1,200,000

8 8 巻出義紘先生の最終講義行われる平成 19 年度新規放射線取扱者全学一括講習会のお知らせ RI RI RI

9 VOL. 37 NO RI X RI 132 A B A B A B A A B RI 17 A B RI X X 委員会だより

10 10 センター日誌 opqropqropqropqropqropqropqropqropqropqropqropqropqropqropq 東京大学アイソトープ総合センターニュース目次巻頭言 1 研究紹介 2 報告学内 RI 管理メモ 19 8 委員会だより 9 センター日誌 10 編集後記 VOL. 37 NO

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1_alignment.ppt " " " " n " n n " n " n n n " n n n n " n LGPSSKQTGKGW-SRIWDN! + +! LN-ITKSAGKGAIMRLGDA! " n -------TGKG--------!! -------AGKG--------! " n w w w " n w w " " " 11 12 " n w w w " n w w A! M! O! A!