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17. (1) 18. (1) 19. (1) 20. (1) 21. (1) (3) 22. (1) (3) 23. (1) (3) (1) (3) 25. (1) (3) 26. (1) 27. (1) (3) 28. (1) 29. (1) 2

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1 Q A 82% 89% 88% 82% 88% 82%

() 2

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Transcription:

53 inclusion body: 75 20 1 2 3 90 2000 CA 2001 CA

54 1 Refolding on Resin Dilution additive methods 2 1 2 3 4 1990

55 3 CA 4 5 6 17-1,4- CA CA 7 CA 20 DnaJ, DnaK, GroEL/ES 1 CA 2 CA 3 2 1 6M 2

56 4 1 2 CA 3. CA

57 2 3-1,4- CA CA -1,4- CD CD Gellman 8 TritonX-100 -CD 7 CitSyn 65 40 -CD 3 -CD 17 Cyclodextrin : CD CD6 CD7 CD8 CD CD CD CD9 CD10 CD14 CD26

58 CA : 17 CA 9 CA CA CTAB C16 C16, C18 26 CA SDS CA CA 10 CA 3 CitSyn 49,000/ B CAB 30,000 Zn 15,000 4

59 S-S 100 1 CitSyn 6 M 1 30 CA CD Tween40 Tween60 0.05 1 CA 0.6 100 CA 1 5

60 CA 100 45 CA; 22-45 CA 7 CA; CA 2 B CAB 16 CitSyn CTAB SB3-14 90 3 4 mm DTT 6 M 16 S-S CAB CTAB SB3-14 DL- CA S-S

61 CA 6 1 Lowry 25 30mg/ml 6 M A280 25 1 1 S-S 40mM DTT 2 4 Tween 40, Tween 60

62 8 l 25 l of 8M : 6M 0.3 l of 4M DTT 40 mm (, 1 8 l 560 l of ( 0.1% 2mM DL-cystine, 1 142 l of 3 % CA ( 0.6%, 1 (15,000rpm 5 min CTAB, SB3-14 0.05 0.12 0.1 0.15 70 1 CTAB SB3-14 S-S DL- S-S - :GSSG GSH 10 DL- GSH/GSSG DL- 3 3 CA 0.6 1 CA 0.6 CA

63 CA CA CA CA CA 1 2 3 4 80 CA 1 15,000rpm 5 CA 12 CA 1 SDS-PAGE

64 2 circular dichroism:cd BioRad BioBeads 1/5 2 90 CA 5,000 11 LDL human C-type lectin like oxidized low density lipoprotein receptor hlox-1 3 C 7 hlox-1 CA 90 8 CD CA 9 hlox-1 LDL LDL LDL LDL C 12,13

65 C 273 C C C 183 C C 142 C 139 73 60 34 1 N C-type lectin-like oxidized LDL receptor : hlox-1 3 S-S 3 2 : 40,000 : C-type lectin-like domain (CTLD) : 細胞外領域

66 1B 2B CA 1 2 CA CA 100

67 1 2 DL- S-S S-S 3 4 CA CA CA 2001 2001 11 Refolding CA

68 Kit 1 Marston,F.A.O. 1986, Biochem.J., 240, 1-12 2 Wetlaufer,D.B.and Xie,T 1995, Prot.Sci., 4, 1535-1543 3 D.Rozema, et al., J. Am. Chem. Soc., 117, 2373 1995 4 M.Yoshimoto. et al., J.Chromatogr.B, 743, 93 2000 5 Y.Akiyoshi, et al., Bioconjugate Chem., 10, 321 1999 6 R.Kuboi. et al., J.Chromatogr.B, 743, 215 2000 7 BioView, 41, 7 2002 8 D.Rozema, & S.H.Gellman., Biochemistry, 35, 15760 1996 9 T.Takaha, et al., J.Biol.Chem., 271, 2902 1996 10 S.Machida, et al., FEBS lett., 486, 131 2000 11 Q.Xie, et al., Protein Expression and Purification, 32, 68-74 2003 12 2003-304624 2003 13 S.Machida, et al., US patent 10-653687 2003