腹腔鏡下付属器切除術1ヵ月後に              発生した尿管搊傷の1例

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1 医学部合同新技術説明会 よりクオリテゖの高い凍結用デバスの開発ー卵巣組織 ips 細胞 ES 細胞への応用 鈴木直聖マリゕンナ医科大学産婦人科学

2 妊孕性 卵巣 卵巣機能 原始卵胞一次卵胞二次卵胞初期胞状卵胞 (0.3-1 mm) 胞状卵胞 ( 1 mm)

3 妊孕性 卵巣 卵巣機能 原始卵胞一次卵胞二次卵胞初期胞状卵胞 (0.3-1 mm) 胞状卵胞 ( 1 mm) 卵巣皮質凍結

4 若年がん患者の生存率と罹患率 近年 集学的治療の進歩により若年がん患者の生存率は目覚しく向上している 15 歳から 19 歳までの若年がん患者の罹患率は増加傾向を示している 米国の NCI:SEER データ

5 化学療法誘発性無月経 化学療法誘発性無月経とは 治療開始から 1 年以内に生じる 3 ヶ月以上の無月経 と定義され 稀発月経や無月経また無排卵症を呈しその発症頻度 は % である (Bines J et al. JCO 1996) その発生頻度は患者 1 年齢 2 抗がん剤の種類 3 抗がん剤の投与量に依存すると考えられている

6 抗がん剤による卵巣毒性 High Risk Intermediate Risk Low/ no Risk Unknown Risk アルキル化剤 シクロホスフゔミド メルフゔラン プロカルバジンニトロソウレゕホスフゔミドブスルフゔン 抗生物質 ドキソルビシン ゕクチノマシン -D マトマシン -C ブレオマシン 白金製剤 シスプラチン カルボプラチン 代謝 メソトレキセレートフルオロウラシル ジェムシタビン ビンカアルカロイド エトポシド ビンクリスチン パクリタキセル ドセタキセルリノテカン Imai A et al: Reproductive Medicine and Biology 2008:7

7 化学療法誘発性無月経と QOL 抗癌剤などを用いた治療によって病状が安定した後の若年女性がん患者において治療によって引き起こされる卵巣機能の廃絶が問題!! 妊孕性の消失 閉経の早期発来 更年期障害 骨粗鬆症 女性としての QOL 低下!!

8 がんと生殖医療 若年女性がん患者は 1 がんによる将来の恐怖のみならず 2 若年だからこそ 妊孕性消失 に関する将来の不安も抱えることとなる 腫瘍医と生殖医がまずはがん医療と生殖医療に対する認識を深め その概念を啓発し 精神的サポートも行うことができる医療システムの構築が必要である しかし 何よりも原疾患に対する的確な対処が重要であり 優先すべきは がん医療 であることを忘れてはならない!

9 がん 生殖医療科学 (Oncofertility) がん 生殖科学 (Oncofertility) 造語 :Oncology( 腫瘍学 )+Fertility( 妊孕性 ) 2006 年に Woodruff らが初めて提唱した概念がん 生殖医療 (Oncofertility Treatment) 聖マリゕンナ医科大学生殖医療センター 2010 年 1 月 Dept. of OB and Gyn. St.Marianna Univ. School of Medicine.

10 聖マリゕンナ医科大学におけるがん 生殖医療 Dept. of OB and Gyn. St.Marianna Univ. School of Medicine. がん 生殖医療 (OncofertilityTreatment) 聖マリゕンナ医科大学生殖医療センター 診療内容 : 1 がん治療による医源性の不妊患者における妊孕性温存 2 がんが合併している患者に対する不妊治療の 2 本柱

11 ヒトにおける卵巣組織凍結と自家移植の現状 2004 年にDonnezらは 25 歳のホジキン病患者 (IV 期 ) から 化学療法施行前に腹腔鏡下に左卵巣から一部皮質を摘出し凍結保存し 初回治療から6 年経過した完全寛解後 融解された卵巣組織を卵巣の血管近傍の腹膜と右卵管采近傍の腹膜に自家移植した [Donnez J et al: Human Reprod Update 2006] 移植後約半年で採血上排卵を有するホルモン動態を示すようになり 移植 11ヶ月後に自然妊娠が成立しヒトで初めて生児獲得に成功した 同所性自家移植

12 ヒトにおける卵巣組織凍結と自家移植の現状 現在 欧州を中心に卵巣組織凍結 ( 緩慢凍結法 ) 自家移植が行われており 本技 術によって 14 名の生児が得られている 欧州においては卵巣組織凍結 ( 緩慢凍結法 ) 自家移植は新しい技術ではあるが 既に臨床応用されるべき一般的な技術の一つであると認識されている しかし 本技術による生児獲得率の向上に向けて解決すべきあるいは改良 すべき問題は依然山積している

13 生児獲得率向上に向けた改良すべき問題点 1) 適応疾患 ( 癌細胞の再移入の問題 ) 2) 移植部位 ( 同所性 vs 異所性 ) 3) 組織片の大きさ ( 卵巣組織細切片 vs 卵巣全体 ) 4) 凍結方法 ( 緩慢 vsガラス化 )

14 凍結保存方法 細胞を構成する分子の熱エネルギーを奪い 運動エネルギーを限りなくゼロにすることにより 細胞の時間を停止できる 一方で細胞を氷点下に曝すことは細胞内外に氷晶形成を促し 細胞膜 細胞内小器官を物理的に破壊し 細胞を死滅させる この場合 細胞の停止した時計は再び時を刻むことはない この止まった時計に再び時を刻ませるためには細胞内外での氷晶形成による障害を防ぐ必要がある 氷晶形成には細胞内外の自由水が関与しており これを阻害する化学物質が耐凍剤として使用されるようになった 耐凍剤は細胞膜を透過し 水分子と置換される細胞膜透過型耐凍剤と 細胞膜を透過できず細胞外に存在する細胞膜非透過型の耐凍剤とに大別される さらに この細胞膜非透過型の耐凍剤は細胞外の浸透圧を上昇させ 細胞内自由水の細胞外への移行 ( 脱水 ) を促進する比較的分子量の小さな単糖類 二糖類と高分子物質とに分類されている

15 卵巣組織凍結法 現在 標準的な卵巣組織凍結方法は 緩慢凍結法となっており 14 名の生児が得られている (Donnez J, Dolmans MM. Preservation of fertility in females with haematological malignancy. British J of Haematol 154: , 2011 ) 問題点 : コストが高い 機械を置くスペースが必要 操作が煩雑である 20ºC 0ºC -20ºC -40ºC 0.3 degree/min 新たな凍結方法 ガラス化法 細胞外液が氷結しない急速 ( ガラス化 ) 凍結の場合は 細胞透過性耐凍剤の割合を大幅に増やし 水あたりの細胞膜透過型耐凍剤の浸透圧が高くなる 耐凍剤を組み合わせて 細胞内外の氷晶形成を防ぎ 細胞への物理低障害を回避する 一方で 高濃度の耐凍剤への暴露による化学的障害の軽減も考慮する必要がある

16 ガラス化法の特徴 Hovatta World Congress on Fertility Preservation 2009 in Belgium 有利な点 不利な点 # 間質と血管へのダメージが少ない # これまでに 生児獲得の報告がない # 短時間 # 技術習得に時間がかかる # 特別な器械を必要としない # 耐凍剤の濃度や浸透圧 # 臨床応用可能である # 技術の迅速性が問われる # 卵の優れた成長が期待できる # 未熟な技術によって組織への毒性が増す

17 カニクイザルを用いた卵巣組織凍結保存および異所性自家移植に関する研究 卵巣組織の大きさ 1 x 1 x 1mm 10 x 10 x 1-2mm ストロー クラオトップ クラオサポート

18 超急速ガラス化凍結法 急速ガラス化凍結法 緩慢凍結法により凍結した卵巣組織内の前胞状卵胞の形態の比較 1. 超急速ガラス化凍結法 5.64 M Ethylene glycol + 5% (w/v) PVP M sucrose 液体窒素 2. 急速ガラス化凍結法 卵巣組織片 5.64 M Ethylene glycol + 5% (w/v) PVP M sucrose 液体窒素 卵巣組織片 ( 約 1 mm 3 ) 3. 緩慢凍結法 1.5 M PrOH and 0.1 M sucrose 20ºC 0ºC -20ºC -40ºC 1 degree/min 0.3 degree/min Seeding -7 C

19 凍結用デバス : クラオサポート IVF なんばクリニック ( 森本義晴医師 橋本周博士 ) との共同開発 本デバイスの改良版について特許出願

20 結果 1. 緩慢凍結法や急速ガラス化凍結法の場合に比べ 超急速ガラス化凍結法により凍結された卵胞の形態は良好であった 2. ホルモン周期の回復は移植後 3 カ月程度で観察され 造影 CT による画像検査の結果に異所性移植卵巣組織への新たな血管の分布と新生血管の供給動脈が確認された 3. 異所性移植卵巣組織から 受精 発生能力のある卵子が回収できた 本成果によって 両側卵巣摘出後の患者への卵巣組織凍結 自家移植に対する臨床応用の可能性が期待される

21 基礎から臨床へ 聖マリゕンナ医科大学倫理委員会によって臨床試験 若年女性がんおよび免疫疾患患者の QOL 向上を志向した卵巣組織凍結ならびに自家移植 が承認された (2010 年 1 月 ) 2010 年臨床応用を開始している ( 日本初 ) IVF なんばクリニックとの共同臨床研究

22 ヒト卵巣組織凍結 自家移植の適応 年齢 : 上限が 35 歳 ( から 38 歳 ) 癌疾患 : ホジキンリンパ腫 肉腫 乳癌 卵巣毒性を呈する治療 : 外部放射線骨盤照射 >5-10Gy 造血幹細胞移植 シクロフォスフゔミドなどのゕルキル化剤を含む化学療法 なお対象は 130% 以上の確率で卵巣毒性が引き起こされる治療の場合 2 再度卵巣組織移植によって妊娠が期待される場合 3 卵巣組織移植による癌細胞の再移入の可能性が非常に少ない場合に限る また 他の全ての症例に対しては 1 過排卵刺激 2 未受精卵あるいは受精卵の凍結 3GnRH ゕナログによる卵巣保護 4 外科的処置などの妊孕性温存に関する他の技術の施行を検討する von Wolf M ら E J Cancer 2009

23 本技術に関する知的財産権 発明の名称 : 生体試料を凍結保存するための凍結保存用具出願番号 : 特願 出願人 : 聖マリゕンナ医科大学他 (1 医療法人 ) 発明者 : 鈴木直石塚文平他 (2 名 )

24 お問い合わせ先 Dept. of OB and Gyn. St.Marianna Univ. School of Medicine. MPO 株式会社 ( 聖マリゕンナ医科大学指定 TLO) TEL: FAX: info@mpoinc.co.jp URL: 担当者 : 聖マリゕンナ医科大学産学官連携コーデゖネーター天野徹也 MPO 株式会社代表取締役社長木苗貴秀 知財事業部 熊谷春乃

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