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1 N [ GLYCAN ANALYSIS SLUTINS ]

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3 [ GLYC AN ANALYSIS SLUTINS ] インタクトプロテイン解析のワークフロー 糖タンパク質 Intact mab Mass Check スタンダード LC 分析カラムにインジェクション UV 検出による LC 分析 QTof MS による質量分析 MassPREP 脱塩カートリッジ または ACQUITY UPLC BEH C4 300Å カラム MassPREP タンパク質ミックススタンダード ACQUITY UPLC システム Xevo G2-XS QTof SYNAPT G2-Si HDMS LC 分析カラムに インジェクション UV 検出による LC 分析 およびインタクト質量解析キット サブユニット解析のワークフロー 糖タンパク質 還元 オプション と IdeS 酵素消化 Intact mab Mass Check ACQUITY UPLC PrST BEH C 4 300Å カラム スタンダード Alliance HPLC または ACQUITY UPLC システム 糖ペプチドマッピングのワークフロー 糖タンパク質 還元 アルキル化 酵素消化 Intact mab Mass Check 糖ペプチド断片 糖鎖の無いペプチド断片 スタンダード LC 分析カラムに インジェクション UV 検出による LC 分析 ACQUITY UPLC システム 逆相カラムまたは ウォーターズ BEH Amideカラム 単糖組成解析のワークフロー 糖タンパク質 単糖類の遊離 酸加水分解 蛍光標識 LC 分析カラムに インジェクション ACQUITY UPLC BEH C18 130Å 1.7 µm mm カラム 3

4 +51 UNIFI MassLynx G0F/G0F G0F/G1F G1F/G1F, G0F/G2F G1F/G2F G2F/G2F m/z mass ESI-TF MS ESI-TF MS 0.24 Fc/2 +Glycans LC Fd QTof MS Xevo G2-XS QTof MS SYNAPT G2-Si HDMS MassLynx A min A 6 MS BPI B QTof MS Xevo G2-XS QTof SYNAPT G2-Si HDMS MassLynx UNIFI 4 UV 280 nm min N-acetylglucosamine (GlcNAc) 2. N-acetylgalactosamine (GalNAc) 3. Galactose (Gal) 4. Mannose (Man) 5. Glucose (Glc) 6. Fucose (Fuc) EU 20 2 LC Alliance HPLC ACQUITY UPLC Empower min

5 N 5

6 [ GLYCAN ANALYSIS SLUTINS ] GlycoWorks Rapi Fluor-MS N-Glycan N Rapi Fluor-MS MS N / 6

7 [ GLYC AN ANALYSIS SLUTINS ] 特長 糖タンパク質 糖タンパク質遊離 N 型糖鎖解析は多くの情報が得られる手法ですが その サンプル調製手順は複雑です PNGase F により糖鎖を切り出した後 効果的な分離と検出を行うには標識が不可欠です ウォーターズの新し いプロトコールは 下記のような幅広いワークフローに利用できます 糖鎖の同定 糖鎖の構造解析 糖鎖のモニタリング 遊離標識N 型糖鎖 糖タンパク質 Intact mab Mass Check N 型糖鎖 の切り出し 糖鎖標識 GlycoWorks Rapid PNGase F と GlycoWorks Rapi Fluor-MS に バッファー および Rapi Gest SF 試薬 スタンダード よる標識 LC 分析カラムに インジェクション 標識糖鎖の精製 Glycan BEH Amide カラム Glycan Performance Testスタンダード GlycoWorks HILIC µelution プレート またはカートリッジ デキストランキャリブレーションラダー 蛍光検出による LC 分析 特性解析または質量確認 Alliance HPLC または ACQUITY UPLC システム ACQUITY QDa MS 検出器 Xevo G2-XS QTof MS SYNAPT G2-Si HDMS 蛍光 FLR EU 1.2E+6 0.0E min 0.0E+0 結果 MS データ処理 Intensity 1.2E+6 UNIFI MassLynx Empower ソフトウェア min 糖鎖解析 モニタリング および特性解析に新しい可能性をもたらす 新規 GlycoWorks Rapi Fluor-MS 試薬の背景となるサイエンスをご紹介します 弊社のビデオ waters.com / SeeT hescience をご覧ください 7

8 [ GLYC AN ANALYSIS SLUTINS ] 糖タンパク質 N 型糖鎖サンプルの調製をスピーディーでシンプルにできたら 標識された N 型糖鎖サンプルを簡単かつ短時間で調製 エラーとサンプルロスが低減 皆様のラボにおける分析と他のラボとの間で容易にメソッド 移管可能 3 ステップで 30 分 糖タンパク質 Intact mab Mass Check N 型糖鎖の切り出し 糖鎖標識 標識糖鎖の精製 GlycoWorks Rapid PNGase F と バッファー Rapi Gest SF 試薬 GlycoWorks Rapi Fluor-MS GlycoWorks HILIC µelution プレート による標識 またはカートリッジ スタンダード ステップ 1 15 分 未満 RapiFluor-MS N-Glycan キットの ショートデモビデオ 2 分間 をご覧ください 8 ステップ 2 ステップ 3 5分 10 分

9 [ GLYCAN ANALYSIS SLUTINS ] MS MS N Rapi Fluor-MS MS BPI Glycan NH NH N NH N AB NH 2 Glycan NH NH 2-AB Glycan NH NH 2 N NH Glycan NH % RapiFluor-MS 2X 52.5 AB 14X * 2-AB * RapiFluor-MS 1000X 160X AB AB 3X 30.0* * 2-AB 14 MS MS 1,000 * 9

10 [ GLYCAN ANALYSIS SLUTINS ] MS MS N 1.2E+6 FLR Intensity EU 0.0E min 1.2E+6 MS 0.0E min RapiFluor-MS ACQUITY QDa MS MS

11 [ GLYCAN ANALYSIS SLUTINS ] GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glycan 96 GlycoWorks GlycoWorks GlycoWorks GlycoWorks ACQUITY UPLC Glycan BEH Amide 1.7 µm mm GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glycan 96 GlycoWorks GlycoWorks GlycoWorks GlycoWorks RapiFluor-MS 50 µg/ RapiFluor-MS Glycan Performance Test 400 pmol/ GlycoWorks Rapi Fluor-MS N-Glycan Rapi Fluor-MS N-Glycan ACQUITY QDa MS :00am - 17:15pm WEB waters.com/glycans 11

12 [ GLYCAN ANALYSIS SLUTINS ] Rapi Fluor-MS Rapi Fluor-MS 5 Rapi Fluor-MS N NH N MS N NHS NH MS GlycoWorks RapiFluor-MS Rapi Fluor-MS Xevo G2-XS QTof SYNAPT G2-Si HDMS MS MS/MS UPLC FLR Xevo G2-XS QTof , 2+ 1: TF MSES+ FA2G2Ga1BPI 6.93e6 2-AB 10 µg 1.5 RapiFluor-MS 0.1 µg min 1: TF MSES+ BPI 6.93e m/z 2-AB N RapiFluor-MS N LC-MS ESI+MS RapiFluor-MS 100 MS 12

13 [ GLYCAN ANALYSIS SLUTINS ] Rapi Fluor-MS ACQUITY QDa MS MS Empower 3 GMP UPLC ACQUITY QDa ACQUITY UPLC H-Class Bio 480 FLR EU min 3.2x10 6 MS Intensity 1.6x min ACQUITY UPLC H-Class Bio ACQUITY QDa MS RapiFluor-MS N 13

14 Australia Austria Belgium and Luxembourg Brazil Canada China Czech Republic Denmark Finland France Germany Hong Kong Hungary India Ireland Israel Italy Japan Korea Mexico The Netherlands Norway Poland Portugal Puerto Rico Russia/CIS / Singapore Spain Sweden Switzerland Taiwan UAE UK US TEL FAX F TEL FAX Waters The Science of What's Possible ACQUITY UPLC UPLC Alliance ACQUITY QDa UNIFI SYNAPT Empower Xevo MassPREP MassLynx Waters Corporation RapiFluor-MS GlycoWorks RapiGest Waters Corporation 2015 Waters Corporation. Printed in Japan JA 04A A JISQ9001:2008(IS9001:2008) JMAQA

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