セミナー室 実践的 バイオインフ ォマテ ィクス-1 実践的ホモロジー サーチと遺伝子機能 アノテーション 守屋勇樹, 五斗 進 京都大 学化学研究所 バイオインフ ォマテ ィクスセンター 配 列類似性 と遺伝子機 能 伝 子 を相 同 遺 伝 子 (ホ モ ロ グ) と呼 び, これ らの遺 伝

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1 セミナー室 実践的 バイオインフ ォマテ ィクス-1 実践的ホモロジー サーチと遺伝子機能 アノテーション 守屋勇樹, 五斗 進 京都大 学化学研究所 バイオインフ ォマテ ィクスセンター 配 列類似性 と遺伝子機 能 伝 子 を相 同 遺 伝 子 (ホ モ ロ グ) と呼 び, これ らの遺 伝 子 を 見 つ け る こ とが ホ モ ロ ジ ー サ ー チ の 目的 とな る. デ ー 遺 伝 子 や タ ンパ ク質 の配 列 が 新 た に 得 られ, そ の 機 能 タベ ー ス か ら得 られ た 相 同遺 伝 子 に機 能 の 情 報 が記 載 さ の推 定 を した い と き, もち ろ ん 実 験 的 手 法 を用 い て 機 能 れ て い た な ら ば, 問 い 合 わせ た 配 列 の機 能 の 推 測 が可 能 同定 す る手 法 も存 在 す る が, 現 段 階 に お い て一 番 の 近 道 と な る. ま た, 相 同遺 伝 子 の よ う に遺 伝 子 全 体 が似 て い と考 え られ る 手 法 は ホ モ ロ ジ ー サ ー チ だ ろ う. ホ モ ロ る の で は な く, 部 分 的 に似 た配 列 を 有 して い る場 合 にお ジ ー サ ー チ と は, 問 い合 わ せ 配 列 とデ ー タ ベ ー ス に蓄 積 い て も, そ の 部 位 が どん な機 能 を もっ て い るの か を デ ー さ れ た す べ て の配 列 を 比 較 す る こ とに よ っ て, 問 い合 わ タベ ー ス上 か ら知 る こ とが で きた な らば, 遺 伝 子 全 体 の せ 配 列 と類 似 性 を もつ 配 列 を 検 索 す る こ と で あ る. で は 機 能 を類 推 す る の に 役 立 つ だ ろ う. なぜ, 類 似 配 列 を 検 索 す る こ とで 遺 伝 子 機 能 が 推 定 で き で は, どの よ うに して 配 列 類 似 性 を もつ 配 列 を デ ー タ る の だ ろ うか. これ は想 像 に 難 くな い だ ろ うが, 配 列 類 ベ ー ス か ら探 し出 せ ば よ い の で あ ろ う か. 完 全 一 致 す る 似 性 を 有 す る遺 伝 子 は 同一 の 機 能 を有 して い る と推 測 で 配 列 が デ ー タベ ー ス中 に存 在 す るな らば そ れ ほ ど難 しい き るか らで あ る. 特 に進 化 の 上 で共 通 の 祖 先 を も っ た遺 問 題 で は な い の だ が, 一 般 的 な 遺 伝 子 の 多 くは進 化 の 上 化 学 と生 物 Vol. 44, 27

2 で 様 々 な変 異 を 蓄 積 して お り, 塩 基 配 列 の上 で もア ミノ ペ ア ワ イ ズ 配 列 比 較 を 用 い た ホ モ ロ ジー サ ー チ 酸 配 列 の上 で も置 換, 挿 入, 欠 失 が 存 在 して い る. そ の た め, 相 同遺 伝 子 を 巨大 な 配 列 デ ー タベ ー ス か ら探 し出 一 口 に ホ モ ロ ジ ー サ ー チ とい って も, そ れ らは デ ー タ す の は 困 難 で あ る. そ れ を 解 決 す る た め に, 現 在 ベ ー ス検 索 の 方 法 や使 わ れ 方 に よ っ て い くつ か に分 類 で BLAST, 実 装 さ れ る もの を は じ き る. そ の一 つ に, 問 い 合 わせ 配 列 とデ ー タベ ー ス上 の め と して 様 々 な ホ モ ロ ジー サ ー チ の た め の ア ル ゴ リズ ム 配 列 を 一 対 一 (ペ ア ワイ ズ) に 比較 して類 似 配 列 を検 索 が 開 発 され て い る. 本 稿 で 紹 介 す る代 表 的 な ホ モ ロ ジー す る方 法 が あ り, BLASTやFASTA, サ ー チ プ ロ グ ラ ム とデ ー タベ ー ス, そ の ウ ェ ブ サ イ トを の プ ロ グ ラ ム で 実 装 さ れ て い る. こ の う ち Smith- 表1に Waterman FASTA, SSEARCHに ま とめ た. 本 稿 で は, こ れ ら検 索 プ ロ グ ラ ム の 利 SSEARCHな ア ル ゴ リズ ム を 実 装 したSSEARCHで ど は, 用 法 と そ の結 果 を 用 い た遺 伝 子 機 能 ア ノ テ ー シ ョ ン につ 問 い合 わ せ 配 列 と デ ー タベ ー ス上 の 配 列 の 間 で, 考 え 得 い て 述 べ る こ と とす る. る す べ て の ア ラ イ ンメ ン トを生 成 し, 最 適 とな る ア ラ イ ンメ ン トを得 る こ とを 目的 と して い る. 精 度 の 高 い ア ラ イ ン メ ン トが得 られ る た め, 進 化 の 上 で共 通 す る祖 先 を もつ 局 所 的 な 保 存 配 列 を 検 出 した い 場 合 な ど に有 用 で あ 表1 代 表 的 な ホ モ ロ ジ ー サ ー チ お よ び デ ー タ ベ ー ス と そ の ウ ェ ブ サ イ ト 28 化 学 と生 物 Vol. 44,

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5 の 類 似 度 は 異 な る た め, E-value が どの 程 度 の値 で あれ ば 機 能 的 関 連 が あ る と い え る の か は 場 合 に よ る が, の リ ス ト上 で E-value 結果 が 大 き く変 化 して い る 場 所 が タ サ ー チ の他 に, タ ンパ ク質 フ ァ ミ リー に見 られ るパ ター ンの デ ー タ ベ ー ス に対 して検 索 を 行 な うホ モ ロ ジ ー サ ー チ が あ る. PROSITEや Pfam は タ ンパ ク質 フ ァ ミ リー ンパ ク質 フ ァ ミ リー を 分 け る た めの 一 つ の 目安 とい え る が もつ モ チ ー フ の デ ー タベ ー ス で, PSSMや だ ろ う. た と え ば 図2-Aの ルHMM れ 以 降 に お い て E-Value め, 上 位3配 例 で い え ば, bisphosphoglycerate mutase が 推 測 で き る だ ろ う. さ ら に, mutase 列 とそ に も 隔 た りが 見 ら れ る. そ の た 列 の 機 能 情 報 か ら, phoglycerate 上 位3配 問 い 合 わ せ 配 列 が2,3- の 機 能 を も って い る こ と リ ス ト全 体 か ら も phos- タ ンパ ク 質 フ ァ ミ リ ー の 一 員 で あ る こ と が 伺 え る だ ろ う. 図2-Bに 最 も類 似 度 の 高 か っ (hidden Markov model) プ ロ フ ァイ に よ って 作 成 さ れ た 配 列 プ ロ フ ァイ ル な どの パ タ ー ンを 問 い合 わ せ 情 報 と し て, パ タ ー ン ど う しを 比 較 す る こ と で デ ー タベ ー ス検 索 を 行 な う こ とが 可 能 で あ る. 現 在 はPROSITEや な どを 統 合 的 に利 用 で き る InterPro Pfam も広 く利 用 さ れ て い る. 上 記 の手 法 の よ う に マ ル チ プ ル ア ラ イ ン メ ン トの 情 報 示 を 利 用 で き れ ば, 単 一 の 問 い 合 わ せ 配 列 を 用 い る場 合 に 括 弧 で 示 さ れ た 数 値 は実 比 べ て類 似 配 列 の検 出感 度 は 上 昇 す る が, パ タ ー ンを 用 際 の ア ラ イ ン メ ン トか ら ア ミ ノ 酸 置 換 行 列 を 用 い て 算 出 い た ホ モ ロ ジ ー サ ー チ を行 な うた め に は, 初 め に機 能 の した ス コ ア 関 連 した 複 数 の配 列 を 準 備 しな くて は な らな い. そ れ を た 配 列 と の ア ラ イ ン メ ン ト結 果 を 示 し た. Score で さ れ る 数 値 が2つ (raw 存 在 す る が, ス コ ア) で, も う一 方 が bit ス コ ア と 呼 ば れ る 類 似 ス コ ア で あ る. raw ス コアはス コア リング 克 服 した の がPSI-BLAST シ ス テ ム の 影 響 に よ り統 計 学 的 に 偏 り が 生 じ る た め, BLAST) BLASTで BLASTと は こ の 偏 り を 正 規 化 し た bit ス コ ア を 用 い て (position-specific-iterated- で あ る. PSLBLASTで は始 め に通 常 の 同 様 に, 単 一 の 問 い 合 わ せ配 列 を 用 い た 配 列 示 さ れ る 数 値 は E-value で あ る. ま た デ ー タ ベ ー ス の ホ モ ロ ジー サ ー チ を行 な う. 次 に, 得 ら ア ラ イ ン メ ン トの 完 全 一 致 度 (Identities) とア ミノ酸 置 れ た類 似 配 列 の う ち, E-value が 設 定 した 閾 値 以 下 の 配 い る. Expect で 換 行 列 に お け る正 の 値 で の 一 致 度 (Positives) も類 似 度 列 群 と問 い合 わ せ配 列 の マ ル チ プル ア ライ ンメ ン トを 行 な い, 配 列 プ ロ フ ァイ ル かPSSMを の 指 標 と し て 用 い られ る. 作 成 す る. そ して 作 成 され た 配 列 プ ロ フ ァイ ル やPSSMを 問い合 わせ 情報 と して 再 度 デ ー タベ ー ス の 検 索 を行 な う. こ の配 列 プ ロ 遠 い類 似 配 列 を 検 索 す る た め の ホ モ ロ ジー サ ー チ 単 一 の 問 い 合 わ せ 配 列 を 用 い た デ ー タ ベ ー ス検 索 の 他 に, マ ル チ プ ル ア ラ イ ン メ ン トの 情 報 を 用 い て デ ー タ フ ァ イ ル やPSSMの 作 成 と デ ー タベ ー ス 検 索 を 繰 り返 し行 な う こ とで, 単 一 の 問 い合 わせ 配 列 を用 い る よ り多 く の 類 似 配 列 を 検 索 す る こ と が で き る. 実 際 に, ベ ー ス 検 索 す る 手 法 も 開 発 さ れ て い る. 複 数 配 列 の 情 報 BLASTは を 用 い る こ と が で き る た め, 多 くの 場 合 で 単 一 配 列 の 問 が 見 つ か る こ とが 検 証 され て い る. しか し, 繰 り返 し検 い 合 わ せ で は 見 つ か らな か った 類 似 配 列 を検 索 す る こ と 索 に よ って 検 索 に お け る ノ イ ズ も増 幅 さ れ る た め, 過 度 が で き る. の繰 り返 し検 索 は偽 陽性 配 列 の増 加 を 招 く こ と に な る. ing そ の 一 つ にPSSM matrix) PSSMは, (position-specific scor- を 利 用 し た ホ モ ロ ジ ー サ ー チ が あ る. ギ ャ ップの な い モチ ー フ配 列 (タ ン パ ク 質 も ち ろ ん, SSEARCHよ そ の た め, 検 索 結 果 の ア ノ テ ー シ ョ ンや E-Value を手 作 業 で 確 認 しな が ら, 目的 に あ った繰 り返 し回 数 と閾 値 を フ ァ ミ リ ー 内 に お い て よ く保 存 さ れ る 配 列 パ タ ー ン) の 決 定 す る こ とが, PSI-BLASTを マ ル チ プ ル ア ラ イ ン メ ン トか ら, 各 残 基 部 位 の ア ミ ノ 酸 重 要 な 要 素 にな る. 出 現 頻 度 をBLOSUM62の り も多 くの 類 似 配 列 用 いた類 似配列 検索 の よ うな 標 準 的 な 置 換 行 列 で 正 規 化 し, 作 成 さ れ た ス コ ア 行 列 で あ る. MASTはPSSM 遺 伝 子 の グ ル ー ピ ング と機 能 の 分 類 を 問 い 合 わ せ 情 報 と して 利 用 で き る ホ モ ロ ジ ー サ ー チ プ ロ グ ラ ム で, モ チ ー フ と類 似 性 の 高 い配 列 を もつ遺 伝 子 を 検 索 す る こ と が で き る. ま た, 配 列 プ ロ フ ァイ ル を用 問 い 合 わ せ 配 列 の 遺 伝 子 機 能 を 推 測 す る段 階 に お い て, 機 能 が 知 られ て い る相 同遺 伝 子 を デ ー タベ ー ス か ら い た デ ー タ ベ ー ス 検 索 も行 な わ れ て い る. 配 列 プ ロ フ ァ 見 つ け 出す こ と が重 要 で あ る こ と は最 初 に述 べ た. イ ル と は, ギ ャ ッ プ を考 慮 した ス コ ア 行 列 の 一 種 で あ し, ホ モ ロ ジ ー サ ー チ に よ って 得 られ た配 列 類 似 遺 伝 子 る. PSSMに 比 べ て 配 列 プ ロ フ ァ イ ル を 使 う 手 法 は, す べ て が 同 一 機 能 を 有 す る相 同 遺 伝 子 で あ る保 証 は な い ギ ャ ッ プ を 考 慮 し て い る た め に 感 度 が 良 く な っ て い る. た め, 相 同 遺 伝 子 の 見 極 め が必 要 と な る. そ こ で, ゲ ノ 配 列 デ ー タ ベ ー ス に 対 す る検 索 を 行 な う ホ モ ロ ジ ー 化 学 と 生 物 Vol. 44, しか ム 解 析 に よ っ て もた ら され た遺 伝 子 や タ ンパ ク質 の 情 報 31

6 測 して い る. しか し, COGは2004年6月 以 降 更 新 が停 止 して お り, 新 しい相 同 遺 伝 子 グル ー プ の検 索 に対 応 し き れ な い可 能 性 もあ る. 相 同遺 伝 子 の 機 能 情 報 を検 索 で きた と き, 次 に重 要 と な る の は, 実 際 に そ の遺 伝 子 が どの よ う な 生 命 現 象 に 関 わ って い る の か を知 る こ とで あ る. 生 命 現 象 と は遺 伝 子 間, タ ンパ ク質 問 の相 互 作 用 を意 味 し, そ の た め一 連 の 生 命現 象 を 司 る遺伝 子機 能 を 分類 す るこ とが必要 にな る. しか し, COGで は そ れ ぞ れ の 相 同遺 伝 子 グル ー プ が 同 じ階 層 に 存 在 す る た め, そ れ ぞ れ の遺 伝 子 が ど の相 同 を, 相 同遺 伝 子 の関 係 に即 して グル ー ピ ン グす る研 究 が 遺 伝 子 グ ル ー プ に分 類 され る か を 見 た だ け で は, そ の生 行 な わ れ た. 物 が どん な代 謝 系 や輸 送 系 を も って い る か が 判 別 で き な 遺 伝 子 に は 配 列 の よ く似 た相 同 遺 伝 子 もあ れ ば, 変 異 い. ま た, これ ま で研 究 者 が 各 々 の 呼 び方 で 遺 伝 子 機 能 が 進 ん で い る相 同遺 伝 子 も存 在 す る た め, 単 純 に ホ モ ロ 情 報 を 記 述 して き た た め, 同一 の 機 能 を表 わ す 言 葉 が複 ジ ー サ ー チ の 類 似 ス コ ア や E-value の み に 頼 っ て 遺 伝 数 存 在 す る場 合 が あ り, そ の た め 共 通 に利 用 で き る機 能 子 を グル ー ピ ン グす る こ と は, 必 ず し も同一 機 能 を 有 す の表 現 が 必 要 とな った. EcoCyc る相 同 遺 伝 子 を グル ー ピ ン グ す る こ と に は な らな い. そ herichia coli K12 Genes こでCOG of pro- 謝 系 に関 す るデ ー タ ベ ー スで, 大 腸 菌 の遺 伝 子 機 能 を 階 teins) で は, 生 物 種 間 の ゲ ノ ム比 較 を行 な う こ とで, 同 一 機 能 を有 す る相 同遺 伝 子 を 同定 し集 め て い る. 相 同 遺 層 的 に分 類 して い る, そ の た め, 大 腸 菌 の近 縁 種 に と っ 伝 子 は, 種 分 岐 を 経 て生 物 種 間 に ま たが って 存 在 す る場 (GO) 合 に オ ー ソ ロ グ遺 伝 子 と呼 び, 同 一 生 物 種 内 に遺 伝 子 重 た もの で, 遺 伝 子 の生 物 学 的 役 割 や 局 在 な どの 情 報 も記 複 な ど の イ ベ ン トを 経 て 存 在 す る場 合 に はパ ラ ロ グ遺 伝 述 され て い る. (Clusters of Orthologous Groups 子 と呼 ばれ て い る. そ の た め オ ー ソ ロ グ遺 伝 子 は, 生 物 (Encyclopedia and Metabolism) of Esc- は 大 腸 菌 の代 て 有 用 な 機 能 分 類 と い え る だ ろ う. Gene Ontology は真 核 生 物 を 中心 に遺 伝 子 機 能 を 階 層 的 に 分 類 し これ ら相 同 遺 伝 子 の グル ー ピ ン グ と機 能 の 分 類 を統 括 種 間 の 全 配 列 ペ アの 中 で最 も近 い 類 縁 関 係 に あ る とい え 的 に 構 築 した デ ー タベ ー ス の一 つ にKEGG る. た とえ ば, あ る遺 伝 子 配 列 を 問 い合 わ せ 配 列 に して, cyclopedia そ れ と は異 な る一 生 物 種 の 全 遺 伝 子 配 列 に対 して ホ モ ロ 子 グ ル ー プ と機 能 分 類 間 の 対 応 の とれ た デ ー タベ ー ス と ジ ー サ ー チ を行 な っ た とす る. そ の 場 合, 最 も高 い類 似 な って い る. of Genes and Genomes) (Kyoto En- が あ り, 相 同遺 伝 ス コア を 示 した 遺 伝 子 が, 問 い合 わ せ 配 列 と共 通 の祖 先 を もつ オ ー ソ ロ グ遺 伝 子 で あ る と推 測 で き る. ま た, 多 くの場 合 で は遺 伝 子 重 複 に よ っ て生 じ同 一 の 機 能 を有 す KEGGに お け る パ ス ウ ェイ の 再 構 築 る と考 え られ る パ ラ ロ グ遺 伝 子 も, オ ー ソ ロ グ遺 伝 子 同 遺 伝 子機 能 ア ノ テー シ ョンの最 終的 な到 達 点 の一 つ 様 に 高 い 類 似 性 を 示 し, 相 同 遺 伝 子 と して集 め る こ とが に, 遺 伝 子 間 の 相 互 作 用 ネ ッ トワー ク の再 構 築 が あ げ ら で き る. れ る. これ は, ゲ ノ ム解 析 か ら得 られ る遺 伝 子 や タ ンパ この よ う に生 物 種 間 で ゲ ノ ム 比 較 を行 な う こ と に よ ク質 の情 報 と, 化 合 物 や 化 学 反 応 の 情 報 を統 合 解 析 す る り, パ ラ ロ グ遺 伝 子 と オ ー ソ ロ グ遺 伝 子 両 方 を一 つ の グ こ とで, 生 命 シス テ ム の機 能 を見 い だ す こ とを 意 味 して ル ー プ に分 類 す る こ と が で き る. 相 同 遺 伝 子 を グル ー ピ い る. KEGGで ング し, 問 い合 わ せ 配 列 が どの グ ル ー プ の配 列 群 に最 も 定 し た 約290生 似 て い るか を調 べ る こ とで, 問 い合 わ せ 配 列 の機 能 ア ノ GENESデ テ ー シ ョ ンに も利 用 で き る. COGで Waterman は新 規 配 列 が ど の は2005年10月 現 在, 全 ゲ ノ ム 配 列 の 決 物 種 に 含 ま れ る 約100万 ア ル ゴ リ ズ ム に よ って 全 遺 伝 子 間 の 配 列 類 グ ル ー プ に 分 類 さ れ る か を 自 動 で 計 算 す る COGnitor 似 関 係 を あ らか じめ 計 算 し蓄 積 し たSSDBデ と い う プ ロ グ ラ ム を 開 発 し, 公 開 して い る. ス を 作 成 して い る. SSDBを COGnitor で は ア ミ ノ 酸 配 列 を 問 い 合 わ せ 配 列 に, COGデ の遺伝 子 が ー タ ベ ー ス と して 蓄 積 さ れ て お り, Smith- ー タベ ー もと にゲ ノム比較 を行 な ータ い, す で につ け られ て い る ア ノテ ー シ ョン情 報 や, 遺 伝 ベ ー ス との 配 列 比 較 を 行 な って お り, 類 似 配 列 の リス ト 子 の 並 び が 近 縁 の生 物 種 に お い て 保 存 され る と い う情 報 を 出力 す る と と もに 分 類 さ れ る相 同遺 伝 子 グ ル ー プ を予 を 用 い て, オ ー ソ ロ グ遺 伝 子 を グル ー ピ ン グ した もの が 32 化 学 と生 物 Vol. 44,

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22 610407487 ロ ペ ミ ッ ク 小 児 用 0. 0 5 % 2319001C1072 23 610412059 ゲ シ ン L 錠 5 0 m g 2478001G1046 24 610412105 ソ レ ル モ ン S R カ プ セ ル 3 7. 5 m g 1147002N1

22 610407487 ロ ペ ミ ッ ク 小 児 用 0. 0 5 % 2319001C1072 23 610412059 ゲ シ ン L 錠 5 0 m g 2478001G1046 24 610412105 ソ レ ル モ ン S R カ プ セ ル 3 7. 5 m g 1147002N1 お 知 ら せ ( 薬 ) 0 0 5 平 成 2 0 年 8 月 2 9 日 医 薬 品 マ ス タ ー の 改 定 に つ い て 今 般 下 記 の と お り 医 薬 品 マ ス タ ー を 改 定 し ま し た の で お 知 ら せ し ま す 記 次 の 医 薬 品 に つ い て は 平 成 2 0 年 3 月 5 日 付 け 厚 生 労 働 省 告 示 第 7 2 号 に 基 づ

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