平成17年度

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1 平 成 25 年 度 新 潟 市 衛 生 環 境 研 究 所 年 報 ( 調 査 研 究 報 告 ) 第 38 号 Annual Report of Niigata City Institute of Public Health and Environment 新 潟 市 衛 生 環 境 研 究 所 NIIGATA CITY INSTITUTE OF PUBLIC HEALTH AND ENVIRONMENT

2 も く じ (1)16SrRNA 遺 伝 子 の 塩 基 配 列 解 析 を 用 いたレジオネラ 属 菌 の 同 定 (2)Campylobacter jejuni におけるギラン バレー 症 候 群 関 連 遺 伝 子 の 保 有 状 況 について (3) 環 境 水 などから 検 出 した 大 腸 菌 の 病 原 因 子 保 有 率 について( 第 2 報 )--- 9 (4) 新 潟 市 における 2013/14 シーズンのインフルエンザウイルス 分 離 検 出 状 況 について (5) 新 潟 市 における 2012/13 および 2013/14 シーズンのインフルエンザウイルス 薬 剤 耐 性 遺 伝 子 について 状 況 (6) 下 水 における 下 痢 症 ウイルス 遺 伝 子 の 検 出 状 況 について( 第 2 報 ) (7) 市 販 二 枚 貝 からの 下 痢 症 ウイルス 遺 伝 子 の 検 出 状 況 について( 第 2 報 )-- 25 (8) 新 潟 市 河 川 における 水 生 底 生 生 物 実 態 調 査 ( 第 12 報 ) (9) 生 物 指 標 による 水 質 評 価 法 の 検 討 について (10) 新 潟 市 における 酸 性 雨 の 状 況 調 査 (11) 新 潟 市 沿 岸 海 域 における 水 質 の 現 状 と 汚 濁 調 査 について (12) 新 潟 市 における 海 塩 影 響 調 査 ( 第 4 報 )

3 調 査 研 究 報 告 (1) 16S rrna 遺 伝 子 の 塩 基 配 列 解 析 を 用 いたレジオネラ 属 菌 の 同 定 山 本 一 成 概 要 近 年, 分 離 菌 同 定 の 迅 速 法 として 16S リボゾーム RNA(16S rrna) 遺 伝 子 解 析 が 利 用 されて いる 一 般 的 にレジオネラ 属 菌 の 種 鑑 別 法 として 特 異 抗 血 清,イムノクロマトおよび 核 酸 を 用 いた 同 定 法 がある 今 回, 当 所 の 保 存 菌 株 で 同 定 されているもの 16 株 および 過 去 の 手 法 で 同 定 できず 保 存 されていた6 株 について16SrRNA 遺 伝 子 解 析 によるレジオネラ 属 菌 の 同 定 について 検 討 した 同 定 されていた 16 株 は, 過 去 の 同 定 と 一 致 した また, 未 同 定 たった 6 株 は Legionella longbeachae(l. longbeachae )2 株,Legionella spiritensis (L. spiritensis) 2 株,および Legionella feeleii(l. feeleii) 2 株 と 16S rrna 遺 伝 子 解 析 で 同 定 された また, 各 菌 株 は 系 統 樹 解 析 において 各 々のクラスターに 分 類 された 1 はじめに レジオネラ 属 菌 は, 河 川 や 湿 った 土 壌 などの 自 然 界 広 く 分 布 しており, 細 菌 や 藻 類 などの 代 謝 産 物 を 栄 養 源 としたり,または, 細 菌 捕 食 性 のアメーバなどの 原 虫 の 細 胞 内 で 増 殖 する 細 胞 内 寄 生 性 細 菌 である レジオネラ 属 菌 は 2011 年 8 月 時 点 で 52 種 の 菌 種 が 報 告 されている 1) レジオネラ 属 菌 は, 生 化 学 的 性 状 試 験 での 菌 種 鑑 別 同 定 は 非 常 に 難 しい 同 定 方 法 としては 市 販 の 特 異 抗 血 清 による 方 法,イムノクロマト 法 による 方 法 および 核 酸 を 用 いた 方 法 がある 核 酸 を 用 いた 方 法 には,ポリメラーゼ 連 鎖 反 応 による Legionella pneumophila とレジオネラ 属 菌 の 同 定 (PCR 法 ),DNA-DNA ハイブリダイゼーション( DDH レジオネラ 極 東 )による 同 定 および 16S rrna 遺 伝 子 解 析 によるシークエンス 法 がある 16S rrna は, 生 物 の 本 質 に 関 わる 機 能 を 持 った 部 分 であり, 遺 伝 子 の 長 さが 約 1,500bp で 塩 基 配 列 の 保 存 性 が 高 い 部 分 と 変 異 しやすい 部 位 も 含 まれており, 近 縁 種 でも 比 較 が 可 能 である と 言 われている 2) 米 国 薬 局 方,ヨーロッパ 薬 局 方 および 世 界 中 の 監 督 官 庁 は, 細 菌 および 親 近 の 遺 伝 子 解 析 による 同 定 を 推 奨 している また, 日 本 においても 2006 年 に, 日 本 薬 局 方 は 参 考 情 報 として, 遺 伝 子 解 析 による 微 生 物 の 迅 速 同 定 法 に 関 する 章 を 追 加 し,16S rrna 遺 伝 子 解 析 による 同 定 が 多 く 利 用 されている 3) 今 回, 保 存 菌 株 を 用 いて 16S rrna 遺 伝 子 解 析 を 行 い 若 干 の 知 見 を 得 たので 報 告 する 2 材 料 と 方 法 1) 材 料 当 所 で 過 去 に 分 離 し 保 存 されている 菌 株,Legionella pneumophila(l. pneumophila) 血 清 群 1~8,12,13,, Legionella Cherrii(L. Cherrii), Legionella feeleii(l. feeleii), Legionella anisa(l. anisa), Legionella dumoffii(l. dumoffii),legionella micdadei (L. micdadei), Legionella londiniensis(l. londiniensis)の 16 株 および 未 同 定 6 株 を 材 料 とした 2) 方 法 保 存 菌 株 を BCYEα 培 地 に 起 し, 国 立 感 染 症 研 究 所 の 病 原 体 検 出 マニュアル,レジオネラ 症 1)) に 準 じて 実 施 した 塩 基 配 列 の 決 定 には,Applied Biosysytems 3500 ジェネティックアナライ ザーを 用 い,ダイレクトシーケンス 法 により 行 った - 1 -

4 得 られた 塩 基 配 列 を DNA Data Bank of Japan(DDBJ)の BLAST( top.-j.html)で 相 同 性 解 析 を 行 い, 遺 伝 子 解 析 ソフト MEGA5 を 用 いて 系 統 樹 解 析 等 を 実 施 した 3 結 果 DDBJ BLAST における 相 同 性 解 析 の 結 果,100 から 98%と 高 い 相 同 性 が 得 られた また,アク セッション 番 号 の 菌 株 との 距 離 は,0.000 から であった( 表 ) また,Legionella 属 菌 6 株 は,L. longbeachae 2 株, L. spiritensis 2 株,および L. feeleii 2 株 と 16S rrna 遺 伝 子 解 析 で 同 定 された 系 統 樹 解 析 においても 各 々のクラスターに 分 類 された( 図 ) 4 考 察 今 回 の 結 果 より,16S rrna 遺 伝 子 解 析 および 系 統 樹 解 析 を 用 いることは, 通 常 の 方 法 で 同 定 できないときに 有 用 な 手 法 と 思 われた しかし,L.pneumophila の 血 清 群 の 鑑 別 は 不 可 能 であ り,ヒトへの 感 染 において 報 告 数 の 多 い L.pneumophila SG1 の 同 定 には, 特 異 抗 血 清 との 組 み 合 わせが 必 要 である 今 後, 特 異 抗 血 清 と 16S rrna 遺 伝 子 解 析 を 組 み 合 わせることにより, 正 確 な 同 定 が 可 能 と 思 わ れる 今 回 は,レジオネラ 菌 について 16S rrna 遺 伝 子 解 析 の 検 討 を 行 ったが,16S rrna は 全 ての 細 菌 に 普 遍 的 に 存 在 し 機 能 的 に 保 存 されているため, 近 年, 微 生 物 の 迅 速 法 として 使 用 されるている このことより, 他 の 菌 においても 生 化 学 的 性 状 等 で 同 定 不 可 能 の 場 合, 利 用 可 能 と 思 われるた め, 今 後 も 検 討 していく 必 要 がある 文 献 1) 国 立 感 染 症 研 究 所 : 病 原 体 検 出 マニュアル,レジオネラ 症 ( 平 成 23 年 10 月 7 日 改 訂 ). 2) Wikipedia :16S rrna 系 統 解 析, 3) Applied biosystems:microseq, 微 生 物 同 定 システム,

5 表 アクセッション 番 号 の 菌 株 と 相 同 性 および 距 離 同 定 株 ACCESSION Ident Distance Legionella_pneumophila_SG1 FR Legionella_pneumophila_SG2 FR Legionella_pneumophila_SG3 FR Legionella_pneumophila_SG4 FR Legionella_pneumophila_SG5 FR Legionella_pneumophila_SG6 FR Legionella_pneumophila_SG7 FR Legionella_pneumophila_SG8 FR Legionella_pneumophila_SG12 FR Legionella_pneumophila_SG13 FR Legionella_cherrii Z Legionella_feeleii X Legionella_anisa AY Legionella_dumoffii Z Legionella_micdadei AF Legionella_londiniensis FR Legionella_longbeachae(06-40) AY Legionella_longbeachae(06-41) AY Legionella_spiritensis(07-12) HF Legionella_spiritensis(07-13) HF Legionella_feeleii(13-22) X Legionella_feeleii(13-23) X

6 図 16S rrna 遺 伝 子 解 析 による 系 統 樹 - 4 -

7 調 査 研 究 報 告 (2) Campylobacter jejuni におけるギラン バレー 症 候 群 関 連 遺 伝 子 の 保 有 状 況 について 山 本 一 成 齊 藤 哲 也 概 要 Campylobacter jejuni( 以 下 C. jejuni)はギラン バレー 症 候 群 を 高 頻 度 に 誘 発 する 原 因 菌 として 知 られている 下 痢 症 患 者 便, 牛 の 便 や 胆 汁,および 市 販 の 鶏 肉 から 検 出 された C. jejuni のギラン バレー 症 候 群 発 症 に 係 る 遺 伝 子 の 保 有 状 況 について 調 査 した その 結 果, 最 もギラン バレー 症 候 群 を 発 症 させるリスクの 高 い C. jejuni は 牛 よりも 鶏 に 多 く 分 布 してい ると 思 われる 1 はじめに カンピロバクターは, 発 熱, 腹 痛, 下 痢, 血 便 などの 消 化 器 症 状 を 引 き 起 こす 食 中 毒 の 起 因 菌 である 現 在 日 本 では, 細 菌 性 食 中 毒 事 件 の 原 因 菌 として 上 位 を 占 めており, 本 市 において もカンピロバクターを 原 因 菌 とする 食 中 毒 事 件 が 年 間 を 通 して 1~2 件 発 生 している カンピロバクターによる 腸 炎 症 状 の 予 後 は 一 般 的 に 良 好 であるが,まれに 多 発 性 神 経 障 害 の 一 種 であるギラン バレー 症 候 群 (Guillain-Barré syndrome: 以 下 GBS)を 発 症 することがある 特 に C. jejuni は,GBS を 高 頻 度 に 発 症 させる 先 行 感 染 の 原 因 とされている C. jejuni による GBS の 発 症 機 序 には, 菌 体 表 層 にあるリポオリゴ 糖 ( 以 下 LOS)が 関 与 してい る この LOS の 一 部 に 神 経 細 胞 を 構 成 するガングリオシド(GM1,GD1a)との 分 子 相 同 性 を 有 する ものがある C. jejuni に 感 染 した 場 合 に 生 体 内 で 作 り 出 される 抗 体 が,ガングリオシド 様 と なり, 交 叉 抗 体 として 神 経 細 胞 に 作 用 することで GBS が 発 症 するとされている C. jejuni 菌 外 膜 に,このガングリオシド 様 LOS が 形 成 されるには,シアル 酸 転 移 酵 素,N-アセチルガラク トサミン 転 移 酵 素,およびガラクトース 転 移 酵 素 の 3 種 類 の 酵 素 が 必 要 である この 3 種 転 移 酵 素 遺 伝 子 をコードする 遺 伝 子 領 域 cstⅡ,cgta および cgtb の 保 有 状 況 により C. jejuni の GBS 発 症 に 関 するリスクを 評 価 することが 可 能 である 1) 今 回, 牛 由 来, 市 販 鶏 肉 由 来 および 下 痢 症 患 者 便 由 来 の C. jejuni について 転 移 酵 素 遺 伝 子 の 保 有 状 況 を 調 査 したので 報 告 する 2 材 料 および 方 法 材 料 C. jejuni 菌 株 収 集 のために 牛 の 便 30 件, 牛 の 胆 汁 30 件, 市 販 の 鶏 肉 8 件 を 検 査 した その 内, 牛 の 便 由 来 の 12 株, 牛 の 胆 汁 由 来 の 7 株, 市 販 鶏 肉 由 来 の 5 株,および 2007 年 から 2010 年 までに 分 離 された 下 痢 症 患 者 由 来 の 22 株, 計 46 株 を 検 体 とした PCR 法 M. Koga 2),Irving Nachamkin, 3) らが 報 告 した cstⅡ,cgta および cgtb を 検 出 するプライ マーを 用 い,PCR 法 にて 検 査 を 行 った 試 薬 は TaKaRa Taq を 用 いた 血 清 型 別 試 験 カンピロバクター 免 疫 血 清 (デンカ 生 研 )を 用 いて Penner 血 清 群 別 試 験 を 行 った 既 存 の 血 清 で 凝 集 が 見 られないものを Unknown Type ( 以 下 UT)とした - 5 -

8 3 結 果 結 果 を 図 1 および 表 1 に 示 す 牛 の 便 および 胆 汁 から 検 出 された C. jejuni は cstⅡを 19 株 中 8 株 (44%)が 保 有 しているものの, 他 の cgta,cgtb は 保 有 していなかった 一 方 で, 鶏 肉 から 検 出 された C. jejuni では 8 株 中 5 株 (63%)が cstⅡ,cgta および cgtb をすべて 保 有 していた 下 痢 症 患 者 便 から 検 出 された C. jejuni は 22 株 中 3 株 (14%)が 3 種 の 遺 伝 子 をすべて 保 有 していた また cstⅡを 単 独 で 保 有 するものが 22 株 中 2 株 ( 9%)であった 血 清 群 別 結 果 と GBS 関 連 遺 伝 子 との 内 訳 を 表 2, 表 3 および 表 4 に 示 す B 群 3 株 ( 牛 の 胆 汁 由 来 1 株, 患 者 便 由 来 2 株 ),D 群 4 株 ( 牛 の 便 由 来 1 株, 牛 の 胆 汁 由 来 1 株, 患 者 便 由 来 2 株 ), L 群 1 株 ( 鶏 肉 由 来 1 株 ),C 群,F 群,G 群,K 群,Y 群, 各 1 株 (すべて 患 者 由 来 ), UT が 33 株 であった N cstⅡ 204bp N cgta 527bp N cgtb 502bp 1~5: 鶏 肉 由 来,6~17: 牛 の 便 由 来,18~24: 牛 の 胆 汁 由 来 N:Negative control 図 1 PCR による cstⅡ,cgta および cgtb の 泳 動 結 果 - 6 -

9 表 1 GBS 関 連 遺 伝 子 の 保 有 状 況 調 査 数 C. jejuni 陽 性 数 cstⅡ cgta cgtb 牛 の 便 牛 の 胆 汁 鶏 肉 患 者 便 表 2 牛 の 便 お よ び 胆 汁 由 来 の C.j e j u n i の 血 清 群 と G B S 関 連 遺 伝 子 の 検 査 結 果 遺 伝 子 保 有 パターン 血 清 群 Penner cstⅡ cgta cgtb B D L UT 合 計 表 3 市 販 鶏 肉 由 来 の C. j e j u n i の 血 清 群 と GBS 関 連 遺 伝 子 の 検 査 結 果 遺 伝 子 保 有 パターン 血 清 群 Penner cstⅡ cgta cgtb B D L UT 合 計 表 4 下 痢 症 患 者 便 由 来 の C. j e j u n i の 血 清 群 と GBS 関 連 遺 伝 子 の 検 査 結 果 遺 伝 子 保 有 パターン 血 清 群 Penner cstⅡ cgta cgtb B C D F G K L Y UT 合 計 考 察 今 回 の 調 査 では, 最 も GBS 発 症 のリスクが 高 い cstⅡ,cgta および cgtb を 同 時 に 保 有 する C. jejuni は 鶏 肉 由 来 もしくは 下 痢 症 患 者 由 来 であった 牛 由 来,および 下 痢 症 患 者 由 来 と 比 較 すると, 鶏 肉 由 来 において GBS を 高 頻 度 に 発 生 させる 可 能 性 のある C. jejuni が 最 も 優 位 で あった 下 痢 症 患 者 便 由 来 の C. jejuni は 鶏 肉 由 来 には 劣 るものの, 比 較 的 高 い 割 合 (22 株 中 3 株 の 14%)で cstⅡ,cgta および cgtb を 同 時 に 保 有 していた この 患 者 の 下 痢 発 症 時 の 喫 食 状 - 7 -

10 況 を 確 認 することはできなかったが, 鶏 肉 を 喫 食 していた 可 能 性 が 示 唆 される 一 方 で, 牛 の 便 および 胆 汁 から 検 出 された C. jejuni の 一 部 は cstⅡのみ 保 有 しており, 他 の cgta および cgtb は 保 有 していなかった 血 清 群 については 日 本 では GBS 患 者 から Penner O 群 が 多 く 検 出 されるとの 報 告 があるが, 一 方 で 国 外 での 研 究 では 関 連 がないとの 報 告 もある 4) 今 回 の 調 査 では cstⅡ,cgta および cgtb を 同 時 に 保 有 する C. jejuni 1 株 ( 患 者 便 由 来 )が B 群 を 示 し,2 株 ( 患 者 便 由 来 )が D 群 を 示 した 更 に cstⅡを 単 独 で 保 有 する C. jejuni 1 株 ( 患 者 便 由 来 )も B 群 を 示 し,2 株 ( 牛 由 来 ) が D 群 を 示 した GBS 関 連 遺 伝 子 を 保 有 する C. jejuni の 血 清 群 が B 群 もしくは D 群 である 確 率 が 高 いことが 示 唆 されるが,この 点 については 更 なる 調 査 を 進 める 必 要 がある また 菌 株 収 集 に 用 いた 検 体 のうち, 市 販 鶏 肉 からの C. jejuni の 検 出 率 は 8 株 中 5 株 で 63% であった 市 販 されている 未 加 熱 の 鶏 肉 は 高 い 確 率 で C. jejuni に 汚 染 されていることがわか った 今 後, 保 健 所 と 連 携 して C. jejuni の 感 染 予 防 に 資 するために, 市 販 鶏 肉 の 検 査 数 を 増 やし, 新 たに 食 中 毒 等 で 分 離 されたヒト 由 来 の 菌 株 の 検 査 を 加 え,GBS 発 症 に 関 与 する 転 移 酵 素 遺 伝 子 の 保 有 状 況 を 引 き 続 き 調 査 していく 必 要 がある 参 考 文 献 1) Michiaki Koga,:Comprehensive analysis of bacterial risk factors for the development of Guillain-Barré syndrome after Campylobacter jejuni enteritis, J Infect Dis. (2006) 2) Michiaki Koga,: Campylobactor gene polymorphism as a determinant of clinical features of Guillain-Barré syndrome,aan Enterprises, Inc.(2005) 3) Irving Nachamkin,: Campylobactor jejuni from Patients with Guillain-Barré Sundrome Preferentially Expresses agd1a-like Epitope,Infection and Immunity.(2002) 4) Parker, C.T.et al: Comparison of Campylobacter jejuni lipooligosaccharide biosynthesis loci from a variety of sources, J. Clin.Microbiol.,Jun.,p.2771~2781(2005) - 8 -

11 調 査 研 究 報 告 (3) 環 境 水 などから 検 出 した 大 腸 菌 の 病 原 因 子 保 有 率 について( 第 2 報 ) 足 立 玲 子 高 橋 裕 子 概 要 平 成 24 年 度 に 引 き 続 き, 河 川 水 及 び 下 水 から 分 離 した 大 腸 菌 157 株 について 大 腸 菌 病 原 因 子 のうち 9 種 のマルチプレックス PCR を 実 施 した その 結 果 eae,asta,afad,aggr 遺 伝 子 を 検 出 し, 病 原 因 子 の 検 出 率 は 8.3 %であった はじめに 大 腸 菌 (Escherichia coli)はヒトなどの 腸 管 内 正 常 細 菌 叢 の 一 つであり,ほとんどは 病 原 性 を 示 さないが, 一 部 に 下 痢 などを 引 き 起 こすものがあり, 下 痢 原 性 大 腸 菌 と 総 称 されてい る 下 痢 原 性 大 腸 菌 は 乳 幼 児 の 胃 腸 炎 の 病 原 菌 として 1927 年 T.Adam(アダム)が 最 初 に 報 告 し たとされ,その 後 も 多 くの 報 告 がなされてきた 1) 2012 年 1 月 から 下 痢 原 性 大 腸 菌 の 分 類 が 改 定 され, 腸 管 出 血 性 大 腸 菌 ( 以 下 EHEC), 腸 管 毒 素 性 大 腸 菌 ( 以 下 ETEC), 腸 管 侵 入 性 大 腸 菌 ( 以 下 EIEC), 腸 管 病 原 性 大 腸 菌 ( 以 下 EPEC), 腸 管 付 着 性 大 腸 菌 ( 以 下 EAggEC),その 他 の 下 痢 原 性 大 腸 菌 の 6 種 類 に 区 別 するようになった これらの 下 痢 原 性 大 腸 菌 と 正 常 細 菌 叢 の 大 腸 菌 とを 区 別 するためには 病 原 因 子 を 検 索 する 必 要 がある 2) これらの 人 を 取 り 巻 く 環 境 中 での 分 布 状 況 を 把 握 し, 食 品 などへの 汚 染 要 因 を 検 討 する 基 礎 資 料 とするため, 河 川 水 と, 下 水 処 理 場 の 浄 化 前 の 流 入 水 ( 以 下 下 水 )について 昨 年 度 に 引 き 続 き 病 原 因 子 保 有 状 況 を 調 査 したので 報 告 する 材 料 昨 年 度 と 同 様 に 環 境 基 準 監 視 のための 河 川 水 および 下 水 を 検 体 とした 河 川 水 は 平 成 25 年 5, 8,11 月, 平 成 26 年 2 月 に, 下 水 については 平 成 25 年 5,6,7,9,10,11 月, 平 成 26 年 1, 2 月 に 検 査 を 実 施 した 方 法 材 料 からの 大 腸 菌 株 の 採 取 および 病 原 因 子 の 検 索 は, 昨 年 度 と 同 様 に 行 った すなわち, 河 川 水 については 要 測 定 指 標 ( 大 腸 菌 )の 測 定 について 3) に 従 い 測 定 し, 測 定 後 の 大 腸 菌 のコロニーを 無 作 為 に 供 試 した 大 腸 菌 数 測 定 に 用 いた 酵 素 基 質 培 地 は ES コリマ ーク 寒 天 培 地 ( 栄 研 化 学 )を 使 用 した 大 腸 菌 と 判 定 した 菌 株 について, 平 成 23 年 度 細 菌 研 修 テキストの 方 法 より 大 腸 菌 病 原 因 子 の PCR を 実 施 した EHEC については VT 遺 伝 子,ETEC については LT,ST 遺 伝 子,EIEC については inve 遺 伝 子,EPEC については eae 遺 伝 子,bfpA 遺 伝 子,EAggEC については aggr 遺 伝 子 を,そ の 他 の 下 痢 原 性 大 腸 菌 については afad 遺 伝 子,astA 遺 伝 子 の 9 遺 伝 子 についてマルチプレッ クス PCR を 実 施 した 病 原 因 子 を 検 出 した 株 について, 病 原 大 腸 菌 免 疫 血 清 (デンカ 生 研 )1 号 セットを 用 いたス ライド 凝 集 反 応 による O 群 血 清 型 別 を 実 施 した O 群 が 決 定 した 株 については,さらに 同 免 疫 血 清 2 号 セットを 用 いて 試 験 管 内 での 凝 集 での H 型 別 を 行 った 下 水 については,ES コリマーク 寒 天 培 地 と 下 水 を 混 釈 し,37 20 時 間 培 養 後 のコロニーを 無 - 9 -

12 作 為 に 釣 菌 し, 性 状 確 認 した 菌 株 を 河 川 水 と 同 様 に 実 施 した 結 果 河 川 水 98 株, 下 水 59 株 の 計 157 株 について 大 腸 菌 病 原 因 子 を 検 索 した PCR による 検 出 状 況 およびその 血 清 型 別 を 表 1に 示 した eae 遺 伝 子 を 河 川 水 から 5 株, 下 水 から 2 株 検 出 した aggr 遺 伝 子 を 下 水 から 1 株,astA 遺 伝 子 を 河 川 水 から 4 株 そして afad 遺 伝 子 を 下 水 から1 株 検 出 した VT 遺 伝 子, LT 遺 伝 子,ST 遺 伝 子,bfpA 遺 伝 子 および inve 遺 伝 子 は, 河 川 水, 下 水 からの いずれからも 検 出 しなかった 病 原 因 子 別 にみると,eae 遺 伝 子 が 4.4%,astA 遺 伝 子 2.5%,afaD 遺 伝 子 0.6%,aggR 遺 伝 子 0.6%の 検 出 率 であり, 検 体 別 では, 河 川 水 9.2%, 下 水 6.8%であった 全 体 では,8.3%であり, 複 数 の 病 原 因 子 を 保 有 する 株 はなかった 血 清 型 別 では, 下 水 中 の eae 遺 伝 子 保 有 株 1 株 が O63:H6, 同 じく afad 遺 伝 子 を 持 った 株 が O168:HNM(NM は 非 運 動 性 )であった 他 の 病 原 遺 伝 子 が 検 出 された 11 株 は 全 て OUT であった 表 1. 病 原 因 子 検 出 状 況 と 血 清 型 別 ( 平 成 25 年 度 ) 河 川 水 血 清 型 別 下 水 血 清 型 別 病 原 因 子 別 検 出 数 ( 率 %) eae 遺 伝 子 5 全 て OUT 2 O63:H6,OUT 7 (4.4) asta 遺 伝 子 4 全 て OUT 4 (2.5) afad 遺 伝 子 1 O168:HNM 1 (0.6) aggr 遺 伝 子 1 OUT 1 (0.6) 小 計 検 出 率 (%) 考 察 昨 年 度 に 引 き 続 き, 環 境 での 循 環 水 を 検 体 として,ヒトの 下 痢 症 にかかわる 大 腸 菌 の 病 原 因 子 の 保 有 状 況 を 調 査 した 平 成 25 年 度 の 調 査 では 病 原 因 子 を 検 出 した 大 腸 菌 は 13 株 (6 パターン)8.3%であった,VT 遺 伝 子,LT,ST 遺 伝 子,invE 遺 伝 子,bfpA 遺 伝 子 は 検 出 されなかった 昨 年 度 検 出 されなか った aggr 遺 伝 子 が 下 水 から 検 出 された 表 2. 由 来 別 の 病 原 因 子 検 出 率 の 年 度 別 状 況 ( 検 出 率 %) 河 川 水 H24 河 川 水 H25 下 水 H24 下 水 H25 VT 遺 伝 子 eae 遺 伝 子 asta 遺 伝 子 afad 遺 伝 子 aggr 遺 伝 子 いずれかの 保 有 昨 年 度 の 結 果 と 比 較 すると,VT および aggr 遺 伝 子 で 検 出, 不 検 出 の 差 はあったが,いずれ も 検 出 率 は 著 しく 低 く, 他 の 病 原 因 子 についても 検 出 率 を 考 慮 すると 大 きな 差 異 とは 認 められ

13 ないと 思 われる また, 昨 年 度 からを 通 じて, 下 水 より 河 川 水 の 方 が 全 体 の 病 原 性 因 子 の 検 出 率 が 高 い 傾 向 が うかがわれる 今 後 さらにデータを 重 ねて, 上 記 のような 傾 向 を 確 認 するとともに, 食 品 など 人 との 接 触 の より 高 い 材 料 や 胃 腸 炎 の 起 因 となったものとの 比 較 検 討 が 必 要 である 参 考 文 献 1) 坂 崎 利 一 編 集 : 新 訂 食 水 系 感 染 症 と 細 菌 性 食 中 毒 中 央 法 規 2000 年 2) 特 集 下 痢 原 性 大 腸 菌 2011 年 現 在 : 病 原 微 生 物 検 出 情 報 Vol.33 No 年 1 月 3) 平 成 23 年 3 月 24 日 付 け 環 水 大 水 発 第 号 4) 環 境 水 などから 検 出 した 大 腸 菌 の 病 原 因 子 保 有 率 について 新 潟 市 衛 生 環 境 研 究 所 平 成 24 年 度 年 報 調 査 研 究 報 告 (2)

14 調 査 研 究 報 告 (4) 新 潟 市 における 2013/14 シーズンのインフルエンザウイルス 分 離 検 出 状 況 について 小 林 元 概 要 新 潟 市 における 2013/14 シーズンのインフルエンザ 患 者 報 告 数 は 2014 年 第 2 週 (2014 年 1 月 6 日 から 12 日 )に 定 点 あたり 報 告 数 が 1.00 を 上 回 り,2014 年 第 9 週 (2014 年 2 月 24 日 から 3 月 2 日 )に となり,ピークを 迎 えた 今 シーズンのインフルエンザウイルスの 分 離 検 出 状 況 は 2013 年 第 52 週 までは AH3 亜 型 インフルエンザウイルス( 以 下 AH3 亜 型 )が 主 流 であったが,2014 年 第 1 週 以 降 は AH1pdm09 インフルエンザウイルス( 以 下 AH1pdm09) が 主 流 となった B 型 インフルエンザウイルス( 以 下 B 型 )は 山 形 系 統,ビクトリア 系 統 とも に 検 出 されたが, 大 半 が 山 形 系 統 であった 分 離 したインフルエンザウイルスの HI 試 験 を 行 ったところ,AH1pdm09 および B 型 はすべてワクチン 類 似 株 であった AH3 亜 型 では 流 行 後 期 に 抗 原 性 の 異 なる 株 が 検 出 された 1.はじめに インフルエンザは 冬 期 に 発 生, 患 者 が 次 第 に 増 加 し 4~5 月 にかけて 減 少 する 季 節 性 流 行 を 毎 年 繰 り 返 し, 年 によって 差 はあるものの 推 定 国 内 で 平 均 1,000 万 人 以 上 の 罹 患 者 が 発 生 する 身 近 な 疾 患 である また, 感 染 症 の 予 防 及 び 感 染 症 の 患 者 に 対 する 医 療 に 関 する 法 律 で 5 類 感 染 症 に 分 類 され, 感 染 症 法 に 基 づく 感 染 症 発 生 動 向 調 査 事 業 においては 定 点 把 握 対 象 疾 患 として, 全 国 約 5,000 のインフルエンザ 定 点 医 療 機 関 ( 小 児 科 3,000, 内 科 2,000)から 週 ごとに, 患 者 の 発 生 状 況 などの 情 報 が 収 集 解 析 されている さらに, 地 方 衛 生 研 究 所 では 主 に 病 原 体 定 点 (インフルエンザ 定 点 の 約 10%)で 採 取 された 検 査 材 料 からウイルス 分 離 を 実 施 し, 抗 原 解 析 などの 性 状 検 査 を 実 施 している この 検 査 結 果 は 病 原 体 検 出 情 報 システムに 登 録 し, 国 立 感 染 症 研 究 所 感 染 症 情 報 センターで 集 約 され,インフルエンザの 流 行 予 測 およびワクチン 株 選 定 に 活 用 されている 当 所 においても 感 染 症 発 生 動 向 調 査 の 一 環 として,インフルエンザウイ ルスの 分 離 検 出 を 行 っており,2013/14 シーズンのインフルエンザウイルスの 分 離 検 出 状 況 と 分 離 株 の 性 状 について 若 干 の 知 見 を 得 たので 報 告 する 2. 材 料 と 方 法 2013 年 第 36 週 から 2014 年 第 23 週 までに 病 原 体 定 点 医 療 機 関 などでインフルエンザあるい はインフルエンザ 様 疾 患 と 診 断 された 患 者 より 採 取 された 咽 頭 ぬぐい 液 などの 検 体 を 材 料 とし てウイルス 分 離 培 養 を 行 い 分 離 された 88 株 のインフルエンザウイルスを 対 象 とした ウイル ス 分 離 には MDCK,LLC-MK2,Hep-2,HeLa,RD-18s,Caco2 及 び Vero 細 胞 を 用 いて 常 法 に 従 って 細 胞 培 養 を 行 った 分 離 したウイルス 株 の 型 別 同 定 は 国 立 感 染 症 研 究 所 インフルエン ザウイルス 研 究 センターから 配 布 された 2013/2014 シーズン 用 インフルエンザウイルス 同 定 キット を 用 いてインフルエンザ 診 断 マニュアル 1) に 準 拠 し,モルモット 血 球 を 使 用 して 赤 血 球 凝 集 阻 止 試 験 (HI 試 験 )により 実 施 した また,HI 試 験 が 実 施 できなかったものについては リアルタイム PCR 法 (インフルエンザ 診 断 マニュアル 準 拠 )により 同 定 を 行 った 3. 結 果 2013/2014 シーズンに 当 所 で 分 離 されたインフルエンザウイルス 88 株 のうち AH1pdm

15 は 51 株 (58.0%),AH3 亜 型 は 19 株 (21.6%),B 型 山 形 系 統 は 17 株 (19.3%),B 型 ビクトリ ア 系 統 は 1 株 (1.1%)であった また, 亜 型 別 の 推 移 は 2013 年 第 43 週 から 第 51 週 までは AH3 亜 型 のみが 分 離 されていたが 第 52 週 には AH3 亜 型 に 加 え,AH1pdm09,B 型 山 形 系 統 も 分 離 された それ 以 降 は AH1pdm09 の 分 離 数 が 増 加 し 主 流 となったが,AH3 亜 型,B 型 も 数 は 少 ないものの, 流 行 終 期 まで 継 続 して 分 離 された 分 離 された 88 株 のうち,85 株 については HI 試 験 により 同 定 が 可 能 であったが,3 株 (AH1pdm09 1 株,AH3 亜 型 2 株 )については HI 試 験 に 必 要 な HA 価 が 得 られず,リアルタイ ム PCR により 同 定 を 行 った HI 試 験 を 実 施 した 85 株 のうち,AH1pdm09 50 株 および B 型 18 株 については,すべてワクチン 株 類 似 株 (HI 試 験 で 2 管 差 以 内 )であったが,AH3 亜 型 17 株 のうち 3 株 はワクチン 株 に 比 べ HI 価 が 大 きく 低 下 したもの(HI 試 験 で 4 管 差 )であった 1.1% 19.3% AH1pdm09 AH3 21.6% 58.0% B/Yamagata B/Victoria 図 1:インフルエンザウイルス 分 離 検 出 報 告 数 の 割 合 (2013/14 シーズン: 新 潟 市 ) 分 離 検 出 報 告 数 ( 株 数 ) B/Victoria B/Yamagata AH3 AH1pdm09 検 体 採 取 週 図 2: 検 体 採 取 週 別 インフルエンザウイルス 分 離 検 出 報 告 数 (2013/14 シーズン: 新 潟 市 ) 4. 考 察 新 潟 市 でのインフルエンザ 定 点 あたり 報 告 数 の 推 移 は 2014 年 第 2 週 (2014 年 1 月 6 日 から 12 日 )に 定 点 あたり 報 告 数 が 1.00 を 上 回 り,2014 年 第 9 週 (2014 年 2 月 24 日 から 3 月 2 日 ) に となり, 今 シーズンのピークを 迎 えた 全 国 での 推 移 2) は 2013 年 第 51 週 (2013 年 12 月 16 日 から 22 日 )に 流 行 開 始 の 指 標 である 1.00 を 上 回 り,2014 年 第 5 週 (2014 年 1 月 27 日 から 2 月 2 日 )にピークを 迎 え,その 後 緩 やかに 減 少 しており, 流 行 のピークの 大 きさや 時 期 に 若 干 の 違 いはあるものの, 流 行 の 開 始 時 期 および 終 息 時 期 については 当 市 との 大 きな 違 いは なかった

16 患 者 報 告 数 ( 人 ) 新 潟 市 新 潟 県 全 国 0 診 断 週 図 3:インフルエンザウイルス 定 点 患 者 報 告 数 (2013/14 シーズン) 今 シーズンのインフルエンザウイルスの 分 離 状 況 は 2013 年 第 52 週 までは AH3 亜 型 が 主 流 であったが,2014 年 第 1 週 以 降 は AH1pdm09 が 主 流 となった B 型 は 山 形 系 統,ビクトリア 系 統 ともに 分 離 されたが, 大 半 が 山 形 系 統 であった このことは 全 国 的 な 傾 向 3)と 大 きな 違 い はなかった 分 離 したインフルエンザウイルスの HI 試 験 の 結 果 では,AH1pdm および B 型 はすべてワク チン 株 類 似 株 であったが,AH3 亜 型 では 流 行 後 期 (2014 年 第 11 週, 第 12 週, 第 14 週 )にワク チン 株 に 比 べ HI 価 が 大 きく 低 下 した 株 が 検 出 された AH3 亜 型 ウイルスについてはヒトでの 流 行 ウイルスを 孵 化 鶏 卵 で 分 離 増 殖 させるとアミノ 酸 の 置 換 が 生 じ( 卵 馴 化 ), 抗 原 性 が MDCK 細 胞 で 分 離 したものに 比 べ 著 しく 異 なる 傾 向 を 示 すといわれている 4) 今 シーズンのワクチン 株 に 対 して 作 製 したフェレット 感 染 抗 血 清 は 今 シーズンに MDCK 細 胞 で 分 離 された 74%の 国 内 流 行 株 に 対 して 大 きく 反 応 性 が 低 下 しているとの 報 告 5)もあり, 当 所 で 分 離 した AH3 亜 型 も このことによる 影 響 を 受 けている 可 能 性 もあるが, 今 回 の 検 査 結 果 だけでは 判 断 できない ま た,2014/15 シーズンのワクチンについては AH3 亜 型 のウイルス 株 の 変 更 が 公 表 されており, 来 シーズンの 動 向 にも 注 意 が 必 要 である インフルエンザウイルスの 分 離 培 養 検 出 はインフルエンザの 流 行 状 況 の 把 握 やワクチン 株 の 選 定 等, 公 衆 衛 生 上 重 要 な 役 割 を 担 っており, 今 後 も 継 続 して 実 施 する 必 要 があると 考 える 謝 辞 検 査 材 料 の 採 取 にご 協 力 いただきました 病 原 体 定 点 医 療 機 関 の 方 々に 深 謝 いたします 文 献 1) 国 立 感 染 症 研 究 所 : 病 原 体 検 出 マニュアル,インフルエンザ 診 断 マニュアル( 第 2 版 ) 2) 厚 生 労 働 省 健 康 局 結 核 感 染 症 課 国 立 感 染 症 研 究 所 : 今 冬 のインフルエンザの 発 生 動 向 (2013/14 シーズン) 3) 国 立 感 染 症 研 究 所 :IASR インフルエンザウイルス 分 離 検 出 速 報, 4) 国 立 感 染 症 研 究 所 : 平 成 25 年 度 インフルエンザ HA ワクチン 製 造 株 の 検 討 について( 回 答 ), 感 染 研 第 232 号 5) 国 立 感 染 症 研 究 所 : 平 成 26 年 度 インフルエンザ HA ワクチン 製 造 株 の 検 討 について( 回 答 ), 感 染 研 第 626 号

17 調 査 研 究 報 告 (5) 新 潟 市 における 2012/13 および 2013/14 シーズンのインフルエンザウイ ルス 薬 剤 耐 性 遺 伝 子 について 山 本 一 成 概 要 新 潟 市 における 2012/13(2013 年 4 月 から 8 月 )および 2013/14(2013 年 9 月 から 2014 年 3 月 )シーズンの 流 行 株 は,AH3N2 亜 型 インフルエンザウイルス(A/H3N2 亜 型 ),A(H1N1)pdm09 亜 型 インフルエンザウイルス(A(H1N1)pdm09 亜 型 ),B 型 インフルエンザウイルス(B 型 )の Yamagata 系 統 および Victoria 系 統 であった 2012/13 シーズンは,A/H3N2 亜 型 が 主 流 であっ た 2013/14 シーズンは,A/H3N2 亜 型 から A(H1N1)pdm09 亜 型 および B 型 の Yamagata 系 統 の 混 合 へと 遷 移 した A/H3N2 亜 型 (36 検 体 ),A(H1N1)pdm09 亜 型 (46 検 体 ),Yamagata 系 統 (27 検 体 )および Victoria 系 統 (2 検 体 )について 薬 剤 耐 性 遺 伝 子 の 変 異 を 調 査 したところ,2013 年 第 7 週 の A(H1N1)pdm09 亜 型 1 件 でアミノ 酸 配 列 解 析 において H275H/Y が 見 つかったため, 国 立 感 染 症 研 究 所 で 薬 剤 感 受 性 試 験 を 実 施 したところ,オセルタミビル べラミビルの 両 薬 剤 に 対 し 感 受 性 の 低 下 が 確 認 された はじめに インフルエンザは 冬 季 に 発 生 し,4 月 ~5 月 に 減 少 する 冬 期 流 行 パターンを 示 す 疾 患 である インフルエンザの 原 因 となるインフルエンザウイルスは A 型,B 型,C 型 があり,ヒトのイン フルエンザの 原 因 となるウイルスは A 型 と B 型 が 主 である A 型,B 型 インフルエンザウイル スは 人 畜 共 通 感 染 で 突 然 変 異 が 起 こりやすく,ヒトではウイルスに 対 する 免 疫 の 持 続 も 短 く, 毎 年 流 行 を 繰 り 返 している 過 去 に 不 連 続 変 異 により,スペインかぜ(A/H1N1 亜 型 ),アジア かぜ(A/H2N2 亜 型 ), 香 港 かぜ(A/H3N2 亜 型 ),ソ 連 かぜ(A/H1N1 亜 型 ), 新 型 インフルエ ンザ(A(H1N1)pdm09 亜 型 )などが 出 現 しパンデミックを 起 こしてきた インフルエンザは,5 類 感 染 症 ( 感 染 症 の 予 防 及 び 感 染 症 の 患 者 に 対 する 医 療 に 関 する 法 律 ) に 分 類 されており, 感 染 症 法 に 基 づく 感 染 症 発 生 動 向 調 査 では, 全 国 約 5,000 のインフルエン ザ 定 点 医 療 機 関 ( 小 児 科 3,000, 内 科 2,000)から,インフルエンザと 診 断 された 患 者 数 の 情 報 が 報 告 されている また, 地 方 衛 生 研 究 所 では,インフルエンザウイルス 遺 伝 子 検 出 やウイル ス 分 離 を 実 施 し, 結 果 は 中 央 感 染 症 情 報 センターで 集 約 され,インフルエンザウイルスの 流 行 予 測 および 次 年 度 ワクチン 株 選 定 に 活 用 されている また, 地 方 衛 生 研 究 所 と 国 立 感 染 症 研 究 所 では, 抗 インフルエンザ 薬 剤 耐 性 株 サーベイランスを 実 施 している 2012/13(2013 年 4 月 から 8 月 )および 2013/14(2013 年 9 月 から 2014 年 3 月 )シーズンの 新 潟 市 におけるインフルエンザウイルスの 薬 剤 耐 性 遺 伝 子 の 変 異 について 調 査 したので 結 果 を 報 告 する 材 料 と 方 法 1) 材 料 2013 年 4 月 から 2014 年 3 月 までに, 病 原 体 定 点 医 療 機 関 などでインフルエンザあるいはイ ンフルエンザ 様 疾 患 の 患 者 より 採 取 された 咽 頭 ぬぐい 液, 鼻 腔 ぬぐい 液, 気 管 支 吸 引 痰 および 気 管 支 肺 胞 洗 浄 液 検 体 (111 検 体 )を 材 料 とした 2) 方 法 A(H1N1)pdm09 亜 型 および B 型 の 薬 剤 耐 性 遺 伝 子 の 変 異 検 出 は,インフルエンザ 診 断 マニュア

18 ル( 第 2 版 ) 1) に 準 じて 実 施 した また,A/H3N2 亜 型 については, 長 島 ら 2)3) を 参 考 に 実 施 し た シークエンス 反 応 は,BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit(Applied Biosystems)を 用 い,Applied Biosysytems 3500 ジェネティッ クアナライザーを 用 いて 塩 基 配 列 を 決 定 した 得 られた 塩 基 配 列 を 基 に 遺 伝 子 解 析 ソフト MEGA5 を 用 いて 系 統 樹 解 析 およびアミノ 酸 配 列 解 析 を 実 施 した インフルエンザ 診 断 マニュアル( 第 2 版 ) 1),Monto ら 4) および Sheu ら 5) を 参 考 に,A(H1N1)pdm09 亜 型 については,H275Y の 薬 剤 耐 性 遺 伝 子 の 変 異 を,A/H3N2 亜 型 につい ては,E119V,D151E,D151V,R152K,R224K,Q226H,G248R,K249E,H274Y,E276D,R292K に ついて 薬 剤 耐 性 遺 伝 子 の 変 異 の 有 無 について 確 認 した また,B 型 については,E119D,E119G, E119A,E119V,R152K,D198E,I222T について 薬 剤 耐 性 遺 伝 子 の 変 異 の 有 無 について 確 認 した 結 果 薬 剤 耐 性 遺 伝 子 の 変 異 を 調 査 したところ,A(H1N1)pdm09 亜 型 で 46 検 体 中 1 検 体 (2.17%)に H275H/Y のアミノ 酸 の 変 異 がみられた A/H3N2 亜 型 36 検 体 に E119V,D151E,D151V,R152K, R224K,Q226H,G248R,K249E,H274Y,E276D,R292K の 薬 剤 耐 性 遺 伝 子 の 変 異 はみられなかっ た また,B 型 についても E119D,E119G,E119A,E119V,R152K,D198E,I222T の 薬 剤 耐 性 遺 伝 子 の 変 異 はみられなかった A(H1N1)pdm09 亜 型,A/H3N2 亜 型 および B 型 の NA 遺 伝 子 系 統 樹 を 図 1, 図 2, 図 3 に 示 す( は,2012/13 および 2013/14 シーズンのワクチン 株, は,2012/13 シーズンのワクチン 株, は,2013/14 シーズンのワクチン 株 ) 考 察 新 潟 市 の 流 行 は,2012/13 及 び 2013/14 シーズンの 両 期 とも 開 始 当 初,A 型 インフルエンザウ イルスの 主 流 は A/H3N2 亜 型 であった しかし,20013/14 シーズンは A(H1N1)pdm09 亜 型 と B 型 の 混 合 へと 遷 移 した この 傾 向 は 国 内 の 流 行 状 況 と 一 致 している また,B 型 インフルエン ザウイルスの 国 内 流 行 状 況 は,Yamagata 系 統 と Victoria 系 統 の 比 率 は 2:1 と 言 われているが 6 ), 新 潟 市 では, 圧 倒 的 に Yamagata 系 統 が 多 かった A/H3N2 亜 型 および B 型 ともアミノ 酸 配 列 解 析 より 薬 剤 耐 性 遺 伝 子 の 変 異 はみられなかった 例 年, 培 養 上 清 を 用 いて 実 施 すると 151 位 のアスパラギン 酸 (D)からアスパラギン 酸 とグル タミン 酸 (G)の D151G/D 等 の 混 合 パターンがみられる 検 体 がある D151G/D や D151N 変 異 は 細 胞 培 養 中 にも 起 こると 言 われているが, 今 回 は 臨 床 検 体 にて 実 施 したことにより 混 合 パタ ーンはみられなかった その 反 面, 泳 動 時 に 非 特 異 バンドがみられる 検 体 が 多 く,ゲル 切 出 し による 抽 出 検 体 数 が 増 えた これに 対 しては,DNase 処 理 を 加 えることにより 改 善 されるか 検 討 する 余 地 があると 思 われる 2014 年 4 月 28 日 現 在, 全 国 的 に 4.5%の 割 合 で H275H と H275H/Y 株 が 報 告 されている 当 所 においては,1 検 体 ( 図 2 中 14-51)に H275H/Y のヒスチジン(H)とチロシン(Y)のアミ ノ 酸 の 混 合 パターンがみられ 2.2%の 割 合 であり, 全 国 と 同 じ 傾 向 であった H275H/Y は, 治 療 中 および 治 療 後 の 患 者 からみられることが 有 り, 今 回 の 事 例 もべラミビル 投 与 後 の 検 体 であ った NA 遺 伝 子 の 系 統 樹 解 析 により 今 シーズン, 札 幌 市 等 でみられている H257Y 株 とは 違 う クラスター 群 を 示 した また, 国 立 感 染 症 研 究 所 で 薬 剤 感 受 性 試 験 を 実 施 し,オセルタミビル べラミビルの 両 薬 剤 に 対 し 感 受 性 の 低 下 が 確 認 された 日 本 は 世 界 最 大 の 抗 インフルエンザ 薬 使 用 国 である 薬 剤 耐 性 遺 伝 子 の 変 異 を 迅 速 に 把 握 することは, 公 衆 衛 生 上 重 要 でありワクチンや 薬 剤 の 有 効 性 などの 動 向 を 探 る 上 でも, 保 健 所 感 染 症 対 策 室 と 連 携 しながら 調 査 をしていく 必 要 がある

19 謝 辞 検 査 材 料 の 採 取 にご 協 力 いただきました 各 医 療 機 関 および 施 設 等 の 方 々に 深 謝 いたします 文 献 1) 国 立 感 染 症 研 究 所 : 病 原 体 検 出 マニュアル,インフルエンザ 診 断 マニュアル( 第 2 版 ) 平 成 24 年 3 月. 2) 長 島 真 美, 他 : 東 京 都 健 康 安 全 研 究 センター, 研 究 年 報,60,61-66, ) 長 島 真 美, 他 : 東 京 都 健 康 安 全 研 究 センター, 研 究 年 報,62,57-63, )Monto,A.S,McKimm-Berschkin,J.L.,et al.:antimicrobial Agents and Chemotherapy., 50, , )Sheu,T.G.,Deyde,V.M.,et al.:antimicrobial Agents and Chemotherapy.,52, , ) 国 立 感 染 症 研 究 所 : 今 冬 のインフルエンザの 発 生 動 向 (2013/14 シーズン) 7) 国 立 感 染 症 研 究 所 : 抗 インフルエンザ 薬 剤 耐 性 サーベイランス 2014 年 4 月 28 日 図 1 A/H3N2 亜 型 NA 遺 伝 子 の 分 子 系 統 樹

20 図 2 A(H1N1)pdm09 亜 型 NA 遺 伝 子 の 分 子 系 統 樹

21 図 3 B 型 NA 遺 伝 子 の 分 子 系 統 樹

22 調 査 研 究 報 告 (6) 下 水 における 下 痢 症 ウイルス 遺 伝 子 の 検 出 状 況 について( 第 2 報 ) 桃 井 拓 也 齋 藤 哲 也 足 立 玲 子 南 波 裕 太 概 要 当 所 では 平 成 24 年 度 より, 下 水 における 下 痢 症 ウイルスの 遺 伝 子 を 調 査 している 今 年 度 は, 昨 年 度 と 異 なり1 年 を 通 してノロウイルス GⅠ,サポウイルスが 検 出 された 下 水 を 調 査 した 結 果, 市 内 においてノロウイルス 及 びサポウイルスは 発 症 者 が 増 加 する 冬 季 だけではなく,1 年 を 通 して 注 意 しなくてはいけない 病 原 体 であることがわかった 下 水 を 調 査 することは 市 内 における 流 行 状 況 の 把 握 や 地 域 に 存 在 しているウイルスを 継 続 的 に 監 視 することができ, 流 行 や 季 節 変 動 を 把 握 するためには 非 常 に 有 用 な 検 体 であるといえる 1.はじめに 嘔 吐 や 下 痢 を 主 症 状 とする 急 性 胃 腸 炎 の 原 因 として, 細 菌,ウイルス, 原 虫 などがあり, 今 日 の 傾 向 としてウイルス 性 による 症 例 報 告 が 多 い 1) 食 中 毒 事 例 や 集 団 感 染 事 例 の 原 因 と されるノロウイルスなどの 下 痢 症 ウイルスはその 事 例 に 係 る 吐 物 や 便 と 共 に 下 水 処 理 場 へ 流 れ 込 む 平 成 25 年 における 新 潟 市 内 の 下 水 道 普 及 率 は 82.8% ( keikaku/fukyuu.html)であり, この 処 理 場 に 入 り 込 んでくる 汚 水 から 感 染 症 のリスク 評 価 および 市 中 に 循 環 する 下 痢 症 ウ イルスが 把 握 できる 可 能 性 がある 今 回, 感 染 症 発 生 動 向 調 査 における 感 染 性 胃 腸 炎 患 者 の 定 点 あたりの 報 告 数 と 下 水 中 の 下 痢 症 ウイルスの 遺 伝 子 検 出 状 況 の 関 連 性 について 検 討 した また, 下 水 を 用 いた 感 染 症 のリスク 評 価 を 行 った 2. 材 料 と 方 法 1) 下 水 の 採 取 2013 年 4 月 から 2014 年 2 月 の 間,18 週 ( 4 月 ) 22 週 ( 5 月 ) 26 週 ( 6 月 ) 31 週 ( 7 月 ) 35 週 ( 8 月 ) 39 週 ( 9 月 ) 43 週 ( 10 月 ) 48 週 ( 11 月 ) 52 週 ( 12 月 ) 4 週 ( 1 月 ) 8 週 ( 2 月 ) において 市 内 の 下 水 処 理 施 設 ( 計 画 処 理 人 口 : 約 275,000 人, 処 理 方 法 : 標 準 活 性 汚 泥 法 )から 約 2L の 流 入 水 を 採 取 した 2) 検 査 項 目 ノロウイルス,サポウイルス,アストロウイルス,A 群 ロタウイルス,C 群 ロタウイル ス,アデノウイルス,エンテロウイルス, 大 腸 菌 群 数, 大 腸 菌 数 3) ウイルスの 濃 縮 方 法 3,000rpm 30 分 遠 心 後, 上 清 約 1L に 対 し,ポリエチレングリコール 6000 を 10%, 1MNaCl を 添 加 し( 以 下,PEG 濃 縮 ),4 で 一 昼 夜 保 管 後,10,000rpm 30 分 遠 心 した その 沈 査 に 滅 菌 蒸 留 水 2ml を 加 え,12,000rpm 20 分 遠 心 後 上 清 に 30%ショ 糖 溶 液 を 重 層 し,40,000rpm 120 分 遠 心 した その 沈 査 を 滅 菌 蒸 留 水 400μl で 溶 解 し 濃 縮 検 体 とし た

23 4) ウイルスの 検 出 方 法 3)の 検 体 から RNA 抽 出 は QIAamp Vial RNA Mini Kit(QIAGEN)を 使 用 し,DNaseⅠ 処 理 を 行 った ノロウイルス,サポウイルス,アストロウイルスおよびエンテロウイルスの 検 体 は random primer を 用 いて 逆 転 写 し,Super Script Ⅱ(invitrogen)を 用 い cdna を 作 製 した A 群 ロタウイルスおよび C 群 ロタウイルスについては,DNaseⅠで 処 理 した 後,ジメチ ルスルホキシド( 和 光 )を 10% 添 加 し,97 5 分 後 急 冷 したものに,SuperScriptⅡ (invitrogen)を 用 い,cDNA を 作 製 した アデノウイルスについては,RNA 抽 出 液 を 分 処 理 したものを 使 用 した 各 ウイルスの 検 出 方 法 は 病 原 体 検 査 マニュアルおよび 通 知 等 に 準 じ 実 施 した 5) 遺 伝 子 解 析 検 出 した 増 幅 産 物 は,シーケンサーABI 3500 Genetic Analyzer(Applied Biosystems)を 用 い 塩 基 配 列 の 解 析 を 実 施 した 3. 結 果 2013 年 18 週 から 2014 年 8 週 に 採 取 した 下 水 11 検 体 のウイルス 検 索 の 結 果 を 表 1 に 示 した ノロウイルス 遺 伝 子 については,GⅠ 遺 伝 子 GⅡ 遺 伝 子 ともに 採 取 した 週 全 てに 検 出 さ れた 検 出 されたウイルス 量 は GⅠでは 最 大 [copies/5μl], 最 小 4.0 [copies/5μl] で,GⅡでは 最 大 [copies/5μl], 最 小 [copies/5μl]であった ノロウイルス 遺 伝 子 の 検 出 状 況 と 感 染 症 発 生 動 向 調 査 に 係 る 感 染 性 胃 腸 炎 の 定 点 報 告 数 との 関 連 は,ノロウイルス GⅡ 遺 伝 子 のウイルス 量 が 増 加 した 52 週 にかけて,その 報 告 数 に 増 加 傾 向 が 認 められた ( 図 1) また, 検 出 されたノロウイルスの 遺 伝 子 塩 基 配 列 を 解 析 した 結 果, 各 週 において 1 つず つの 遺 伝 子 型 がみられ, 複 数 の 型 を 認 めた 週 はなかった GⅠでは GⅠ.1, GⅠ.3, GⅠ.4 及 び GⅠ.6 が 検 出 され,その 中 でも GⅠ.4 及 び GⅠ.6 の 遺 伝 子 型 が 多 く 検 出 された 一 方 G Ⅱでは GⅡ.2, GⅡ.3 及 び GⅡ.4 が 検 出 され,9 検 体 が GⅡ.4 であった この GⅡ.4 の 塩 基 配 列 を 解 析 した 結 果,48 週 は 変 異 株 Hu/GII.4/New Orleans1805/2009/USA に 近 縁 で,22 週, 35 週, 52 週, 4 週 及 び 8 週 は 変 異 株 Hu/GII.4/Sydney/NSW0514/2012/AU に 近 縁 で あった 2 月 及 び 3 月 に 発 生 した 食 中 毒 事 例 で 検 出 されたノロウイルスの 塩 基 配 列 と 8 週 に 採 取 し た 下 水 から 検 出 されたノロウイルスの 塩 基 配 列 との 相 同 性 を 比 較 した 結 果,8 週 に 採 取 した 下 水 と 食 中 毒 事 例 で 検 出 されたものの 塩 基 配 列 は 一 致 した( 図 2) サポウイルスは 採 取 した 週 全 てで 検 出 された また 検 出 された 遺 伝 子 型 は GⅠ.1, GⅠ.2 であった アストロウイルスは 22 週, 26 週 及 び 31 週 で 検 出 された また 検 出 された 遺 伝 子 型 はⅠ

24 及 びⅡ 型 であった A 群 ロタウイルスは 18 週, 43 週, 48 週 及 び 翌 年 の 4 週, 8 週 で 検 出 された また 検 出 された 遺 伝 子 型 は G1, G3 及 び G4 であった アデノウイルスは 22 週, 26 週, 35 週, 39 週, 43 週 及 び 翌 年 の 4 週, 8 週 で 検 出 され た また 検 出 された 遺 伝 子 型 は 31 型 及 び 41 型 であった C 群 ロタウイルス 及 びエンテロウイルスは 検 出 されなかった 大 腸 菌 群 数 および 大 腸 菌 数 を 検 査 した 結 果, 大 腸 菌 数 は 全 ての 検 体 で [cfu/ml] から [cfu/ml], 大 腸 菌 群 数 は 全 ての 検 体 で [cfu/ml] から [cfu/ml] の 値 であった 4. 考 察 2013/14 シーズンにおいて 下 水 から 下 痢 症 ウイルス 検 索 を 試 み,2012/13 シーズンと 同 様 に 全 ての 週 でウイルス 遺 伝 子 を 検 出 した ノロウイルスについて, 下 水 から 検 出 した copy 数 は,GⅠと GⅡとを 比 較 すると,GⅡの 方 がより 多 かった このことは GⅠより GⅡが 人 の 腸 管 で 増 殖 しやすい 及 び 接 触 の 可 能 性 が 高 いと 考 えられる また,その 下 水 から 検 出 さ れたノロウイルス GⅡのウイルス 量 が 増 加 すると, 医 療 機 関 からの 感 染 性 胃 腸 炎 患 者 数 の 報 告 が 多 くなる 傾 向 が 見 られた このことは, 集 団 事 例 や 多 くの 散 発 事 例 が 発 生 したこと によるものと 思 われる G Ⅱ の 遺 伝 子 型 は G Ⅱ.4 が 多 く 検 出 さ れ 塩 基 配 列 を 解 析 し た 結 果 多 く が Hu/GII.4/Sydney/NSW0514/2012/AU に 近 縁 であった 冬 季 だけでなく 2013 年 22 週 や 2013 年 35 週 でも 検 出 されたことから, 市 内 にノロウイルスの 変 異 株 が 1 年 を 通 して 存 在 していることが 考 えられる 市 内 に 存 在 している GⅡ.4 の 株 は 2013 年 52 週 から 流 行 を 引 き 起 こしていた 可 能 性 が 高 く 2014 年 8 週 に 検 出 した 塩 基 配 列 はその 後 に 発 生 した 2 件 の 食 中 毒 事 例 の 塩 基 配 列 と 相 同 性 が 認 められた( 図 2) サポウイルスは 昨 年 度 と 異 なり,1 年 を 通 して 検 出 された 遺 伝 子 型 は GⅠ.1 及 び GⅠ.2 が 検 出 されている したがって, 市 内 にはサポウイルスが 1 年 を 通 して 存 在 していること が 考 えられる 特 に GⅠ.2 は 既 に 国 内 や 海 外 で 食 中 毒 を 引 き 起 こす 遺 伝 子 型 として 報 告 さ れている 2),3) このことからノロウイルスが 検 出 されない 感 染 事 例 が 発 生 した 場 合,サポウ イルスを 疑 う 必 要 があると 考 えられる 4) アストロウイルスは 2013 年 22 週 から 31 週 まで 検 出 されたことから,この 時 期 に 市 内 で 散 発 的 に 発 生 したと 考 えられる 検 出 された A 群 ロタウイルスの 遺 伝 子 型 は 人 から 検 出 される 遺 伝 子 型 の 一 つ 5) であるた め,この 時 期 に 市 内 でロタウイルスによる 感 染 性 胃 腸 炎 の 発 生 が 多 くあったことが 考 えら れる 一 般 的 にロタウイルスは 春 季 に 流 行 するウイルスだが,43 週, 48 週 に 検 出 されたこ とから 春 季 以 外 の 季 節 においても 十 分 に 考 慮 しなくてはいけない 大 腸 菌 群 数 および 大 腸 菌 数 を 検 査 した 結 果, 大 腸 菌 群 数 は 採 取 した 全 ての 週 で

25 [cfu/ml] から [cfu/ml] の 値 であった このことから 雨 水 は 下 水 中 のウイルスの 濃 度 には 大 きく 影 響 しないと 思 われる このように, 下 水 中 から 下 痢 症 ウイルスの 遺 伝 子 の 検 出 を 調 査 することは 市 内 における 感 染 症 事 例 の 発 生 の 予 測 できる 今 後 とも 下 水 を 調 査 し 感 染 症 対 策 室 と 情 報 を 共 有 する ことで 感 染 症 予 防 に 寄 与 していきたい 5. 文 献 1) 厚 生 労 働 省 医 薬 食 品 局 食 品 安 全 部 監 視 安 全 課 長 通 知 :ノロウイルスによる 食 中 毒 の 発 生 予 防 について. 平 成 25 年 1 月 11 日, 食 安 監 発 0111 第 2 号 (2013) 2) 小 林 慎 一 他 : 給 食 弁 当 を 原 因 としたサポウイルスによる 大 規 模 食 中 毒 事 例 愛 知 県, 病 原 微 生 物 検 出 情 報, 31(11) ,2010 3) 岡 智 一 郎 他 : 愛 知 県 と 川 崎 市 の 食 中 毒 事 例 から 検 出 されたサポウイルス GI/2 の 塩 基 配 列 の 比 較, 病 原 微 生 物 検 出 情 報, 31(11) ,2010 4) 山 﨑 俊 治 他 :ノロウイルスが 検 出 されない 下 痢 症 患 者 におけるアストロウイルス,サ ポウイルス,アイチウイルスの 調 査 ( 第 2 報 ). 平 成 16 年 度 福 岡 市 保 健 環 境 研 究 所 報 5) 小 林 宣 道 : 全 遺 伝 子 配 列 に 基 づくヒトロタウイルスの 遺 伝 子 型 別 とその 世 界 的 な 動 向. 病 原 微 生 物 検 出 情,35(3)66-67,2014 表 1 下 水 における 下 痢 症 ウイルスの 遺 伝 子 検 出 状 況 週 22 週 26 週 31 週 35 週 39 週 43 週 48 週 52 週 4 週 8 週 NV GⅠ GⅠ.6 GⅠ.6 GⅠ.6 GⅠ.4 GⅠ.3 型 別 不 能 GⅠ.1 GⅠ.4 GⅠ.4 GⅠ.6 GⅠ.4 NV GⅡ GⅡ.2 GⅡ.4 GⅡ.4 GⅡ.4 GⅡ.4 GⅡ.3 GⅡ.4 GⅡ.4 GⅡ.4 GⅡ.4 GⅡ.4 Sapo GⅠ.2 GⅠ.2 GⅠ.2 GⅠ.1 GⅠ.2 GⅠ.1 GⅠ.1 GⅠ.1 GⅠ.1 GⅠ.1 GⅠ.1 Astro Ⅰ Ⅰ Ⅱ A rota G1 G3 G4 G3 G1 C rota Adeno type31 type41 type41 type41 type41 type41 type41 Entero

26 [copies/5μl] 週 22 週 26 週 31 週 35 週 39 週 43 週 48 週 52 週 4 週 8 週 図 1 ノロウイルスcopy 数 と 定 点 報 告 数 [ 人 ] 定 点 報 告 数 NoV GⅠ NoV GⅡ FD_ FD_ sewage_ ATGAAGATGGCGTCGAGTGACGCCAACCCATCTGATGGGTCCGCAGCCAACCTCGTCCCA ATGAAGATGGCGTCGAGTGACGCCAACCCATCTGATGGGTCCGCAGCCAACCTCGTCCCA ATGAAGATGGCGTCGAGTGACGCCAACCCATCTGATGGGTCCGCAGCCAACCTCGTCCCA ************************************************************ FD_ FD_ sewage_ GAGGTCAACAATGAGGTTATGGCTCTGGAGCCCGTTGTTGGTGCCGCCATTGCGGCACCT GAGGTCAACAATGAGGTTATGGCTCTGGAGCCCGTTGTTGGTGCCGCCATTGCGGCACCT GAGGTCAACAATGAGGTTATGGCTCTGGAGCCCGTTGTTGGTGCCGCCATTGCGGCACCT ************************************************************ FD_ FD_ sewage_ GTAGCGGGCCAACAAAATGTAATTGACCCCTGGATTAGAAATAATTTTGTACAAGCCCCT GTAGCGGGCCAACAAAATGTAATTGACCCCTGGATTAGAAATAATTTTGTACAAGCCCCT GTAGCGGGCCAACAAAATGTAATTGACCCCTGGATTAGAAATAATTTTGTACAAGCCCCT ************************************************************ FD: 食 中 毒 事 例 株 sewage: 下 水 由 来 株 図 2 下 水 由 来 株 及 び 食 中 毒 事 例 株 の 塩 基 配 列 の 相 同 性

27 調 査 研 究 報 告 (7) 市 販 二 枚 貝 からの 下 痢 症 ウイルス 遺 伝 子 の 検 出 状 況 について ( 第 2 報 ) 南 波 裕 太 桃 井 拓 也 齊 藤 哲 也 足 立 玲 子 概 要 平 成 24 年 より 市 販 二 枚 貝 について 下 痢 症 ウイルスおよび A 型 肝 炎 ウイルス(HAV)を 調 査 しており, 平 成 25 年 の 夏 季 については, 下 痢 症 ウイルス 遺 伝 子 および A 型 肝 炎 ウイル ス 遺 伝 子 の 検 出 はなかったが, 冬 季 にはノロウイルス(NV),サポウイルス(SaV)および アイチウイルス(AiV)を 検 出 した また,それぞれのウイルスの 検 出 率 は NV35.9%, SaV2.6%および AiV28.2%であった 1.はじめに NV SaV アストロウイルス(AstV)などの 下 痢 症 ウイルス 1) は, 人 の 体 内 に 侵 入 する と 急 性 胃 腸 炎 を 引 き 起 こす 特 に NV はカリシウイルス 科 に 属 し, 冬 季 に 多 発 するウイル ス 性 食 中 毒 の 主 な 原 因 のウイルスである 2) ウイルスゲノムを 比 較 することにより, GenogroupⅠ(GⅠ)と GenogroupⅡ(GⅡ)の 遺 伝 子 群 に 分 類 され 3),4),さらにそれぞれ に 多 くの 遺 伝 子 型 が 存 在 する 5) また,NV 同 様 カリシウイルス 科 に 属 する SaV を 原 因 と する 胃 腸 炎 が 増 加 しており, 特 に 乳 幼 児 に 多 く 認 められる SaV には GenogroupⅠ~Ⅴが あり, 人 に 感 染 が 確 認 されているのは,GenogroupⅠ,Ⅱ,Ⅳ,Ⅴである 一 方,HAV はピコルナウイルス 科 に 属 し, 経 口 感 染 により 発 熱 や 下 痢 を 伴 った 急 性 肝 炎 を 発 症 させる 6) NV や HAV は 食 中 毒 の 原 因 物 質 に 指 定 されており,ウイルス 性 食 中 毒 において 注 意 しな ければいけないウイルスである また, 二 枚 貝 はその 中 腸 線 にウイルスが 蓄 積 されるとい う 性 質 上,ウイルス 性 食 中 毒 の 原 因 となり 易 い 7) 今 回, 市 販 二 枚 貝 ( 生 カキ アサリ シジミ)について,NV などの 下 痢 症 を 引 き 起 こす ウイルス,HAV およびエンテロウイルス(EnV)の 汚 染 実 態 を 調 査 したので, 報 告 する 2. 材 料 と 方 法 1) 検 査 項 目 NV GⅠ GⅡ,SaV,AstV,A 群 C 群 ロタウイルス(RotaV groupa groupc),アデ ノウイルス(AdV),AiV,HAV,EnV 2) 材 料 平 成 25 年 度 に 新 潟 市 内 で 市 販 されていたパック 詰 めの 二 枚 貝 ( 生 カキ アサリ シジミ)

28 を 検 査 材 料 とし, 生 カキについては 3 個 の 中 腸 線,アサリ シジミについては 5 個 の 中 腸 線 を 1 検 体 とし, 合 計 で 39 検 体 の 二 枚 貝 ( 生 食 用 生 カキ 8 検 体 加 熱 調 理 用 生 カキ 17 検 体 アサリ 10 検 体 シジミ 4 検 体 )を 調 査 した また, 生 カキは 冬 季,アサリは 6 月 及 び 1 月,シジミは 9 月 に 採 取 し 調 査 した PBS(-) 45 ml で 乳 剤 を 作 成 し,10,000 rpm 20 min 冷 却 遠 心 を 行 い, 上 清 にポリエ チレングリコール(Mw = 6,000)を 10%, NaCl を 濃 度 が 1M になるように 添 加 し,4 で 一 昼 夜 静 置 した その 後,10,000 rpm 20 min 冷 却 遠 心 を 行 い, 上 清 を 捨 て, 沈 渣 を 滅 菌 蒸 留 水 2 ml に 浮 遊 させ,30%ショ 糖 に 重 層 させた 後,40,000 rpm 120 min 冷 却 遠 心 を 行 った 上 清 を 捨 て, 沈 渣 を PBS(-)で 洗 浄 した 後, 滅 菌 蒸 留 水 200 L 中 に 浮 遊 させ 検 体 とした 3) 方 法 平 成 24 年 同 様 に,NV については 厚 生 労 働 省 通 知 8)に 準 じて 行 った 他 の 下 痢 症 ウイル スおよび HAV については 厚 生 労 働 省 通 知 9)および 国 立 感 染 症 研 究 所 のウイルス 性 下 痢 症 診 断 マニュアル 第 3 版 に 準 じて 行 った 陽 性 となった PCR 産 物 の 遺 伝 子 解 析 は, 各 種 プライマー10) を 用 いて 遺 伝 子 領 域 の 一 部 を 増 幅 し, 得 られた 増 幅 産 物 を QIAquick PCR Purfication Kit (QIAGEN)により 精 製 し, BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems)を 用 い, 3500GeneticAnalyzer (Applied Biosystems)でダイレクトシーケンス 法 により 塩 基 配 列 を 決 定 し, 遺 伝 子 解 析 ソフト MEGA5 を 用 いて 系 統 樹 解 析 を 行 った 3. 結 果 市 販 二 枚 貝 について 下 痢 症 ウイルス 遺 伝 子 及 び HAV 遺 伝 子 を 調 査 した 結 果, 生 カキ 3 検 体 から NV GⅠ 遺 伝 子, 生 カキ 14 検 体 から NV GⅡ 遺 伝 子, 生 カキ 11 検 体 から AiV 遺 伝 子, 生 カキ 1 検 体 から SaV 遺 伝 子 が 検 出 された また,これらのウイルス 遺 伝 子 はある 1 検 体 から 重 複 して 検 出 される 場 合 もあった ウイルス 遺 伝 子 の 検 出 パターン 及 び 陽 性 数 を 表 1 に 示 す 表 1 二 枚 貝 における 各 種 ウイルス 遺 伝 子 の 検 出 状 況 検 出 パターン 陽 性 数 / 検 体 数 陽 性 率 [%] NV GⅡ 5/ NV GⅠ/GⅡ 1/ NV GⅡ,AiV 6/ NV GⅠ/GⅡ,AiV 1/ NV GⅠ/GⅡ,AiV,SaV 1/ AiV 3/ 生 カキにおいて AstV,RotaV(groupA 及 び C), HAV,EnV については 検 出 されなかっ た また,アサリ シジミからは 下 痢 症 ウイルス 遺 伝 子 および HAV 遺 伝 子 は 検 出 されなか

29 った 今 回 調 査 した 生 カキについて 生 食 用 および 加 熱 調 理 用 の 陽 性 数 を 表 2 に 示 す また, 今 回 検 出 されたウイルス 遺 伝 子 および 平 成 24 年 に 調 査 した 結 果 を 表 3 に 示 す 表 2 生 カキにおける 各 種 ウイルス 遺 伝 子 の 検 出 状 況 検 出 パターン 生 食 用 加 熱 調 理 用 陽 性 率 [%] 陽 性 数 / 検 体 数 陽 性 数 / 検 体 数 陽 性 率 [%] NV GⅡ 3/ / NV GⅠ/GⅡ 1/ /17 0 NV GⅡ,AiV 0/8 0 6/ NV GⅠ/GⅡ,AiV 1/ /17 0 NV GⅠ/GⅡ,AiV,SaV 0/8 0 1/ AiV 1/ / 表 3 平 成 24 年 及 び 25 年 の 検 出 状 況 NV GⅠ 及 び NV GⅡ( 計 17 件 )のうち 塩 基 配 列 を 決 定 できた 13 件 について 系 統 樹 解 析 した 結 果,GⅠ.4(2 件 ),GⅡ.4(10 件 ),GⅡ.14(1 件 )に 分 類 された( 図 1) AiV11 件 について 塩 基 配 列 を 決 定 し 系 統 樹 解 析 した 結 果,11 件 すべてを AiV genotypea に 分 類 された( 図 2) ウイルス 陽 性 数 / 検 体 数 ( 陽 性 率 [%]) 平 成 24 年 平 成 25 年 NV GⅠ 0/42(0) 3/39(7.7) NV GⅡ 1/42(2.4) 14/39(35.9) SaV 0/42(0) 1/39(2.6) AiV 2/42(4.8) 11/39(28.2) SaV1 件 について 塩 基 配 列 を 決 定 し 系 統 樹 解 析 した 結 果,SaV GⅠ.2 に 分 類 された( 図 3) 4. 考 察 今 回 の 調 査 でウイルス 遺 伝 子 が 検 出 された 検 体 は 生 食 用 または 加 熱 調 理 用 の 生 カキのみ で,アサリ シジミからの 検 出 はみられなかった 流 通 している 生 カキには 生 食 用 と 加 熱 調 理 用 の 区 別 があり, 生 食 用 においては 食 中 毒 を 防 止 するために 成 分 規 格 などの 規 格 基 準 が 定 められているが,ウイルスに 関 する 基 準 は 定 められていない そのためウイルスによる 食 中 毒 が 広 く 認 識 された 現 在, 生 産 者 は 出 荷 前 の 浄 化 洗 浄 や 自 主 検 査 などによりウイルスに 汚 染 されている 生 カキの 市 場 への 提 供 を 自 粛 している しかし, 今 回 の 調 査 では NV の 陽 性 率 は 生 食 用 カキで 62.5%, 加 熱 調 理 用 カキ で 53%と 決 して 低 いとは 言 えない 数 値 となった また, 検 出 された 各 ウイルス 遺 伝 子 にお いて 平 成 24 年 に 調 査 した 結 果 よりも 高 い 陽 性 率 を 示 した 今 回 の 結 果 から 平 成 25 年 はカ キの 採 取 海 域 における 糞 便 汚 染 が 示 唆 されたが, 平 成 24 年 25 年 に 調 査 した 生 カキは 無 作 為 に 採 取 し, 産 地 における 偏 りはなく, 検 査 数 も 大 差 はなかった また, 平 成 24 年

30 年 における 全 国 的 な NV の 検 出 状 況 においても 大 きな 違 いはみられなかった 今 後,カキ の 採 取 海 域 などを 限 定 した 調 査 や 継 続 的 なデータの 収 集 が 望 まれる 生 カキからは NV 以 外 にも SaV,AiV が 検 出 されており,AiV は 胃 腸 炎 の 原 因 ウイルス で,1989 年 の 愛 知 県 で 集 団 発 生 した 胃 腸 炎 患 者 からはじめて 分 離 されたウイルスである 11) 遺 伝 子 型 は A,B,C の 3 種 類 があり 12)13), 今 回 の 調 査 では 検 出 したすべての AiV が genotypea に 分 類 された AiV は 他 の 下 痢 症 ウイルスと 比 較 して 検 出 頻 度 が 低 く, 病 原 性 を 疑 問 視 されている また,WHO は 腸 管 内 に 感 染 を 起 こすウイルスとして 分 類 したが, 食 品 媒 介 ウイルス 感 染 症 としての 重 要 性 は 低 いと 評 価 している しかしながら,AiV が 多 く の 場 合 が NV と 同 時 に 検 出 されていることや NV 等 と 同 様 に 腸 管 内 に 感 染 するウイルスで あることから, 二 枚 貝 の 生 育 海 域 の 糞 便 汚 染 調 査 における 一 つの 指 標 となり 得 ると 考 えら れる また, 近 年 SaV を 原 因 とする 食 中 毒 が 増 加 しており,SaV は NV と 同 様 に 糞 便 中 に 排 泄 されるため, 環 境 や 食 品 の 汚 染 が 危 惧 される 今 回 の 調 査 においても 1 検 体 から 検 出 して おり SaV についても 注 意 が 必 要 である 今 回 の 調 査 では, 生 食 用 加 熱 調 理 用 生 カキから NV,AiV,SaV を 検 出 した これらの 中 には 3 種 のウイルスが 重 複 して 検 出 された 検 体 もあり,このカキが 採 取 された 海 域 が 下 痢 症 ウイルスによって 汚 染 されていた 可 能 性 を 示 唆 した また,これらの 結 果 を 行 政 を 通 じて 広 く 還 元 することで 市 内 におけるカキを 原 因 とする 食 中 毒 防 止 に 寄 与 することができ ると 思 われる

31 平 成 25 年 検 出 検 体 ( 印 ) GenogroupⅡ GenogroupⅠ 図 1 NV の 分 子 系 統 樹

32 平 成 25 年 検 出 検 体 ( 印 ) genotype A genotype B genotype C Bovine Kobuvirus 図 2 AiV の 分 子 系 統 樹 平 成 25 年 検 出 検 体 ( 印 ) 図 3 SaV の 分 子 系 統 樹

33 文 献 1) 牛 島 廣 治 :ヒト 急 性 胃 腸 炎 の 起 因 ウイルス, 総 合 臨 床,51: ,2002 2) 国 立 感 染 症 情 報 センター. 病 原 微 生 物 検 出 情 報 (IASR)2003; 31: ) Ando T, Noel JS, Fankhauser RL. Genetic classification of Norwalk-like viruses. J Infect Dis 2000; 181 (Suppl 2): ) Katayama K, Shirato-Horikoshi H, Kojima S, Kageyama T, Oka T, Hoshino FB, et al. Phylogenetic analysis of the complete genome of 18 Norwalk-like viruses. Virology 2002; 299: ) Kageyama T, Shinohara M, Uchida K, Fukushi S, Hoshino FB, Kojima S, et al. Coexistence of multiple genotypes, including newly identified genotypes, in outbreaks of gastroenteritis due to Norovirus in Japan. J Clin Microbiol 2004; 42: ) 入 谷 展 弘, 勢 戸 祥 介, 春 木 孝 祐, 西 尾 治, 久 保 英 幸, 改 田 厚, 他. 市 販 生 カキからのノロ ウイルスおよび A 型 肝 炎 ウイルスの 検 出. 生 活 衛 生 2005; 49: ) 食 品 ウイルス 性 胃 腸 炎 集 団 発 生 実 態 調 査 研 究 班 : 最 近 5 年 間 の 食 品 媒 介 ウイルス 性 胃 腸 炎 集 団 発 生 全 国 実 態 調 査 総 合 報 告 書. 食 品 媒 介 ウイルス 性 胃 腸 炎 集 団 発 生 実 態 調 査 研 究 班 8) 厚 生 労 働 省 医 薬 局 食 品 安 全 部 監 視 安 全 課 長 通 知 :ノロウイルスの 検 出 法 について. 平 成 15 年 11 月 5 日, 食 安 監 第 号 (2003). 9) 厚 生 労 働 省 医 薬 局 食 品 保 健 部 監 視 安 全 課 長 通 知 :ふん 便 及 び 食 品 中 の A 型 肝 炎 ウイルス の 検 査 法 について. 平 成 14 年 8 月 16 日, 食 監 発 第 号 (2002). 10) 齊 藤 哲 也, 足 立 玲 子, 桃 井 拓 也. 国 産 および 輸 入 二 枚 貝 からの 下 痢 症 ウイルス 遺 伝 子 の 検 出 状 況 について. 新 潟 市 衛 生 環 境 研 究 所 年 報 ( 調 査 研 究 報 告 ) 2013; 37: ) Yamashita T, Kobayashi S, Sakae K, Nakata S, Chiba S, Ishihara Y, Isomura S.: Isolation of cytopathic small round viruses with BS-C-1 cells from patients with gastroenteritis. J Infect Dis 164: , )Yamashita T et al.: Application of a Reverse Transcription-PCR for Identification and Differentiation of Aichi Virus,aNew Member of the Picornavirus Family Associated with Gastroenteritis in Humans. J. Clin. Microbiol. 38 : , )K. Ambert-Balay et al. : Prevalence and Genetic Diversity of Aichi Virus Strains in Stool Samples from Community and Hospitalized Patients. J. Clin. Microbiol. 46 : ,

34 調 査 研 究 報 告 (8) 新 潟 市 河 川 における 水 生 底 生 生 物 実 態 調 査 ( 第 12 報 ) 猪 股 秀 子 岡 田 裕 美 立 川 正 幸 松 田 哲 明 概 要 当 所 では, 平 成 17 年 度 の 水 生 底 生 生 物 実 態 調 査 基 本 計 画 に 基 づき, 新 潟 市 の 河 川 環 境 につい て 毎 年 調 査 を 行 っている 平 成 21 年 度 までの 5 年 間 で, 市 内 13 河 川,33 地 点 の 1 回 目 の 調 査 が 終 わった 平 成 22 年 度 からは 調 査 地 点 を 信 濃 川, 西 川, 阿 賀 野 川 の 3 河 川 にしぼり, 経 年 変 化 や 河 川 環 境 をより 詳 しく 調 べることにした 今 年 度 は 阿 賀 野 川 の 4 地 点 について 調 査 を 実 施 し, 底 質 など 基 礎 資 料 を 収 集 するとともに, 水 質 変 化 との 関 連 等 を 前 回 ( 平 成 22 年 度 )と 比 較 しながら, 河 川 環 境 を 総 合 的 に 評 価 した 1 はじめに 新 潟 市 の 河 川 について 水 環 境 を 評 価 するため 平 成 14 年 度 から 水 生 底 生 生 物 を 実 施 している 平 成 25 年 度 は 平 成 22 年 度 に 調 査 した 早 出 川 阿 賀 野 川 の 4 地 点 について 調 べ 比 較 検 討 した ので 報 告 する 2 調 査 方 法 (1) 調 査 日 平 成 25 年 5 月 29 日 (2) 調 査 地 点 ( 図 1) St1 早 出 川 上 流 ( 五 泉 市 水 戸 野 ) St2 早 出 川 中 流 ( 五 泉 市 太 田 善 願 橋 ) St3 早 出 川 下 流 ( 新 潟 市 秋 葉 区 新 郷 屋 ) St4 阿 賀 野 川 下 流 ( 新 潟 市 江 南 区 小 杉 大 阿 賀 橋 ) 日 本 海 St 4 大 阿 賀 橋 信 濃 川 阿 賀 野 川 St 3 新 郷 屋 早 出 川 St 2 St 1 善 願 橋 水 戸 野 図 1 調 査 地 点

35 (3) 調 査 項 目 水 生 底 生 生 物 を 採 集 し, 科 レベルの 分 類 を 行 った また 気 温, 水 温, 透 視 度, ph, 溶 存 酸 素, 化 学 的 酸 素 要 求 量 ( 以 下 COD と 表 示 ), 生 物 化 学 的 酸 素 要 求 量 ( 以 下 BOD と 表 示 ), 全 窒 素, 全 りん, クロロフィルa, 電 気 伝 導 率, 底 質 の 含 水 量, 強 熱 減 量 の 理 化 学 調 査 を 行 った (4) 河 川 環 境 の 評 価 方 法 水 生 生 物 による 河 川 環 境 の 評 価 はスコア 法, 水 質 階 級 法 の 2 法 を 用 いた 1 スコア 法 ( 生 物 等 による 水 環 境 評 価 マニュアル 環 境 庁 水 質 保 全 局 より) 62 の 科 レベルの 指 標 生 物 に 1~10 までのスコアが 設 定 され,きれいな 川 に 住 む 生 物 ほど 数 字 が 大 きい 地 点 毎 に, 採 集 された 指 標 生 物 の 平 均 スコア 値 ( 以 下 ASPT 値 という)を 算 定 し,ASPT 値 が 10 に 近 いほど 汚 濁 の 程 度 が 少 なく 自 然 環 境 に 近 い 人 為 的 影 響 の 少 ない 河 川 環 境 であると 評 価 する 方 法 2 水 質 階 級 法 ( 川 の 生 き 物 を 調 べよう 環 境 庁 水 質 保 全 局 建 設 省 河 川 局 編 より) 30 種 類 の 指 標 生 物 を,きれいな 水 ( 水 質 階 級 Ⅰ),ややきたない 水 ( 水 質 階 級 Ⅱ),きたない 水 ( 水 質 階 級 Ⅲ), とてもきたない 水 ( 水 質 階 級 Ⅳ)の 4 階 級 に 分 類 し, 多 くの 種 類 が 採 集 された 生 物 の 階 級 で 河 川 環 境 の 評 価 を 行 う 方 法 3 調 査 結 果 (1) 水 生 底 生 生 物 調 査 結 果 河 川 および 周 辺 の 状 況 を 表 1 に 示 した 表 2 に 水 生 底 生 生 物 の ASPT 値 を, 表 3 に 水 質 階 級 法 による 調 査 結 果 を 平 成 22 年 度 と 平 成 25 年 度 を 併 記 して 示 した 巻 末 に, 調 査 地 点 の 写 真 と 生 物 の 写 真 を 示 した また, 総 個 体 数 について 表 4 に 示 したが 採 集 範 囲 が 均 一 ではないため, 参 考 とした 1 早 出 川 上 流 の St1 水 戸 野 は, 川 幅 30m, 水 深 18cm, 流 速 は 約 3.9cm/sec, 川 底 は 礫 である 両 岸 は 自 然 地 で, 周 辺 は 木 や 草 が 茂 り, 人 家 は 見 られない スコア 9 のフタオカゲロウやマダラカゲロウ が 採 集 され, ASPT 値 は 7.7 で,3 年 前 の 7.1 とほぼ 同 様 であった 水 質 階 級 法 では,ヒラタカゲロ ウやカワゲラやヘビトンボが 採 集 されⅠ(きれいな 水 )と 判 定 され, 前 回 と 同 様 だった 総 個 体 数 は 61 で, 今 回 の 4 地 点 の 中 では 一 番 多 かった 2 早 出 川 中 流 の St.2 善 願 橋 は, 川 幅 30m, 水 深 20cm, 流 速 は 約 60cm/sec, 川 底 は 礫 である 右 岸 は コンクリートで 護 岸 されているが, 左 岸 は 自 然 地 で 周 辺 には 植 物 が 繁 茂 している スコア 9 のマダ ラカゲロウやカクツツトビケラが 採 集 されたが,スコア 3 のユスリカ( 鰓 なし)も 採 取 され ASPT 値 は 7.3 となり,3 年 前 の 8.6 より 低 下 した 水 質 階 級 法 では,ヒラタカゲロウ 等 が 採 集 されたのでⅠ(きれいな 水 )と 判 定 され, 前 回 と 同 様 だ った 総 個 体 数 は 55 だった 3 早 出 川 下 流 の St3 新 郷 屋 は, 川 幅 約 100m, 採 集 した 所 の 水 深 45cm, 流 速 は 約 14cm/sec で, 川 底 は 泥 質 である 右 岸 はコンクリートで 護 岸 されているが, 周 辺 は 自 然 地 で 植 物 が 繁 茂 している ス コア 9 のフタオカゲロウやマダラカゲロウ,またスコア 7 のサナエトンボが 採 集 されたが,スコア 3 のユスリカ( 鰓 なし)も 採 取 され ASPT 値 は,7.7 となった これは 3 年 前 と 同 じ 値 だった 水 質 階 級 法 では,ヒラタカゲロウ 等 が 採 集 されたのでⅠ(きれいな 水 )と 判 定 され, 前 回 と 同 様 だっ た 総 個 体 数 は 36 だった 4 阿 賀 野 川 下 流 の St.4 大 阿 賀 橋 は, 川 幅 700m, 採 集 した 所 の 水 深 30cm, 流 速 は 約 8.3cm/sec で,

36 川 底 は 泥 質 である 両 岸 は 植 物 が 繁 茂 している 自 然 地 である スコア 9 のフタオカゲロウやカクツツトビケラ,スコア 7 のカワトンボが 採 集 された 一 方 で,スコア 3 のユスリカ( 腹 鰓 なし)やスコア 1 のユスリカ( 鰓 あり)が 採 集 され,ASPT 値 は,6.4 となった 水 質 階 級 法 では, 優 先 種 としてユスリカ( 腹 鰓 あり)が 採 集 されたためⅣ(とてもきたない 水 )と 判 定 され,3 年 前 のⅢ(きたない 水 )から 低 下 した 総 個 体 数 は 50 だった 調 査 地 点 阿 賀 野 川 上 流 中 流 下 流 下 流 調 査 項 目 St.1 水 戸 野 St.2 善 願 橋 St.3 新 郷 屋 St.4 大 阿 賀 橋 川 幅 (m) 水 深 (cm) 流 速 (cm/sec) 護 岸 ( 右 岸 ) 自 然 地 コンクリート 護 岸 自 然 地 自 然 地 護 岸 ( 左 岸 ) 自 然 地 自 然 地 自 然 地 自 然 地 水 際 線 ( 右 岸 ) 植 物 生 息 植 物 生 息 コンクリート 植 物 生 息 水 際 線 ( 左 岸 ) 川 原 ( 小 石 ) 川 原 ( 小 石 ) 植 物 生 息 植 物 生 息 河 畔 ( 右 岸 ) 河 畔 ( 左 岸 ) 表 1 河 川 および 周 辺 の 状 況 早 出 川 植 物 繁 茂 植 物 繁 茂 植 物 繁 茂 植 物 繁 茂 ( 草 ) ( 草 ) ( 草 木 ) 植 物 繁 茂 植 物 まばら 植 物 繁 茂 植 物 繁 茂 ( 草 ) ( 草 木 ) ( 草 木 ) 河 床 型 瀬 瀬 淵 淵 底 質 礫 (れき) 礫 (れき) 泥 泥 採 集 範 囲 (m) 約 20 m 約 30 m 約 30 m 約 20 m

37 指 標 生 物 目 科 スコアH17 H22 H25 H17 H22 H25 H15 H17 H22 H25 H15 H17 H19 H22 H25 フタオカゲロウ 科 9 ヒラタカゲロウ 科 9 コカゲロウ 科 6 カゲロウ 目 トビイロカゲロウ 科 9 マダラカゲロウ 科 9 モンカゲロウ 科 9 トンボ 目 カワトンボ 科 7 サナエトンボ 科 7 カワゲラ 目 アミメカワゲラ 科 9 カワゲラ 科 9 オナシカワゲラ 科 6 ミドリカワゲラ 科 9 アミメカゲロウ ヘビトンボ 目 科 9 トビケラ 目 ヒゲナガカワトビケラ 9 科 表 2 平 成 15,17,22 年 と 平 成 25 年 のスコア 法 による 水 生 底 生 生 物 調 査 結 果 上 流 St.1 水 戸 野 シマトビケラ 科 7 エグリビケラ 科 10 ヒメトビケラ 科 4 カクツツトビケラ 科 9 コウチュウ ゲンゴロウ 目 科 5 ガムシ 科 4 ハエ 目 ガガンボ 科 8 早 出 川 St.2 善 願 橋 ユスリカ 科 ( 腹 鰓 あり) 1 ユスリカ 科 ( 腹 鰓 なし) 3 ニナ 目 カワニナ 科 8 ミミズ 綱 ミミズ 綱 1 ヒル 綱 ヒル 綱 2 中 流 阿 賀 野 川 ヨコエビ 目 ヨコエビ 科 9 エビ 目 サワガニ 科 8 総 スコア 総 科 数 ASPT 値 ( 平 均 スコア) 下 流 St.3 新 郷 屋 下 流 St.4 大 阿 賀 橋

38 表 3 平 成 15,17,22 年 と 平 成 25 年 の 水 質 階 級 法 による 調 査 結 果 早 出 川 阿 賀 野 川 水 質 階 級 指 標 生 物 上 流 中 流 下 流 下 流 St.1 水 戸 野 St.2 善 願 橋 St.3 新 郷 屋 St.4 大 阿 賀 橋 H17 H22 H25 H17 H22 H25 H15 H17 H22 H25 H15 H17 H19 H22 H25 ヒラタカゲロウ Ⅰ カワゲラ (きれいな 水 ) ヘビトンボ ヨコエビ サワガニ シマトビケラ Ⅱ( 少 しきたない 水 ) カワニナ コオニヤンマ イソコツブムシ Ⅲ(きたない 水 ) ヒル タニシ Ⅳ(とてもきたない 水 ) ユスリカ( 鰓 あり) 水 質 階 級 の 判 定 Ⅰ Ⅰ Ⅰ Ⅰ Ⅰ Ⅰ Ⅳ Ⅲ Ⅰ Ⅰ Ⅲ Ⅲ Ⅲ Ⅲ Ⅳ : 採 集 された 生 物 を 示 す : 数 が 多 く 採 集 された 生 物 表 4 総 個 体 数 ( 採 集 条 件 が 異 なるため 参 考 ) 指 標 生 物 早 出 川 阿 賀 野 川 上 流 中 流 下 流 下 流 目 科 St.1 水 戸 野 St.2 善 願 橋 St.3 新 郷 屋 St.4 大 阿 賀 橋 カゲロウ 目 フタオカゲロウ 科 ヒラタカゲロウ 科 コカゲロウ 科 2 7 トビイロカゲロウ 科 1 マダラカゲロウ 科 モンカゲロウ 科 3 トンボ 目 カワトンボ 科 30 サナエトンボ 科 1 カワゲラ 目 オナシカワゲラ 科 2 カワゲラ 科 6 1 アミメカゲロウ 目 ヘビトンボ 科 3 トビケラ 目 ヒメトビケラ 科 1 カクツツトビケラ 科 コウチュウ 目 ゲンゴロウ 科 1 2 ハエ 目 ユスリカ 科 ( 腹 鰓 なし) ユスリカ 科 ( 腹 鰓 あり) 4 ニナ 目 カワニナ 科 1 ミミズ 綱 ミミズ 綱 ヨコエビ 目 ヨコエビ 科 1 1 ワラジムシ 目 コツブムシ 科 1 総 個 体 数

39 (2) 理 化 学 調 査 結 果 表 5 平 成 22 年 と 平 成 25 年 の 理 化 学 調 査 結 果 調 査 地 点 早 出 川 阿 賀 野 川 上 流 中 流 下 流 下 流 St.1 水 戸 野 St.2 善 願 橋 St.3 新 郷 屋 St.4 大 阿 賀 橋 調 査 項 目 H22 H25 H22 H25 H22 H25 H22 H25 天 候 晴 れ くもり 晴 れ くもり 晴 れ くもり くもり 小 雨 気 温 ( ) 水 温 ( ) 透 視 度 ( 度 ) 100 以 上 100 以 上 100 以 上 100 以 上 100 以 上 100 以 上 p H 溶 存 酸 素 (mg/l) COD (mg/l) BOD (mg/l) 全 窒 素 (mg/l) 全 りん (mg/l) クロロフィルa ( μ g/l) 電 気 伝 導 率 (ms/m) 底 質 の 含 水 量 (%) 底 質 の 強 熱 減 量 (%) 理 化 学 調 査 結 果 を 平 成 22 年 度 の 結 果 と 併 記 して 表 5 に 示 した 4 まとめ 調 査 結 果 のまとめを 表 6 に 示 した 早 出 川 の ASPT 値 は,3 年 前 と 比 べて 上 流 では, 低 スコアのミミズやヒルが 採 集 されなかったこ とでやや 上 昇 し, 中 流 では 前 回 採 集 された 高 スコアの 生 物 が 少 なくなり, 低 下 した 下 流 では 総 科 数 が 9 から 6 に 減 少 したが ASPT 値 は 変 わらなかった また,その 下 流 の 阿 賀 野 川, 大 阿 賀 橋 では, 総 科 数 は 6 から 8 に 増 えたが,ASPT 値 に 大 きな 変 化 は 見 られなかった 一 方, 水 質 階 級 法 による 評 価 は, 早 出 川 では, 上 流, 中 流, 下 流 ともⅠで,3 年 前 と 変 わらな かった 大 阿 賀 橋 は,ⅢからⅣに 低 下 した 全 体 としては 上 流 の 早 出 川 3 地 点 では ASPT 値 が 高 く, 下 流 の 阿 賀 野 川 で,ASPT 値 がやや 低 かった 3 年 前 とくらべると 各 地 点 間 の ASPT 値 の 差 は 小 さくなった この 間 の 水 質 の 状 況 を 見 てみると, 測 定 日 の COD は 明 らかな 低 減 がみられたものの, 年 間 を 通 した 測 定 ではないため 単 純 な 比 較 はできない そこで 大 阿 賀 橋 について 新 潟 県 から 公 表 され ている 水 質 測 定 結 果 の BOD75% 値 ( 近 隣 の 横 雲 橋 )を 参 考 にしてその 経 年 変 化 と ASPT 値 の 経 年 変 化 をグラフにした ( 図 2) 最 近 4 年 間 で,BOD75% 値 は 0.7mg/l から 1.5mg/l と 年 々 上 昇 してきているが,ASPT 値 に 明 確 な 経 年 変 化 は 見 られなかった 今 後 は, 長 期 の 水 質 状 況 が 把 握 できる 公 共 用 水 域 の 常 時 監 視 地 点 を 考 慮 した 調 査 地 点 の 選 定 や,ASPT 値 の 正 確 性 を 高 めるために 採 集 範 囲 を 拡 大 して 採 集 する 生 物 の 数 を 増 やすなど, 手 法

40 の 検 討 も 加 えつつ, 新 潟 市 の 主 な 河 川 について 調 査 を 継 続 していきたい 表 6 調 査 結 果 のまとめ 早 出 川 阿 賀 野 川 上 流 中 流 下 流 下 流 St.1 水 戸 野 St.2 善 願 橋 St.3 新 郷 屋 St.4 大 阿 賀 橋 ASPT 値 水 質 階 級 Ⅰ Ⅰ Ⅰ Ⅰ Ⅰ Ⅰ Ⅲ Ⅳ 総 科 数 周 辺 環 境 変 化 なし 変 化 なし 変 化 なし 変 化 なし 水 質 (COD:mg/l) 底 質 ( 強 熱 減 量 :%) 流 速 (cm/sec) 図 2 大 阿 賀 橋 の ASPT 値 と BOD75% 値 ( 近 隣 の 横 雲 橋 )の 経 年 変 化

41 参 考 文 献 1) 猪 股 秀 子, 斎 藤 和 子, 小 林 秀 昭, 岸 洋 志 : 新 潟 市 における 大 型 底 生 動 物 による 河 川 水 域 環 境 評 価 と 評 価 法 の 検 討, 全 国 環 境 研 会 誌 Vol.35,No.4,2010 2) 川 合 禎 次 : 日 本 産 水 生 昆 虫 検 索 図 説, 東 海 大 学 出 版 会,1958 3) 山 崎 正 敏 : 河 川 の 生 物 学 的 水 域 環 境 評 価 基 準 の 設 定 に 関 する 研 究, 全 国 公 害 研 会 誌 Vol. 21 No.3,1996 4) 環 境 庁 水 質 保 全 局 : 平 成 11 年 度 水 生 生 物 等 による 水 環 境 評 価 手 法 検 討 調 査,p19,2000 調 査 地 点 の 写 真 St.1 早 出 川 上 流 ( 五 泉 市 水 戸 野 ) St.2 早 出 川 中 流 ( 五 泉 市 太 田 善 願 橋 ) St.3 早 出 川 下 流 ( 新 潟 市 秋 葉 区 新 郷 屋 ) St.4 阿 賀 野 川 下 流 ( 新 潟 市 江 南 区 大 阿 賀 橋 )

42 写 真 1 写 真 2 写 真 3 分 類 目 カゲロウ 目 分 類 目 カゲロウ 目 分 類 目 カゲロウ 目 科 フタオカゲロウ 科 科 ヒラタカゲロウ 科 科 コカゲロウ 科 写 真 4 写 真 5 写 真 6 分 類 目 カゲロウ 目 分 類 目 カゲロウ 目 分 類 目 カゲロウ 目 科 トビイロカゲロウ 科 科 マダラカゲロウ 科 科 モンカゲロウ 科 写 真 7 写 真 8 写 真 9 分 類 目 トンボ 目 分 類 目 トンボ 目 分 類 目 カワゲラ 目 科 カワトンボ 科 科 サナエトンボ 科 科 カワゲラ 科 写 真 10 写 真 11 写 真 12 分 類 目 カワゲラ 目 分 類 目 ハエ 目 分 類 トビケラ 目 科 オナシカワゲラ 科 科 ヘビトンボ 科 科 ヒメトビケラ 科

43 調 査 研 究 報 告 (9) 生 物 指 標 による 水 質 評 価 法 の 検 討 について 岡 田 裕 美 猪 股 秀 子 立 川 正 幸 小 林 秀 昭 概 要 生 物 指 標 による 水 質 評 価 法 については 1992 年 環 境 庁 水 質 保 全 局 から 大 型 底 生 生 物 による 河 川 環 境 評 価 のための 調 査 マニュアル( 案 ) 1) が 出 され これに 基 づき 現 在 多 くの 調 査 が 行 われている 新 潟 市 においても 平 成 17 年 度 から 調 査 を 実 施 している 2) が 調 査 地 点 の 多 くが 下 流 域 に 位 置 すること から 個 体 数 が 少 なく 生 物 種 も 限 られており 従 来 のスコア 法 では 河 川 の 状 況 を 十 分 に 反 映 できないこと があった そこで 各 スコアの 加 重 平 均 で 評 価 する 方 法 を 検 討 し 一 定 の 有 効 性 が 確 認 できたので 報 告 する 1 はじめに 生 物 調 査 は 現 場 での 実 用 性 から 個 体 数 を 数 えないスコア 法 が 用 いられている これは 出 現 した 科 に 与 えられたスコアの 合 算 を 総 科 数 で 割 った 値 (ASPT 値 )で 評 価 するもので 生 物 種 の 分 類 が 容 易 で 算 出 も 簡 単 に 行 える 一 方 平 均 ではなく 単 に 各 スコアの 合 算 値 で 比 較 する 方 法 (BMWP 法 )もあるが 季 節 やサンプルサイズの 影 響 が 大 きいことが 指 摘 されている 3) このため 全 国 的 にスコア 法 が 用 いられ 統 一 した 手 法 として 採 用 されている しかし 下 流 域 に 位 置 する 新 潟 市 の 調 査 では 採 集 される 生 物 が 少 ないため 1 個 体 の 出 現 が 結 果 に 大 きく 影 響 することとなり 河 川 環 境 と ASPT 値 の 間 に 違 和 感 を 生 ずることがあった また 河 川 によっては 年 度 間 で 変 動 が 大 きく 傾 向 を 探 ることが 難 しい 状 況 となっている このため スコア 法 に 対 し より 状 況 を 反 映 する 指 標 として 個 体 全 てのスコアを 合 算 し 個 体 数 で 割 る 方 法 ( 以 下 加 重 スコア 法 という )を 検 討 したので 報 告 する 2 方 法 平 成 23~25 年 度 に 実 施 した 生 物 調 査 の 結 果 を 通 常 のスコア 法 と 加 重 スコア 法 により 解 析 し 妥 当 性 について 検 討 する 3 調 査 地 点 今 回 の 検 討 については 平 成 23 年 度 から 25 年 度 に 生 物 調 査 を 行 った 地 点 のうち 図 1 に 示 す 信 濃 川 2 地 点 西 川 3 地 点 阿 賀 野 川 2 地 点 を 対 象 とした