115 EntryNo. 44 Clostridium difficile の培養検査からみえてきた当院の現状と今後の課題金澤雄大 1) 佐藤真喜 1) 村山久恵 1) 中村尚子 1) 鎌田恵理子 1) 奥田千晶 1) 秋山怜美 1) 堀内弘子 1) 八戸市立市民病院 1) 目的 Clostrid

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たみえほがり
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1 115 EntryNo. 44 Clostridium difficile の培養検査からみえてきた当院の現状と今後の課題金澤雄大 1) 佐藤真喜 1) 村山久恵 1) 中村尚子 1) 鎌田恵理子 1) 奥田千晶 1) 秋山怜美 1) 堀内弘子 1) 八戸市立市民病院 1) 目的 Clostridium difficile は C. difficile 感染症 (CDI) の起炎菌であり院内感染の原因菌でもあるしかし現在市販されている迅速診断キットは toxin の検出感度が低く抗原である Glutamate dehydrogenase(gdh) のみ陽性の場合の解釈が難しい今回 GDH のみ陽性の場合に培養検査を追加し菌株から toxin を再検査することの有用性と調査から見えた当院の課題について検証した対象方法対象は 2015 年 1 月から 2016 年 5 月までに CDI を疑い提出された糞便 536 検体 GDH と toxin の検出には C. DIFF QUIK CHEK コンプリート ( アリーアメディカル ) 分離培養には CCFA 培地 ( 日本 BD) を使用した検体で toxin 陽性 (Ⅰ 群 ) 検体で GDH のみ陽性のうち菌株で toxin 陽性 (Ⅱ 群 ) 菌株で toxin 陰性 (Ⅲ 群 ) の 3 群に分け該当患者の治療内容から評価を行った結果総検体数 536 検体のうちⅠ 群 47 件 GDH のみ陽性だった 54 件を培養したところ 43 検体で C. difficile の発育を認めた菌株で toxin を再検査するとⅡ 群 15 件 Ⅲ 群 28 件であったそれぞれの群で治療を行ったのは Ⅰ 群 42 人 (89.4%) Ⅱ 群 6 人 (40%) Ⅲ 群 11 人 (39.3%) であった治療期間の中央値はⅠ 群 12 日間 Ⅱ 群とⅢ 群は 10 日間であった ( 治療中の転院死亡症例は除いた ) 考察 GDH のみ陽性検体の C. difficile 培養後の toxin 陽性率は 27.8% で他報告 (39.4%~82.2%) と比較して低かった Ⅰ 群とⅡ Ⅲ 群では治療を行った割合に差が認められたが Ⅲ 群でも約 4 割が治療を行っていたまた当院の傾向として toxin 産生の有無に関わらず臨床症状から CDI として治療している症例も多く toxin 陰性が治療中止の根拠となるのか不明であった今後菌株での toxin 再検査の結果を臨床に還元しその効果について検討していきたいさらに今回の調査で検査の適応とならない症例 ( 治療効果判定 ) や長期入院にも関わらず便培養が同時に提出されている症例も散見された糞便検体が提出された際には細菌検査室でもアセスメントを行い検査の適応に関して医師とディスカッションする必要性があると思われた連絡先 : ( 内線 2430) 116 EntryNo. 98 溶血性尿毒症症候群を発症した腸管出血性大腸菌感染症の一症例溶血性尿毒素症候群を発症した腸管出血性大腸菌感染症の一症例石井幸恵 1) 安藤昭子 2) 村山由美子 3) 飯塚麻里 1) JA 新潟厚生連長岡中央綜合病院 1) JA 新潟厚生連豊栄病院 2) JA 新潟厚生連三条総合病院 3) はじめに腸管出血性大腸菌感染症はベロ毒素を産生する腸管出血性大腸菌 ( 以下 EHEC) の感染によって起こる全身疾病である重症例においてはベロ毒素の作用により溶血性貧血急性腎不全をきたし溶血性尿毒症症候群 ( 以下 HUS) を引き起こすことがある今回 HUS を発症した EHEC 感染症を経験したので報告する症例患者は 78 歳女性 2014 年 8 月 19 日腹痛嘔吐血便を認め 22 日に近医を受診腹部レントゲンを施行するも異常なし点滴にて改善したため LVFX を処方され帰宅 23 日症状が再燃したため当院 ER を紹介受診感染性腸炎の疑いで入院となった入院時検査所見 WBC:18,200/µl RBC:556 万 /µl Hb:16.8g/dl PLT:17.9 万 /µl CRP:5.18mg /dl 細菌学的検査入院時に血性水様便入院 4 日目に緑色水様便の便培養が提出されたが 35 2 日培養ではいずれの検体も大腸菌の発育は認めなかった入院 3 日目に主治医より EHEC による HUS 疑いの連絡を受けたため入院時提出の便検体にて大腸菌 O-157 抗原検査 ( キャピリア O157) を行い陽性となった引き続き外注検査にて便検体によるベロ毒素迅速検査 ( オーソ VT1/VT2) を依頼し入院時提出の便検体で陽性となったまとめ EHEC 感染症は 3 類感染症として全数届出が義務付けられている確定診断には検体から大腸菌を分離し分離株のベロ毒素産生性の確認または VT 毒素遺伝子の検出が必要であるしかし溶血性尿毒素症候群 (HUS) 症例に限っては菌が分離されない場合においても便中のベロ毒素検出または患者血清中の抗大腸菌抗体の検出によって診断し届出が必要である本症例では EHEC 感染症から HUS を続発したため大腸菌を分離できなかったが迅速診断キットにて O-157 抗原およびベロ毒素の検出によって EHEC 感染症の診断が確定した病原性大腸菌による感染が強く疑われる場合は培養検査と並行して迅速キットの活用や便検体からの毒素の検出も考慮することで早期診断や早期治療開始に貢献できると考えられる連絡先 ( 内線 3883)

2 117 EntryNo. 40 短期間に経験した G 群溶血性連鎖球菌による壊死性筋膜炎の 2 例山本絢子 1) 郷裕昭 1) 齋藤芳弘 1) 新潟県立中央病院臨床検査科 1) はじめに壊死性筋膜炎は急激な経過を辿り死亡率も高い感染症であり早期診断治療を要する β 溶血性連鎖球菌による壊死性筋膜炎は主に A 群溶連菌 ( 以下 GAS) が起炎菌として知られている今回短期間に G 群溶連菌による壊死性筋膜炎を 2 例経験したので報告する症例 1 91 歳男性慢性心不全完全房室ブロックなどの既往歴あり 2015 年 9 月 10 日夜から発熱右手背の疼痛があり SPO2 低下に伴い 9 月 11 日深夜に当院へ救急搬送された来院時より右手背の皮下出血斑と前腕にかけての腫脹があり精査中に血圧の低下と右前腕の腫脹の急速な悪化を認めた同日夕方に入院時提出の血液培養が陽性になり G 群溶連菌が分離されたことからデブリードマン目的に緊急手術が行われたその後 PCG CLDM 投与による治療が続けられ第 64 病日目に軽快退院となった症例 2 83 歳女性慢性心不全高血圧の既往歴あり以前より左下肢に浮腫を認めていたが 2015 年 9 月頃より悪化していた 10 月 30 日に転倒その後から左下肢に水疱が出現自宅で様子を見ていたが 11 月 2 日当院受診した左足部から大腿近位にかけて後面以外に水疱形成があり壊死性筋膜炎が疑われ水疱内容液と血液培養 2 セットが提出された水疱内容液のグラム染色にて連鎖球菌を認めたためストレプト LA 生研 ( デンカ生研 ) を使用して水疱内容液から直接ラテックス凝集反応を実施し G 群溶連菌と報告した緊急手術にて左大腿の切断が行われ PCG CLDM 投与による治療が続けられたが多臓器不全循環不全となり翌日永眠されたまた血液培養からは菌は検出されなかったまとめ 2 症例とも精査の結果 Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis( 以下 SDSE) と同定された SDSE は特に高齢者に対して GAS と同様な感染症を引き起こすことが知られており近年注目されている菌である今回の 2 症例から壊死性筋膜炎が疑われる場合は臨床側と連携をとりつつグラム染色形態などから迅速に起炎菌を推定し報告する必要があると改めて感じた連絡先 ( 内線 2566) 118 EntryNo. 35 自動遺伝子検査装置 TRCReady-80 を用いたノロウイルス検出能の性能評価佐藤勇樹 1) 品川雅明 1) 韮澤慎也 1) 八鍬佑貴 1) 佐伯理知 1) 東恭悟 2) 淺沼康一 1) 高橋聡 1) 札幌医科大学附属病院検査部 1) 札幌医科大学附属病院病理部 2) はじめにノロウイルスは感染力が強く少量のウイルスでも感染が成立するため迅速かつ高感度に検出する検査体制の構築が望まれる高感度な検査法として厚生労働省が推奨するリアルタイム RT-PCR 法があるが操作が繁雑であり結果を得るまでに約 4 時間を要する問題点があるまたノロウイルス抗原キットは操作が簡便かつ迅速性に優れている反面十分な感度を有していないことが指摘されている近年これらの問題点を克服するため TRC Ready ノロウイルス (TRC 法 : 東ソー ) が開発された本検査法は核酸の抽出増幅検出までを自動化した遺伝子解析装置を利用するため操作が簡便でありさらに測定時間も約 50 分と迅速性に優れているそこで今回我々は TRC 法によるノロウイルスの検出能について評価した対象ノロウイルス感染疑い患者の便 60 検体とした方法 TRC 法による検出は自動遺伝子検査装置 TRC Ready-80 を用いた比較対照のリアルタイム RT-PCR 法は TaKaRa qpcr Norovirus (GⅠ/GⅡ) Typing Kit ( タカラバイオ ) と LightCycler Nano システム ( ロシュダイアグノスティックス ) を用い測定したさらに陽性を示した検体は遺伝子型解析を行い Genotype を決定した結果リアルタイム RT-PCR 法では 60 件中 GenogroupⅠが 4 件 GenogroupⅡが 20 件 GⅠ GⅡの混合感染が 1 件の計 25 件が陽性を示しウイルス量は copies/μl であったまた遺伝子型は GenogroupⅠは GⅠ.1 (1 件 ) GⅠ.2 (2 件 ) GⅠ.3 (2 件 ) GenogroupⅡは GⅡ.2 (1 件 ) GⅡ.4 (6 件 ) GⅡ.13 (2 件 ) GⅡ.17 (12 件 ) であった一方 TRC 法では 24 件が陽性を示しリアルタイム RT-PCR 法との陽性一致率は 96.0% であった TRC 法で偽陰性であった検体は GⅠ.2 で copies /μl とウイルス量が極めて少ない検体であった結語 TRC Ready ノロウイルスの検出能はリアルタイム RT-PCR とほぼ同等であり測定時間も短く操作も簡便であるため日常検査に有用と考えられた連絡先内線 3645

3 119 EntryNo. 77 新設病院における緊急輸血の体制の構築と日当直者への輸血指導小林徹 1) 加藤瑞希 1) 柴田真由美 1) 小池敦 1) 新潟大学地域医療教育センター魚沼基幹病院 1) はじめに新潟県は魚沼地域に不足する救命救急医療や高度医療を確保するため H27 年 6 月 1 日に新潟大学地域医療教育センター魚沼基幹病院を開院した新卒新採用が 5 名いて他にも輸血業務の経験の浅い検査技師も多く開院前より輸血の基本的なトレーニングは必須であった開院前から現在に至るまでの日当直に入る検査技師への指導や緊急輸血の経験を報告する緊急輸血の体制輸血オーダーには通常緊急超緊急の 3 つの依頼区分がある超緊急は医師が電話で依頼し検査技師が臨床現場まで血液製剤を運び検査技師と現場スタッフでダブルチェックをして払い出している一度の出庫は O 型 RBC 6 単位 AB 型 FFP 6 単位までで繰り返しの出庫は可能である同型血への切り替えは電子カルテでのオーダーであり血液型が 2 回別時点で確定し出庫時使用時の認証操作が可能であることである日当直者への指導開院前より日当直に入る検査技師 18 名 ( 新人含む ) に輸血担当者 3 名で輸血に関するトレーニングを行った全自動輸血検査装置 ( オーソオートビュー ) の操作用手法 ( オーソバイオビュー試験管法 ) FFP の融解の仕方輸血システムの操作緊急輸血時の対応等を指導した開院後緊急輸血が日勤帯にあった場合実際に輸血担当者以外のスタッフに製剤の準備から払い出しまで実践してもらった緊急輸血の経験これまで緊急輸血は日勤帯に 14 件日当直帯に 17 件あった輸血トレーニングの成果もあり実際に緊急輸血が発生したときは円滑に行うことができている終わりに輸血のトレーニングは日当直に入る者に必要であるまた定期的な輸血のトレーニングを行うことで輸血の知識が身に付き迅速な輸血の対応が可能になる連絡先 : ( 内線 :2202) 120 EntryNo. 84 RhD 陽性 RBC を輸血した RhD 陰性患者の緊急輸血症例田仲宏充 1) 横山一二美 1) 鶴田聡 1) 秋田赤十字病院 1) はじめに危機的出血時では RhD 陰性患者が抗 D を保有していなければ RhD 陽性 RBC を輸血することがある今回緊急手術に際し RhD 陰性患者へ RhD 陽性 RBC を輸血した症例を経験したので報告する症例 68 歳女性作業事故により転院搬送右上腕動脈吻合手術施行出産歴 2 回 O 型 RhD 陰性 ccee 不規則抗体陰性当院での検査歴輸血歴は無かったが前医より O 型 RhD 陰性との事前連絡があったまた前医での輸血はなかった経過緊急輸血オーダーを受け準備していた O 型 RhD 陰性 RBC を 8 単位出庫しその後患者の RhD 陰性を確認した緊急手術後の出血に対し血液センターと調整を図り対応していたが供給が間に合わず RhD 陽性 RBC を 8 単位輸血した大量出血状態を脱した後も供給の不足により更に RhD 陽性 RBC を 4 単位輸血した輸血量は 10 日間で RBC が 61 単位 (RhD 陽性を含む ) FFP240 が 12 本 FFP480 が 14 本 PC が 100 単位であり FFP と PC は全て RhD 陽性を輸血したまた当院の輸血同意書には RhD 異型製剤使用の説明同意に関する適切な文言の記載がなく患者又は家族への説明に苦慮した輸血検査 RhD 異型輸血から 1 か月間定期的に検査を実施した血液型検査では抗 D との反応が異型輸血後 1 日は 4+ 2 日目は mf を示し 3 日目からは陰性となった SCR/DAT は全て陰性であった一方抗 D を用いた吸着解離試験では全て 3+ 程度の強い凝集を認めたまた異型輸血から約 2 ヵ月後の検体を血液センターで FCM 検査したところ 1% 程度の RhD 陽性赤血球が残存していた考察結語本例では抗体産生の可能性が高い約一か月という期間では抗 D は産生されなかったこのような事例では輸血後の患者のフォローアップが重要となることから検査結果に応じた具体的な手順を含めたフローチャートを整え臨床医に報告できる体制の構築が必要と考えられたまた輸血同意書の内容を緊急時に速やかに説明し同意が得られるように異型輸血の説明を RhD 型も含め対応できるものに改訂することとし検討している連絡先 ( 内線 5621)

4 121 EntryNo. 101 新潟県における輸血検査の現況と課題松山雄一 1) 古俣妙 1) 新潟県赤十字血液センタ - 1) はじめに平成 26 年 12 月に赤血球型検査ガイドライン ( 以下 GL) が改訂されたことを受け我々は GL に準じた活動を行ってきた新潟県合同輸血療法委員会で実施しているアンケート調査結果をもとに新潟県における輸血検査の現況と課題について報告する対象と方法新潟県内で輸血を行う主要 80 施設を対象とし県医務薬事課からアンケート調査用紙を発送回答は FAX 返信とした同様に過去 3 年間に輸血用血液の供給実績のある小規模 63 施設にも実施した調査結果主要 80 施設すべてから回答を得た 1 検体の種類 : 血液型検査では血漿が 51 施設 (64%) を占めるが不規則抗体検査と交差適合試験では血清と血漿の割合は半数ずつであった 2 血液型検査 : 方法は試験管法 56 施設 (70.0%) カラム法 19 施設 (23.8%) でカラム法が微増傾向外注は 3 施設試験管法の施設における Rh コントロールの使用は平成 26 年度の 36 施設から平成 27 年度は 43 施設に増加した同一患者二重チェックは 74 施設 (92.5%) 同一検体二重チェックは 63 施設 (78.8%) で行われていた 3 不規則抗体検査 : 方法は試験管法 40 施設 (50.0%) カラム法 33 施設 (41.3%) 外注と未実施は各 3 施設術式は酵素法 & クームス法 27 施設 (36.5%) 生食法 & クームス法 17 施設 (23.0%) クームス法単独 16 施設 (21.6%) の順であったクームス法の反応増強剤は平成 26 年度の PEG 19 施設アルブミン 19 施設から平成 27 年度は PEG 33 施設アルブミン 5 施設と大きな変化があった自己対照の使用は 39 施設 (48.8%) で減少傾向臨床的意義のない抗体が検出された場合の臨床報告では陽性報告が 53 施設 (68.8%) 陰性報告が 22 施設 (28.6%) であった小規模施設の調査では 44 施設から回答を得た ( 回収率 69.8%) 不規則抗体検査の未実施 11 施設検査技師以外が検査を実施している状況が散見された考察 GL 改訂を受け我々が啓蒙活動を行ってきた試験管法におけるクームス法の反応増強剤切り替え酵素法や自己対照の省略等についてはある程度の成果が得られた一方で小規模施設では輸血検査を含めた安全な輸血療法実施のための体制整備が急務である連絡先 EntryNo. 104 安定した IgG 感作血球の作製条件の検討渡邊愛 1) 金田航 1) 竹中航太 1) 田邊幸 1) 川村宏樹 1) 新潟医療福祉大学医療技術学部臨床技術学科 1) 背景 IgG 感作赤血球は間接抗グロブリン試験において凝集が認められない場合に添加し血球洗浄の確認抗ヒトグロブリン試薬の活性や入れ忘れを確認するために用いられるこの IgG 感作赤血球は抗ヒトグロブリン試薬を用いた検査において使用される重要な試薬であるが海外から輸入されるため試薬メーカーで異なるが 2 ヵ月前からの予約注文が必要であるまた試薬単価は使用頻度を考えると安い試薬ではないそのため使用頻度やコストの面などを考えて IgG 感作赤血球を作製している施設もあるしかし作製方法は教本などで示されているが不明な点も多いそこで本研究は安定した IgG 感作赤血球の作製を目的として条件検討をおこなった材料と方法 IgG 感作赤血球は O 型 RhD 陽性赤血球にポリクローナル抗 D を感作させて作製することが知られているそこで赤血球量を 500μL(500 万個 /μl) 使用する条件下で 1) 抗 D 試薬量と使用期限 2) 加温時間 3) 抗 D 試薬ロット間差 4) 供血者血球差について抗ヒトグロブリン試薬を用いて反応強度を比較検討を行ったなお作製は輸血移植検査技術教本に準じて実施し研究に用いた輸血検査用試薬はオーソ社製を使用した結果考察 O 型赤血球に加える抗 D 試薬量と使用期限を検討した結果 50μL で μL で μL で 3+ であり 100μL 群と 150μL 群では作製後 14 日目まで 2+ 以上の反応強度が示され 21 日目では 3 群共に溶血が認められたまた抗 D 試薬を 100μL 加えて加温時間と反応強度の関係を測定した結果 50 分加温で 3 回実施した全て 2+ となった次に抗 D 試薬のロットを変えてロット差が結果に与える影響を検討した結果 50μL 群 100μL 群および 150μL 群の全てにおいてロット差は認められなかった最後に O 型赤血球を 2 検体 B 型赤血球を 1 検体用意して個人差と血液型による差を検討した結果抗 D 試薬を 150μL 使用する系で検討した3 検体全てで 2+ 以上であった以上のことから検討した条件下では抗 D 試薬を 150μL 使用した場合抗 D 試薬のロットに関係なく 37 で 60 分感作すると安定した IgG 感作赤血球が作製されることが示唆された連絡先

5 123 EntryNo. 106 不規則抗体検査における不規則抗体の種類が反応条件に与える影響岡崎浩太 1) 五十嵐愛琳 1) 沖田望 1) 清野文香 1) 竹中航太 1) 田邊幸 1) 川村宏樹 1) 新潟医療福祉大学医療技術学部臨床技術学科 1) 背景不規則抗体は輸血後の重篤な溶血性副作用や胎児新生児溶血性疾患の原因となるそれらの事象を防止するために間接グロブリン試験 ( 以下 IAT) を用いて臨床的意義のある 37 で反応する同種抗体の検出を目的とした不規則抗体検査の実施が推奨されている IAT では PEG LISS の反応増強剤を用いる方法と反応増強剤無添加の方法があるが我々はこの2つの方法が反応時間の短縮以外にも検出感度などで違いがあるのか否か疑問をいだいたそこで本研究は不規則抗体の種類別で PEG- IAT 法と反応増強剤無添加 IAT 法 ( 以下無添加 -IAT 法 ) の検出感度比較無添加 IAT 法では抗体感作条件が検出感度に与える影響を検討した材料と方法検体は日本赤十字社から譲渡して頂いた抗 Dia 抗 Jka および抗 E を含む血漿を用いた検討項目は 1)PEG-IAT 法の加温時間と振とう条件 2) 無添加 IAT 法の加温時間と振とう条件 3) 抗 Jka を含む血漿を用い量的効果の反応強度の比較検討を行ったなお検査方法は輸血のための検査マニュアル Ver. 1.3 に準じて実施し研究に用いた輸血検査用試薬はオーソ社製を使用した結果考察 PEG-IAT 法での加温時間を 10 分と 15 分振とうを毎 5 分で 0 秒 3 秒 10 秒の条件で検討した結果抗 Dia と抗 E では反応強度に変化は認められなかったが抗 Jka では Jk(a+b+) 赤血球群と Jk(a+b-) 赤血球群のいずれにおいても反応強度の差異が認められた次に無添加 IAT 法での加温時間を 60 分まで毎 15 分振とう 0 秒 3 秒 10 秒の条件で検討した結果全ての検体において振とう 0 秒 3 秒 10 秒の順で反応強度の上昇傾向が認められた反応強度は抗 Dia では加温 60 分抗 E では加温 45 分でピークに達したまた抗 Jka においては Jk(a+b+) 赤血球群で加温 45 分 Jk(a+b-) 赤血球群では加温 60 分でピークとなり反応強度の上昇に違いが認められた検出感度については PEG-IAT 法では学生レベルでも十分に上記抗体の検出が可能であったが無添加 IAT 法では条件によっては検出できないこともあり現在更なる検討をおこなっている連絡先

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Title 不規則抗体検査の解説福島県立総合衛生学院教務部臨床検査学科安田広康 SLIDE 1 不規則抗体同定のプロセス (1) 不規則抗体スクリーニング (Sc) 可能性の高い抗体の推定 * 否定できない抗体の推定反応態度 *1 消去法 * - 日臨技輸血移植検査技術教本 - *1 陽性の Sc 赤血球 1) 反応パターン ) 反応温度 ) 凝集の強さ * 陰性の Sc 赤血球 1) 量的効果 *

115 EntryNo. 44 Clostridium difficile の培養検査からみえてきた当院の現状と今後の課題 金澤雄大 1) 佐藤真喜 1) 村山久恵 1) 中村尚子 1) 鎌田恵理子 1) 奥田千晶 1) 秋山怜美 1) 堀内弘子 1) 八戸市立市民病院 1) 目的 Clostrid

115 EntryNo. 44 Clostridium difficile の培養検査からみえてきた当院の現状と今後の課題金澤雄大 1) 佐藤真喜 1) 村山久恵 1) 中村尚子 1) 鎌田恵理子 1) 奥田千晶 1) 秋山怜美 1) 堀内弘子 1) 八戸市立市民病院 1) 目的 Clostrid