くり審査基準

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あきみふしはら
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1 2019 年 1 月コムギ種 Wheat (Triticum aestivum L.)

2 コムギ種審査基準 Ⅰ. 審査基準の対象 (Subject of these Guidelines) この審査基準はイネ科 (Poaceae) コムギ属 ( Triticum L.) のフツウコムギ種 (T. aestivum L.) の全ての品種に適用する Ⅱ. 提出種苗 (Material Required) ⅰ) 種苗の形態種子 ⅱ) 提出時期審査当局が指定する時期 ⅲ) 数量 1,000 粒更に当局の要請があった場合は穂を 100 本以上提出する提出する種子は発芽率純度含水量等保存に適したものであること ⅳ) 提出する種苗は重要な病害虫に汚染されていない十分に健全なものであること ⅴ) 提出種苗は審査当局が指示した場合を除き薬剤その他の処理をしていないものであることもし処理が行われている場合はその処理の詳細について記載すること Ⅲ. 試験の実施 (Conduct of Tests) ⅰ) 栽培条件特性の確認が十分にできる正常な生育が可能な条件下で実施する ⅱ) 最低供試個体数 1,000 個体 (2 反復 ) 穂列試験の場合 100 穂 ⅲ) 栽培期間 2 生育周期 ⅳ) 調査方法調査個体数特に指示がない限り植物体 20 個体又は各個体から採取した部分 20 個とする調査時期特に指示がない限り特性表の調査方法欄に記載した十進コードの時期に行う ⅴ) 特別な試験特別な条件下でのみ発現する特性があり出願者が申告し方法等が十分に提示され審査当局が合意した場合は特別な栽培試験を実施することがある Ⅳ. 判定基準 (Standards for decisions) 判定は登録出願品種審査要領の区別性均一性及び安定性 (DUS) 審査のための一般基準に基づくものとする均一性については供試個体数が 1000 の場合許容される異型個体数は3であるまた穂については 100 の場合許容される異型個体数は3である Ⅴ. グループ分けに使用する形質 (Grouping of Varieties) ⅰ) 出穂期 ( 形質 4) ⅱ) 草丈 ( 形質 9) ⅲ) 穂首直下の節間の髄の厚さ ( 形質 10) ⅳ) 芒の有無 ( 形質 14) - 1 -

3 ⅴ) 穂の色 ( 形質 16) ⅵ) まき性 ( 形質 25) Ⅵ. 特性表で使用する記号の説明 (Legend) G: グループ分けに使用する形質 (): 必須形質 QL: 質的形質 QN: 量的形質 PQ: 擬似の質的形質 (+):Ⅷ. に特性表の説明図等を示す MG: 区別性判定のため植物体又は植物体の部分をグループで計測 MS: 区別性判定のため個々の植物体又は植物体の部分を計測 VG: 区別性判定のため植物体又は植物体の部分をグループで観察 VS: 区別性判定のため個々の植物体又は植物体の部分を観察網掛け ( 特性表のピンク色の部分 ): 願書に添付する説明書 ( 種苗法施行規則第 7 条別記様式第 2 号 ) に出願者が記載する特性及び階級値状態区分質的形質及び擬似の質的形質の場合すべての状態が特性表に記載してあるしかし 5 階級以上の状態がある量的形質の場合省略した状態が用いられることがある例えば 9 階級の状態による量的形質の場合審査基準の状態は以下のとおりに略されることがある状態階級 (State) (Note) ( 日本語 ) (English) 小 small 3 中 5 大 large 7 しかし以下の9 階級の状態を品種の記述として使用できるがその場合には適切に使用するよう留意する - 2 -

4 状態階級 (State) (Note) ( 日本語 ) (English) 極小 very small 1 かなり小 very small to small 2 小 small 3 やや小 small to 4 中 5 やや大 to large 6 大 large 7 かなり大 large to very large 8 極大 very large 9-3 -

5 Ⅶ. 特性表 (Table of Characteristics) 形質番号UPOV 記号形質階状態 (Characteristics) 調査定義 (State) 級方法 ( 日本語 ) (English) ( 日本語 ) (English) 標準品種 (Ex.Var.) 備考 1 1 QN (+) 2 2 QN () (+) 3 4 QN (+) 4 5 QN () G 5 6 QN () (+) 子葉しょうのアントシアニン着色の強弱 Coleoptile: anthocyanin coloration 本葉が出始めた時の子葉しょうのアントシアニン着色の強弱草姿 Plant: growth habit 第 5~7 分げつ期の株の姿反曲した止め葉 Plant: frequency of 反曲した止め葉を持つを持つ個体の出 plants with recurved 個体の出現頻度現頻度 flag leaves 出穂期 Time of ear 有効茎数の 50% の穂の emergence (first 第 1 小穂が見えた期日 spikelet visible on 50% of ears) 止め葉の葉しょ Flag leaf: glaucosity 止め葉の葉しょうの白うの白粉の強弱 of sheath 粉の強弱観察 VG 観察 VG 観察 VG 測定 ( 日 ) MG 観察 VG 極弱弱中強立半立半立 ~ 中中半ほふくほふく低中やや高高早中晩弱中強 very weak weak strong erect semi-erect semi-erect to intermediate intermediate semi-prostrate prostrate low to high high early late weak strong シロガネコムギシロガネコムギシロガネコムギ - 4 -

6 形質P形質階状態O番V(Characteristics) 調査号定義 (State) 標準品種級号U 記方法 (Ex.Var.) ( 日本語 ) (English) ( 日本語 ) (English) 6 QN 止め葉の白粉の Flag leaf: glaucosity 止め葉の葉身裏面の白観察 3 弱 Weak シロガネコムギ強弱 of blade (lower side) 粉の強弱 VG 中 7 強 strong 7 7 QN 穂の白粉の強弱 Ear: glaucosity 穂の白粉の強弱観察 3 弱 Weak () VG 5 中強 strong 8 8 QN 穂首の白粉の強 Culm: glaucosity of 穂首の白粉の強弱観察 3 弱 weak 弱 neck VG 5 中強 strong 9 9 QN 草丈 Plant: length (stem, 植物体の先端までの高測定 3 低 short () ear, awns and scurs) さ cm 5 中 G MS 7 高 long QN 穂首直下の節間 Straw: pith in cross 穂首節直下の節間の中観察 1 無又は極薄 absent or very thin シロガネコムギ () の髄の厚さ section (halfway 央部の横断面の髄の厚 VG (+) between base of ear さ中 G and stem node below) 3 極厚又は充満 very thick or filled PQ 穂の形 Ear: shape in profile 側面から見た穂の形観察 1 先細 tapering () VG 2 両側平行 parallel-sided (+) 92 3 やや棍棒状 semi-clavate 4 棍棒状 clavate 5 紡錘状 fusiform シロガネコムギ備考

7 号UPOV 記号形質階状態 (Characteristics) 調査定義 (State) 級方法 ( 日本語 ) (English) ( 日本語 ) (English) 標準品種 (Ex.Var.) 備考形質12 12 QN () (+) QN (+) QL () (+) G QN () QL () G QN (+) QN (+) 粒着密度 Ear: density 穂の粒の粗密観察 VG 穂の長さ Ear: length (excluding 穂の長さ ( 長芒短芒測定 awns and scurs) を含まない ) cm MS 芒の有無 Awns or scurs: 穂の頴の長芒又は短芒観察 presence の有無 VG 穂の先端の芒の長さ Awns or scurs at tip of ear: length 穂の先端部に着く粒の長芒又は短芒の長さ測定mm MS 穂の色 Ear: color 糊熟期 ~ 完熟期の穂の観察色 VG 穂軸の先端凸部表面の毛の多少 Apical rachis segment: hairiness of convex surface 穂軸の先端部表面に着生する毛の多少観察 VG 護頴の肩部の幅 Lower glume: 穂中央部の小穂護頴の観察 shoulder width 肩部の幅 VG (spikelet in mid-third 粗中密短やや短中長両方無短芒有り長芒有り短中長白着色少中多狭中広 lax シロガネコムギ dense short short to シロガネコムギ long both absent scurs present awns present シロガネコムギ short long white シロガネコムギ colored weak strong narrow broad

8 形質P形質階状態O番V(Characteristics) 調査号定義 (State) 標準品種級号U 記方法 (Ex.Var.) ( 日本語 ) (English) ( 日本語 ) (English) of ear) QN 護頴の肩部の形 Lower glume: 穂中央部の小穂護頴の観察 1 下がる sloping (+) shoulder shape 肩部の形 VG 3 やや下がる slightly sloping (spikelet in mid-third 水平 straight of ear) 7 上がる elevated 9 2つ目の頂点 strongly elevated を作り強く上 with 2nd point がる present QN 護頴の嘴の長さ Lower glume: beak 穂中央部の小穂護頴の観察 3 短 short length (spikelet in 先端嘴の長さ VG 5 中 mid-third of ear) 長 long QN 護頴の嘴の形 Lower glume: beak 穂中央部の小穂護頴の観察 1 直 straight (+) shape (spikelet in 先端嘴の形 VG 3 やや曲がる slightly curved mid-third of ear) 曲がる moderately curved 7 強く曲がる strongly curved 9 鋭角に曲がる geniculate QN 護頴の内側の毛 Lower glume: extent 穂中央部の小穂護頴内観察 3 少 weak (+) の多少 of internal hair 面の毛の着生の多少 VG 5 中 (spikelet in mid-third 多 strong of ear) PQ 原麦粒の色 Grain: color 原麦粒の色観察 1 白 white () VG 2 赤 red シロガネコムギ 92 備考

9 形質P形質階状態O番V(Characteristics) 調査号定義 (State) 標準品種級号U 記方法 (Ex.Var.) ( 日本語 ) (English) ( 日本語 ) (English) QN 原麦粒のフェノ Grain: coloration with 原麦粒のフェノール反観察 3 淡 light (+) ール反応による phenol 応による着色の濃淡 VG 5 中着色の濃淡 92 7 濃 dark QL まき性 Seasonal type まき性のタイプ観察 1 秋まき型 winter type () VG 2 中間型 alternative type (+) 3 春まき型 spring type シロガネコムギ G 電気泳動法を用いる形質 ( 形質 26~28) 検定 Characteristics derived by using Electrophoresis ( グルテニン組成 Glutenin composition ) QL Glu-A1 遺伝子座 Allele expression at Glu-A1 遺伝子座にあ 1 バンド 1 band 1 (+) にある対立遺伝 locus Glu-A1 る対立遺伝子の発現 2 バンド 2 band 2 子の発現 3 バンド無し no band シロガネコムギ QL Glu-B1 遺伝子座 Allele expression at Glu-B1 遺伝子座にあ 1 バンド 6+8 bands 6+8 (+) にある対立遺伝 locus Glu-B1 る対立遺伝子の発現 2 バンド 7+8 bands 7+8 シロガネコムギ子の発現 3 バンド 7+9 bands バンド 7( 又は band 7(or 7+9 in the 形質番号 28 の presence of bands バンド 5+10 と 5+10 of char.28) ともにバンド 7+9) 5 バンド bands 備考

10 形質号U28 29 QL (+) 形質階状態 (Characteristics) 調査定義 (State) 級方法 ( 日本語 ) (English) ( 日本語 ) (English) Glu-D1 遺伝子座にある対立遺伝子の発現 Allele expression at locus Glu-D1 Glu-D1 遺伝子座にある対立遺伝子の発現 29 QN 稈の長さ Stem: length 最長稈の地際から穂首節までの長さ測定cm MS PQ 稃の色 Glume: color 完熟期の稃の色観察 VG バンドバンドバンド 20 バンドバンド 2+12 バンド 3+12 バンド 4+12 バンド 5+10 バンド短やや短中やや長長淡黄黄黄褐褐赤褐赤赤紫紫濃紫標準品種 (Ex.Var.) bands bands band 20 bands bands 2+12 bands 3+12 bands 4+12 bands 5+10 bands シロガネコムギ short シロガネコムギ short to to long long light yellow yellow シロガネコムギ yellowish brown brown reddish brown red reddish purple purple deep purple 備考

11 形質P形質階状態O番V(Characteristics) 調査号定義 (State) 標準品種備級号U 記方法 (Ex.Var.) 考 ( 日本語 ) (English) ( 日本語 ) (English) 31 PQ 粒の形 Grain: shape 原麦粒の長さと幅の比観察 VG 1 2 極円円 round round/oval 92 3 中 oval シロガネコムギ 4 長 slender 32 QN 千粒重 1000 grain weight 原麦粒の千粒の重さ測定 3 小 low g MG 5 中シロガネコムギ 92 7 大 high 33 QL うるちもちの別 Grain: glutinous or non-glutinous endosperm 胚乳でんぷんのうるち性もち性の別観察 VS うるちもち non-glutinous glutinous シロガネコムギ 34 QN 成熟期 Time of maturity 全穂数の 80% の穂首部が黄化し粒の硬さ観察 MG 3 5 早中 early シロガネコムギがろう程度になった日晩 late 35 QL 粒質 Grain: glassiness 硝子質の多少 ( 硝子質の粒が 70% 以上の場合を硝子質 30% 以下の場合を粉質とする ) 測定 MG 粉質中間質硝子質 floury glassy シロガネコムギ : 標準品種欄のシロガネコムギ及びは暖地温暖地における標準品種である ( 標準品種設定に際して調査を実施した調査地 : 福岡県筑後市茨城県つくば市広島県福山市 )

12 Ⅷ. 特性表の説明 (Explanations on the Table of Characteristics) 形質 1 子葉しょうのアントシアニン着色の強弱 Char.1 Coleoptile: anthocyanin coloration アントシアニン着色程度の調査方法供試粒数 100 粒粒の準備休眠していない粒をシャーレ内の湿潤ろ紙上に置床し発芽させる試験場所実験室又は温室内光条件子葉しょうが約 1cm になるまでは暗黒条件下でその後 3~4 日 15,000Lux の連続光条件下温度 15~20 調査時期子葉しょうが十分に生育した時期 ( 約 1 週間 ) 生育コード表の階級値調査特性表の形質 1 参照注区別性の試験には判定の指標として少なくとも2 以上の標準品種を含めること Method for the Determination of Anthocyanin Coloration Number of grains per test: 100 grains Preparation of grains: Set up non-dormant grains on moistened filter paper covered with a Petri dish lid during germination Place: Laboratory or greenhouse Light: After the coleoptiles have reached a length of about 1 cm in darkness, they are placed in artificial light (daylight equivalent), at 15,000 lux continuously for 3-4 days Temperature: 15 to 20 C Time of recording: Coleoptiles fully developed (about 1 week) at stage Scale of recording: See characteristic 1 Note: At least two of the example varieties should be included as a control when testing for distinctness

13 形質 2 草姿 Char.2 Plant: growth habit 1 立 erect 3 半立 semi-erect 5 中 intermediate 7 半ほふく semi-prostrate 9 ほふく prostrate 草姿は葉と分げつの状態の観察による外側の葉と分げつが仮想の垂直軸と作る角度を用いる The growth habit should be assessed visually from the attitude of the leaves and tillers. The angle formed by the outer leaves and the tillers with an imaginary vertical axis should be used. 形質 3 反曲した止め葉を持つ個体の出現頻度 Char.3 Plant: frequency of plants with recurved flag leaves 1 全ての個体が直立 all flag leaves are rectilinear 3 約 1/4 の個体が反曲 about 1/4 of the plants with recurved flag leaves 5 約 1/2 の個体が反曲 about 1/2 of the plants with recurved flag leaves 7 約 3/4 の個体が反曲 about 3/4 of the plants with recurved flag leaves 9 全ての個体が反曲 all flag leaves are recurved 形質 5 止め葉の葉しょうの白粉の強弱 Char.5 Flag leaf: glaucosity of sheath 葉しょうの最も強く発現している場所を調査 The strongest expression on the sheath should be observed. 形質 10 穂首直下の節間の髄の厚さ Char.10 Straw: pith in cross section (halfway between base of ear and stem node below) 無又は極薄中極厚又は充満 absent or very thin very thick or filled

14 形質 11 穂の形 Char.11 Ear: shape in profile 先細両側並行やや棍棒状棍棒状紡錘状 tapering parallel-sided semi-clavate clavate fusiform 形質 12 粒着密度 Char.12 Ear: density 密度は観察によるか又は小穂数 / 穂長の割合で評価する The density can be assessed either visually or as measurement of the ratio of the number of spikelets/ear length. 形質 13 穂の長さ Char.13 Ear: length (excluding awns and scurs) 主茎の穂の長さを測定 Single ear of the main stem to be measured. 形質 14 芒の有無 Char.14 Awns or scurs: presence 両方無短芒有り長芒有り both absent scurs present awns present

15 形質 17 穂軸の先端凸部表面の毛の多少 Char.17 Apical rachis segment: hairiness of convex surface 無又は極少少中多極多 absent or very weak weak strong very strong 形質 18 護頴の肩部の幅 Char.18 Lower glume: shoulder width (spikelet in mid-third of ear) 無又は極狭狭中広極広 absent or very narrow narrow broad very broad 形質 19 護頴の肩部の形 Char.19 Lower glume: shoulder shape (spikelet in mid-third of ear) 下がるやや下がる水平上がる 2つ目の頂点を作り強く上がる sloping slightly sloping straight elevated strongly elevated with 2nd point present

16 形質 21 護頴の嘴の形 Char.21 Lower glume: beak shape (spikelet in mid-third of ear) 直やや曲がる曲がる強く曲がる鋭角に曲がる straight slightly curved moderately curved strongly curved geniculate 形質 22 護頴の内側の毛の多少 Char.22 Lower glume: extent of internal hair (spikelet in mid-third of ear) 少中多 weak strong 形質 24 原麦粒のフェノール反応による着色の濃淡 Char.24 Grain: coloration with phenol フェノール反応の方法供試粒数 100 粒 ( 無処理の粒を使用すること ) 調整時間流水に浸した後縦溝を下にして蓋付きシャーレに置床試薬の作成 1% フェノール溶液 ( 試験毎に作成 ) 試薬の量粒の 3/4 を浸す試験場所実験室光条件直射の当たらない自然光下温度調査時期浸漬後 4 時間階級値調査特性表の形質 24 を参照注判定の指標として少なくとも2 以上の標準品種を含めること

17 Method for Determination of Phenol Reaction Number of grains per test: 100 grains. The grains should not have been treated chemically Preparation of grains: Soak in tap water for 16 to 20 hours, drain and remove surface water, place the grains with crease downwards, cover dish with lid Concentration of solution: 1 per cent Phenol-solution (freshly made up) Amount of solution: The grains should be about 3/4 covered Place: Laboratory Light: Daylight - out of direct sunshine Temperature: 18 to 20 C Time of recording: 4 hours (after adding solution) Scale of recording: See characteristic 24 in the Table of Characteristics Note: At least two of the example varieties should be included as a control 形質 25 まき性 Char.25 Seasonal type 調査のため標準品種を加えて全ての品種を春まきする最も遅い春まき品種が完全に成熟した時期 ( 十進コード表のステージ 91/92 に達したとき ) に供試した各品種の状態を調査する各タイプの状態は以下に示す秋まき型中間型春まき型最大で十進コード表のステージ 45 になる十進コード表のステージ 45 を超えて一般にステージ 75 以上になり最大でステージ 90 となる十進コード表のステージ 90 を超える The seasonal type should be assessed on one or several plots sown in springtime. Example varieties should always be included in the plots. When the example varieties behave according to this description, the varieties under study can be described. At the time when the latest spring type variety is fully mature (stage 91/92 of the Eucarpia decimal code), the growth stage reached by the respective variety should be assessed. The states of expression are defined as follows: Winter type: The plants have reached stage 45 of the Eucarpia decimal code (boots swollen) at maximum Alternative type: The plants have exceeded stage 45 of the Eucarpia decimal code---as a rule they have exceeded stage 75---and have reached stage 90 at maximum Spring type: The plants have exceeded stage 90 of the Eucarpia decimal code

18 形質電気泳動法の説明 1. 器具と設備 ( 略 ) Char Description of the method to be used 2. 試薬アクリルアミド ( 電気泳動用に特別に精製したもの ) ビスアクリルアミド ( 同上 ) TRIS( トリスヒドロキシメチルアミノメタン ) SDS( ドデシル硫酸ナトリウム ) APS( 過硫酸アンモニウム ) メルカプトエタノール TEMED( テトラメチルサイレンジアミン ) TCA( クエン酸 ) 塩酸氷酢酸グリシンブタノールピロニンY( またはG) グリセリンメタノールまたはエタノールクマシーブリリアントブルー R-250 クマシーブリリアントブルー G 電気泳動 ( 通電 ) 用緩衝液保存液グリシン 141.1g とTRIS 30.0g SDS 10.0gに蒸留水を加えて 1lとする使用直前に保存液を蒸留水で 1:10 に希釈する保存緩衝液は室温で2か月保存が可能である希釈緩衝液は1 週間以上おかないこと緩衝液のpHは 8.3 近くとする 3.3 ゲル調製液分解用ゲルの保存緩衝液 (1M TRIS 塩酸 ph 8.8) TRIS gと塩酸 (d=1.19) 20ml に蒸留水を加えて1lとするこの緩衝液は4 で2か月保存が可能であるスタッキングゲル保存緩衝液 (1M TRIS 塩酸 ph 6.8) TRIS gと塩酸 78ml に蒸留水を加えて1lとするこの緩衝液は4 で2か月保存が可能である %(w/v) ドデシル硫酸ナトリウム液

19 SDS 10g を蒸留水に溶かして 100ml とするこの保存液は 4 で 2 か月保存が可能である使用に先立って SDS が結晶化していたら撹拌してゆるやかに温めて SDS を溶解させる %(w/v) 過硫酸アンモニウム液 APS 1g を蒸留水に溶かして 100ml とするこの溶液は使用直前に作るアクリルアミド保存液アクリルアミド 40.02g に蒸留水を加えて 100ml とするビスアクリルアミド保存液ビスアクリルアミド g に蒸留水を加えて 130ml とする 3.4 染色液クマシーブリリアントブルー G g とクマシーブルリリアントブルー R g に蒸留水を加えて 100ml とする TCA 55g と氷酢酸 65ml メタノールまたはエタノール 180ml 液 25ml に蒸留水を加えて 1lとする 4. 方法 4.1 蛋白質の抽出グルテニンのみの抽出種子をハンマー ( 他の道具でも可 ) で粉砕する粉と希釈した試料抽出緩衝液 (3.1.1) をねじ蓋か密閉蓋のついた 3ml 容量のポリエチレン製血液遠心分離用チューブの中に入れて混ぜる粉と抽出緩衝液の割合は 59mg/0.75ml とする試料抽出は室温で 2 時間かかるその間に数回ボルテックスミキサーにかけて撹拌しそののち沸騰させた湯煎器で 10 分間温存させて冷却するチューブを 18000gで 5 分間遠心分離するグリアジンに引き続くグルテニンの抽出グルテニンとグリアジンを同じ麦粒から分析できるグリアジン抽出のためはじめに粉砕粉 (1 粒または半粒 ) とA 液 (3.1.2) 0.25ml をミクロ滴定板かミクロ遠沈管に入れて室温で一晩培養する次にグルテニン抽出のために粉砕粉にB 液 (3.1.2) 0.5ml を加えて室温で一晩培養する泳動しようとする抽出物の量はゲルの厚さや泳動槽の大きさによって異なる一般には 10μl ないし 25μl あれば十分である

20 4.2 ゲルの準備用いる装置のデザインに従って清潔で十分に乾燥したゲルカセットを組み立てるカセットのシールにテープを用いるときはテープがなれてよく着くよう少なくとも使用する1 日前に装置を組み立てるとよい分解用ゲル (10% アクリルアミド ph 8.8) 二枚垂直型ゲル (180mm 160mm 1.5mm) を作成するためアクリルアミド保存液 (3.3.5) 20ml とビスアクリルアミド保存液 (3.3.6) 26ml ゲル保存液(3.3.1) 30ml を室温で混合する混合液は 100ml のブフナーフラスコ内で 2 分ないし 3 分かけて空気抜きするこれに APS(3.3.4) 2ml とSDS(3.3.3.) 0.8ml TEMED 40μl( 瓶から直接用いる ) を加える次に空気泡を立てないようにゲルを注意深く注入して室温に置いて重合させるゲルカセットは満杯にせず 3cm ないし 4cm のスタッキングゲルのために空きを残しておくゲルの表面にはピペットを用いてブタノール ( または蒸留水 ) で注意深く覆う 30 分ほどで重合が終わるのでゲル表面を蒸留水で注意深くすすぎろ紙で乾かす分解用ゲル (7% アクリルアミド ph 8.8) サブユニット2および2 を調製するため 7% 濃度のアクリルアミドが必要である二枚垂直型ゲル (180mm 160mm 1.5mm) を作製するためアクリルアミド保存液 (3.3.5) 14ml と蒸留水 6ml ビスアクリルアミド保存液(3.3.6) 26ml ゲル保存液(3.3.1) 30ml を室温で混合する混合液は 100ml のブフナーフラスコ内で 2 分ないし 3 分かけてガス抜きするこれに APS(3.3.4) 2ml とSDS(3.3.3.) 0.8ml TEMED 40μl( 瓶から直接用いる ) を加える次に空気泡を立てないようにゲルを注意深く注入して室温に置いて重合させるゲルカセットは満杯にせずスタッキングゲルのために 3cm ないし 4cm の空きを残しておくゲルの表面にはピペットを用いてブタノール ( または蒸留水 ) で注意深く覆う 30 分ほどで重合が終わるのでゲル表面を蒸留水で注意深くすすぎろ紙で乾かすスタッキングゲル (3% のアクリクアミド ph 6.8) 50ml のブフナーフラスコにアクリルアミド保存液 (3.3.5) 1.50ml とビスアクリクアミド保存液 (3.3.6) 2.15ml ゲル緩衝保存液(3.3.2) 2.50ml の蒸留水 13.15ml を入れて混合する空気抜きののちこれにAPS(3.3.4) 0.75ml とのSDS(3.3.3) 0.2ml TEMED 15μl( 瓶から直接入れる ) を加えるこれを注意深く混合したら直ちにスタッキングゲルをゲルカセットの上端まで注ぎいれる空気泡を立てないようにサンプルコウムを挿入して室温で 2 時間重合させるそののちコウムをゲルカセットから静かに抜いて希釈泳動緩衝液 (3.2) で泳動槽をすすぐ 4.3 電気泳動タンクに適量の通電用緩衝液 (3.2) を満たし 15 に冷却する試料投入ののちピロニンY/Gがスタッキングゲルを動き出すまで 8mA/cm 2 ( 差し渡し部分 ) の定常電流で電気泳動を行いさらにマーカーがゲルの下端に達するまで 16mA/cm 2 ( 最大電圧 300V) で泳

21 動を続ける温度は常に 15 を維持する 4.4 固定および染色ゲルカセットをタンクから取り出して開きゲルを 15%(w/v)TCA 250ml の液内で少なくとも 30 分間固定させるゲルを蒸留水ですすぎ染色液 (3.4.2) 250ml を用いて室温で一晩染色する脱色は必ずしも必要ないがゲルはポリエチレン袋に密閉保存する前に蒸留水で洗う他の染色法も利用できる ( たとえばコマシーブリリアントブルー Gや同濃度のTCA のみで ) ゲルの調製染色のための最終的な品質調節条件はゲルに現れた標準品種を解析して決めるとよい標準バンドの分離と電気泳動の相対移動度 ( 分子量 ) が十分満足できるほどに明瞭でなければならないグルテニン対立遺伝子の識別この表は上記の対立遺伝子を説明できるようにまた異なるバンドを識別する際に手助けとなるように構成してあるここには品種 Courtot に見られる対立遺伝子と比較して各遺伝子座にあるすべてのグルテニンバンドの位置と分子量が描かれているまた Payne の命名によるバンド数とともに Payne Lawrence (1983) に基づく各対立遺伝子に与えられる文字もつけられている

22 (26), (27) (28)

23 - 22 -

24 - 23 -

25 - 24 -

26 - 25 -

27 形質 26 Glu-A1 遺伝子座にある対立遺伝子の発現 Char.26 Allele expression at locus Glu-A1 形質 27 Glu-B1 遺伝子座にある対立遺伝子の発現 Char.27 Allele expression at locus Glu-B1-26 -

28 形質 28 Glu-D1 遺伝子座にある対立遺伝子の発現 Char.28 Allele expression at locus Glu-D1 備考 : 特定の複数のバンド ( すなわちバンド 9 と 10) が類似の分子量をもつことがあるこれにより形質 28 でバンド 5+10 の存在下では形質 27 のバンド 7 とバンド 7+9 が互いに識別できないことになるそこで形質 28 でバンド 5+10 の存在下では形質 27 では階級値 4がバンド 7 とバンド 7+9 のどちらかの可能性となる同じような分子量をもつ他のバンドは他のバンドとの既知の関係から識別できることがある形質 27 ではバンド 13 は常にバンド 16 とバンド 14 は常にバンド 15 と結びついているがバンド 40 は単独である 27, 28, 28, 27 27,

29 生育ステージに関する十進コード表コード一般記述注記発芽 00 乾燥種子 01 吸水開始吸水完了頴果から幼根の出現頴果から鞘葉の出現鞘葉先端に葉がのぞく苗の生長 10 鞘葉から第 1 葉が出る第 2 葉の視認 (1cm以下 ) 11 第 1 葉の展開葉身が 50% 展葉 ( 以下同じ ) 12 第 2 葉の展開 13 第 3 葉の展葉 14 第 4 葉の展葉 15 第 5 葉の展開 16 第 6 葉の展葉 17 第 7 葉の展葉 18 第 8 葉の展葉 19 第 9 葉又はそれ以上の展葉分げつ 20 主茎のみ 21 主茎及び第 1 分げつ 22 主茎及び第 2 分げつ 23 主茎及び第 3 分げつ 24 主茎及び第 4 分げつ 25 主茎及び第 5 分げつこのセクションは表の他のセクショ 26 主茎及び第 6 分げつンからの記録を補うために 27 主茎及び第 7 分げつ同時コードとして使われる 28 主茎及び第 8 分げつ 29 主茎及び第 9 又はそれ以上の分げつ

30 茎の伸長 30 偽茎の立ち上がり生育初期の草姿がほふく又は半ほふくのものにのみ適用 31 第 1 節が認められる 32 第 2 節が認められる 33 第 3 節が認められる 34 第 4 節が認められる 35 第 5 節が認められる 36 第 6 節が認められる 37 止め葉が認められる止め葉の葉舌 / 襟の視認期幼穂形成前期穂ばらみ期 40 - 幼穂形成期 41 止め葉の葉鞘の伸展穂の膨張視認期穂ばらみ中期穂の膨張期穂ばらみ後期止め葉の葉鞘の開裂最初の芒が認められる有芒品種のみ出穂開花 50 第 1 小穂 ( 頂花 ) 視認期穂の 1/4 出穂穂の 1/2 出穂穂の 3/4 出穂出穂完了期 59. 開花期 60 開花始め大麦では確認困難 61 稲では通常は出穂直後

31 半分開花開花完了 69 乳熟期頴果に水分が満ちる乳熟初期乳熟中期指の間で頴果をつぶすと液状胚乳に 76 - 固形分の増加が認められる 77 乳熟後期糊熟期糊熟前期爪で押さえてもあとが残らない糊熟中期糊熟後期 88 - 爪のあとが残る穂の緑色がうすれる 89 - 完熟期 90 - 稲では末端小穂の完熟 91 頴果が硬化 ( 親指の爪で割る稲では小穂の 50% が成熟ことが困難 ) 92 頴果が硬化 ( 親指の爪で窪み稲では小穂の 90% が成熟がつかない ) 93 頴が日中緩む脱落による穀粒のロスの危険

32 94 過熟茎の枯れ上がり及び倒伏 95 種子の休眠 96 完熟種子の発芽力が 50% に上がる 97 種子休眠がとける 98 二次休眠の誘発 99 二次休眠の消失

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<4D F736F F D D497DE385F A20834F A8EED8AEE8F802E646F63> 0 年 4 月フェスツカグラウカ種 Blue Fescue (Festuca glauca Vill.) フェスツカグラウカ種審査基準 Ⅰ. 審査基準の対象 (Subject of these Guidelines) この審査基準はイネ科 (Poaceae) フェスツカ属 (Festuca L.) のグラウカ種 (F. glauca Vill.) のうち栄養繁殖性の全ての品種に適用する Ⅱ.