Fig. 1 Clinical course Table 1 PCR primers and cycling parameters used for amplification
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- こうき てらわ
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1 Key words: extended-spectrum Ĉ-lactamase (ESBL), SHV-12 Escherichia coli
2 Fig. 1 Clinical course Table 1 PCR primers and cycling parameters used for amplification
3 中村 114 Fig. 2 PCR primers 竜也 他 ジ 洗 浄 を 行 い,白 used in this study 血 球 数,CRPも 症 状 も 改 善 し た た め4月15日 術 が 施 行 さ れ た.そ た た めCZOPが 減 少 し た.炎 症 には 人工肛 門造 設 の 際 白 血 球 数,CRPが 投 与 さ れ た が,感 な 症 状 は な く経 過 は 良 好 で あ っ た.経 好 で 全 身 状 態 も 良 く,5月24日 増 加 し 染 症 を疑 う よ う 口摂 取 も良 退 院 と な り現 在 は 外 来 通 院 中 で あ る(Fig,1). (1)細 菌 学 的 検 査:腹 腔 内 の 膿 瘍 か ら,定 法 に よ り 菌 の 分 離 培 養 を,同 を 用 い た.ま 法(BBL)を 使 用 し,ESBLが 上 の検 査 結 果 よ り細 菌 性 の 術 後 腹 腔 内 膿 瘍 及 び 腹 液 体 希 釈 法(Microscanパ 膜 炎 が 考 え られ た. Type5J及 治 療 経 過:ド レ ナ ー ジ に よる 排 膿 に よ り炎症 症 状 も改 善 さ れ た た め,CZOPは され た.そ の後,強 投 与5日 目で 中 止 酸 性 水 に よ る数 回 の ドレナ ー Fig. 3 Double-disk test of CAZ-resistant NG社)を びNeg E. coli strains. BP 行 っ た.さ つ い て,β-ラ cva)を 定 はVITEKGNIカ ー ド た薬 剤 感 受 性 試験 は セ ン シデ ィ ス ク 疑 わ れ た た め,微 ネ ルNeg Combo Combo3J: DADE ら に,CAZ耐 Strain 159: BEHRI- 性 の分離菌 に ク タ マ ー ゼ 阻 害 剤(ク 含 むACV-KB ラ ブ ラ ン 酸: diskとcaz-kb diskを isolate from stool, 160: isolate from pus 感 染症 学 雑 誌 量 Panel 第74巻 第2号 用
4 115 日本 で大 腸 菌 か ら発 見 され たESBL Table 2 Antibiotic susceptibilities Fig. 4 of Escherichia coli Large plasmid transconjugant. clinical isolate and transconjugant A: DNA from E. coli isolate and parent strain B: transconju- gant A い たDouble-Disk試 CSH2を 験 を 行 っ た..一 方,E, 受 容 菌 と し て,定 法 に よ りCAZ耐 B coli 性の 親 株 か ら プ ラ ス ミ ドの 接 合 伝 達 試 験 を 行 っ た. (2)PCR解 析:CVAに る ク ラ スAβ-ラ る た め,本 よる 阻害 現 象 が 観 察 さ れ ク タ マ ー ゼ は 数 種 類 に分 け ら れ 分 離 菌 が 産 生 す る β-ラ ク タ マ ー ゼ の 遺 伝 子 型 を 特 定 す る た め,TEM-由 SHV-由 来ESBL遺 来ESBL遺 伝 子,MEN-1型 マ ー ゼ 遺 伝 子,Toho-1型 に 特 異 的 なPCRプ ラ イ マ ー を 用 い てPCR解 い たPCRプ 件 をTable1に 示 す. に よ り増 幅 し た.増 幅 さ れ た ラ グ メ ン ト に 対 し,6本 よ り塩 基 配 列 を 決 定 し た.シ に ー クエ ンス解 析 は のPRISMTM377XL Systemを DNA Sequencing 用 い た 使 用 した プ ラ イ マ ー セ ッ トを 示 す. 細 菌 学 的 検 査:膿 検 出 さ れ た.E. 果 量 液 体 希 釈 法 で のMIC値 に 示 し た.Double-Disk法 ACV-diskと 瘍 内 容 物 か らE.COliな CZOP20mm(S)で CTX22mm(I), あ り,ESBL産 をTable2 の 結 果,CAZ-diskと の 問 に発 育 阻 止 帯 の 拡 大 が 観 察 され た(Fig.3).以 上 の 結 果 よ りNCCLSのESBL産 菌 の 判 定 基 準 を 満 た し た た め,ESBL産 た,同 どが AZT15mm 生菌が疑 れ た.一 方,接 生 生菌 であ 一患者 の便か ら も 同 様 の 耐 性 パ タ ー ン を 示 す.E.COliが coliの セ ン シ デ ィ ス ク 法 で の 阻 止 円 はCAZ15mm(I), 平成12年2月20日 わ れ た.微 る こ と が 強 く 示 唆 さ れ た.ま 結 (R), の シ ー ケ ンス解 析 ラ イ マ ー を 用 い てdye-terminator法 ABI社 Fig.2に 下流 に ラ イ マ ー を 設 定 し,構 造 遺 伝 子 全 体 を 含 む 領 域 をPCR法 用PCRプ 応 条 伝 子 の開 始 コ ド 上 流 と 終 始 コ ド ン(TAA)の 1対 のPCRプ 析 を ラ イ マ ー とPCR反 (3)シ ー ク エ ン ス 解 析:blaSHV遺 DNAフ β-ラ ク タ β-ラ ク タ マ ー ゼ 遺 伝 子 実 施 し た.用 ン(ATG)の 伝 子, 検 出 さ 合 伝 達 試 験 で は ド ナ ー と 同 じCAZ に 対 す る 耐 性 度 を 示 す 接 合 体 が 得 ら れ た た め,耐 性 遺 伝 子 は 伝 達 性 プ ラ ス ミ ド依 存 性 で あ る こ と が 確 認 さ れ た(Table2, Fig.4).
5 中村 116 Fig. 5 Result of Hin diii, PC: strains PCR解 tested 析 結 果:SHV-由 a PCR each analysis positive in this study. 来ESBLに of 3 control 120, 160: 特 異 的な プ 竜也 他 clinical strain, isolates. M: ƒédna 120, 159, 160: digested with CAZ-resistant E. coli isolates from pus, 159: an isolate from stool のESBL産 生 菌 は黒 川 らが 既 に 報 告 して い る14)15) ラ イマ ー を 用 い た 場 合 に の み 陽 性 結 果 が 得 られ た が,感 染 症 の 症 例 報 告 と して は 今 回が 国 内 で 最 初 (Fig.5). の もの と考 え られ る. シ ー ク エ ン ス 解 析 結 果:両 解 析 の 結 果,β-ラ グ 領 域 は,ス 方 向 の シー ク エ ン ス 国 内 で も数 年 前 か ら ESBL産 生 菌 の 分 離 報 告 クタマー ゼ遺伝子 の コーデ ィ ン や 院 内 感 染 の 症 例 報 告 が み られ る よ う に な っ て い イ ス で 分 離 さ れ たK,pneumoniaeか ら 発 見 さ れ たSHV-5-2a(=SHV-12)の (EMBL accession 配 列 を 示 し,今 No.X98105)と 遺 伝 子 全 く同 一 の 塩 基 回 分 離 さ れ たCAZ耐 は,SHV-型ESBL産 る.し か し,そ れ ら は,Toho-1タ 性 のE. coli 生 菌 で あ る こ とが 確 定 し た (Fig.6). 第3世 マ ー ゼ 産 生 菌 で あ る.な ぜ 国 内 で はCTXに 高 い 耐 性 を 示 すToho-1型 Toho-1型 後 は 国内で も β-ラク タマ ー ゼ に 加 えTEM型,SHV 生 菌 の増 加 が 懸 念 され る た め,細 菌 検 査 の 現 場 で は一層 の 注 意 を 払 う事 が 求 め られ て 察 代 セ フ ェ ム 系 薬 が1980年 売 さ れK.pneumoniaeな より β-ラク タ マ ー ゼ 産 生 菌 が 主 流 な の か 不 明 で あ る.今 型 のESBL産 考 イ プ の β-ラク タ 代 以 降に発 どの グ ラ ム 陰 性 桿 菌 に よ る 感 染 症 が 減 少 し た.し か し,1983年 ら の 報 告1)以 後,ESBL産 生 菌 に よ る 院 内 感 染 や術 のKnothe い る. 今 回 の 症 例 で は 患 者 の 便 か ら も 同 一 のESBL 産 生菌 が 分離 され たた め 院 内感 染 の 危 険性 が 有 り,同 室 患 者 の 便,尿,そ の 他 外 部 との 接 触 が あ 後感 染 症 が世 界 各地 か ら報 告 され る よ う に な っ る よ うな 処 置 部 の 検 体 を用 い て 調 査 した.そ た.欧 果,E. coliとk.pneumoniaeに 米 の 医 療 現 場 で は こ れ ら ESBL産 よ るoutbreakが ア に お い て も,以 ESBL産 前 か ら,TEM-型 や,SHV-型 が 国にお いて line drugs)と し て多 用 さ れ て きた れ らの 薬 剤 に感 受 性 を示 す ESBL産 生 つ い て はESBL産 生 を疑 う よ う な 菌 は 幸 い に も検 出 さ れ な か っ た.今 回,ESBL産 前 か らセ フ ァマ イ シ ンや カ ル バ ペ ネ ム が 第 一 線 薬 剤(first た め,こ ジ 生 菌 が 報 告 さ れ て い る12)13)が,本 邦 で の 感 染 症 の 報 告 は 認 め ら れ て い な い.我 は,以 生 菌 に 深 刻 な 問 題 と な っ て い る.ア の結 生 菌 に よ る感 染 症 で あ る こ とが 早 期 に 判 定 され,直 ち に感 染 対 策 を講 じる こ とが で き た た め に 蔓 延 を防 ぐこ とが 可 能 で あ っ た と考 え ら れ る.ESBL産 生 菌 は,腸 内 細 菌 で あ り,便 か ら検 出 さ れ る ケ ー ス も多 い が,そ の よ う な場 合,常 在 菌 と して 扱 わ れ,感 受 性 試 験 が 行 わ れ な い こ とが 菌 の 増 加 が 抑 え ら れ て き た と も 考 え ら れ て い る. 多 い,そ 本 症 例 で は,腹 の 広 範 な 汚 染 を 許 し て し ま う 恐 れ が あ り,特 に 5-2a=SHV-12)産 部 膿 瘍 か らSHV-型ESBL(SHV生 菌 が 分 離 さ れ た.こ の タイプ ICUや の 結 果,院 内 感 染 対 策 が 遅 れ,院 内 環 境 血 液 疾 患 治 療 ユ ニ ッ ト,移 植 ユ ニ ッ トな ど 感 染症 学 雑 誌 第74巻 第2号
6 Fig. 6 Nucleotide sequences of blashv-12 gene encoding SHV-5-2a (SHV-12)
7 Bois SK, Amyes SG, George RC: Outbreak of in- fection in two UK hospitals caused by a strain of Klebsiella pneumoniae resistant to cefotaxime and ceftazidime. J Hosp Infect 1992; 20: ) Sougakoff W, Petit A, Goussard S, Sirot D, Bure A, Courvalin P: Characterization of the plasmid 9) Ishii Y, Ohno A, Taguchi H, Imajo S. Ishiguro M, Matsuzawa H: Cloning and sequence of the gene encoding a cefotaxime-hydrolyzing class A betalactamase isolated from Escherichia coil. Antimi- crob Agents Chemother 1995; 39: ) Yagi T, Kurokawa H, Senda K et al.: Nosocomial genes. Antimicrob Agents Chemother 1997; 41: ) Knothe H, Shah P, Krcmery V, Antal M, Mitsuhashi S: Transferable resistance to cefotaxime, cefoxitin, cefamanodole and cefuroxime in clinical isolates of Klebsiella pneumoniae and Serratia marcescens. Infection 1983; 11: ) Bermudes H, Arpin C, Jude F, el-harrif Z, Bebear C, Quentin C: Molecular epidemiology of an outbreak due to extended-spectrumƒà-lactamaseproducing enterobacteria in a French hospital. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 1997; 16: ) Shannon K, Stapleton P, Xiang X et al.: Extended-spectrum ƒà-lactamase-producing Klebsiella pneumoniae strains causing nosocomial outbreaks of infection in the United Kingdom. J Clin Microbiol 1998; 36: ) Pena C, Pujol M, Ardanuy C et al.: Epidemiology and successful control of a large outbreak due to Klebsiella pneumoniae producing extended-spectrum ƒà-lactamases. Antimicrob Agents Chemother 1998; 42: ) Johnson AP, Weinbren MJ, Ayling-Smith B, Du genes blat-4 and blat-5 which encode the broad-spectrum ƒà-lactamases TEM-4 and TEM-5 in enterobacteriaceae. Gene 1989; 78: spread of cephem-resistant Eschemichia coil stra- ins carrying multiple Toho-1-likeƒÀ-lactamase 11) Prodinger WM, Fille M, Bauernfeind A, Stemplinger I, Amann S, Pfausler B: Molecular epidemiology of Klebsiella pneumoniae producing SHV-5 ƒàlactamase: parallel outbreaks due to multiple plasmid transfer. J Clin Microbiol 1996; 34: ) Liu PY, Tung JC, Ke SC, Chen SL: Molecular epidemiology of extended-spectrum ƒà-lactamaseproducing Klebsiella pneumoniae isolates in a district hospital in Taiwan. J Clin Microbiol 1998; 36: ) Kim J, Kwon Y, Pai H, Kim JW, Cho DT: Survey of Klebsiella pneumoniae strains producing extended-spectrum ƒà-lactamases: prevalence of SHV- 12 and SHV-2a in Korea. J Clin Microbiol 1998; 36: ) Livermore DM, Yuan M: Antibiotic resistance and production of extended-spectrum ƒà-lactama-
8 ses amongst Klebsiella spp. from intensive care units in Europe. J Antimicrob Chemother 1996; 38: cherichia coli and Klebsiella pneumoniae: preva- lence of TEM-52 in Korea. J Clin Microbiol 18) Pai H, Lyu S, Lee JH et al.: Survey ofextendedspectrum ƒà-lactamases in clinical isolates of Es- 1999; 37: A SHV-derived Extended-spectrum ƒà-lactamase (SHV-12) Produced by an Escherichia coli Recovered from Wound Abscess in post Operative Case with Rectal Carcinoma Tatsuya NAKAMURA1), Sachiko UCHIDA1), Hitoshi HEIJYO1), Midori MASUDA1), Hakuo TAKAHASHI1), Masaru KOMATSU2), Masanori AIHARA2), Hiroshi KUROKAWA3), Naohiro SHIBATA3), Tetsuya YAGI3) ARAKAWA3) of Clinical Central Laboratory, Kansai Medical University Hospital of Clinical Pathology, Tenri Hospital of Bacterial and Blood Products, National Institute of Infection Diseases A 62-year-old woman admitted for rectal carcinoma suffered from a post-operative bacterial infection. Oxy-imino-beta-lactams including cefotiam (CTM) and cefozopran (CZOP) were prescribed for this case, but the patient developed a wound abscess followed by peritonitis. She recovered from the bacterial infection after drainage and recurrent washing of the abscess. An ephemeral aggravation of infectious signs was observed just after creation of an artificial anus, and CZOP was again administered, and no evident bacterial infection occurred. The patient recovered, then was followed as an outpatient to date. A CAZ-resistant (MIC,>16ƒÊg/ml) E. coli was recovered from pus of her wound abscess. Since the CAZ-resistance decreased (MIC, 64ƒÊg/ml0.13ƒÊg/ml) by the presence of clavulanate (CVA) in this isolate, this strain was speculated to be an extended spectrum beta-lactamase (ESBL) producer at an early stage of infection. A similar strain was also isolated from the feces. Therefore, we immediately took measures to block the nosocomial spread of this microorganism, and we succeeded in preventing a nosocomial outbreak of this strain. It was later confirmed by PCR analysis and DNA sequencing analysis that this CAZ-resistant E. coli strain produces an ESBL (SHV-5-2a=SHV-12). This is the first report of a case of infection with SHV-derived ESBL producing E. coli strain in Japan. We are concerned that further dissemination of this kind of microorganism might occur in the near future also in Japan, as it has been widely observed in European countries and the US. We believe that it will be very important to distinguish the type of beta-lactamases for rigorous bacterial infection control with the prudent use of antibiotics. In other words, we in Japan must recall that various gram-negative bacterial species that produce TEM-, SHV-derived ESBLs, Toho-1, AmpC, or IMP-1 are already widespread. Thus, we should take this fact into consideration when we do antibiotic susceptibility tentings and interpretation of the results for promotion of accurate chemotherapy.
VOL.48 NO.7 lase negative staphylococci, Escherichia coli, Klebsiella spp., Citrobacter freundii, Enterobacter spp., indole-positive Proteus, Serratia
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