電気泳動 & ブロッティング 電気泳動 & ウェスタンブロッティング サンプル調製 2 ライセート調製用試薬 / 免疫沈降用磁気ビーズとラック 電気泳動 3 SDS-PAGEサイズスタンダード TGXプレキャストゲルその他プレキャストゲルアクリルアミド溶液 (FastCastキット) 電気泳動槽 ブロッティング 12 トランスブロットTurboブロッティングシステム / 転写パックトランスブロットTurbo 用 RTAキット 検出 解析 16 ウェスタン用 1 次抗体 /2 次抗体ケミルミ検出用試薬イメージングシステム (ChemiDoc Touch MP) 蛍光標識 2 次抗体蛍光ウェスタンアプリケーション その他転写装置 / パワーサプライ 21 定量ウェスタンV3ワークフロー 22 プレミックスバッファー 24
サンプル調製 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 ライセート調製用試薬 Laemmli サンプルバッファー SDS-PAGE ウェスタン用一般可溶化試薬 Bio-Plex Cell Lysis キット リン酸化検出に最適な可溶化試薬 SingleShot Cell Lysis キット ウェスタン用とリアルタイム PCR 用サンプルを同一培養細胞から調製 サンプルに直接加え 加熱処理を行い 電気泳動 ウェスタンブロッティング用サンプルの調製を行えます ( 要 2ME またはDTT) 物理的処理や遠心等の操作が必要な場合があります 2 タイプと4 タイプがあります リン酸化タンパク質のウェスタン解析用サンプルを培養細胞や組織から抽出 調製できます 脱リン酸化阻害剤を組み合わせた抽出キットです 培養細胞 1 の1つのウェルから ウェスタン用 リアルタイムPCR 用サンプル 2 を簡単に調製できます Cell Lysisバッファーで溶解後 ウェスタン用サンプルにSDS-PAGE 用サンプルバッファーを加え リアルタイムPCR 用サンプルは Protease DNaseを加えるだけです Ordering Information カタログ番号 品名 価格 保存 1610737 Laemmli サンプルバッファー (2 )30 ml 8,500 室温 1610747 4XLaemmli サンプルバッファー 10 ml 6,500 室温 171304011 Bio-Plex Cell Lysisキット 25,000-20 1725080 SingleShot Cell Lysisキット 48,000-20 まとめ買いパッケージもございます 詳しくはお問い合わせください 1 対応細胞種はご確認ください 2 本抽出液のリアルタイムPCRにはSsoAdvancedシリーズキットの使用を推奨します 免疫沈降用磁気ビーズとラック SureBeads 免疫沈降用磁気ビーズとラック SureBeadsは磁気ビーズを採用した 迅速 かつ効率的に免疫沈降を行うためのビーズです 樹脂に固定化されているProteinA( またはG) に抗体が結合した際に 抗原結合部位がしっかりと外側に配向するように設計されています SureBeads 免疫沈降用磁気ビーズ (3 ml) SureBeads トライアルビーズ (1 ml) ミニラック 効率的な抗原結合による高効率抗原回収 低非特異的吸着 磁気ビーズによる迅速 かつ高効率洗浄 チューブを動かさずに利用できる便利な磁石ラック SureBeads 上での抗体配向性模式図 SureBeads ProteinA( または G) に抗体の Fc 部位が結合し 抗原結合部位がしっかりと外側を向くことで 効率的に抗原 ( 目的タンパク質 ) が結合する SureBeads と一般的なアガロースタイプビーズとの性能比較 ( 目的タンパク質の回収効率比較 ) 0.5 µg Ab 1 磁気ビーズ 2 µg Ab 4 µg Ab 8 µg Ab 2 3 4 5 6 7 8 9 Protein A magnetic SureBeads ProteinA または G Input HeLa lysate 0.5 µg Ab 2 µg Ab 抗原結合部位 抗体 Fc 部位 抗原 ( 目的タンパク質 ) 4 µg Ab Protein A agarose Beads 8 µg Ab SureBeads もしくは一般的なアガロースタイプの ProteinA ビーズを用い ライセートから目的タンパク質を回収 抗体の配向性が良いため 少ない抗体使用量で効率的に抗原 ( 目的タンパク質 ) を回収できる Ordering Information SureBeads ラック 16 チューブ用 SureBeads ラックは 最大 16 本のチューブを保持することができ 磁気ビーズ集積用の磁石はラック中央でスライドできるようになっています これにより サンプルチューブをセットしたまま洗浄操作を行うことができ チューブを移動させることなく作業が容易になります 様々な磁気ビーズで利用できます カタログ番号 品名 価格 保存 1614011 SureBeads ProteinA トライアルビーズ 1 ml(1 本 ) 12,000 4 1614811JA SureBeads ProteinA トライアルキットミニラック付 18,000 4 構成品 : SureBeads ProteinA トライアルビーズ (1) SureBeadsミニラック (1) 1614013 SureBeads ProteinA 免疫沈降用磁気ビーズ 3 ml(1 本 ) 24,000 4 1614013B02 SureBeads ProteinA 免疫沈降用磁気ビーズ 3 ml(2 本 ) 45,600 4 1614813JA SureBeads ProteinA(2)16チューブ用ラック付セット 79,200 4 構成品 : SureBeads ProteinA 3 ml(2) SureBeadsラック16チューブ用 (1) 1614021 SureBeads ProteinG トライアルビーズ 1 ml(1 本 ) 12,000 4 1614821JA SureBeads ProteinG トライアルキットミニラック付 18,000 4 構成品 : SureBeads ProteinG トライアルビーズ (1) SureBeadsミニラック (1) 1614023 SureBeads ProteinG 免疫沈降用磁気ビーズ 3 ml(1 本 ) 24,000 4 1614023B02 SureBeads ProteinG 免疫沈降用磁気ビーズ 3 ml(2 本 ) 45,600 4 1614823JA SureBeads ProteinG(2)16チューブ用ラック付セット 79,200 4 構成品 : SureBeads ProteinG 3 ml(2) SureBeadsラック16チューブ用 (1) 1614916 SureBeadsラック 16チューブ用 (1 個 ) 40,000 1614833JA SureBeads ProteinA&G 16チューブ用ラック付セット構成品 : SureBeads ProteinA G 3 ml( 各 1) SureBeadsラック16チューブ用 (1) 79,200 4 2 電気泳動 & ウェスタンブロッティング
そのままで サンプル調製電気泳動 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 SDS-PAGE サイズスタンダード PrecisionPlus スタンダードシリーズ プレシジョンPlusプロテインスタンダードは リコンビナントタンパク質を使用したSDS-PAGE 用の分子量スタンダードです 10 15 20 25 37 50 75 100 150 250 kdaの10 種類のタンパク質は高純度で シャープなバンドが得られるように調製されています シャープなバンドだから分子量測定が容易 色つきだから泳動中もバンドを確認可能 ( 着色済製品 ) 高分子から低分子まで覚えやすい分子量 75, 50, 25 kdaのバンドが太いから簡単に識別可能 プレシジョン Plus スタンダードシリーズラインアップ プレシジョン Plus スタンダード未着色 バンドが最もシャープに確認できます プレシジョン Plus ブルースタンダード全てのバンドが青色に着色済み プレシジョン Plus デュアルスタンダード 75, 25 kda のバンドがピンク色に着色済み その他は青色 より視認性高い プレシジョン Plus カレイドスコープスタンダード 10 本のバンドが 5 色に色分け済み さらにバンド認識が容易 プレシジョン Plus WesternC スタンダード着色済みで StrepTactin-HRP によりウェスタンでの検出も可能 プレシジョンPlusデュアルエクストラスタンダードデュアルスタンダードにさらに5 kdaと2 kdaのバンドを追加 ペプチド領域までカバー プレシジョンPlus スタンダード kda 250 150 100 75 50 37 分子量推定に最適な優れた直線性 プレシジョン Plus ブルースタンダード kda 250 150 100 75 50 37 プレシジョン Plus デュアルスタンダード kda 250 150 100 75 50 37 プレシジョンPlus カレイドスコープスタンダード kda 250 150 100 75 25 25 25 25 25 25 20 20 20 20 20 20 15 15 15 15 15 15 10 10 10 10 10 10 5 2 未着色品着色済着色済着色済着色済着色済 ( 写真はCBB 染色後のものです ) NOTICE TO PURCHASER : LIMITED LICENSE This product is sold under license from Life Technologies Corporation, Carlsbad, CA for use only by the buyer of the product. The buyer is not authorized to sell or resell this product or its components. 50 37 プレシジョンPlus WesternC プロテインスタンダード kda 250 150 100 75 50 37 プレシジョンPlus デュアルエクストラスタンダード kda 250 150 100 75 50 37 Best In Class 1 本でマルチに使える プレシジョン Plus WesternC スタンダード 特長 3 ケミルミ同時検出可能 特長 1 泳動状況の確認に使える 特長 2 転写状況の確認に使える ストレプタクチン HRP(p.18) を加えて トランスフェリントリプシンインヒビター 特長 4 蛍光マルチプレックス検出可能 トランスフェリン トリプシンインヒビター Ordering Information カタログ番号 品名 価格 プレシジョンPlusスタンダード 1610363 1,000 μl 18,600 1610363B02 1,000 μl 2 本 35,000 1610396 1,000 μl 5 本 (Value Pack) 79,000 プレシジョンPlusブルースタンダード 1610373 500 μl 18,600 1610373B02 500 μl 2 本 35,000 1610393 500 μl 5 本 (Value Pack) 79,000 プレシジョンPlusデュアルスタンダード 1610374 500 μl 19,600 1610374B02 500 μl 2 本 37,000 1610394 500 μl 5 本 (Value Pack) 83,000 カタログ番号 品名 価格 プレシジョンPlusカレイドスコープスタンダード 1610375 500 μl 24,600 1610375B02 500 μl 2 本 47,000 1610395 500 μl 5 本 (Value Pack) 104,000 プレシジョンPlus WesternCスタンダード 1610376 250 μl 19,600 1610376B02 250 μl 2 本 37,000 1610399 250 μl 5 本 (Value Pack) 83,000 プレシジョンPlusデュアルエクストラスタンダード 1610377 500 μl 22,600 1610377B02 500 μl 2 本 42,500 1610397 500 μl 5 本 (Value Pack) 95,000 カタログ番号品名価格保存プレシジョン Plus スタンダード 1610385 プレシジョン PlusWesternC プロテインパック, 50 回分 ( プレシジョン Plus WesternC 250 μl ストレプタクチンー HRP 125 μl) 26,000-20 プレシジョン Plus スタンダード用ストレプタクチン 1610380 ストレプタクチンー HRP 標識, 300 μl, 150 回分 14,000 4 www.bio-rad.com 3
サンプル調製電気泳動 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 ウェスタンブロッティングに最適な TGX プレキャストゲル TGX プレキャストゲル 独自に開発した新技術で タンパク質電気泳動の標準法 (Laemmli 法 ) を改良し ウェスタンブロッティングに最適なプレキャストゲルを開発しました 安定した品質のプレキャストゲルを使用し 再現性の高い確実な実験を行えます ブロッティング効率が高い 電気泳動が速い Tris/Glycine 系バッファーが使えて 長期保存も可能 高効率なタンパク質転写 ミニプロティアンTGXゲル中ではバイオ ラッド独自の技術によりタンパク質がより速く移動するため より多くのタンパク質を膜上に移動させたいウェスタンブロッティングに最適です ゲルから抜けにくいタンパク質の転写効率も改善 ラット肝臓抽出液サンプルを2 次元電気泳動で分離後 トランスブロットTurboシステムでPVDF 膜に転写 転写後の膜とゲルを染色し 転写されたタンパク質とゲルに残存するタンパク質を確認した 他社製長期保存可能プレキャストゲル 転写された PVDF 膜上のタンパク質染色像 転写後のゲル残存タンパク質染色像 5 pl 8 小分子量大 一般的に転写されにくいと言われる高分子量タンパク質や塩基性タンパク質はゲルに残りやすい TGXゲルでは タンパク質の転写効率が全体的に向上するため 抜けにくいタンパク質 もゲルから抜け 膜にしっかりと移動します TGX プレキャストゲル 転写された PVDF 膜上のタンパク質染色像 転写後のゲル残存タンパク質染色像 膜上のタンパク質の染色強度が全体的に高く より多くのタンパク質がゲルから移動したことがわかる 図中の赤い点は検出時にシグナルが飽和するほどの染色強度が得られたことを示す より詳細なデータは Bulletin6147 をご参照ください 4 電気泳動 & ウェスタンブロッティング
サンプル調製電気泳動 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 高速電気泳動 実験時間を短縮 独自開発のゲルバッファー組成により タンパク質がより速くゲル内を移動します しかも高分離能です 迅速に泳動が終了し ( 約 30 分 200 V 定電圧 ) すぐに次の実験に進むことができます 泳動時間は30 分(200 V 定電圧 ) 300 V 定電圧 ( 通常 200 V 定電圧 ) で泳動を行うことにより 泳動が最短 15 分で終了します しかも移動度や分離能はそのまま Rapidプロトコールがさらに研究を加速します Rapidプロトコールの泳動結果 Rapid プロトコールでさらに分離時間を最短 15 分に短縮 ( ミニプロティアン TGX ゲル ) 標準プロトコールの泳動結果 TGX 10% TGX 10% Rapid プロトコール 電圧下部バッファー量発生電流値 ( ゲル1 枚あたり ) 泳動時間 ( 目安 ) 同時泳動枚数 300 V 800 ml 初期値 70 ma 前後 ~ 終値 55 ma 前後 15~23 分最大 2 枚 プロテインスタンダード 大腸菌抽出液 プロテインスタンダード 大腸菌抽出液 長期保存可能 Tris/Glycine 系バッファーが使える長期保存可能なゲル いつものバッファー (Tris/Glycine/SDSバッファー) を使用できるので ランニングコストは変わりません さらにバイオ ラッドの新技術で 製造後 1 年間の長期保存 (4 ) が可能 また ゲルにはSDSが含まれていないので Native-PAGEにも使用可能です ミニプロティアン TGX ゲル 10% 一般的なアクリルアミドゲル 10% 泳動バッファー 25 mm Tris-base, 192 mm Glycine, 0.1% SDS サンプルバッファー (2x) 62.5 mm Tris-HCl ph6.8, 2% SDS, 25% Glycerol, 0.01% BPB, 5% 2- メルカプトエタノール 左図 : 加速試験 : 37 12 日間保存は 4 12 ヶ月保存に相当します 製造直後 37 6 日間保存後 37 12 日間保存後 長期保存後の泳動パターンの比較 www.bio-rad.com 5
サンプル調製電気泳動 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 多彩なラインアップ 2 種類のゲルサイズと豊富なゲル濃度ラインアップ 目的に応じて使い分ける取り扱いが楽なミニゲルと 多サンプル解析やハイスループット解析に最適なワイドゲルの2つから選べます ミニプロティアンタイプ ( ミニゲル ) なら最大 15well(15 μl) Criterionタイプ ( ワイドゲル ) なら最大 26well(15 μl) に対応します サンプル数が多い場合は Criterionサイズで一度に泳動後 1 枚のメンブレンでウェスタンブロッティングの検出を行うことで 目的タンパク質の発現量比較などより精度の高い実験を行うことが可能です 7.2 cm 8.7 cm 8.6 cm ミニプロティアンタイプ ( ミニゲルサイズ ) ユニークなゲル濃度 AnykD 13.3 cm Criterion タイプ ( ワイドゲルサイズ ) ゲル濃度と参考分離パターン 均一濃度ゲル (10%) なのにグラジェントゲルのような分離 100 kda 以下の分離に最適生体内タンパク質の主要な部分を占める100 kda 以下を広く分離できるようにデザインされています ペプチド領域まで分画範囲をカバー低分子まで見ることができるので ペプチドサイズの分離 確認用にも使用できます ペプチド領域の確認には泳動後に TCA 固定などの処理が必要な場合があります ユニークなコームと豊富なウェル数 10well Deep ウェル ( ミニプロティアンタイプ ) ミニゲルでももっとたくさんのサンプル量を泳動したい そんな時は 10well Deepをお選びください サンプルを最大 50 μlアプライ可能より多くのサンプル量をアプライできるので タンパク質濃度が薄いサンプルや目的タンパク質の量が少ない場合に有効です ワイドゲル12ウェル 26ウェル (Criterionタイプ) できるだけ量を流したい 多サンプルを一枚で泳動したい そんな時はCriterion 12ウェルフォーマット 26ウェルフォーマットをお選びください 12ウェルなら最大 45 μlアプライ可能しかもスタンダード用ウェルがさらに両端に2つついています 10ウェルフォーマットと同じ幅横幅はそのままに ウェルが高くなっているので より濃縮したバンドが形成されます 検出時の感度アップにつながります 10well Deep 12 + 2 WELL 45ul + 15ul 12+2well 15 μlのサンプルを26ウェル同時に泳動 26ウェルタイプなら一枚のゲルで26サンプル同時に泳動が可能です 多サンプルを同時に比較したいウェスタンブロッティングやクロマトグラフィーフラクションチェックに有効です 8 連 12 連マルチチャンネルピペットのピッチにも対応しているので サンプルアプライを楽に行えます 26 WELL 15ul 通常の 10well 26well 6 電気泳動 & ウェスタンブロッティング
サンプル調製電気泳動 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 Stain-Freeテクノロジー染色せずにタンパク質を可視化 電気泳動後の泳動パターン確認は 染色による泳動結果の確認以外にも ブロッティング前の泳動状態の確認 ブロッティング状態の確認の点においても非常に重要なステップです バイオ ラッドのStain-Freeテクノロジーは 染色色素による染色や固定操作をすることなくタンパク質を可視化できる新しい泳動パターン確認ツールです Stain-Free 原理 ( イメージ図 ) COOH トリハロ化合物 蛍光 トリハロ化合物 Trp H O NH トリハロ化合物 UV H O NH UV H O NH NH2 ゲル中のタンパク質 タンパク質中のトリプトファン残基とゲル中に含まれるトリハロ化合物 タンパク質のトリプトファンとゲル中のトリハロ化合物が結合する 修飾されたトリプトファンが UV 照射により蛍光を発する エピトープ部位 もしくは近傍にトリプトファンを含む抗体によるウェスタンブロッティング検出では 抗体反応に影響が出る場合があります 検出感度は CBB 以上 CBB 染色と同等以上の検出感度でタンパク質バンドを確認できます 高い検出再現性ゲルの中で結合反応が起きるため ゲルの外から色素を染み込ませる方法に比べ 非常に高い再現性でタンパク質バンドの確認 定量ができます Stain-Free ゲルの UV によるタンパク質検出 CBB 染色によるタンパク質検出 タンパク質スタンダードを段階希釈し泳動を行った (4-20%Stain-Free ゲル ) 泳動後 UV 照射による検出 ( アクティベーション 5 分, 画像取得 1.1 秒 ) または CBB 染色で検出を行った Stain-Free ゲルの UV によるタンパク質検出 CBB 染色によるタンパク質検出 左記の検出の後 β- ガラクトシダーゼのバンドを定量した データは 3 枚のゲルで取得し それぞれをプロットした タンパク質組成 ( トリプトファン含量 ) による さらに有効な応用例として 定量ウェスタンV3ワークフロー を22ページに掲載しています ウェスタンブロッティング用ローディングコントロールとしての利用 近年 ウェスタンブロッティングのデータ補正には より安定した総タンパク質量を用いることが推奨されています Stain-Freeを用いれば 染色することなく泳動後のゲルに UV 照射するだけで メンブレン上の総タンパク質量を簡単に求めることが可能です 図 4 通常通りサンプル調製し 電気泳動 泳動後のゲルに UV 照射し 電気泳動パターンの確認 ミニプロティアンゲルシリーズその他ゲルラインアップ 転写後のメンブレンに UV を当て 転写状態の確認 ソフトウェアでレーン中のバンド強度の総和を求める この値を補正用データとして利用する ミニプロティアン Peptide ゲル ミニプロティアン TBE ゲル ミニプロティアン TBE Urea ゲル Tris/Tricine 系バッファーを使用するペプチド分離用ゲル ペプチド領域の分離に対応した16.5% ゲル ウェル数は 4 種類 10well(30 μl) 10wellDeep(50 μl) 12well(20 μl) 15well(15 μl) 16.5% TBEバッファーを使用するDNA 分離用ゲル 50 2,000 bpに対応した5% ゲル ウェル数は4 種類 10well(30 μl) 10wellDeep(50 μl) 12well(20 μl) 15well(15 μl) 本ゲルは製造後 3ヶ月の使用期限です TBE Urea 組成のssDNAやRNA 分離用ゲル 20 1,000 bpの分離に対応した10% ゲル 15 120 bpの分離に対応した15% ゲル ウェル数は 2 種類 10well(30 μl) 15well(15 μl) 本ゲルは製造後 3 ヶ月の使用期限です 10% 15% 本ゲルは製造後 3 ヶ月の使用期限です www.bio-rad.com 7
サンプル調製電気泳動 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 ミニプロティアンゲル仕様 ゲル ポリアクリルアミド ゲルサイズ 6.7 8.6 cm (H W) ゲル厚 1.0 mm カセットサイズ 8 10 0.46 cm (H W T) 保存条件 2-8 ( 水平状態 凍結厳禁 ) 電気泳動槽 ミニプロティアンTetraセル ミニプロティアン3セル 使用期限 製造後 1 年 ( ラベルに記載 ) Criterionゲル仕様 ゲル ポリアクリルアミド ゲルサイズ 8.7 13.3 cm (H W) ゲル厚 1.0 mm カセットサイズ 10.6 15.0 0.53 cm (H W T) 保存条件 2 ~8 ( 水平状態 凍結厳禁 ) 電気泳動槽 Criterionセル 使用期限 製造後 1 年 ( ラベルに記載 ) Ordering Information ミニプロティアン TGX ゲル ミニプロティアンTGXゲルウェル容量 :10well (30 μl) 10well Deep (50 μl) 12well (20 μl) 15well (15 μl) IPG/Prep (7 cm IPGstrip or 450 μl) 価格 10 枚パック 19,600 30 枚パック 55,800 50 枚パック 88,000 品名 10well 10 枚 10well Deep 10 枚 12well 10 枚 15well 10 枚 IPG/Prep 10 枚 保存 ミニプロティアンTGXゲル 7.5% 4561023 4561024 4561025 4561026 4561021 4 ミニプロティアンTGXゲル 10% 4561033 4561034 4561035 4561036 4561031 4 ミニプロティアンTGXゲル 12% 4561043 4561044 4561045 4561046 4561041 4 ミニプロティアンTGXゲル 4 15% 4561083 4561084 4561085 4561086 4561081 4 ミニプロティアンTGXゲル 4 20% 4561093 4561094 4561095 4561096 4561091 4 ミニプロティアンTGXゲル 8-16% 4561103 4561104 4561105 4561106 4561101 4 ミニプロティアンTGXゲル Any kd 4569033 4569034 4569035 4569036 4569031 4 30 枚のご注文は456XXXXB03( 末尾にB03を付加 ) 50 枚のご注文は456XXXXB05( 末尾にB05を付加 ) にてお願いいたします ミニプロティアンゲルをカセットから取り出す際には 別売のTGXオープニングレバー 4560000( 500) が必要となります ミニプロティアンTGX Stain-Freeゲルウェル容量 :10well (30 μl) 10well Deep (50 μl) 12well (20 μl) 15well (15 μl) IPG/Prep (7 cm IPGstrip or 450 μl) 価格 10 枚パック 20,600 品名 10well 10 枚 10well Deep 10 枚 12well 10 枚 15well 10 枚 IPG/Prep 10 枚 保存 ミニプロティアンTGX Stain-Freeゲル 7.5% 4568023 4568024 4568025 4568026 4568021 4 ミニプロティアンTGX Stain-Freeゲル 10% 4568033 4568034 4568035 4568036 4568031 4 ミニプロティアンTGX Stain-Freeゲル 12% 4568043 4568044 4568045 4568046 4568041 4 ミニプロティアンTGX Stain-Freeゲル 4-15% 4568083 4568084 4568085 4568086 4568081 4 ミニプロティアンTGX Stain-Freeゲル 4-20% 4568093 4568094 4568095 4568096 4568091 4 ミニプロティアンTGX Stain-Freeゲル 8-16% 4568103 4568104 4568105 4568106 4568101 4 ミニプロティアンTGX Stain-Freeゲル Any kd 4568123 4568124 4568125 4568126 4568121 4 ミニプロティアンゲルをカセットから取り出す際には 別売のTGXオープニングレバー 4560000( 500) が必要となります Ordering Information Criterion TGX ゲル Criterion TGXゲルウェル容量 :12+2well (45 μl) 18well (30 μl) 26well (15 μl) IPG+1(11 cm IPGStrip) Prep+2 (800 μl) 価格 4 枚パック 11,200 10 枚パック 26,600 品名 12+2well 10 枚 18well 10 枚 26well 10 枚 IPG+1 10 枚 PREP+2 10 枚 保存 Criterion TGXゲル 7.5% 5671023J10 5671024J10 5671025J10 4 Criterion TGXゲル 10% 5671033J10 5671034J10 5671035J10 4 Criterion TGXゲル 12% 5671043J10 5671044J10 5671045J10 4 Criterion TGXゲル 4 15% 5671083J10 5671084J10 5671085J10 5671081J10 5671082J10 4 Criterion TGXゲル 4 20% 5671093J10 5671094J10 5671095J10 5671091J10 5671092J10 4 Criterion TGXゲル 8 16% 5671103J10 5671104J10 5671105J10 5671101J10 5671102J10 4 Criterion TGXゲル Any kd 5671123J10 5671124J10 5671125J10 5671121J10 5671122J10 4 4 枚パックはカタログ番号の末尾をJ04に変更してください Criterion TGX Stain-Freeゲルウェル容量 :12+2well (45 μl) 18well (30 μl) 26well (15 μl) IPG+1(11 cm IPGStrip) Prep+2 (800 μl) 価格 4 枚パック 12,000 10 枚パック 28,500 品名 12+2well 10 枚 18well 10 枚 26well 10 枚 IPG+1 10 枚 PREP+2 10 枚 保存 Criterion TGX Stain-Freeゲル 7.5% 5678023J10 5678024J10 5678025J10 4 Criterion TGX Stain-Freeゲル 10% 5678033J10 5678034J10 5678035J10 4 Criterion TGX Stain-Freeゲル 12% 5678043J10 5678044J10 5678045J10 4 Criterion TGX Stain-Freeゲル 4-15% 5678083J10 5678084J10 5678085J10 5678081J10 5678082J10 4 Criterion TGX Stain-Freeゲル 4-20% 5678093J10 5678094J10 5678095J10 5678091J10 5678092J10 4 Criterion TGX Stain-Freeゲル 8-16% 5678103J10 5678104J10 5678105J10 5678101J10 5678102J10 4 Criterion TGX Stain-Freeゲル Any kd 5678123J10 5678124J10 5678125J10 5678121J10 5678122J10 4 4 枚パックはカタログ番号の末尾をJ04に変更してください Ordering Information その他のゲル ミニプロティアンPeptideゲル / ミニプロティアンTBEゲル ウェル容量 :10well (30 μl) 10well Deep (50 μl) 12well (20 μl) 15well (15 μl) 価格 4 枚パック 13,600 品名 10well 4 枚 10well Deep 4 枚 12well 4 枚 15well 4 枚 保存 ミニプロティアンPeptideゲル 16.5% 4563063B02 4563064B02 4563065B02 4563066B02 4 ミニプロティアンTBEゲル 5% 4565013B02 4565014B02 4565015B02 4565016B02 4 ミニプロティアンTBE Ureaゲル 10% 4566033B02 4566036B02 4 ミニプロティアンTBE Ureaゲル 15% 4566053B02 4566056B02 4 ミニプロティアンPeptideゲル TBEゲル およびTBE Ureaゲルは製造後 3ヶ月の使用期限です ミニプロティアンゲルをカセットから取り出す際には 別売のTGXオープニングレバー 4560000( 500) が必要となります 8 電気泳動 & ウェスタンブロッティング
サンプル調製電気泳動 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 TGX ゲルの性能をハンドキャスト ( 自作 ) で実現 TGX FastCast アクリルアミド溶液キット TGXゲル Stain-Freeゲルを簡単に自作できる プレミックスアクリルアミド溶液キットです 7.5% 10% 12% 濃度になるようにあらかじめ調製された溶液を1:1で混ぜるだけで 簡単に しかも30~45 分で泳動用ゲル作成を行えます TGXゲル仕様ですので プレキャストTGXゲルと同じように 高転写効率と高速電気泳動の性質を持ちます また 作成したゲルは1ヶ月保存が可能ですので まとめて作成し4 保存しておき プレキャストゲルの感覚で使用することもできます 1:1で混ぜるだけで 高い再現性のゲル作成が可能 30 分でゲル作成が完了 作成後のゲルは4 で1ヶ月保存可能 プレキャストTGXゲルと同様の高い転写効率 Stain-Freeタイプもラインアップ Resolver 溶液 (A B 各 200 ml) Stacker 溶液 (A B 各 75 ml) 簡単迅速プロトコール Step 1 Step 2 Step 3 Start 分離ゲルの作成濃縮ゲルの作成コームの挿入電気泳動開始 1:1 1:1 Resolver A Resolver B Stacker A Stacker B 重合時間は 30 分 + APS, TEMED + APS, TEMED 水などの重層不要すぐに濃縮ゲル作成へ 比重が違うから混ざらない ~30 秒 視認できるよう Stacker 溶液に色をつけています 長期保存性能 TGXゲルケミストリーを採用しているので 作成後 4 で1ヶ月の保存が可能です 高効率転写 転写効率が高まり ウェスタンの高感度検出につながります Ordering Information アクリルアミド溶液 FastCastアクリルアミドキット カタログ番号 品名 ( 各ミニゲル約 60 枚 ) 価格 カタログ番号 品名 ( 各ミニゲル約 60 枚 ) 価格 1610171 TGX FastCast アクリルアミドキット 7.5% 21,000 1610181 TGX Stain-Free FastCast アクリルアミドキット 7.5% 23,000 1610173 TGX FastCast アクリルアミドキット 10% 21,000 1610183 TGX Stain-Free FastCast アクリルアミドキット 10% 23,000 1610175 TGX FastCast アクリルアミドキット 12% 21,000 1610185 TGX Stain-Free FastCast アクリルアミドキット 12% 23,000 www.bio-rad.com 9
サンプル調製電気泳動 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 使いやすい電気泳動槽 使いやすさにこだわった2 種類の電気泳動槽 ミニプロティアンゲル ( ミニゲル ) 用のミニプロティアンTetraセル Criterionゲル ( ワイドゲル ) 用の Criterionセルからご利用のゲルにあわせてお選びください ミニプロティアン Tetra レディーゲルセル ミニプロティアンTetraレディーゲルセルは 1 台で最大 4 枚のゲルを同時に電気泳動が可能なミニゲルサイズの電気泳動装置です ゲルが1~2 枚の電気泳動では電極アッセンブリを ゲルが3~4 枚の電気泳動では電極アッセンブリとコンパニオンランニングモジュールをセットして使用します 簡単なセッティング泳動槽へのゲルのセッティングが非常に簡単です ( 右図参照 ) プレキャストゲル 自作ゲルともに使用可能ミニプロティアンTetraレディーゲルセル本体はプレキャストゲル 自作ゲルの両方に対応し電気泳動することができます ( 自作ゲルの作成には別途自作モジュールが必要です ) ブロッティング装置にも早変わりミニトランスブロットモジュールを追加購入するだけで ミニゲル用タンク式ブロッティング装置として使用が可能です ゲルのセッティングゲルを電極アッセンブリ ( コンパニオンランニングモジュール ) の下端に置き 両サイドのフレームを閉じるだけです 1-2 枚の電気泳動では 電極アッセンブリのみを使用します 3-4 枚の電気泳動では 電極アッセンブリに加えコンパニオンランニングモジュールを使用します Criterion セル Criterionワイドプレキャストゲルシステムは 新しいコンセプトの縦型スラブ電気泳動システムです JUST 3 STEPS TO RUN 独自のゲルカセット形状とそれを活かした簡単セットアップの泳動槽により 他の電気泳動システムには無い使いやすさと高いパフォーマンスを実現しました ゲルカセットを 1 差し込みます 多彩なウェルタイプ 45 μl 容量の12ウェルタイプから15 μl 容量の26ウェルタイプまで 用途に応じてウェルフォーマットを選択できます 多サンプルでも簡単アプライ 12 18 26wellそれぞれに対応したサンプルローディングガイドを用いれば サンプルのアプライも非常に簡単です ローディングガイド マルチチャンネルピペットに対応していますので サンプルがたくさんある時のアプライに手間がかかりません (12 26well) バッファーを注ぎ 2 サンプルをアプライします フタを閉じて 3 実験スタート! トラブルフリー ゲルカセットと上部バッファーダムが一体化した構造です バッファー漏れの心配がありません 上部バッファー :60 ml/ ゲル 下部バッファー :400 ml/ ゲル ミニプロティアンTetraセル仕様 ゲル枚数 1 4 枚 プレキャストゲル ミニプロティアンゲル 自作用ガラスプレートサイズ (W L) ショートプレート :10.1 7.3 cm アウタープレート :10.1 8.2 cm バッファー使用量 2 枚 700 ml バッファー使用量 4 枚 1,000 ml 標準泳動時間 35 45 分 (200 V 定電圧 ) 推奨パワーサプライ パワーパックBasic or パワーパックHC サイズ (W L H) 12 16 18 cm 重量 1 kg(2.2 lb) 使用例 Criterionセル仕様タンク上部電極下部電極リッドサンプルローディングガイドサイズ (W D H) 使用可能ゲル電圧リミット重量 ポリカーボネートポリカーボネートポリカーボネートポリカーボネートポリカーボネート 22.3 14.4 19.5 cm Criterionゲル専用 600 VDC and 15 W 0.98 kg 10 電気泳動 & ウェスタンブロッティング
サンプル調製電気泳動 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 Ordering Information ミニプロティアン Tetra シリーズ カタログ番号 品名 価格 ミニプロティアンTetraセル 1658005JA ミニプロティアンTetraレディーゲルセル 2 枚用 42,000 構成内容 : 下部バッファー槽 ケーブル付フタ 電極アッセンブリ バッファーダム 1658004JA ミニプロティアンTetraレディーゲルセル 4 枚用 67,000 構成内容 : 下部バッファー槽 ケーブル付フタ 電極アッセンブリ コンパニオンランニングモジュール バッファーダム 1658000JA ミニプロティアンTetraセル 10well, 0.75 mm 4 枚用 110,000 構成内容 : 下部バッファー槽 ケーブル付フタ 電極アッセンブリ コンパニオンランニングモジュール バッファーダム サンプルローディングガイド 10well, 0.75 mm コーム (5) 0.75 mm スペーサー付ガラスプレート (5) ショートガラスプレート (5) ガスケット付キャスティングスタンド(2) キャスティングフレーム(4) 1658001JA ミニプロティアンTetraセル 10well, 1.0 mm 4 枚用 110,000 構成内容 : 下部バッファー槽 ケーブル付フタ 電極アッセンブリ コンパニオンランニングモジュール バッファーダム サンプルローディングガイド 10well, 1.0 mm コーム (5) 1.0 mm スペーサー付ガラスプレート (5) ショートガラスプレート (5) ガスケット付キャスティングスタンド(2) キャスティングフレーム(4) 1658007JA ミニプロティアンTetraセル 10well, 1.5 mm 4 枚用 110,000 構成内容 : 下部バッファー槽 ケーブル付フタ 電極アッセンブリ コンパニオンランニングモジュール バッファーダム サンプルローディングガイド 10well, 1.5 mm コーム (5) 1.5 mm スペーサー付ガラスプレート (5) ショートガラスプレート (5) ガスケット付キャスティングスタンド(2) キャスティングフレーム(4) 1658002JA ミニプロティアンTetraセル 10well, 0.75 mm 2 枚用 95,000 構成内容 : 下部バッファー槽 ケーブル付フタ 電極アッセンブリ バッファーダム サンプルローディングガイド 10well, 0.75 mm コーム (5) 0.75 mm スペーサー付ガラスプレート (5) ショートガラスプレート(5) ガスケット付キャスティングスタンド (1) キャスティングフレーム(2) 1658003JA ミニプロティアンTetraセル 10well, 1.0 mm 2 枚用 95,000 構成内容 : 下部バッファー槽 ケーブル付フタ 電極アッセンブリ バッファーダム サンプルローディングガイド 10well, 1.0 mm コーム (5) 1.0 mm スペーサー付ガラスプレート (5) ショートガラスプレート(5) ガスケット付キャスティングスタンド (1) キャスティングフレーム(2) 1658006JA ミニプロティアンTetraセル 10well, 1.5 mm 2 枚用 95,000 構成内容 : 下部バッファー槽 ケーブル付フタ 電極アッセンブリ バッファーダム サンプルローディングガイド 10well, 1.5 mm コーム (5) 1.5 mm スペーサー付ガラスプレート (5) ショートガラスプレート(5) ガスケット付キャスティングスタンド (1) キャスティングフレーム(2) ミニプロティアン Tetra セル 2 枚用は コンパニオンランニングモジュールを追加することで 4 枚用にすることが可能です ミニプロティアン3/Tetra 用キャスティングモジュール ( ゲル4 枚作成用 ) 66,000 ガスケット付キャスティングスタンド (2) キャスティングフレーム (4) コーム(5) ショートガラスプレート (5) スペーサー付ガラスプレート (5) サンプルローディングガイド 0.75 mm 1.0 mm 1.5 mm 5Well 1658008JA 1658013JA 1658019JA 9Well 1658009JA 1658014JA 1658020JA 10Well 1658010JA 1658015JA 1658021JA 15Well 1658011JA 1658016JA 1658022JA Prep/2-D Well 1658012JA 1658017JA 1658023JA IPG Well ー 1658018JA 1658024JA ミニプロティアン3/Tetra 用キャスティングモジュール ( ゲル2 枚作成用 ) 58,500 各キャスティングモジュールには コーム (5) スペーサー付ガラスプレート (5) ショートガラスプレート (5) キャスティングフレーム (2) キャ スティングスタンド (1) サンプルローディングガイド(1) が含まれます 0.75 mm 1.0 mm 1.5 mm 5well 1653327JA 1653332JA 1653338JA 9well 1653328JA 1653333JA 1653339JA 10well 1653329JA 1653334JA 1653340JA 15well 1653330JA 1653335JA 1653341JA Prep/2-D well 1653331JA 1653336JA 1653342JA IPG well ー 1653337JA 1653343JA 5well Prep/2-D well IPG wellキャスティングモジュールには サンプルローディングガイドは含まれておりません Ordering Information Criterion シリーズ カタログ番号 品名 価格 Criterionセル 1656001 Criterionセル 60,000 構成内容 : 下部バッファー槽 パワーケーブル付フタ サンプルローディングガイド Criterionサンプルローディングガイド (1) 12,000 well 数 12+2well 18well 26well 1656006 1656007 1656008 自作ゲル用 Criterionカセット 1 mm 厚 (10) 21,000 well 数 12+2well 18well 26well Prep+2well IPG+1well 3459901 3459902 3459903 3459904 3459906 www.bio-rad.com 11
サンプル調製 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 ウェスタン実験を強力にサポートする転写装置の新スタンダード トランスブロット Turbo ブロッティングシステム トランスブロットTurboシステムは 電源装置内蔵のトランスブロット本体と熱耐性の高い転写カセット そして専用転写試薬からなる これまでに無い高効率の転写を高速に行えるブロッティングシステムです High Transfer Efficiency: 高効率ブロッティング より多くのタンパク質を より多くメンブレンに転写トランスブロットTurboブロッティングシステムは セミドライ式ブロッティング装置でありながら 高電流を出力できるトランスブロットTurbo 本体と 独自に開発した転写パックを組み合わせて使用することで ゲルからのタンパク質の抜けが非常に効率良くなります トランスブロットTurboの転写 検出結果 (A) とその他手法の一般的条件下での結果 (B,C,D) と比較すると 高感度にウェスタンブロッティングによるシグナル検出が行えることがわかります ゲルから抜け出たタンパク質を逃さない ( 転写パック ) トランスブロットTurboの高効率転写を支える専用転写パックは ゲルからのタンパク質の抜けを良くするだけではなく 転写メンブレン表面にしっかりとタンパク質を保持させる働きもあります バイオ ラッドが独自に開発した専用転写パックは 転写メンブレン 特殊構造のろ紙があらかじめ転写バッファーで平衡化されています この転写バッファー成分により これまで高電場ではメンブレンを通過してしまう低分子タンパク質までも しっかりとメンブレン表面に保持させることができます A. トランスブロット Turbo システム 10 ng 5 ng 2.5 ng 1.25 ng B. タンク式ブロッティングシステム 10 ng 5 ng 2.5 ng 1.25 ng トランスブロット Turbo システム 他社高速ブロッティングシステム C. セミドライブロッティングシステム D. 他社高速ブロッティングシステム 10 ng 5 ng 2.5 ng 1.25 ng 10 ng 5 ng 2.5 ng 1.25 ng 4 つの代表的転写装置比較 トランスフェリン ( 約 80 kda) を Criterion TGX ゲルで分離後 転写を行い検出 転写条件 :A. トランスブロット Turbo システム (25 V 7 min) B. タンク式ブロッティングシステム (100 V 30 min) C. セミドライブロッティングシステム (25 V 30 min) D. 他社高速ブロッティングシステム (P3 7 min) PVDF メンブレン 2 枚目 1 枚目 着色済みタンパク質スタンダードを泳動し 共に 7 分プロトコールで転写 PVDF メンブレンは 2 枚重ねてセットし タンパク質の通過を確認した Turbo: 高速ブロッティング トランスブロットTurboには 4 種類のTurboプロトコール がプリセットされています ゲルの種類 分子量に応じて簡単に選択し すぐに実行できます いずれのプロトコールもトランスブロットTurbo 転写パックの使用が必須です TGX/Turbo プロトコール :3 分プロトコールブロッティング時のタンパク質の抜けが非常に良いミニプロティアン TGX ゲルを使用すれば 最速プロトコール (TGX/Turbo プロトコール ) が使用でき たった 3 分で転写が終了 します 目安分子量は ~50 kda 程度 転写効率はタンパク質の性質により変動します Turboプロトコール : 分子量別転写プロトコール TGXゲル 他社製 / 自作ゲルで使用でき 目的タンパク質の分子量に応じて使い分けが可能です プロトコール名 目安分子量 時間 HIGH MW ~150 kda 10 分 MIXED MW ~100 kda 7 分 LOW MW ~30 kda 5 分 高分子用プロトコール (HIGH MW) は 分子量が大きなタンパク質の転写や 濃度が薄いサンプルの転写に適しています 同時に 比較的小さな分子量のタンパク質もしっかりとメンブレン上に保持するため 全体的に転写効率の向上が期待できます 12 電気泳動 & ウェスタンブロッティング
サンプル調製 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 TURBO PACK TURBO PACK TURBO PACK すぐに使える転写パック ミニゲルなら 4 枚同時処理可能 ターボトランスファーの鍵を握る専用転写パック ろ紙 メンブレンがあらかじめ特殊な転写溶液で平衡化されています また トレーに BOTTOM TOP の印があるので BOT TOM スタック ゲル TOP スタックの順に乗せるだけ ゲル平衡化の必要もありません ミニゲルなら 1 つのカセットに 2 枚設置可能 2 つのカセット使用で最大 4 枚の転写を同時に行えます スモールフットプリント フレキシブル 実験台に置いても邪魔にならない省スペース性 トレーのみを出し入れするので 作業スペースを効率的に使えます プロトコール作成も自由に行え 今までの条件 試薬を使用できます また 2 つのカセットは別々にスタートが可能でさらに実験効率を高めます ( 同一プロトコール ) High Uniformity: 均一な転写 比較定量を行う上で転写均一性は非常に重要です トランスブロットTurboの転写カセットは 独自のロック機構により 電極 ろ紙 メンブレン ゲルのサンドイッチ構造をしっかりと保持します この方式により 電極間距離を短くし 強力な電場を均一にかけることができ 均一性の高いブロットが得られます また 転写中に発生する熱に対する耐性も高くなるよう設計されています トランスブロット Turbo システム 他社高速ブロッティングシステム CV 値 :9% CV 値 :17% メンブレン全体にわたる均一性の高い転写 トランスブロット Turbo 転写カセット バイオ ラッド SDS-PAGE スタンダード (Broad) を Criterion TGX ゲル 4-20% で分離後 推奨プロトコール (7 分 ) でニトロセルロースメンブレンに転写 転写後のメンブレンを蛍光染色し VersaDoc4000MP システムで各バンドを定量し 同一分子量バンドの定量値のバラツキ (CV 値 ) を求めた トランスブロット Turbo システム仕様 プリセットプロトコール 6 ( 種 Turbo Mixed MW Low MW High MW 1.5 mm 厚ゲル Standard SD ) カセット電極 陽極 : プラチナチタン 陰極 : ステンレス ユーザープロトコール 25 個まで保存可能 ( 最大設定可能値 :25 V or 2.5 A 90 min) 操作環境 温度 :15-31 相対湿度 :0-95% ( ただし結露が無いこと ) アラート機能 Power Fail No-load No cassette End of Run 入力電源 100-240 VAC 276 VA 50-60 Hz 175 W Max ディスプレイ 128 64ピクセルモノクロディスプレイ サイズ (W D H) 21.1 26.0 20.4 cm 対応ゲルサイズ 転写パックサイズまたは13.5 8.5 cm 以下 重量 3.6 Kg ( カセット含む ) www.bio-rad.com 13
サンプル調製 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 転写パック自作用キット トランスブロット Turbo 用 RTA キット トランスブロットTurbo 用 RTA(Ready To Assemble) キットは お客様ご自身で転写スタックを作成するキットです ランニングコストを抑えたトランスブロットTurbo 用 RTAキットは 転写パックで使用されているメンブレン ろ紙 転写バッファーがキット化されており 別途エタノールと超純水をご用意いただくだけで 転写パックよりもランニングコストを抑えた転写スタックを準備できます 転写パックで使用されている試薬が使われているので トランスブロットTurboの高速 高効率転写の特長はそのままです また 低蛍光 PVDFメンブレンのキットもあるため 蛍光検出によるウェスタンブロッティングや定量ウェスタンV3ワークフローにも利用でき あらゆるウェスタンブロッティングニーズにお応えできます 転写 検出性能は転写パックと同等 転写パック RTAキット 1Runあたりのコスト比較 RTAキット 転写パック TBT 1 RTA NC (mini) 2 1,155 1,680 TBT RTA PVDF(mini) 1,155 1,680 TBT RTA 低蛍光 PVDF(mini) 1,355 TBT RTA NC(midi) 1,655 2,360 TBT RTA PVDF(midi) 1,655 2,360 TBT RTA 低蛍光 PVDF(midi) 1,955 1. TBT=トランスブロットTurbo ニトロセルロース膜に転写し ケミルミで検出 2. NC=ニトロセルロース mini=ミニゲル用 midi=ミディ (Criterion) ゲル用 実験のヒント ウェスタンに最適な組み合わせ トランスブロット Turbo システムと TGX ゲル ミニプロティアンTGXゲルをトランスブロットTurboブロッティングシステムと組み合わせて使用することで 実験時間が短縮されるだけでなく より高感度な検出が期待できます 一般的セミドライ方式での転写 (15 V 30 分 ) ( バイオ ラッドトランスブロット SD セル ) 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 転写機器の変更 トランスブロット Turbo での転写 (MIXED プロトコール 7 分 ) 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 転写後のゲル転写済み膜転写後のゲル転写済み膜 使用ゲル : A 社 10% プレキャストゲル 使用ゲル : A 社 10% プレキャストゲル Tips すでに検出感度に満足されている方は サンプル量を減らすことでクルードサンプル固有の問題 ( 近接タンパク質によるマスキングやスメアなバンド ) を軽減することが期待できます また 貴重な1 次抗体の希釈率を上げ より経済的に実験を進めることができます 泳動ゲルの変更トランスブロットTurboでの転写 (MIXEDプロトコール 7 分 ) 1 2 3 4 5 6 8 7 1 2 3 4 5 6 8 7 転写後のゲル転写済み膜使用ゲル : ミニプロティアンTGXゲル10% 各社の10% プレキャストゲルを推奨条件で泳動を行い 表記のプロトコールにて転写を行った 泳動後のゲル および転写後のメンブレンはCBB 染色を行い可視化した ( すべて同条件での染色 画像取り込み ) サンプル : 1: プレシジョンPlus All Blueスタンダード 2: プレシジョンPlusスタンダード 3: SDS-PAGEスタンダード (Low) 4: E.coliライセート 5: IgG 6: マグロ抽出物 7: サケ抽出物 8: エビ抽出物 トランスブロット Turbo ブロッティングシステムとミニプロティアン TGX の組み合わせによる さらなる転写効率の改善 14 電気泳動 & ウェスタンブロッティング
サンプル調製 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 Ordering Information カタログ番号 品名 価格 トランスブロットTurboシステム転写パック付 1704150J1 トランスブロットTurbo with PVDF( ミニ ) 280,000 構成内容 : 本体 転写パック PVDF( ミニ ) 1704150J3 トランスブロットTurbo with PVDF( ミニ )&TGX(10% 12w) セット 290,000 構成内容 : 本体 転写パック PVDF( ミニ ) TGXゲル 1704150J5 トランスブロットTurbo with PVDF( ミニ )&TGX(10% 12w)& 泳動槽セット 320,000 構成内容 : 本体 転写パック PVDF( ミニ ) TGXゲル 泳動槽 1704150J2 トランスブロットTurbo with NC( ミニ ) 280,000 構成内容 : 本体 転写パック NC( ミニ ) 1704150J4 トランスブロットTurbo with NC( ミニ )&TGX(10% 12w) セット 290,000 構成内容 : 本体 転写パック NC( ミニ ) TGXゲル 1704150J6 トランスブロットTurbo with NC( ミニ )&TGX(10% 12w)& 泳動槽セット 320,000 構成内容 : 本体 転写パック NC( ミニ ) TGXゲル 泳動槽 1704150J7 トランスブロットTurbo with PVDF( ミディ ) 285,000 構成内容 : 本体 転写パック PVDF( ミディ ) 1704150J8 トランスブロットTurbo with NC( ミディ ) 285,000 構成内容 : 本体 転写パック NC( ミディ ) 1704151 トランスブロットTurbo 転写カセット増設用 (1) 95,000 ゲル種類は変更可能です お問い合わせください 泳動槽はミニプロティアン Tetra レディーゲルセル 2 枚用です トランスブロットTurboシステムRTA 転写キット付 1704270J1 トランスブロットTurbo w/rta NC( ミニ ) 306,000 トランスブロットTurbo 本体 RTA 転写キットNC( ミニ ) 1704272J1 トランスブロットTurbo w/rta PVDF( ミニ ) 306,000 トランスブロットTurbo 本体 RTA 転写キットPVDF( ミニ ) 1704274J1 トランスブロットTurbo w/rta 低蛍光 PVDF( ミニ ) 313,000 トランスブロットTurbo 本体 RTA 転写キット低蛍光 PVDF( ミニ ) 1704271J1 トランスブロットTurbo w/rta NC( ミディ ) 324,000 トランスブロットTurbo 本体 RTA 転写キットNC( ミディ ) 1704273J1 トランスブロットTurbo w/rta PVDF( ミディ ) 324,000 トランスブロットTurbo 本体 RTA 転写キットPVDF( ミディ ) 1704275J1 トランスブロットTurbo w/rta 低蛍光 PVDF( ミディ ) 335,000 トランスブロットTurbo 本体 RTA 転写キット低蛍光 PVDF( ミディ ) トランスブロットTurboベストパッケージ 1704150J10 ベストパッケージ for トランスブロットTurbo PVDF (MINI) 430,500 トランスブロットTurbo with PVDF ( ミニ ) ミニプロティアンTetrasセルレディーゲルセル パワーパックBasic プレシジョンPlus WesternCプロテインパック タンパク質バッファーキット 10XTBS, 10% Tween-20 1 L プロトエレクローディングチップ 1,000 本 ゲルリリーサー 1704150J11 ベストパッケージ for トランスブロットTurbo PVDF (MIDI) 450,000 トランスブロット Turbo with PVDF ( ミディ ) Criterionセル パワーパック Basic プレシジョン Plus WesternCプロテインパック タンパク質バッファーキット 10XTBS, 10% Tween-20 1 L プロトエレクローディングチップ 1,000 本 ゲルリリーサー Expert Careプラン ( 通常の無償保証 1 年間に加え さらに保証期間を延長するプランです ) SVCEC02701 トランスブロットTurbo 保証延長 1 年 30,000 SVCEC02702 トランスブロットTurbo 保証延長 2 年 56,000 転写パック 1704156 トランスブロットTurbo 転写パック PVDF( ミニ ) 7x8.4 cm(10 枚パック ) 16,800 1704156B03 トランスブロットTurbo 転写パック PVDF( ミニ ) 7x8.4 cm(30 枚パック ) 47,500 1704157 トランスブロットTurbo 転写パック PVDF( ミディ ) 8.5x13.5 cm(10 枚パック ) 23,600 1704157B03 トランスブロットTurbo 転写パック PVDF( ミディ ) 8.5x13.5 cm(30 枚パック ) 67,000 1704158 トランスブロットTurbo 転写パック NC( ミニ ) 7x8.4 cm(10 枚パック ) 16,800 1704158B03 トランスブロットTurbo 転写パック NC( ミニ ) 7x8.4 cm(30 枚パック ) 47,500 1704159 トランスブロットTurbo 転写パック NC( ミディ ) 8.5x13.5 cm(10 枚パック ) 23,600 1704159B03 トランスブロットTurbo 転写パック NC( ミディ ) 8.5x13.5 cm(30 枚パック ) 67,000 RTA 転写キット 1704270 トランスブロットTurbo 用 RTA 転写キットNC( ミニ ) 46,000 転写メンブレン (40 枚 ) ろ紙(80セット) 5X 転写バッファー (1 L) 1704272 トランスブロットTurbo 用 RTA 転写キットPVDF( ミニ ) 46,000 転写メンブレン (40 枚 ) ろ紙(80セット) 5X 転写バッファー (1 L) 1704274 トランスブロットTurbo 用 RTA 転写キット低蛍光 PVDF( ミニ ) 54,000 転写メンブレン (40 枚 ) ろ紙(80セット) 5X 転写バッファー (1 L) 1704271 トランスブロットTurbo 用 RTA 転写キットNC( ミディ ) 66,000 転写メンブレン (40 枚 ) ろ紙(80セット) 5X 転写バッファー (1 L 2 本 ) 1704273 トランスブロットTurbo 用 RTA 転写キットPVDF( ミディ ) 66,000 転写メンブレン (40 枚 ) ろ紙(80セット) 5X 転写バッファー (1 L 2 本 ) 1704275 トランスブロットTurbo 用 RTA 転写キット低蛍光 PVDF( ミディ ) 78,000 転写メンブレン (40 枚 ) ろ紙(80セット) 5X 転写バッファー (1 L 2 本 ) www.bio-rad.com 15
サンプル調製 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 ウェスタンブロッティング検証済み抗体 PrecisionAb 抗体 ウェスタンブロッティングに用いる抗体は 分析対象サンプルでの反応性が不明な場合 購入しウェスタンブロッティングによって確認を行う必要があります バイオ ラッドのウェスタンブロッティング検証済み抗体 PrecisionAb 抗体は あらかじめ最大 12 種類の細胞 (Total Lysate) での反応性を確認したもので 文献等で報告されている分子量との確認や一定以上の検出シグナル強度が得られることなどの厳しい基準をクリアーしています 抗体性能は最大 12 細胞株 (total lysate) によりチェック済み ポジティブコントロール付でトライアンドエラー低減 抗体性能検証に使用した推奨プロトコール付 トライアルサイズ (20 μl) もラインアップ ウェスタンブロッティング用抗体の検索は bio-rad-antibody.jp にアクセス PrecisionAb の検出に必要な 2 次抗体はデータシートでご確認ください 検証例 : プロット全体のデータを開示しているため 特異性や内在性タンパク質への反応性を確認できます 比較データ : Jurkat セルライセート中の BCL-2 タンパク質検出を各社抗体を用いて行った A: ウェスタン検出シグナル ( 左 ) と Stain-Free イメージ ( 右 マーカーと総タンパク質 ) B: ウェスタン検出シグナル定量結果 ( 総タンパク量で補正済 ) 同等または高い希釈率で他社製抗体よりも強いシグナルが得られている A Bio-Rad PrecisionAb Vendor S Vendor C kd 75 50 37 20 kd 75 50 37 20 kd 75 50 37 20 B Relative intensity (x 10 6 ) 8 6 4 2 Bio-Rad PrecisionAb Vendor S Vendor C 10 10 10 0 免疫沈降用サンプルのウェスタン検出に最適な 2 次抗体 TidyBlot ウェスタン検出試薬 (HRP 標識済み ) 変性していない抗体のみ認識し結合する2 次抗体 TidyBlotウェスタン検出試薬なら 免疫沈降サンプルや組織抽出液サンプルなど 抗体を含むサンプルの検出時に反応させた1 次抗体に対してのみ結合するので 目的タンパク質のみをバンドとして検出することが可能になります 免疫沈降後のウェスタンブロット検出に最適 変性したIgG 由来の重鎖 軽鎖とは反応しません 幅広い一次抗体に使用可能 従来の二次抗体をTidyBlotに置き換えるだけの簡単操作 2 次抗体の検索は bio-rad-antibody.jp にアクセス TidyBlot の IgG に対する交差性 TidyBlot(Lane 2) および標準的な二次抗体 (Lane 5) ともターゲットタンパク ( 4 6 kda) を検出しているが (Lane 3 6 は一次抗体なしのコントロール ) Lane 5 6 では サンプルに含まれる変性した抗体の H 鎖 (50 kda) と L 鎖 (25 kda) も検出されてしまっている 交差種 モノクローナル抗体 ポリクローナル抗体 Bovine IgG2 Goat IgG2 Human IgG1 IgG2 IgG4 Mouse IgG2a IgG2b IgG3b IgG1 すべて使用可能 Rabbit IgG Rat IgG2c Sheep IgG2 ヤギ抗体 ウサギ抗体 ヒツジ抗体 ( ポリクローナル ) に対する TidyBlot の交差性 : マウス IgG1 への親和性は弱いため ご検討の際は確認試験を行ってください マウス IgG の軽鎖のみ (MCA152P) ウサギ IgG の軽鎖のみ (MCA6003P) に結合する HRP 標識 2 次抗体もございます Ordering Information カタログ番号 品名 価格 保存 V PresicionAb 抗体 100 μl (10 回分 ) 50,000 4 VKT PrecisionAb 抗体 20 μl (2 回分 )+ コントロールライセート 24,000-20 STAR209P TidyBlot WESTERN BLOT DETECTION REAGENT HRP 標識 21,800 4 MCA152P Rat anti Mouse Kappa Light Chain (OX-20)HRP 標識 50,100 4 MCA6003P Mouse anti Rabbit Light Chain (SB62a)HRP 標識 50,100-20 1706515 ヤギ抗ウサギIgG(H+L)HRP 標識 32,000-20 1706516 ヤギ抗マウスIgG(H+L)HRP 標識 32,000-20 抗体の検索や検証データについては http://bio-rad-antibody.jp をご参照願います 16 電気泳動 & ウェスタンブロッティング
サンプル調製 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 高感度ケミルミ検出用試薬 Clarity Western ECL Substrate シリーズ Clarity Western ECL Substrateシリーズは 感度 コストパフォーマンス 使いやすさの3つの要素を兼ね備えた化学発光 ( ケミルミネッセンス ) 検出用試薬です また 常温保存可能なので 室温に戻す手間がなく すぐに使用できます Clarityケミルミ検出試薬シリーズには 超高感度検出用のClarity Max 高感度 および長時間検出用 Clarityの2 種類があります 超高感度検出用 高感度検出用 製品 Clarity Max Western ECL Substrate Clarity Western ECL Substrate 感度 Low-fg レベル Mid-fg レベル 発光時間 約 2 時間 約 24 時間 保存温度 室温 対応検出方法 デジタルイメージング (CCDカメラ等) X 線フィルム 対応メンブレン ニトロセルロース PVDF 低蛍光 PVDF 超高感度検出用 Clarity Max Western ECL Substrate 超高感度検出超高感度検出試薬の中でもトップクラスの検出感度でターゲットを確認できます 高感度 および長時間検出用 Clarity Western ECL Substrate 高感度検出高感度検出 Clarityは他社同等品の中でも より高い感度でターゲットを検出します A Purified IKB alpha, pg 700 470 310 210 140 90 60 40 30 Clarity Max G 社同等品 S G 社同等品 P B 25 20 15 10 Signal-to-noise ratio Clarity Max G 社同等品 S T 社同等品 F [ A] 希釈倍率 T 社同等品 Plus 1 1/2 1/4 Clarity 1 1/2 1/4 T 社同等品 D 1 1/2 1/4 [B] Peak intensity 200 150 100 50 0 T 社同等品 Plus Clarity T 社同等品 D 10.0 5.0 2.5 Total protein load, µg T 社同等品 F 5 ( お客様ご提供データ ) ND T 社同等品 D 0 40 30 Protein per well, pg Clarity と Clarity Max で幅広い検出感度に対応 ルーチンの検出はClarity ターゲット濃度が薄い場合はClarity Max と感度に応じた使い分けが可能です Clarity と Clarity Max の連続使用で無駄の無い検出 Clarityを使用し予想よりも感度が低い検出だった場合に ウェスタンをやり直すことなく Clarity Maxを直接添加しイメージングすることで サンプルを無駄にすることなく 確実な検出データを得ることが可能です Purified IKB alpha, ng 5.3 3.6 2.4 1.6 1.1 0.70 0.47 0.31 0.21 0.14 0.092 0.062 0.041 0.027 0.018 A B Clarity Clarity Max Clarity シリーズの利用で高感度から超高感度まで幅広くケミルミ検出をカバー プレシジョン Plus スタンダードの希釈系列を泳動 転写し StrepTactin- HRP を反応させ Clarity で 5 秒間露出撮影 (A) 後 Clarity Max を添加し再度 5 秒間露出撮影 (B) を行った Ordering Information カタログ番号 品名 価格 保存 1705060 Clarity Western ECL Substrate (200 ml, 約 33 回分 ) 20,000 室温 1705061 Clarity Western ECL Substrate (500 ml, 約 84 回分 ) 40,000 室温 1705062 Clarity Max Western ECL Substrate (100 ml, 約 16 回分 ) 38,000 室温 1705062J1 Clarity Max(100 ml)& Clarity(200 ml) セット 52,500 室温 ミニゲル (60 cm 2 相当 ) 換算 www.bio-rad.com 17
サンプル調製 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 高感度検出を可能にする新しい蛍光標識 2 次抗体 StarBright Blue 700 蛍光標識 2 次抗体 StarBright Blue 700は バイオ ラッドの独自技術により開発された 超高感度な検出を可能にする蛍光色素です 蛍光色素内では複数の機能性ユニットがコンパクトに配列しており 効率的なエネルギー伝達により 一般的蛍光色素に比べ高い蛍光強度を得ることが可能です 強い蛍光による超高感度検出 高い安定性 低い非特異的相互作用 低バックグランドと低自家蛍光干渉 Light-absorbing monomerが470 nm 付近の光 ( 青色 ) のエネルギーを吸収し そのエネルギーをEnergy Transfer monomerに受け渡します Energy transfer monomerはこのエネルギーを非常に効率的に Light-emitting monomerに伝え 最終的に700 nm 付近の蛍光 ( 遠赤 近赤外付近 ) を発します StarBright Blue 700 標識抗体の模式図 StarBright Blue 700 スペクトラム 高品質で高感度なデータを短時間で取得 一般的な蛍光標識 2 次抗体に比べおよそ2 4 倍 超高感度化学発光検出試薬とほぼ同等の感度でターゲットを検出可能です また 蛍光が非常に強いため binning( ビニング 増感のためのピクセル統合処理 ) を行うことなく かつ短時間に高品質なデータを得ることができます 一般的近赤外蛍光色素 StarBright Blue 700 超高感度化学発光検出試薬 製品情報 StarBright Blue 700 標識抗体 推奨希釈倍率 吸収済み生物種 ( 血清 ) ヤギ抗マウスIgG StarBright Blue 700 1:2,500 1:5,000 Bovine, Goat, Human, Rabbit, Rat ヤギ抗ウサギIgG StarBright Blue 700 1:2,500 1:5,000 Bovine, Goat, Human, Mouse, Rat ハウスキーピング検出用蛍光標識抗体 抗 HKP hfab Rhodamine 標識抗体 バイオ ラッド独自のHuCAL 技術を用いて開発された抗 HKP hfab Rhodamine 標識抗体は アクチンやチューブリン GAPDHといったハウスキーピングタンパク質 (HKP) の検出をワンステップで行える 使いやすく特異性の高いモノクローナル抗体です 他目的タンパク質検出の2 次抗体反応時に本抗体を混合して使用します Fc 領域を持たない一本鎖抗体 Rhodamine 標識 HuCAL 技術で合成されたhFAB 抗体なので 併用される2 次抗体との相互作用がほとんどなく また交差性を考慮することなく使用可能です 1 次抗体に Rhodamine が標識されているので 2 次抗体が不要です Fc 一般的な抗体 抗 HKP hfab 抗体 製品情報 抗 HKP hfab Rhodamine 標識抗体 推奨希釈倍率 交差性 抗アクチン hfab Rhodamine 1:1,000 1:10,000 Human, Mouse, Rat 抗チューブリン hfab Rhodamine 1:1,000 1:10,000 Human, Mouse, Rat 抗 GAPDH hfab Rhodamine 1:1,000 1:10,000 Human, Mouse, Rat 18 電気泳動 & ウェスタンブロッティング
サンプル調製 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 蛍光ウェスタンアプリケーション マルチプレックス蛍光ウェスタン StarBright 標識抗体などの蛍光標識抗体を組み合わせて使用することにより 多色による蛍光マルチプレックスウェスタンで複数ターゲットの同時検出 解析が可能です 3-Plex 検出例 Target protein #1:ATG7 Target protein #2:AKR1C2 Anti-Tubulin hfab Rhodamine Antibody Target Protein Primary Antibody Secondary Antibody Exposure Time sec Rabbit anti-human Goat anti-rabbit #1:ATG7 6.9 ATG7(78 kd) IgG StarBright Blue 700 #2:AKR1C2 Housekeeping Mouse anti-human AKR1C2(36 kd) Anti-tubulin hfab Rhodamine Antibody(50 kd) Goat anti-mouse IgG DyLight 800 300 141.9 ATG7をStarBright AKR1C2をDyLight800 Tubulin(HKP) をRhodamineで検出を行うことにより 1 枚のメンブレンから2つのターゲットタンパク質検出データと補正用 Tubulin 検出データを得られる マルチプレックス蛍光ウェスタンの推奨条件 (ChemiDoc Touch MP 3 チャンネル使用時 ) ChemiDoc Touch MPシステムでは 最大 3チャンネルを使用し画像撮影を行えます 3チャンネルをすべて使用する場合は 右記の組み合わせを推奨しています ターゲットタンパク質 1 ターゲット検出 2 次抗体蛍光標識 データ補正用 1 種類 StarBright Blue 700 2 種類 (1 種類 + データ補正用 ) StarBright Blue 700 Rhodamine 標識抗 HKP 抗体またはStain-Freeゲル 3 種類 (2 種類 +データ補正用 ) StarBright Blue 700 ( ターゲット1)2 DyLight 800 ( ターゲット2) Rhodamine 標識抗 HKP 抗体またはStain-Freeゲル 1 ChemiDoc Touch MP システム以外でご利用の場合 適切な光源 フィルターが必要です 撮影感度やクロストークに注意願います 2 感度に差がある場合は 薄いターゲットを StarBright Blue 700 で検出します Ordering Information カタログ番号 品名 価格 保存 StarBright Blue 700 標識 2 次抗体 12004157 ヤギ抗マウスIgG StarBright Blue 700 (5 400 μl) 80,000-20 12004158 ヤギ抗マウスIgG StarBright Blue 700 (1 400 μl) 20,000-20 12004159 ヤギ抗マウスIgG StarBright Blue 700 (1 80 μl) 10,000-20 12004160 ヤギ抗ウサギIgG StarBright Blue 700 (5 400 μl) 80,000-20 12004161 ヤギ抗ウサギIgG StarBright Blue 700 (1 400 μl) 20,000-20 12004162 ヤギ抗ウサギIgG StarBright Blue 700 (1 80 μl) 10,000-20 DyLight 800 標識 2 次抗体 STAR36D800GA Sheep anti Rabbit IgG:Dylight 800 0.1 mg 22,300 4 STAR117D800GA Goat anti Mouse IgG (H/L):DyLight 800 (Multi Species Adsorbed)0.1 mg 22,100 4 STAR74D800GA Goat anti Mouse IgG:Dylight 800 (Rat Adsorbed)0.1 mg 22,300 4 STAR104D800GA Goat F(ab')2 anti Hamster IgG:Dylight 800 0.1 mg 21,500 4 STAR16D800GA Rabbit F(ab')2 anti Rat IgG:Dylight 800 0.1 mg 21,500 4 STAR71D800GA Goat anti Rat IgG:Dylight 800 (Mouse Adsorbed)0.1 mg 22,600 4 STAR8D800GA Rabbit F(ab')2 anti Mouse IgG:Dylight 800 0.1 mg 22,300 4 Rhodamine 標識ハウスキーピング用抗体 ( 交差性 : ヒト マウス ラット ) 12004163 抗アクチン hfab Rhodamine 200 μl 36,000-20 12004164 抗アクチン hfab Rhodamine 40 μl 18,000-20 12004165 抗チューブリン hfab Rhodamine 200 μl 36,000-20 12004166 抗チューブリン hfab Rhodamine 40 μl 18,000-20 12004167 抗 GAPDH hfab Rhodamine 200 μl 36,000-20 12004168 抗 GAPDH hfab Rhodamine 40 μl 18,000-20 その他 各種蛍光ラベル2 次抗体をご用意しています 詳細は http://bio-rad.antibodies.com をご覧ください ブロッティング用メンブレン 蛍光ウェスタンを行う場合 メンブレンが持つ自家蛍光に注意する必要があります 蛍光ウェスタンには低蛍光 PVDFメンブレン もしくはニトロセルロースメンブレンの使用を推奨しています Ordering Information カタログ番号品名 価格保存 蛍光 / ケミルミウェスタン対応低蛍光 PVDFメンブレン 1620260 低蛍光 PVDFメンブレン / フィルターペーパーセット 7 8.4 cm, 10セット 17,500 室温 1620261 低蛍光 PVDFメンブレン / フィルターペーパーセット 7 8.4 cm, 20セット 32,500 室温 1620262 低蛍光 PVDFメンブレン / フィルターペーパーセット 8.5 13.5 cm, 10セット 26,500 室温 1620263 低蛍光 PVDFメンブレン / フィルターペーパーセット 8.5 13.5 cm, 20セット 47,500 室温 1620264 低蛍光 PVDFメンブレン 28 380 cm, 1ロール 171,000 室温 トランスブロット Turbo 用転写メンブレンは p15 をご覧ください カタログ番号品名 価格 保存 蛍光 / ケミルミウェスタン対応ニトロセルロースメンブレン 1620146 ニトロセルロースメンブレン (0.2 μm)7 8.4 cm, 10セット 8,000 室温 1620168 ニトロセルロースメンブレン (0.2 μm)8.5 3.5 cm, 10セット 14,500 室温 1620112 ニトロセルロースメンブレン (0.2 μm)30 350 cm, 1ロール 55,000 室温 ケミルミ検出対応 PVDFメンブレン 1620174 イミュンブロット PVDFメンブレン 7 8.4 cm, 10 枚 14,000 室温 1620177 イミュンブロット PVDFメンブレン 26 330 cm, 1ロール 64,000 室温 1620186 シーケブロット PVDFメンブレン 7 8.4 cm, 10 枚 16,000 室温 1620184 シーケブロット PVDFメンブレン 26 330 cm, 1ロール 67,000 室温 www.bio-rad.com 19
サンプル調製 1 電気泳動 2 ブロッティング 3 検出 解析 4 ベスト イン クラスのウェスタンブロッティング撮影装置 ChemiDoc Touch MP イメージングシステム ChemiDoc Touch MPイメージングシステムは 高感度かつ高解像度イメージングを両立する最新式冷却 CCDカメラを搭載し 化学発光や蛍光を用いたウェスタンブロッティングの撮影に最適です 高解像度検出を可能にする可動式カメラによる自動ズーム機能 撮影にPCが不要な本体タッチパネルでのコントロール 直感的な操作が可能なシンプル画面設計など 高品質なデータを誰でも簡単に得られるよう設計されています 超高感度な化学発光検出に対応 蛍光ウェスタン検出にも最適化 Multi Purposeに使えるスマートトレイテクノロジー採用 3 x 10 7 2.5 x 10 7 2 x 10 7 ChemiDoc Touch Imager A Imager B Imager C ChemiDoc Touch Imaging System 15 sec exposure Imager A 15 sec exposure 高感度化学発光検出 Band intensity 1.5 x 10 7 Imager B 15 sec exposure 高感度センサーにより 従来のCCDカメラタイプの撮影装置と比べ極めて高い検出感度でケミルミ撮影を可能にします 1 x 10 7 5 x 10 6 0 1 2 3 実サンプルを用いケミルミ撮影を行った際のケミルミ撮影画像およびバンド強度比較例 Imager C 15 sec exposure 1 2 3 高感度蛍光検出 & マルチプレックス検出 新しい高感度検出用蛍光色素 StarBright Blue 700 標識抗体も最適条件で検出でき 超高感度ケミルミ検出に匹敵する高感度蛍光ウェスタンを行えます 蛍光標識抗体を組み合わせることで 1 枚のメンブレンから複数のターゲットタンパク質を同時に検出することが可能になります Target A(StarBright Blue 700) StarBright B700 露光時間 8.6 秒 Target B(Cy3) 基質 :Clarity(Low-fgレベル) 露光時間 169 秒サンプル :Jurkat cells treated with TPA at 200nM 1 次抗体 :Phosopho-p44/42 MAPK(Erk1 2)(Thr202/Tyr204)(E10)Mouse mab メンブレン : 低蛍光 PVDFメンブレン StarBright B700と化学発光検出比較例 Target C(DyLight 800) 3 種類のターゲットタンパク質をそれぞれ異なる蛍光色素を用い検出した例画像のご提供 :Dr. James Smyth, Virginia Tech Carilon Research Institute ゲルの撮影から切り出しまで対応 トランスイルミネーターが標準装備されているため 透過光によるゲル撮影や切り出しに対応 また トレイを変えることで様々なアプリケーションに柔軟に対応します 対応アプリケーション Blot/UV/Stain-Freeトレイ White トレイ Blue トレイ 標準品オプション品オプション品オプション品 UV シールド ケミルミ Ethidium bromide SYPRO Ruby Oriole GelRed SYBR 系染色剤 TGX Stain-free ゲルなど CBB Silver Zinc Copper など Gel Green SYBR 系染色剤など 引き出し式 UV トランスイルミネーターに UV シールドをセットすることでゲルの切り出しに対応可能 Ordering Information カタログ番号 品名 価格 17001401JA ChemiDoc Touchイメージングシステム ( ケミルミ対応 ) 4,900,000 17001402JA ChemiDoc Touch MPイメージングシステム ( ケミルミ 蛍光対応 ) 7,900,000 ChemiDoc Touch MP イメージングシステムの詳細や仕様 その他システムについては 装置カタログをご参照ください 20 電気泳動 & ウェスタンブロッティング
その他転写装置 / パワーサプライ ミニトランスブロットセル タンク式転写装置のスタンダード 低分子から高分子まで均一な転写 長時間転写が可能 最大 2 枚 ( ミニゲル ) の転写 Tetraセルと共通のバッファー層 トランスブロット SD セル セミドライブロッティング装置のロングセラー 強い電場で短時間で高い転写効率 少量の転写バッファーでエコな転写 ミニゲルなら最大 4 枚同時転写可能 ~100 kdaのタンパク質の転写に最適 Criterion トランスブロットセル 転写効率とスループットを両立する転写装置 6( オプション ) 1 2 電極はワイヤーかプレートを選択可能 プレート電極による密な電場で高い転写効率 5 最大 4 枚 ( ミニゲル ) もしくは2 枚 ( ミディゲル ) の転写 アッセンブルトレイで簡単にセットアップ 1. フタ付下部バッファー槽 2. ゲル / ブロットアッセンブリートレイ 1704089 ローラー 1651279 ファイバーパッド 1704086 ゲルホルダーカセット 1704080 3. ワイヤー電極 4. プレート電極 5. シールドアイスクーリングユニット 1704087 6. クーリングコイル ( オプション ) 1704076 4 3 Ordering Information カタログ番号 品名 価格 ミニトランスブロットセル & システム 1703930JA ミニトランスブロットセル 92,000 構成内容 : バッファー槽 (1) ケーブル付フタ(1) セントラルコアアッセンブリ(1) ゲルホルダー(2) バイオアイスクーリングユニット (1) ファイバーパッド(4) 1703935JA ミニトランスブロットモジュール 76,000 構成内容 : セントラルコアアッセンブリ (1) ゲルホルダー(2) バイオアイスクーリングユニット(1) ファイバーパッド(4) トランスブロットSDセル & システム 1703940JA トランスブロット SD セル 140,000 構成内容 : 本体 フィルターペーパー ( 極厚 )7 8.4 cm(60 枚 ) 8.6 13.5 cm(60 枚 ) 14 16 cm(30 枚 ) 19 18.5 cm(30 枚 ) Criterion トランスブロットセル & システム 1704070JA Criterion プレートトランスブロットセル 115,000 構成内容 : フタ プレート電極付下部バッファー槽 (1) ゲルホルダーカセット(2) ゲル/ ブロットアッセンブルトレイ (1) ファイバーパッド (4) ローラー(1) アイスクーリングユニット(1) フィルターペーパー 1704071JA Criterion ワイヤートランスブロットセル 100,000 構成内容 : フタ ワイヤー電極付下部バッファー槽 (1) ゲルホルダーカセット(2) ゲル/ ブロットアッセンブルトレイ (1) ファイバーパッド (4) ローラー(1) アイスクーリングユニット(1) フィルターペーパー パワーパックシリーズ 電気泳動用パワーサプライ パワーパック シリーズは SDS-PAGEやウェスタンブロッティングから 等電点電気泳動などの高電圧が要求されるアプリケーションまで 様々な実験に応えます 出力範囲 出力機能 特長 電圧電流電力 ミニゲル電気泳動なら ブロッティングなら 高電圧アプリケーションなら 電気泳動もブロッティングも楽々こなす パワーパック Basic パワーパック HC パワーパック HV パワーパック Universal 10-300 V 4-400 ma 75 W( 最大 ) 定電圧定電流 最適スペックで低価格軽量 コンパクト 5-250 V 0.01-3.0 A 1-300 W 定電圧定電流定電力幅広いスペックで低価格プログラム機能付 20-5,000 V 0.01-500 ma 0.1-400 W 定電圧定電流定電力 10-500 V 10-2,500 ma 1-500 W 定電圧定電流定電力 高電圧のアプリケーションに対応様々なアプリケーションに対応プログラム機能付プログラム機能付温度コントロールが可能 ( オプション ) ブロッティングをご検討されている場合は パワーパック HC またはパワーパック Universal をご選択ください Ordering Information カタログ番号 品名 価格 1645050JA パワーパック Basic 98,000 1645052 パワーパック HC 150,000 1645056JA パワーパック HV 330,000 1645070JA パワーパック Universal 250,000 www.bio-rad.com 21
ウェスタンブロッティングデータ補正 定量ウェスタン V3 ワークフローより正確なデータを得るための簡単総タンパク質補正プロトコール Stain-Free を用いたシンプル かつ迅速なワークフロー Stain-Freeテクノロジーは ゲル中やメンブレン上の総タンパク質を素早く蛍光検出することができ ウェスタンブロッティングにおける サンプル間のデータノーマライズに使用することが可能です 本ワークフローによりウェスタンブロッティング実験の正確性と信頼性が向上し 時間の節約を可能にします また メンブレン上のタンパク質の検出で得られる総タンパク量 ( レーンのシグナル強度の総和 ) は そのままローディングコントロールとして使用でき 目的タンパク質の発現量補正に使用できます Workflow Benefit 電気泳動 1 ミニプロティアンセル Criterion セル 電気泳動 ( 15 分 ) Stain-Free TGX( プレキャストゲルまたは FastCast 自作ゲル ) を用いた電気泳動 Stain-Free TGX ゲル 泳動状態の確認 泳動状態の確認 ( 1 分 ) 2 ChemiDoc Touch MPシステムによりゲルを撮影することで泳動状態を確認します CBB 染色と近い検出感度でバンドの状態を確認 ChemiDoc Touch MP システム 転写前のゲル中のタンパク質を可視化 することが可能です 転写 転写 ( 3 分 ) 3 トランスブロット Turboを用いた転写は最速 3 分でメンブレンへの転写を可能にします ミニゲルは最大 4 枚まで同時に転写可能です トランスブロット Turbo 転写の確認 転写の確認 ( 2 分 ) 4 ChemiDoc Touch MPシステムにより転写されたメンブレンを撮影することで 転写状態を確認します 転写後のゲルを撮影することで ゲルからのタンパク質 ChemiDoc Touch MP システム メンブレン上に転写されたタンパク質を確認 の抜け具合を確認することもできます 抗原抗体反応 ( 5 時間 ) 化学発光検出 / 蛍光検出およびデータノーマライズ ( データ補正 ) 転写の確認 ( 2 分 ) 5 ChemiDoc Touch MP システム 化学発光 / 蛍光により目的タンパク質を検出 定量 抗原抗体反応後のメンブレン上の総タンパク質を検出 定量 ChemiDoc Touch MPシステムにより 抗原抗体反応後のメンブレンを撮影することで データノーマライズ用総タンパク質を検出 ChemiDoc Touch MPシステムにより目的タンパク質を化学発光検出または蛍光検出 ImageLab ソフトウェアにより総タンパク質量を用い サンプル間のデータノーマライズを行い 目的タンパク質の発現量を数値化します 22 電気泳動 & ウェスタンブロッティング
総タンパク質量を用いたデータノーマライズ Stain-Freeテクノロジーを用いたデータノーマライズ法は 従来のハウスキーピングタンパク質 (HKP) の代わりに 総タンパク質を用いてデータ補正を行います 本方法では ストリッピングやリプローブなどの操作をする必要がないため これらの操作によりもたらされるエラーや操作の煩雑性を改善し 安定したデータノーマライズを行うことが可能です 近年 JBCなどの学術誌において HKPの発現量や検出値について安定性に疑問があるため ウェスタンブロッティングのデータは総タンパク質量による補正が望ましいとされています β -actin β -tubulin や GAPDH のようなハウスキーピングタンパク質 (HKP) は サンプルによって過剰発現しているケースがあり データ補正を行う上で充分なダイナミックレンジの確保が難しい場合があります また HKP は様々な刺激や状態の変化によっても発現量が大きく変動することが報告されており データ補正を行う上で必ずしも最適な方法ではありません 一方 Stain-Free テクノロジーを用いた総タンパク質量は 直線性のあるワイドなダイナミックレンジで確保することが可能です そのため HKP によるデータ補正における問題を改善し 様々なターゲットに対しても定量性のあるデータノーマライズを安定的に行うことができます 1 Relative signal intensity of protein bands HKPおよび総タンパク質 (Stain-Free) による定量性比較 Stain-Free による総タンパク質定量は ハウスキーピングタンパク質よりも正確かつ幅広いダイナミックレンジで信頼性が高く ローディングコントロールとして優れています 6 5 4 3 2 1 Stain-free b-actin GAPDH b-tubulin Quantitative response 0 0 10 20 30 40 50 60 HeLa lysate load, µg HeLa 細胞 10-50 μgをアプライした際の Stain-free による総タンパク質の定量性 および 3 種類のハウスキーピングタンパク質を検出した場合の定量性比較 2 H K P および総タンパク質 ( S t a i n - F r e e ) によるデータ補正比較ローディング量を変えて各種キナーゼタンパク質をウェスタンで検出定量を行った 本来 相対的発現量は変わらないはずですが アクチンでは補正が正確に行われず 発現レベルが上昇したデータとなってしまう 一方 総タンパク質量ではローディング量の違いを補正でき 正しい結果が得られます MEK Akt Erk b-actin HeLa lysate load, µg 50 40 30 20 10 Signal intensity (artificial units) 2.5 2 1.5 1 0.5 アクチンを用いてノーマライズされたキナーゼタンパク質の発現レベル 0 10 40 HeLa lysate load, µg 2.5 総タンパク質量を用いてノーマライズされたキナーゼタンパク質の発現レベル Stain-free blot image Signal intensity (artificial units) 2 1.5 1 0.5 0 10 40 HeLa lysate load, µg Stain-Free 総タンパク質もしくはアクチンによりノーマライズされたキナーゼタンパク質発現レベルの比較 M E K( ),A k t( ),E r k( ) データが適切にノーマライズされた場合 キナーゼタンパク質の発現レベルは変化しないはずです Expected Value( ) http://www.jbc.org/site/misc/ifora.xhtml#blots www.bio-rad.com 23
電気泳動 ウェスタン用プレミックスバッファー Ordering Information カタログ番号 品名 価格 保存 サンプル処理バッファー 1610747 4 Laemmliサンプルバッファー 10 ml 6,500 室温 1610747B02 4 Laemmliサンプルバッファー 10 ml 2 12,000 室温 1610739 トリシンサンプルバッファー 30 ml 7,500 室温 1610710 2-メルカプトエタノール 25 ml 8,000 室温 1610610 ジチオトレイトール 1 g 10,000 4 泳動バッファー 1610732 10 トリス / グリシン /SDS 1 L 8,500 室温 1610732B02 10 トリス / グリシン /SDS 1 L 2 15,000 室温 1610772 10 トリス / グリシン /SDS 5 Lキューブ 30,000 室温 1610744 10 トリス / トリシン /SDS 1 L 17,000 室温 カタログ番号 品名 価格 保存 ウェスタン関連バッファー 1610734 10 トリス / グリシン 1 L 7,500 室温 1610734B02 10 トリス / グリシン 1 L 2 13,000 室温 1610771 10 トリス / グリシン 5 Lキューブ 24,000 室温 1706435 10 TBS 1 L 7,000 室温 ブロッキング剤 1610782 1 TBS/1% カゼイン 1 L 26,000 4 1610781 EIAグレード 10% Tween-20 1 L 8,500 室温 1610781B02 EIAグレード 10% Tween-20 1 L 2 15,000 室温 DyLight is a trademark of Thermo Fisher Scientific Inc. ECL is a trademark of GE Healthcare. HuCAL is a trademark of MorphoSys AG. IRDye is a trademark of LI-COR, Inc. Tween is a trademark of ICI Americas Inc. Clarity Max Western ECL Substrate is manufactured by Cyanagen Srl and is the subject of patent application numbers US7855287, EP1950207, US9040252, AU2011202658, CA2742025, US8129136, and EP1962095, together with other equivalent granted patents and patent applications in other countries like CN102313732. Precision Plus Protein Standards are sold under license from Life Technologies Corporation, Carlsbad, CA for use only by the buyer of the product. The buyer is not authorized to sell or resell this product or its components. バイオ ラッドラボラトリーズ株式会社 取扱店 ライフサイエンス www.bio-rad.com 本 社 140-0002 東京都品川区東品川 2-2-24 TEL:03-6361-7000 大阪営業所 532-0025 大阪市淀川区新北野 1-14-11 TEL:06-6308-6568 福岡営業所 812-0013 福岡市博多区博多駅東 2-5-28 TEL:092-475-4856 学術的お問い合わせは TEL:03-6404-0331 価格 ( 税抜き ) 仕様は2017 年 9 月現在のもので 予告なく変更することがあります 本カタログに記載されている会社名 商品名は各社の商標または登録商標です C10615L 1709B