autoMACS Pro 簡易操作マニュアル

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なつきあいきょう
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1 automacs Pro Separator ver...0 * 分離の際は必ずマイクロビーズに添付されているデータシートに従ってください Miltenyi Biotec K.K.

2 目次目次 automacs Pro Separator. とは.. 機能および特徴.. 構造. を用いた細胞分離の操作手順.. 操作手順フローチャート.. 実際の手順... automacs Proのセットアップ... automacs Proのプライミング... 分離プログラムの実行... automacs Proのシャットダウン.. テンプレートについて, 6 7 8,9 0. メンテナンス.. 分離カラムの交換について.. Safeプログラムについて.. 長期保存について. トラブルシューティングとカスタマーサポート.. トラブルシューティング.. 年間保守契約サービス 6 6 付録分離プログラム選択分離プログラムのサンプル吸引速度と溶出液量各プログラムの所要時間と必要な溶液量モニタリング機能とその表示 : スクリーン上の表示モニタリング機能とその表示 : ボトルイルミネーション MACS および automacs は Miltenyi Biotec GmbH の登録商標です

3 automacs Pro とは. とは.. 機能および特徴 ( 以下 automacs Pro) はミルテニーバイオテク社の MACS 技術を利用したコンピュター制御の自動磁気細胞分離装置です MACS は微小な磁気粒子の MicroBeads を用いて細胞を磁気標識し強力な永久磁石の中においた分離カラムに標識した細胞を通すことで細胞を分離します automacs Pro はこの分離過程が全自動化されており種類の分離プログラムとサンプル自動供給装置により最大 6 サンプルまでを連続分離することが可能です細胞への物理的ストレスも最小限に押さえられておりダメージを与えることなく高速高純度で目的細胞を得ることができます Selection Negative fraction Elution Positive fraction 図.MACS とは分離処理能力全細胞数 : 0 9 個磁気標識細胞数 : 0 8 個サンプル容量 : 0.-0 ml 仕様設置面積 (MACS MiniSampler 設置時 ): 60 mm( 幅 ) mm( 奥行 ) 9-60 mm( 高さ ) * 重量 : kg 入力電圧 : 00-0 VAC, 0-60 Hz 消費電力 : 00 VA 分離プログラム : プログラム * 調節可能 MACS MicroBeads はウイルス程度のきわめてて小さな酸化鉄と多糖類からなる粒子ですこの特性により標的細胞の生理学的機能を損なうことなく細胞を分離することが可能です ( 矢印が MicroBeads) 図.MACS MicroBeads とは注意 automacs Pro 周囲には強力な磁場が生じます磁気に弱いものは周囲 0 cm 以内に置かないでください automacs Pro は試験研究用です臨床目的には使用できません automacs Pro にインストールされているソフトウェアのバージョンが.0 以上の場合は簡易マニュアル ver..0.0 および User manual, version ( または 0) をご参照ください

automacs Pro とは.. 構造前面 8 6 9 7 6. Touchscreen. Front cover. Bottom cover.

$Guiding for sensor cables and tubing. Robotic arm. Outlet port negative fraction (Neg).$ $Outlet port positive fraction (Pos) / Uptake port. Slot for MACS MiniSampler 6. Memory card 7.$

4 automacs Pro とは.. 構造前面 Touchscreen. Front cover. Bottom cover. Washing station cover. Fluid container baskets () 6. Fluid containers () 7. Bottle closures () 8. Robotic arm 9. Rack detection 側面 6 本体左側. Guiding for sensor cables and tubing. Robotic arm. Outlet port negative fraction (Neg). Outlet port positive fraction (Pos) / Uptake port. Slot for MACS MiniSampler 6. Memory card 7. Main power switch 7 本体右側背面 6. Guiding for sensor cables and tubing. Socket for main plug. Socket for sensor cables. Socket for MACS MiniSampler. Type plate 6. FCC label

automacs Pro とは流路系 6. Pump syringe. Valves (). Magnet unit.

MACS MiniSampler. Guiding for MiniSampler. Guiding for MiniSampler lid.

Rack detection MACS Cooling Tube Racks. MACS MiniSampler.

5 automacs Pro とは流路系 6. Pump syringe. Valves (). Magnet unit. automacs Column. automacs Column 6. Dilutor valve MACS MiniSampler 6. MACS MiniSampler. Guiding for MiniSampler. Guiding for MiniSampler lid. Slot for MiniSampler guiding. MACS MiniSampler cable with plug 6. Rack detection MACS Cooling Tube Racks. MACS MiniSampler. Lid of the MACS Minisampler. Chill 0 : for 0 ml tubes. Chill : for ml tubes. Chill : for ml tubes

6 細胞分離.autoMACS Pro を用いた細胞分離の操作手順.. 操作手順フローチャート細胞分離方法の選択細胞サンプルの調製細胞の磁気標識使用する MicroBeads のデータシートをご参照ください使用する MicroBeads のデータシートをご参照ください automacs Pro のセットアップ automacs Pro P.7 をご覧ください automacs Pro のプライミング P.8-9 automacs Pro での過程分離洗浄プログラムの設定 P.0 分離プログラムの実行洗浄プログラムの実行最大 6 回まで連続分離可能 automacs Pro のシャットダウン簡易マニュアル P.

7 細胞分離.. 実際の操作手順...autoMACS Pro のセットアップ.MACS MiniSampler を接続してください. 十分な量の Running Buffer Washing Solution Storage Solution が入った各ボトルと空の廃液用ボトルを接続してください接続する溶液類組成位置 Running Buffer automacs Running Buffer #0-09- または mm EDTA, 0. % BSA を含む PBS (ph 7.) 右手前ボトルイラストケーブルの色青 Washing Solution automacs Pro Washing Solution # 右奥緑 Storage Solution 70 % (v/v) エタノール特級グレードのエタノールをご使用ください左奥黒 Waste 廃液左手前赤注意 automacs Pro Washing Solution は automacs Pro 専用の洗浄液です automacs には使用できません冷えた溶液類を使用しないでください液漏れの原因となります.Front coverとwashing station coverを開け次の点を確認してください分離カラムは正しい位置に確実に取付けられているか? 分離カラムに錆は浮き出ていないか? ValveやDilutor valve Pump syringe Washing Stationの本体や周りに塩が析出していないか? 流路系に折れやねじれはないか? Robotic armは正しい位置に取付けられているか?

touchscreen に Status menu が表示されます次の点を確認してください各溶液類のボトルマークが緑色で表示されているか?

カラムマークが緑色で表示されているか? 赤色の場合はカラムを交換してください Status menu MACS MiniSampler が正しく接続され長方形のマークが表示されているか?

8 細胞分離...autoMACS Pro のプライミング. 電源を ON にしてください動作チェックとシステムの初期化が行われ Status menu が表示されます ( 約 0 秒 ) Initialization screen.touchscreen に Status menu が表示されます次の点を確認してください各溶液類のボトルマークが緑色で表示されているか? Storage Solution は常に灰色で表示されます赤色あるいは灰色の場合は溶液の容量廃液ボトルの空き容量 Sensor cable の接続を確認してくださいカラムマークが緑色で表示されているか? 赤色の場合はカラムを交換してください Status menu MACS MiniSampler が正しく接続され長方形のマークが表示されているか? 手形マークが表示されている場合はもう一度接続部分を確認してください.Separation() をタッチし Separation menu を表示します.Wash only() をタッチします Separation menu.rinse(6) を選択し Run(7) をタッチしてください automacs Pro のプライミング ( 流路系の洗浄および Runningbuffer の充填 ) が行われます ( 約分 ) 6 7 Separation menu Pop up mene Wash only

9 細胞分離 6. 適切なチューブラックを MACS MiniSampler に設置してくださいチューブラックは前もって -8 で - 時間冷却してくださいチューブラックは 0 以下では冷却しないでください細胞サンプルが凍結する恐れがありますチューブラック使用可能なチューブ連続分離可能なサンプル数分離プログラムの設定位置最大サンプル容量 * 最大サンプル細胞数 * Chill ml 6 サンプル -6. ml 0 8 個 Chill ml サンプル -. ml. 0 9 個 Chill 0 0 ml サンプル - 0 ml 0 9 個 *Posselwb プログラムで分離を行う場合は異なります分離の準備が完了しました

細胞分離... 分離プログラムの実行.Separation menu の Programing field() 上でプログラムを設定するポジションをタッチして選択します選択されたポジションは黄色になります使用するラックが Chill の場合はポジション -6 に Chill の場合はポジション - に Chill 0 の場合はポジション - に設定してください.

10 細胞分離... 分離プログラムの実行.Separation menu の Programing field() 上でプログラムを設定するポジションをタッチして選択します選択されたポジションは黄色になります使用するラックが Chill の場合はポジション -6 に Chill の場合はポジション - に Chill 0 の場合はポジション - に設定してください.Separation program() と Washing program() をそれぞれ選択します Separation menu. チューブラックの適切な位置 (Programing field でプログラムを設定した位置 ) にサンプルと回収用チューブをセットします A: サンプル B: ネガティブフラクション C: ポジティブフラクション D: 予備 A B C D A B C D A B 6 Chill Chill D D D C C C Chill 0.Run() をタッチしてください溶液類が十分量あるか確認するよう指示が表示されます問題ない場合は OK を選択してください分離および洗浄が進行します補足 Save Template(6) でテンプレートの保存ができます Load Template() で保存したテンプレートの呼び出しができます 6 Separation menu 注意サンプルはアプライする直前にフィルター (#0-0-07) に通し細胞凝集塊を除去してください 0

11 細胞分離...autoMACS Pro のシャットダウン短期間の停止の場合は Sleep プログラムを実行してください. シャットダウンボタン () を押してください.Yes() をタッチして Sleep プログラムを実行してください ( 約分 ) 流路系が洗浄され最後に Strage Solution が充填されますボトルイルミネーションが紫色になります. 本体電源を OFF にしてください Separation menu Pop up warning screen for Shutdown 補足分離プログラムと組み合わせることも可能ですその場合は最後の洗浄ステップに Sleep プログラムを設定してください

テンプレートの名称を入力し () OK() をタッチしてください分離テンプレートの保存が完了しました Separation menu Save template menu B.

12 細胞分離.. テンプレートについてテンプレートを作成することで頻繁に使用する分離洗浄プログラムを毎回設定する必要がなくなります A. 分離テンプレートの保存.Separation menu で分離プログラムおよび洗浄プログラムを設定し Save templete() をタッチしてください. テンプレートの名称を入力し () OK() をタッチしてください分離テンプレートの保存が完了しました Separation menu Save template menu B. 保存したテンプレートの呼び出し.Separation menu で Load template() をタッチしてください. 使用するテンプレートを選択し () OK(6) をタッチしてください. テンプレートが呼び出されます Run をタッチすると分離がスタートします Separation menu 6 Load template menu

メンテナンス. メンテナンス.. 分離カラムの交換 automacs Pro 用の分離カラム ;automacs Columns (#0-0-0) は週間または 00 回の分離まで使用可能です最良の性能を発揮するために上記使用期限を守りカラムの交換を行ってください.Option menu() を選択してください.

13 メンテナンス. メンテナンス.. 分離カラムの交換 automacs Pro 用の分離カラム ;automacs Columns (#0-0-0) は週間または 00 回の分離まで使用可能です最良の性能を発揮するために上記使用期限を守りカラムの交換を行ってください.Option menu() を選択してください. 左側の Main から Special() を選択し次に右の Detail から Col_ex() を選択してください.Run() をタッチしてください Column Exchange プログラムがスタートし自動で流路系の洗浄が行われます ( 約分 ) Option menu. 分離カラム交換の指示が表示されます (A) 下記の手順で分離カラムを交換してください Front cover を開ける両手でカラムの上下の端をつかみスロットからカラムを引き出す広口の容器をカラムの下に置き上側のカラムコネクター (a) を反時計回りにゆるめてはずしカラムを逆さまにして充填されている溶液を廃棄する A 下側のカラムコネクター (c) を時計回りにゆるめてはずしカラム (b) を取り外す新しい分離カラムを下側のカラムコネクターに挿入し反時計回りにコネクターを締めるカラムを上側のカラムコネクターに挿入し時計回りにコネクターを締める上側のカラムコネクターをマグネットカバー (d) にあるスロットのガイド部分に合わせカチッというまでカラムをスロットに押し込む Front cover を閉める a Option menu.done をタッチしてください () 自動で流路系の洗浄が行われます ( 約分 0 秒 ) b e b d 6. 分離カラムの交換が終了しました続けて分離を行う場合は Separation menu を選択してください c 分離カラムの交換方法

14 メンテナンス..Safe プログラムについて Safe プログラムは感染性のサンプルを使用した際に流路系を除菌するために行いますまた Safe プログラムは 6 ヶ月毎に行うことをおすすめします注意このプログラムには 0mL 以上の MACS Bleach Solution(# ) が必要です.Option menu() を選択してください. 左側の Main から Special() を選択し次に右側の Detail から Safe() を選択してください.Run() をタッチしてくださいスクリーン上に Safe プログラムの手順が表示されます (A) 表示された手順に従って操作を進めてください.Running Buffer Washing Solution Storage Solution のボトルに接続されている流路チューブを全て外し OK をタッチしてください Option menu. 外した流路チューブの端を ml の MACS Bleach Solution を入れたチューブに入れ OK をタッチしてください MACS Bleach Solution を吸引します 6. ml の MACS Bleach Solution を入れたチューブをミニサンプラーに設置した Chill 0;position A にセットし OK をタッチしてください MACS Bleach solution を吸引しますその後流路系が MACS Bleach Solution で満たされた状態で 0 分間インキュベートされます ( 除菌処理 ) A ここに手順が表示されます Option menu 7. 外した流路チューブを再接続し OK をタッチしてください自動で流路系の洗浄が行われます ( 約分 ) 8. 分離カラムの交換 (P.) に従って新しい分離カラムに交換し OK をタッチしてください Safe プログラムが継続され流路系が洗浄されます ( 約分 0 秒 ) 9.70% エタノールで浸したキムワイプなどで Uptake port と Outlet port を拭いてください続けて精製水で拭き OK をタッチしてください分離の準備が整いました注意 Safe プログラムは除菌を目的としたものでありこのプログラムで完全に滅菌することはできません Safe プログラムを行った際は必ず新しい分離カラムに交換してください MACS Bleach Solution によってカラムが錆びバルブ等の故障につながります MACS Bleach Solution は腐蝕性です取り扱う際は保護メガネ手袋および白衣を着用してください

メンテナンス.. 長期保存について automacs Pro を週間以上停止する場合は Store プログラムを実行し分離カラムをダミーカラムに交換してください.Option menu() を選択してください. 左側の Special() を選択し次に右側の Store() を選択してください.

15 メンテナンス.. 長期保存について automacs Pro を週間以上停止する場合は Store プログラムを実行し分離カラムをダミーカラムに交換してください.Option menu() を選択してください. 左側の Special() を選択し次に右側の Store() を選択してください.Run() をタッチしてください流路系の洗浄が行われます ( 約分 ) Option menu. 分離カラムの交換と同様の手順でダミーカラムに交換してください.Done() をタッチしてください流路系が 70% エタノールで満たされます ( 約分 ) 6.autoMACS Pro の本体電源を OFF にしてください Option menu Option menu

16 トラブルとサポート. トラブルシューティングとカスタマーサポート.. トラブルシューティング automacs Pro にトラブルが生じた場合はユーザーズマニュアルのトラブルシューティングをご参照の上カスタマーコールセンターまでご連絡ください機器修理のお問い合わせ : AM9:00 PM:00 ( 土日祝日除く ) どのマイクロビーズを使用すればよいかわからない使用方法がわからない細胞がうまく分離できないなど細胞分離に関するご質問ご相談は下記専用ダイヤルまでお問合せください学術的なお問い合わせ : AM9:00 PM:00 ( 土日祝日除く ).. 年間保守契約サービス安心してお使いいただくために弊社では年間保守契約サービスをご用意しております詳しくは担当営業またはカスタマーコールセンターまでお問い合わせください 6

17 付録分離プログラムの選択目的特別な表面抗原を発現している細胞を分離するサンプルから不必要な細胞群を除去し untouch で細胞を分離する分離方法存在率が高い (% 程度以上 ) Positive Selection 標的細胞を磁気標識存在率が低い (% 程度以下 ) 純度を高めたい Depletion 標的細胞以外を磁気標識 Possel positive selection in standard mode ポジティブセレクション Posseld positive selection in standard mode I, double-column program カラムを本用いるポジティブセレクション Deplete depletion in standard mode ディプリーションプログラム抗原発現量が多い抗原発現量が少ない Possel_s positive selection in sensitive mode 高感度モードのポジティブセレクション Posseld positive selection in standard mode II, double-column program 希少細胞を大量のサンプルから濃縮する際や全血や臍帯血から細胞を分離する際のカラム本を用いるポジティブセレクション Posselds positive selection in sensitive mode, double-column program 高感度モードのカラム本を用いるポジティブセレクション Depletes depletion in sensitive mode I 高感度モードのディプリーション Depl 0 / Depl 0 depletion in sensitive mode II / III 非常に高感度なスペシャルディプリーション全血からの分離 Posselwb positive selection in special mode, double-column program Whole Blood MicroBeads を用いた全血からの直接分離 FCM で細胞集団が明確に分かれない場合はこちらをご利用ください 7

18 付録所要時間および必要な溶液量はおおよその値です目安としてお考えください分離プログラムのサンプル吸引速度と溶出液量分離プログラム Possel Possel_s Posseld Posseld Posselds Posselwb Deplete Depletes Depl0 Depl0 サンプル吸引速度 ml / min ml / min ml / min (Column ) ml / min (Column ) ml / min ml / min ml / min ml / min ml / min 0. ml / min 0. ml / min ネガティブフラクション ml + サンプルボリューム ml + サンプルボリューム ml + サンプルボリューム ml + サンプルボリューム ml + サンプルボリューム ml + サンプルボリューム + プレ希釈ボリューム ml + サンプルボリューム ml + サンプルボリューム ml + サンプルボリューム ml + サンプルボリューム溶出される液量ポジティブフラクション ml ml 0. ml ml ml ml ml ml ml ml プログラム実行時に自動的にサンプルが倍希釈されます各プログラムの所要時間と必要な溶液量プログラム使用液量 Washing Solution Running Buffer Storage Solution Bleach Solution 所要時間 Qrinse - 8 ml - -. min Rinse 96 ml 8 ml - - min Sleep 96 ml - 8 ml - min Store 96 ml - 96 ml - 8 min Col_ex 96 ml 96 ml min Safe 96 ml 96 ml - 0 ml min ダミーカラムあるいは新しい分離カラムに交換する時間は含みません 8

19 付録モニタリング機能 : スクリーン上の表示 Bottle status マーク溶液状態 / 対処法 Running buffer Washing solution Storage Solution 緑色 : 正常赤色 : 溶液が足りません補充してください灰色 :Bottle Sensor を正しく接続してください灰色 :Storage Solution はボトルセンサーによって認識されません目視により容量を確認してください Waste 緑色 : 正常赤色 : 溶液許容量を超えていますボトルを空にしてください灰色 :Bottle Sensor を正しく接続してください Columns status マーク状態 / 対処法緑色 : 正常赤色 : カラムを交換してください Rack detection マークラック特徴 Chill 最大 6 サンプルまで連続分離可能回の分離で処理可能な総細胞数 :x0 8 個 in. ml Chill 最大サンプルまで連続分離可能回の分離で処理可能な総細胞数 :.x0 9 個 in. ml Chill 0 最大サンプルまで連続分離可能回の分離で処理可能な総細胞数 :x0 9 個 in 0 ml MACS MiniSampler detection マーク状態 / 対処法 MACS MiniSampler が認識されています何も認識されていません MACS MiniSampler を正しく接続してください 9

20 付録モニタリング機能 : ボトルイルミネーションボトルイルミネーションの色状態緑分離可能青プログラム実行中ー黄赤分離の準備ができていませんエラー対処法 Wash プログラム (Rinse あるいは Qrinse) を実行してくださいスクリーンでエラーログを確認してください紫 Sleep プログラムの完了 automacs Pro の電源を OFF にしてください点滅個別の対処が必要とされていますスクリーンを確認してください 0

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