3 光毒性第三者評価報告書100924改

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1 評価報告書 酵母光生育阻害試験と赤血球光溶血性試験の 組み合わせによる光毒性試験代替法 平成 22 年 1 月 国立医薬品食品衛生研究所

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9 in vivo 24 in vivo GLP 1 b 4 Acridine BMDM 4-t-butyl-4-methoxydibenzoylmethane CHD Chlorhexidine Bithionol CHD Bithionol in vivo in vivo b in vivo 70% b 5 in vitro 3T3-NRU T3-NRU 3T3 NRU 2 3

10 1. In vitro 3T3 3T3-NRU OECD 3T3-NRU 14 3T3-NRU DMSO Dimethyl sulfoxide 1% DMSO 4

11 % DMSO 6 UVA ( A ) Vilber Lourmat UVB ( B ) Metal halide lamp Dr. Honle GmbH Dr. Honle GmbH SOL500 Dr. Honle GmbH UVB H1 Dr. Honle GmbH UVA Dr. Honle GmbH Z; mm 8-MOP 8 5mm 2mm 5mm 8.5J/cm 2 20J/cm 2 8-MOP 0.01% 0.1 mg/ml 0.1% ( 1 mg/ml ) 5 Bithionol 6-MC (6-metheylcoumarin SLS Sodium lauryl sulfate 3 5

12 5mm 3 4mm DMSO 10%(w/v) 5 4 (100% ) (0%) 5 (100%) (100%) (0%) (0%) Vilber Lourmat SOL500 Dr.Honle (UVB) H1 (UVA-Meter, Dr.Honle ) 6.2 J/cm 2 540nm 2 2 ( ) 540nm 525nm L;% [100 X (OD OD ) (OD OD )] [100 X (OD OD ) (OD OD )] L 5 5 L L 3. 1) Musk ambrette Musk ketone, Musk xylene Phantolid Galaxolide 8-methoxypsoralen (8-MOP) 6

13 5-methoxypsoralen (5-MOP) 6-metheylcoumarin 6-MC 2) Parsol 1789, Parsol MCX ASL-24 ASL-24S Escalol 507(D) 3) Sulfanilamide Indomethacin Piroxicam Chlorpromazine (CPZ) 4) TCC Bithionol TBS TCSA 5) Rose bengal Acridine Anthracene TCSA 8-MOP DNA 5-MOP Musk ambrette, Bithionol, 6-MC sulfanilamide UVB Piroxicam Chlorpromazine Indomethacin EU/COLIPA in vivo 9 1) Anthracene 2) 4-t-butyl-4-methoxydibenzoylmethane (BMDM) 3) Amiodaron, Chlorpromazine (CPZ) 4) Bithionol, Chlorhexidine (CHD) 5) Acridine 6-methylcoumarin (6-MC) 6) Sodium lauryl sulfate (SLS) BMDM Parsol 1789 Parsol 1789 CHD SLS 7

14 4. in vivo in vivo 1) TCSA,8-MOP, 5-MOP, Phantolid, Galaxolide, Acridine, Anthracene 2) Musk ambrette, Musk ketone, Musk xylene, 6-metheylcoumarin, Sulfanilamide, Piroxicam, Chlorpromazine, TCC, Bithionol, TBS 3) Parsol 1789, Parsol MCX, ASL-24, ASL-24S, Escalol 507(D), Indomethacin, Rose bengal (+) TCSA 8-MOP 5-MOP Phantolid Galaxolide Acridine Anthracene Chlorpromazine Chlorpromazine 1) (-) TCC Sulfanilamide Indomethacin Piroxicam Parsol 1789 Parsol MCX ASL-24 ASL-24S Escalol 507(D) Musk ambrette Musk ketone Musk xylene Chloropromazine Sulfanilamide Piroxicam Musk in vivo in vivo 1) Acridine, Amidaron Anthracene 2) Bithionol, CPZ 6-MC 3) BMDM 4) CHD SLS b (+) Acridine Amidaron Anthracene CPZ (-) Bithionol 6-MC BMDM CHD SLS 1) 2) 1 2 3) 4) Bithionol 6-MC 8

15 ( ) R&D EU/COLIPA in vivo in vivo (P) (N) (E)

16 5.2.2 a in vivo Bithionol in vivo CHD b in vivo Amiodaron CPZ in vivo Anthracene c d in vivo Anthracene d in vivo Amiodaron Acridine e f e in vivo CPZ Acridine f CPZ Acridine a f b c e 2 <2mm: Negative, 2mm<diameter<5mm: Equivocal, >5mm: Positive nm 2 3 a b c 2 d e f In vivo Amiodaron b a c d in vivo CHD Bithionol b SLS c 6-MC 3 525nm ) 10 <5%: Negative, 5%<hemolysis<10%: Equivocal, >10%: Positive

17 540nm 525nm Anthracene a b e CPZ nm ) <5%: Negative, 5%<hemolysis<10%: Equivocal, >10%: Positive b c b b 11

18 Acridine BMDM CHD Bithionol CHD Bithonol in vivo 7 in vivo b 70% 64% 12

19 8 in vivo in vivo 9 b in vivo 13

20 nm 525nm 525 nm 10 in vivo MOP Rose bengal d f 1 14

21 c d f 2 (++)

22 SLS 6-MC in vivo SLS f 6-MC c 15 16

23 3 4 2 CHD Bithionol C % 3 4 in vivo in vitro 100% b 4 Acridine BMDM CHD Bithionol b in vivo 70% 6.1 ( ) UVA SOL500 Dr. Honle 17

24 UVB 8.5/cm 2 20J/cm mm 2mm 5mm 5mm 8-MOP 0.1 mg/ml 1mg/mL mg/ml nm 525nm 525nm 540nm 18

25 7. in vivo % 47% 70% 9 in vivo 3T3-NRU GLP GLP GLP GLP GLP GLP

26 GLP GLP GLP GLP GLP GLP GLP GLP ) GLP 2 20

27 A Strategic Approach for Predicting Phototoxicity of Cosmetic Ingredients Altern. Animal Test. Experiment., 9(1), (2002) 3T3-NRU in vivo in vivo T3 NR 3T3-NRU Evaluation of in vitro methods in terms of five parameters 18 Evaluation of the three battery systems 21

28 9.2 Effects of Light Sources on the Prediction of Phototoxicity by the Yeast Growth Inhibition Phototoxicity Assay and the Red Blood Cell Photohemolysis Assay Altern. Animal Test. Experiment., 10(1), 1-17 (2004) 24 solar simulator UVA Availability of the battery system in terms of correlation parameters. Solar simulator 3T3-NRU 3T3-NRU EU/COLIPA 2 3T3-NRU 20 Comparison of correlation parameters for the YGI PT assay, the RBC PH assay and the battery system with the use of the solar simulator Rs 3 2mL 22

29 OECD Guidance for Testing of Chemicals: 432, In vitro 3T3 NRU Phototoxicity Test, OECD/OCED., 13 April 2004 Balb/c 3T3 Neutral red Altern. Animal Test. Experiment., 10(2), (2004) Sugiyama M. et al., A Strategic Approach for Predicting Phototoxicity of Cosmetic Ingredients. Altern. Animal Test. Experiment., 9(1), (2002) Mori M. et al., Effects of Light Sources on the Prediction of Phototoxicity by the Yeast Growth Inhibition Phototoxicity Assay and the Red Blood Cell Photohemolysis Assay. Altern. Animal Test. Experiment., 10(1), 1-17 (2004) 23

30 9 3T3-NRU 2

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32 平成 22 年 5 月 20 日 株式会社資生堂 板垣宏様 国立医薬品食品衛生研究所安全性生物試験研究センター薬理部新規試験法評価室小島肇 酵母光成育阻害試験と赤血球光溶血試験の組み合わせによる光毒性試験代替法 評価報告書について 貴殿から頂きました評価報告書への質問を JaCVAM(Japanese Center for the Validation of Alternative Methods) の光毒性試験評価委員会および評価会議で議論し 以下のような修正 提言が新 たに追加されましたので ご連絡させて頂きます よろしくご理解頂けますようお願い申し上げます 1. 第三者評価報告書より オブザーバーとして記載されていた貴殿のお名前を削除します 2. 第三者評価報告書 p3 要旨および結論下から 5 行目 6 代謝活性化系が設定されていないため の前に 3T3-NRU 法と同様に を追記します 3. 本試験法のメリットの一つと考えられている水難溶性物質の評価が不十分であることから 4 物質以上の水難溶性物質 ( 光毒性が報告されている物質も含む ) を用いた追加バリデーションが必要であると評価会議は判断しました バリデーション実施には JaCVAM としても協力を惜しみませんので ご連絡をお待ちしております 4. 当初 本試験法に関する論文から 本試験法の光毒性の予測性は高いと判断され バリデーションは施設間再現性を確認するため 9 物質のみで実施されました その結果 施設間再現性が高いことを確認できましたが バリデーションの過程でプロトコルの改良がなされ 新たなプロトコルを用いたデータによる予測性が不明であると評価委員会は判断しました バリデーションを行う必要はありませんが 資生堂が過去の検討試験で用いた 24 物質程度 ( バリデーションが終了している物質は必要ありません ) の追加データを提出頂きますようお願い致します 5.3T3-NRU 法との同等性あるいは優位性につきましても 改定プロトコルでのデータを用いて判断したいと評価委員会は考えております ご了承下さい 6. 評価会議報告書および第三者評価報告書のその他の部分は修正しません ご了承ください 以上

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