6:180 血 液 図2 Neocarzinostatin投 c:60分 後,d:120分 後.白 後,b:30分 の そ の 他 の 目 的 で,現 在,最 各種 の抗 白血 病 剤 の 白血 病 細 胞 に お よ ぼす 影 響 る 実 験 白 血 病 で あ る, を経 時 的 か つ 表 面

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2 6:180 血 液 図2 Neocarzinostatin投 c:60分 後,d:120分 後.白 後,b:30分 の そ の 他 の 目 的 で,現 在,最 各種 の抗 白血 病 剤 の 白血 病 細 胞 に お よ ぼす 影 響 る 実 験 白 血 病 で あ る, を経 時 的 か つ 表 面 形 態 学 的 に 観 察 し,比 較 検 討 2.走 白 血 病 剤 の 種 類 に よ りお の お の 異 っ た 特 徴 あ る 変 化 が み られ る と い う興 味 あ る 知 見 を え た の で 報 告 す る. 1.白 査 電顕的観 察のため の試料作 成 7.2)で し,日 をBDF1マ 移 植 後6日 目 の,腹 L1210白 ウ ス 白血 病 細 胞 を な わ ち,L1210マ 1 106個 処 理 し たcover glassにl1210細 ウ ス白血 病 細胞 胞 固 定 し, セ トンか ら無 水 ア セ トン ま で の 上 昇 ア 立HCP-1臨 acetateに 置換 界 点 乾 燥 装 置 で 乾 燥 し, Gold-palladiumを 蒸 着 後,JSM-U3型 走 査 電 子 顕 微 鏡 で 観 察 し た. ウ ス腹 腔 内 に 移 植 し, II.成 水 の 充 分 貯 溜 した マ ウ ス に, 血 病 に 対 す る 抗 白 血 病 剤 のoptimal 1.抗 dose(ncso.25mg/kg,dvi1mg/kg,vcr 1mg/kg,CA20mg/kg)を 血 病 細 胞 は,直 腹 腔 内 に 投 与 し, ん ど な く,表 径6 10の の 多 数 のmicrovilliが 形 態 で あ っ た(図1-a,b). ウ ス白血 病 は 腹 水 型 で継 代 され る リン パ 性 白 血 病 で あ り,抗 癌 剤 の ス ク リー ニ ン グ, -6- 球形 で凹 凸 はほ と 面 に 長 さ0.1 1μ,幅 μ に,経 時 的 に 採 取 し た 腹 水 細 胞 を 用 い た. 績 白 血 病 剤 投 与 前 の 無 処 置 のL1210白 投 与 前 お よ び 投 与 後5分,30分,60分,120分 L1210マ 液(PH セ トン 系 列 で 脱 水 後,Isoamyl 血病細胞 用 い た.す も広 く使 用 さ れ て い を の せ,1.2%glutaraldehydeで30分 料 お よび 方 法 材 料 と し て は,L1210マ 後 Poly-L-Lysine30μg/ml加PBS溶 50%ア 1.材 第3号 線:1μ, istille(vcr),cytosine訂abinoside(ca)等 し た と こ ろ,抗 と 脈 管 第6巻 認 め ら れ,ほ ぼ均一 の 2.Neocarzinostatin投 NCSに 胞 表 面 の 窪 み と,か よ る 変 化 は,細

3 Blood&Vessel 図3 6:181 Daunomycin投 d:120分 後.白 か る変 化 がNCS投 線:1μ. 与 後 か な り早 期 に 出 現 す る こ とが 特 徴 的 で あ っ た.す 5分 後 で,す な わ ち,NCS投 与 で に大 多 数 の細 胞 の歪 み,陥 凹, の細 胞 に は 表 面 に 円形 の窪 み が み られ た.ま た 膨 化 した と老 え られ る巨 大 な 細 胞 の 出現 が 認 め 後 に は 細 胞 膜 の 円形 の 窪 み が よ り明 瞭 とな り,巨 大 な 細胞 も増 加 した (図2-c)-120分 後 に は,ほ 後, 30分 後 で は5分 後 と ほ ぼ 同 様 で あ っ た(図3-b). 60分 後 で は,約 半 数 の 細 胞 に(図3-c),120分 べ て の 細 胞 に 著 明 な 変 化 が み られ た (図3-d). 30分 後 に は紙 風 船 が しぼ ん だ よ うに な り,1部 られ た(図2-b).60分 後,c:60分 5分 後 で す で に 少 数 の 細 胞 に 認 め ら れ(図3-a), 後 で は,す 突 出 等 の 明 瞭 な形 態 変 化 が み られ た(図2-a) 後,b:30分 とん どす べ て の細 4.Vincristine投 与 後 の変化 5分 後 で は 少 数 の 細 胞 表 而 よ り瘤 状 突 出 が み ら れ た り,表 面 の 小 隆 起 や 陥 凹 が 認 め ら れ た (図4-a).30分 後 に は細胞 内容 が 出 て きた よ うな 大 き な 突 起 を も つ 手 鏡 状 の 細 胞 や,表 胞 に か か る変 化 が 出 現 し,microvilhは ほ とん 腫 瘤 状 小 隆 起 の 数 も増 加 し た(図4-b).60 どみ られ ず,多 数 の 小 孔 が観 察 され,軽 石の表 120分 面 を み る が ご と くで あ った.cytolysisを 起し て い る 細 胞 も多 くみ られ た.比 較 的 変 形 の 少 な い 細 胞 で も,表 面 の 大 小 の 窪 み の た め に,あ た か も月 の 表 面 を思 わ せ る もの で あ った(図2-d). 3.Daunomycin投 た か もブ ドウ房 状 を呈 す る極 め て特 異 な 変 化 が 観 察 さ れ た.か か る変 化 はDM投 与 -7- の よ うな 細 胞 は 増 加 して く る が 高 頻 度 に は み られ ず,変 化 のな い細 胞 の方 が 多 か っ た. 5.Cytosine arabilloside投 30分 後 ま で は 薬 剤 に よ る 影 響 は 全 く認 め られ ず(図4-e),60分 細 胞 表 面 よ り腫 瘤 状 突 起 や,瘤 状 の 小 隆 起 が み られ,あ 後 に は,こ 面 の 後 に は 変 形,凹 凸 の あ る細胞 が わ ず か に認 め られ る程 度 で あ り,120分 後に は 腫 瘤 状 突 出 や 表 面 の 陥 凹 の あ る 細 胞 が み られ た りす る が(図4-d),こ の よ うな 変 化 を受 け

4 6 血 液 :182 図4 と 脈 管 第6巻 上 段:Vincristine投 後b:30分 下 段:Cytosine arabinoside投 血 病 細 胞 の 経 時 的 変 化c:5分 d:120分 後.白 線;1μ. た 細 胞 は 少 数 し か み ら れ な か っ た. な く,む し ろ,microvilliは 数 の 円 形 の 窪 み が で き,あ III.考 L1210白 案 と く で あ っ た,中 血 病 細 胞 に お よぼ す 抗 白血 病 剤 の 影 響 を 走 査 電 顕 で 観 察 し比 較 検 討 し た 結 果, NCSは 作 用 の 発 現 が 早 く,し actionと た.DMに よ る作 用 の 発 現 も早 く,2時 に はtotal 思 え る変化 が 認 め られ cell killin9の の 薬 剤 はcycle 状 態 で あ り,こ phase non-specificで と を 示 して い る.VCRお よ びCAで ま た,従 来,下 胞 に お け るcytocydal れ ら 抗 癌 剤 を,細 あ る こ は,時 くらべ て非 depen- 間 後 の 形 態 変 化 で 特 徴 的 な の は,DM actionの は 特 に 目立 っ た 瘤 状 突 出 は -8- 様 式 に よ って の うち作 用 明 な もの を 時 間 接 触 の 場 合 は殺 細 胞 作 用 は わず る 濃 度 以 上 で はtime な 作 用 を 示 すII型 dependent に 分 類 し,NCSはIa型,,VCR,CAはII型 報 告 して い る が,か か る 分 類 は,私 に お け る こ れ ら の 薬 剤 のL1210細 で は 表 面 よ り大 小 多 数 の 腫 瘤 状 突 起 が 現 れ る の に 反 して,NCSで vitroのl1210細 濃 度 差 の ほ と ん ど な い も の をIa,著 DMはIb型 あ る こ と が 表 面 形 態 的 に も判 別 で き た. 査電 関 係 な く殺 細 胞 作 用 を 示 すI型(そ か で あ り,あ ま た2時 胞 膜 面 への 胞 と の接 触 時 間 の 長 短 に ほ とん ど Ib)と,短 dentで 山 ら5)がin 間後 間 以 内 で は 全 体 と して は変 specificでtime 作用 機序の 顕 に よ る 観 察 結 果 で も そ の 可 能 性 が 示 唆 さ れ た. 数 は 増 加 し た が2時 常 に 少 な く,Sphase 面 に多 た か も軽 石 を み る こ 成 阻 害 の 他 に,細 間 の経 過 と と もに薬 剤 に よ る変 化 を受 け た細 胞 化 の み ら れ る 細 胞 はNCS,DMに 消 失 し,膜 直 接 作 用 の あ る こ と を 報 告 し て い る が,走 か も多数 の 細胞 にcytotoxic 後 後, 村 ら4)はNCSの 1つ にDNA合 第3号 に属 す る と 達 のin す 経 時 的 形 態 変 化 の観 察 結 果 と も符 合 し て 興 味 深 い. vivo 胞 に お よぼ,極 め

5 preparing specimens for the electron microscopy. Trans. N. Y. Acad. Sci., 13: 130 `134, ) Anderson, T. F.: Techniques for the preservation of three-dimensional structure in 2) Polliack, A., Lampen, N. and deharven, E. Comparison of air drying and critical point drying procedure for the study of human blood cells by scanning electron microscopy. In "Scanning electron microscopy/1973" IIT Research Institute, Chicago USA p. 529 ` ) Hiraki, K., Kamimura, 4., Takahashi, I., Nagao, T., Kitajima, K. and Irino, S.: Neocarzinostatin, une approche nouvelle dans la chimiotherapie des leucemies aigues. Nouv. Rev. fr. d'hemat. 13:445 `451,1973.

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