Estimation of optimal growth temperature and species identification of wood rotting fungi collected in Tosayamada town 1050001 1
1 2 2-1 2-2 2-3 2-4 2-5DNA 3 3-1 3-2 3-3 3-4 3-5DNA 4 5 6 7 2
1 PCB 4 KUT0401KUT0404 3
2 2-1 KUT0401 KUT0404PDA PDA PDA 2-2 2-3 PDA ph5.75.8 7mM 20 90 15 KUT0401KUT0404 24 360m 80 m ph5.7 5.8 plate) 24 1PDA 400ml 4
2-4 90 PDAKUT0401 KUT0404 PDA 15202530354045 6 24 2-5DNA DNA 15mTE 2.5m 50 1.5m 1.510SDS 50050 5 30 48000rpmRG55mm 30 CIA 48000rpmRG55mm 20 1/10 3M NaOAc 1 48000rpmRG55mm 30 4 48000rpmRG55mm 30 70 148000rpmRG55mm 20 5 TE 500 Template 1 10 2 dntp2blend Taq 0.08ITS1ITS4 2 1 Template 1 13PCR ITS pgempcr 2 2Ligation Buffer 5T4 DNA Ligase 1Vector 2, 2 Ligation 27 Transformation Ligation 2 50 42 1 LB 400 37X-galIPTG 50 LB 5037 16 DNA Transformation DNA DNA DNA 5
LB 5m37 24 -SDS 415000rpmRG55mm 2 Solution.1 * 100 Slution.2 * 200 5 Solution.3 * 150 5 CIA 10415000rpm RG55mm 10 2 415000rpmRG55mm 10 70 1415000rpmRG55mm 5 4 TE 100 Rnase 137 30 Solution.1 * 50mM 0.91up 25mM Tris-HCl(pH8.0) 2.5ml 100ml A.C 10mM EDTA(pH8.0) 2 ml Solution.2 * 0.2N NaOH 200 1SDS 100 H2O 700 Solution.3 * 5M K-O-Ac 60ml up CH3COOH 11.5ml 100ml A.C H2O 28.5ml 6
3 3-1 4 KUT0401KUT0404 1 7
3-2 クランプ結合の観察 KUT0401 KUT0402 KUT0403 KUT0404 写真 1 各木材腐朽菌のクランプ結合 0.01ｍｍ 顕微 観察から 各菌株において担子菌 特有のクランプ結合が確認された 写真 1 このため単離した菌株 KUT0401 KUT0404 は担子菌 であると判定した 8
3-3 バーベンダム反応 KUT0401 KUT0402 KUT0403 KUT0404 カワラタケ オオウズラタケ 写真 2 各木材腐朽菌のバーベンダム反応 KUT0401 KUT0404 のすべてについて培地が 色に変化した また比Ԕに用いた白色腐 朽菌のカワラタケ 色腐朽菌のオオウズラタケはそれぞれ 色 白色を示した したがっ てバーベンダム反応より KUT0401 KUT0404 のすべてが白色腐朽菌であることが判明した また木材腐朽菌によって培地の色が変化する時期にずれがあった このことから 培養時 9
10
3-2 2 KUT0401 mm/day 15 20 25 30 32.5 35 37.5 40 45 4.98 11.92 15.55 16.02 17.63 18.13 2.77 0 0 1.38 3.26 1.92 2.76 5.4 3.74 1.69 0 0 KUT0402 mm/day 15 20 25 27.5 30 32.5 35 40 45 6.62 12.06 15.88 16.72 19.77 18 14.06 0 0 3.69 5.57 3.33 4.97 1.65 4.59 3.87 0 0 KUT0403 mm/day 15 20 25 27.5 30 32.5 35 40 42.5 1.79 6.13 14.95 16.35 23.44 20.31 19.69 14.26 10.53 0 45 11
2.43 3.34 5.65 3.62 5.75 5.33 5.6 8.07 4.73 0 KUT0404 mm/day 15 20 25 27.5 30 32.5 35 40 45 0 3.08 16.32 18.81 18.86 10.1 2.83 0 0 0 3.11 11.03 9.69 10.53 8.09 3.27 0 0 2 2 2 KUT0401 3532.537.5 KUT0402KUT0403KUT0404 30 27.532.5 KUT0403 4045 42.5 1 KUT0401 35KUT0402 KUT0403 KUT0404 30 KUT0401 KUT0403 30 42.5 KUT0401KUT0403 KUT0402KUT0404 24 3-4 DNA Transformation Ligation 2 50LB 400KUT0401KUT0404 Ligation 10 100 LB 200KUT0401 Ligation DNA -SDS KUT0401 SDS 12
4 KUT0401KUT0404 5 4 KUT0401KUT0404 KUT0401KUT0404 4 KUT0401 35KUT0402KUT0403 KUT0404 30 KUT0403 30 42.5 DNA KUT0401 SDS 6 7 1,.289. 2, White T.J. et al., PCR protocols:aguide to methods and applications, Academic, San Diego(1990),pp.315332. 13