26 さ れ て い るRPHA法 とLA法,そ 高 橋 克也 他4名 し て こ れ ら に次 い で 多 く使 用 さ れ て い るLタ イ プIGオ ー トHem (以 下 金 コ ロ イ ド法)の3種 類 を 選 ん で,こ 2. ヘ モ グ ロ ビ ン検 出 感 度 比 較 試 験 の
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- さや かたいわ
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1 A basic study for the sensitivity of hemoglobin-detection of RPHA method, LA method and colloidal gold agglutination assay in hemoglobin added artificial fecals. Katsuya TAKAHASHI 1), Hiroshi HAMASAKI, Seiichi HASEGAWA, Tsukasa GOTO, Takashi NABATA 2) 1) Laboratory of Chuo Medical Technology. 2) Medical Association of Suminoe-District of Osaka, Japan.
2 26 さ れ て い るRPHA法 とLA法,そ 高 橋 克也 他4名 し て こ れ ら に次 い で 多 く使 用 さ れ て い るLタ イ プIGオ ー トHem (以 下 金 コ ロ イ ド法)の3種 類 を 選 ん で,こ 2. ヘ モ グ ロ ビ ン検 出 感 度 比 較 試 験 の 実 施 ヘ モ グ ロ ビ ン検 出 感 度 比 較 試 験 の 実 施 方 法 に つ で と同様 の 手 法 に よ り,ヘ モ グ ロ ビ ン添 加 疑 似 便 い て は初 回 論 文 下)で詳 述 した が,概 を 利 用 した 共 通 の 方 法 で,ヘ った を 比較 す る基 礎 実 験 を 実 施 した の で 報 告 す る 方 法 3:1の 1. 試 薬 と測 定 方 法 RPHA法 ッ シ ュ ポ テ トに き な粉 を 比 で 加 え 混 合 した も の を 用 い た そ れ に,ヘ モ グ ロ ビ ン濃 度 既 知 血 液 を,生 理 食 塩 水 で に つ い て は,試 ア-HemSp(富 ね 次 の 様 に行 先 ず,ヘ モ グ ロ ビ ン検 出 感 度 比 較 試 験 用 疑 似 便 の 基 礎 試 料 と して,マ II し た れま モ グ ロ ビ ン検 出 感 度 薬 キ ッ トは イ ム デ ィ 士 レ ビ オ(株))を 使 用 し,U型 マ 希 釈 し調 製 し た24段 階 の 濃 度 の ヘ モ グ ロ ビ ン液 を,基 礎 試料1gに イ ク ロ プ レー トを 使 用 して 凝 集 像 を 目視 に よ り判 対 し1ml添 加 した 次 い で,こ れ をヘ モ グ ロ ビ ン検 出 感 度比 較 試 験 定 した 測 定 及 び判 定 に あ た っ て は 当 該 キ ッ トの 取 扱 説 明 表1: RPHA法,LA法,金 (表中の数字は検体数を表す) 書3)に 準 じ実 施 し た 即 ち,検 査 用 ろ 紙 は専 用 の 塗 布 紙 を使 用 し, 抗 体 感 作 血 球 が 希 釈 倍 数 1:8 23 以 上 で凝 集反応 を 示 す もの を陽 性 と判 定 した LA法 に つ い て は,試 薬キッ トはOCヘ モ デ ィ ア(栄研 化 学(株)) を 使 用 し,専 用 セ ル 内の 吸 光 度 を 測 定 装 置 で あ るOCセ ンサ ー Hで 測 定 した 判 定 は当 該 キ ッ ト の 取 扱 説 明 書 喋)に従 っ て 100ng/ml以 上 を 陽性 と した 金 コ ロイ ド法 につ い て は,試 薬 キ ッ トはLタ Hem(和 イ プIGオ ー ト 光 純 薬 工 業(株))を使 用 し,当 該 キ ッ トの 取 扱 説 明 書) に準 じ専 用 セ ル 内 の 吸 光 度 を 測 定 装 置 で あ るJIA-HB2010で 定 した 判 定 は,メ 測 ー カ ーの 推 奨 す る カ ッ トオ フ値100ng/ml 以 上 を 陽 性 と した な お,3法 と も疑 似 便 の 調 製 及 び検 体 の作 製 は1名 の検査技 師 が 行 い,測 定 は ヘ モ グ ロ ビ ン 濃 度 を知 らせ て い な い他 の検 査 技 師 が 室 温(22 24 )で コロ イド法 に よるヘ モグ ロビ ン検 出 感 度 比 較 試 験 実施 日消 集検 誌
3 用 疑 似 便 と して,そ の調 製 直 後 に,各 濃 度 毎 に10 検 体 を作 製 し,RPHA法 とLA法 及び金 コロイ ド 以 上 の 結 果 よ り,今 回検 討 した3法 の 疑 似 便 で のヘ モ グ ロ ビ ン検 出感 度 に つ い て は,取 扱 説 明 書 に準 じた カ ッ トオ フ値,及 法 で そ れ ぞ れ 測 定 した 3. LA法 及 び 金 コ ロ イ ド法 の カ ッ トオ フ値 を 低 値 に変 化 させ た 場 合 の ヘ モ グ ロ ビ ン検 出 感 度 2. LA法 に つ い て の検 討 定 基 準 値 で あ る100ng/mlと い う カ ッ トオ フ 値 階 即 ち,2,10ng/mlと い う よ う に, び メ ー カー の 推 奨 す る カ ッ トオ フ値 で 判 定 す る と,RPHA法 次 い で 金 コ ロ イ ド法,LA法 が最 も高 く, の 順 と な っ た の カ ッ トオ フ 値 を 取 扱 説 明 書 よ り低 値 に 変 化 させ た 場 合 の 限 界 域 LA法 及 び 金 コ ロ イ ド法 に つ い て は,陽 性 の 判 を,2段 27 高 橋 克也 他4名 結 果 を(表2)に mlと,取 示 した カ ッ トオ フ値 を2ng/ 扱 説 明 書 に 記 載 さ れ て い る 値 よ り低 値 そ の 値 を低 値 に変 化 させ て判 定 した 時 の ヘ モ グ ロ に 変 化 させ て 判 定 す る と,10 1μgHb/g疑 ビ ン検 出 感 度 を調 べ,低 便 で 陰 性 と陽 性 が 混 在 し,こ の 濃 度 域 が 限 界 域 で 値 に 変 化 させ た カ ッ トオ フ値 の実 用性 につ い て 検 討 した III 結 あ っ た さ らに カ ッ トオ フ 値 を低 値 に変 化 させ, 表2: 果 LA法 の カ ットオ フ値 を変 化 させ た場 合 の ヘ モ グ ロ ビ ン検 出 感 度 (表中の数字は検体数を表す) 1. ヘ モ グ ロ ビ ン検 出 感 度 比 較試験 の結果 ヘ モ グ ロ ビ ン検 出 感 度 比 較 試験 に お い て,RPHA法 とLA 法 は 取 扱 説 明 書 通 りに,ま た, 金 コ ロ イ ド法 で は メ ー カ ー の 推 奨 す る カ ッ トオ フ 値 に よ り 判 定 し た 時 の 結 果 を(表1)に 示 した RPHA法 で10μgHb/g疑 似 便 ま で は す べ て 陰 性 で あ り, 1μgHb/g疑 似 便 で 陰性 と陽 性 が 混 在 し,こ の 濃 度域 が ヘ モ グ ロ ビ ン検 出 感 度 限 界 域 (以下 限 界 域 と省 略)で あ っ た LA法 で は2μgHb/g疑 似 便 ま で は す べ て 陰 性 で あ り, 30 40μgHb/g疑 似 便 で陰性 と陽 性 が 混 在 し,こ の濃 度 域 がLA法 で の 限 界域 で あ っ た 金 コ ロ イ ド 法 で は20μ ghb/g疑 似 似便 まではすべ て 陰 性 で あ り,2 3μgHb/g疑 似 便 で 陰 性 と 陽 性 が 混 在 し, こ の 濃 度 域 が 金 コ ロ イ ド法 の 限界域で あった 日消集検誌
4 28 10ng/mlと ghb/g疑 高橋 克 也 他4名 し て 判 定 し た 場 合 で は,6.0 10μ 似 便 で 陰 性 と陽 性 が 混 在 し,カ フ値 が2ng/mlの カ ッ トオ フ値 を低 値 に変 化 させ,10ng/mlと ッ トオ 時 と比 較 す る と,当 然 の ご と て 判 定 した 場 合 で は,7. 10μgHb/g疑 し 陰 性 と陽 性 が 混 在 し,カ 似便で ッ トオ フ値 が2ng/ml く限 界域 が 低 濃 度 側 へ 移 行 し た 但 し,こ の 濃 度 の 時 と比 較 す る と,LA法 域 内 で の 陰 性 と陽 性 の比 率 に は規 則性 が な い 結 果 側 へ 移 行 した な お,こ の 濃 度 域 内 での 陰性 と 陽 同 様,限 界域 が低 濃 度 と な った 性 の比 率 に は 規 則 性 が あ っ た 3. 金 コロ イ ド法 の カ ッ トオ フ値 を メ ー カ ー の 推 奨 す る値 よ り低 値 に 変 化 させ た場 合 の 限 界 域 結 果 を(表3)に mlと,メ 示 した カ ットオ フ値 を2ng/ IV 考 ー カ ー の 推 奨 す る 値 よ り低 値 に して 判 定 す る と,10 1μgHb/g疑 察 1. LA法,及 似 便 で 陰 性 と陽 性 が 混在 し,こ の 濃 度 域 が 限 界 域 で あ っ た さ ら に び 金 コ ロ イ ド法 の カ ットオ フ 値 を 低 値 に変 化 させ た場 合 の 実 用 性 につ い て LA法,及 び 金 コ ロ イ ド法 は 定 量 法 で あ る た め, 疑 似 便 で の 限界 域 の 改 善 を 目的 に,カ ッ トオ フ 値 を よ り低 値 に 変 化 させ て 判 定 し, 表3: 金 コロ イド法 のカットオフ値 を変 化 させ た場 合 の ヘ モグ ロビ ン検 出 感 度 (表中の数字は検体数を表す) 比 較 検 討 した ま ず,LA法 で は2ng/mlの カ ッ トオ フ値 で 判 定 す る と,限 界 域 は 低 値 に 改 善 さ れ,か つ限 界 域 内の 陰性 と陽性 の比率 に は 規 則 性 が あ り,実 用性 の あ る カ ッ トオ フ値 と判 断 され た さ ら に カ ッ トオ フ 値 を10ng/ mlに まで 低 値 に し た場 合 は,限 界 域 の 改 善 は 見 ら れ た も の の, 限 界域 内 で陰 性 と陽性 の比 率 に 規 則 性 が な くな り,カ ッ トオ フ 値 と して の 実 用 性 は な い も の と 判 断 され た 次 に 金 コ ロ イ ド法 に つ い て 2ng/mlの す る と,LA法 善 さ れ,か カ ッ トオ フ 値 で 判 定 同 様,限 界域 が 改 つ 限界 域 内の 陰性 と 陽 性 の 比 率 に は 規 則 性 が あ り, 実 用 性 の あ る カ ッ トオ フ値 と判 断 され た さ ら に カ ッ トオ フ 値 を10ng/ mlに ま で 低 値 に し た場 合 で も, 限 界 域 が さ ら に低 濃 度 側 へ 移 行 し,か つ 限 界 域 内 で の 陰 性 と陽 性 の 比 率 に も 規 則 性 が あ り,カ ッ トオ フ 値 と し て の 実 用 性 は あ 日消 集検 誌
5 29 高橋 克 也 他4名 る もの と判 断 され た で30μgHb/g疑 2. 免 疫 便 潜 血検 査 試 薬 に お い て,こ 30 40μgHb./g疑 れ まで 行 っ 似 便 で あ っ た の に 対 し,今 回は 似 便 で あ っ た そ し て,定 た 基 礎 実 験 で の 限 界域 の 報 告 値 と 今 回 の結 果 法 で あ るLA法 値 につ い て 2ng/mlに 変 化 さ せ て 判 定 し た 時 の 限 界 域 が10 μghb/g疑 似 便 で あ っ た の に 対 し,今 こ れ まで の ヘ モ グ ロ ビ ン添 加 疑 似 便 を 用 い た 免 に つ い て は,カ 量 ッ トオ フ 値 を 回 は10 疫 便 潜 血 検 査 試薬 の ヘ モ グ ロ ビ ン検 出 感 度 試験 の 1μgHbg疑 基 礎 的 検 討 にお け る各 試 薬 の 限 界 域 を(表4)に の カ ッ ト オ フ 値 で 判 定 し た 時 も,3. 7.μ 示 した 第1回 ghb/g疑 はEIA法(専 用 の フェ カツインセ ン シ テ ィブ ケ ー ス を 使 用 せ ず,試 ク に 直 接 塗 布)とRPHA法 第2回 は このEIA法 行 っ た この 第1回 似 便 で あ っ た 同 様 に,10ng/ml 似 便 で あ っ た の に 対 し,今 料 をEIAデ ィス μghb/g疑 の比 較 を行 い,次 いで お い て 若 干 の 差 が 生 じた 要 因 と して 考 え られ るの との 比 較 をFEIA法 とLA法 で 及 び 第2回 の 報 告値 と比 較 し, は,今 似 便 で あ っ た こ の 様 に,限 回 の 基 礎 実 験 に お い て,ヘ の と推 測 さ れ る 即 ち,こ ち,RPHA法 い て,一 の 限 界 域 に つ い て.共 通 の 実 験 方 法 で 実 施 した に も拘 らず,若 干 の差が生 じ 界域 に モ グ ロ ビ ン添 加 疑 似 便 を採 取 し た 時 の サ ン プ リ ン グ 誤 差 に よ る も 今 回 比 較 検 討 し た3法 の 免 疫 便 潜 血 検 査 試 薬 の う とLA法 回 は れ まで の 基礎 実 験 に お 貫 し て 同 一 の 検 査 技 師 が サ ンプ リ ン グ を 実 施 し た に も 拘 ら ず,そ の 際 サ ンプ リ ン グ量 に若 て い た 即 ち,取 扱 説 明 書 通 りに 判 定 した 場 合 の 干 の 差 が 生 じた と推 測 され る そ の こ とが 特 に 限 限 界 域 は,第1回 界 域 付 近 の ヘ モ グ ロ ビ ン濃 度 に お け る 判 定 結 果 に のRPHA法 で は20 2μgHb g疑 似 便 で あ っ た の に 対 し,今 疑 似 便 で あ っ た ま た,LA法 表4: 影 響 を及 ぼ した も の と考 え る 回 は1μgHbg に つ い て は 第2回 各種 免疫 便潜 血検 査試 薬 のヘ モ グロ ビン検 出感 度限界 域 日消 集 検誌
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