Agilent BioHPLC HPLC/UHPLC /

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ちえこゆのもと
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1 Agilent BioHPLC HPLC/UHPLC /

2 HPLC/UHPLC ( Å Å ) BioHPLC MPa.. µm UHPLC Poroshell ( )

Agilent AdvanceBio RP-mAb : AdvanceBio RP-mAb

3 Agilent AdvanceBio RP-mAb : AdvanceBio RP-mAb Poroshell mab Agilent AdvanceBio :.7 µm C AdvanceBio Agilent Poroshell : Agilent ZORBAX RRHD Å. µm : MPa UHPLC Agilent ZORBAX Å. µm : HPLC. µm Agilent PLRP-S : ph HPLC PLRP-S : AdvanceBio RP-mAb mab AdvanceBio 7 Poroshell ZORBAX RRHD ZORBAX StableBond ph 7 PLRP-S /

4 HPLC LC HPLC/UHPLC 6 MPa ( Å) mab mab AdvanceBio RP-mAb Å mabs. µm SB-C C ZORBAX Å. µm RRHD SB-C RRHD SB-C RRHD SB-C RRHD -Diphenyl ZORBAX Å. µm SB-C SB-C SB-C SB-CN ZORBAX Å Extend-C Poroshell C mab ph USP L6 StableBond C Agilent 9 Infinity LC MPa High Definition. µm mm mm StableBond C StableBond C CN ph. ph Poroshell SB-C SB-C SB-C Extend-C AdvanceBio Poroshell HPLC Å Poroshell DNA PLRP-S PLRP-S Å Å Å Å / PLRP-S Å / PLRP-S Å PLRP-S Å DNA/ PLRP-S Å ZORBAX (AAA) OPA FMOC HPLC UHPLC

5 ADVANCEBIO RP-mAb mabs Agilent AdvanceBio RP-mAb QA/QC Poroshell AdvanceBio RP-mAb : LC ( Å) (. µm) mab : ( ) : Poroshell µm : SB-C C 6 AdvanceBio RP-mAb C x mm. µm A:. % TFA IPA (9:) B: IPA:ACN: A (7::). ml/ % B 9 % B % B Creative Biolabs Variant IgG ( mg/ml) µl C UV nm. AdvanceBio RP-mAb C IgG Agilent AdvanceBio AdvanceBio RP-mAb C 他社カラム C, Å,. µm 他社カラム C, Å,.6 µm 他社カラム C, Å,.6 µm :. x mm. µm A:. % TFA IPA (9:) B: IPA:ACN: A (7::) : : : : :. ml/ % B 9 % B % B Creative Biolabs Variant IgG ( mg/ml) µl C UV nm. AdvanceBio RP-mAb mab

6 mab AdvanceBio RP-mAb QC ( ) IgG AdvanceBio RP-mAb AdvanceBio RP-mAb Poroshell AdvanceBio RP-mAb x mm. µm A:. % TFA IPA (9:) B: IPA:ACN: A (7::). ml/ % B 9 % B % B Creative Biolabs Variant IgG ( mg/ml) µl C UV nm. AdvanceBio RP-mAb Poroshell AdvanceBio RP-mAb SB-C :. MPa x mm. µm A:. % TFA B: - ACN: A (::). ml/ % B 9 % B % B Creative Biolabs Fc/Fab Variant IgG ( mg/ml) µl 6 C UV nm.advancebio RP-mAb 6

7 ADVANCEBIO ペプチドマッピングカラム解像度を低下させずにペプチドマッピング時間を短縮 Agilent AdvanceBio ペプチドマッピングカラムを使用すると時間を短縮: 全多孔質 HPLC カラムの倍の速度で高分次構造のアミノ酸の修飾を迅速に分離し同定することができます全多孔質カラムのように 6 分も時間がかかることはありません離能の分離を実行しますすべての機器の機能を向上: 内径.6. および. mm のカラムは 6 MPa まで使え UHPLC 装置を最大限に活用でこれらの高度なバイオカラムは Åのポアサイズと.7 µm きます従来の MPa の装置でも優れた性能を実現しまの表面多孔質粒子を特徴としており次を目的に設計されてすいます柔軟性を向上: ギ酸移動相を使用することで MS の感度を分析の信頼性を向上: AdvanceBio ペプチドマッピングカラ向上しますム充填剤の各バッチは厳密なペプチド混合物を使用したテストを実施しているため適合性と再現性が確保されており複雑なペプチドマップの主要ペプチドの同定が可能ですペプチド混合物を使用した品質管理テストバイオシミラー EPO のペプチドマップカラム : カラム: AdvanceBio ペプチドマッピング. x mm.7 µm p/n 67-9 流量 :. ml/ 注入量 : µl ºC 検出 : nm グラジエント : A 水 (. % TFA) B ACN (. % TFA) 分 6 % B 6 分 6 9 % B 7 6 温度 : サンプル : Agilent ペプチドマッピング標準混合物 ( ペプチドごとに.. µg/µl) p/n 9 流量:. ml/ 注入量: µl (. mg/ml) 温度: ºC 検出: nm グラジエント: A w n 6 9 % B 6 AdvanceBio ペプチドマッピング. x mm.7 µm p/n ピーク番号 MW 77 成分ブラジキニンフラグメント 7 6 ブラジキニン 6 アンギオテンシン II 67 ニューロテンシン 9 アンギオテンシン I 6 6 ACTH フラグメントレニン 7. 図 6.AdvanceBio ペプチドマッピングカラムを使用することで容易にタンパク質を同定しすべての翻訳後修飾を特定できます PEPTIDE MAPPING STANDARDS Now Available p/n 9- メリチン図. AdvanceBio ペプチドマッピング充填剤の全バッチにテスト用混合物を使用しましたこの混合物には分子量の範囲が 77 Da の種類の親水性疎水性および塩基性ペプチドが含まれますすべてのカラムは低分子プローブを使用したテストにより効率も保証されています x 6 Cpd :.: +ESI ECC Scan Frag=7.V EPOdigestd.d Cpd : Counts vs. Acquisition Time () 図 6a. EPO 消化物 MassHunter Workstation ソフトウェアにより LC/MS TOF の 9 % 配列範囲を達成 7

8 AdvanceBio AdvanceBio 7 AdvanceBio Norm Norm PEP79 Inj. (9 bar) Inj. ( bar) Inj. (97 bar) 6 7 RT ( ) RT ( ) RT ( ) RT ( ) PW PW PW PW B69 Norm Inj. (97 bar) Inj. ( bar) 6 7 RT ( ) RT ( ) RT ( ) RT ( ) PW PW PW PW : AdvanceBio. x mm.7 µm p/n 67-9 :. ml/ : µl : C : nm : A (. % TFA) B ACN (. % TFA) 6 % B. 9 9 % B : Sigma HPLC -Gly-Tyr -Val-Tyr-Val -Met Enk - Angio II - Leu Enk 7.. x mm AdvanceBio

Agilent AdvanceBio.7 µm (>99.99 % SiO ) C AdvanceBio IgG LC/MS x 7..9.9...7.7.6.6........... : AdvanceBio. x mm.

9 Agilent AdvanceBio.7 µm (>99.99 % SiO ) C AdvanceBio IgG LC/MS x : AdvanceBio. x mm.7 µm p/n 69- LC/MS (Agilent 6 Q-TOF) : L/ Vcap: V : V :. ml/ : µl : C : A (. % FA) B ACN (. % FA) % B % B 6 % B. 7 9 % B : Stratagene mab IgG (n=) 9

10 POROSHELL Agilent Poroshell MPa Agilent Poroshell Poroshell RP-HPLC Poroshell Å. µm Å. µm Poroshell µm UHPLC. µm. µm StableBond ph TFA Poroshell

11 . mm Å Poroshell 9. Poroshell. II.. RNase Time () : Poroshell SB-C. x 7 mm µm : A:. % TFA B:.7 % TFA ACN :. ml/ : 7 C : UV nm :. % B : MPa 重鎖軽鎖 IgG の処理 : DTT 6 グリコシル化グリコシル化なし IgG の処理 : DTT ペプチド-N-グリコシダーゼ F 6 IgG の処理 : DTT ペプチド-N-グリコシダーゼ F カルボキシペプチダーゼ-B 6. lgg : ( ) % B.... Poroshell SB-C. x 7 mm µm A:H O-ACN (9:) B:H O-ACN (:9) A B. % TFA ml/l PEG. ml/ 7 C UV nm

12 µm Poroshell.7 µm mm ( ) MPa HPLC Agilent Poroshell Poroshell Poroshell * 6 7 * * C. x mm.7 µm DAD: A.. c. ( 66 kda) A: (. % TFA) B:ACN (. % TFA) C UV nm 9 % B 6. ml/ B-. Agilent.6.6 * 6 7 * 6 7 Poroshell SB-C. x 7 mm µm * Agilent Poroshell A: (. % TFA) B:ACN (. % TFA) C DAD: UV nm 9 % B. ml/. Poroshell SB-C

13 Poroshell HPLC SB-C SB-C SB-C Extend-C c Poroshell SB- C Poroshell SB-C ( ) Poroshell SB-C C Poroshell SB-C µl µl Poroshell SB-C 7, Poroshell SB-C. x 7 mm µm Poroshell SB-C. x 7 mm µm A:. % TFA/H O B:.7 % TFA/ACN. ml/ 7 C. % B UV nm Poroshell SB-C.... Poroshell SB-C C 6 c 6 9. II.. RNase A. B. 6. c A () µl Poroshell SB-C. x 7 mm µm A:. % TFA /H O B:.7 % TFA/ACN. ml/ C. 6 % B % B µl ( ) UV nm µl 6 RT (). Agilent Poroshell SB-C

14 ph. Poroshell Poroshell Extend-C ph ph C SB-C Extend C SB-C SB-C Poroshell. x 7 mm µm A: (. % TFA) B:ACN (. % TFA).7 ml/ C % B. 6 % B gly-tyr. mg/ml. Val-tyr-val. mg/ml. Met-. mg/ml. Leu-. mg/ml. II. mg/ml Time () RNase A mg/ml 7. c mg/ml. mg/ml 9. mg/ml 7 9 Poroshell SB-C. x 7 mm µm /. µl P/N G-67 A:. % TFA HO B:.7 % TFA ACN ml/ % B. 7 C DAD /6 nm ref = / nm

15 ZORBAX RRHD Å. µm MPa ZORBAX RRHD SB-C C C -Diphenyl. µm 9 Infinity LC UHPLC ZORBAX StableBond (C C C) ph (TFA) ph ph C ma ZORBAX RRHD SB-C. x mm. µm mab A:H O:IPA (9:). % TFA B:IPA:ACN:H O (7::). % TFA. ml/ C 9 Infinity LC ( nm) : ( ) % B ma... C C C C C C - UHPLC 7 UV 6. Agilent ZORBAX RRHD SB-C

Å Pursuit XRs Å Pursuit ZORBAX Å. µm. µm RRHD.

99.9.766.9 µl 7. Agilent ZORBAX RRHD SB-C -Diphenyl.

µm (IgG) (. mg/ml) A:. % TFA B: % n- % ACN 9.9 %.

ml/ 7 C UV C Diphenyl ZORBAX RRHD SB-C. x mm. µm.

16 Å Pursuit XRs Å Pursuit ZORBAX Å. µm. µm RRHD. µm UHPLC ZORBAX RRHD :C. x mm 6. MPa µl 7. Agilent ZORBAX RRHD SB-C -Diphenyl. x mm. µm ZORBAX RRHD SB-C -Diphenyl. x mm. µm (IgG) (. mg/ml) A:. % TFA B: % n- % ACN 9.9 %. % TFA % B % B % B. ml/ 7 C UV C Diphenyl ZORBAX RRHD SB-C. x mm. µm.9 MPa 7 9 DAD: A: (. % TFA) B:ACN (. % TFA) % B. 6 % B. ml/ C nm. Agilent High Definition Å. µm ( ) 6

17 ZORBAX Å. µm ph 6 Agilent ZORBAX StableBond Å ZORBAX StableBond ph (TFA ) ph LC/MS ZORBAX StableBond StableBond C C C Extend-C StableBond ( 9 ) ph ZORBAX SB-C % k 残存フェニルヘプタン ZORBAX SB-C 他社 C ZORBAX SB-C.6 x mm µm % B A:. % TFA B:. % TFA - % A % B. ml/ 6 C,,,,, 6, 7,, 移動相の量 9. ph TFA ( ) Agilent StableBond 7

18 AGILENT PLRP-S HPLC PLRP-S ph Å PLRP-S PLRP-S PLRP-S M NaOH / NaOH. (, MW). (, MW) M NaOH 通液前カラムボリューム (M NaOH) 後.. II. I. PLRP-S Å PLRP-S Å : PLRP-S Å.6 x mm µm : : % B. ml/ : A:. % TFA B:. % TFA ACN : UV nm PLRP-S Å.6 x mm µm PLRP-S Å.6 x mm µm A:. % TFA B:. % TFA % 9 % ACN. ml/.agilent PLRP-S ph / 6 % B UV nm. Agilent PLRP-S Å PLRP-S Å PLRP-S Å

19 HPLC Agilent 6 Infinity LC Agilent 9 Infinity LC UHPLC Poroshell UHPLC % : ph ( ph ) M M UHPLC :6 MPa ZORBAX RRHD Å / LC LC/MS MPa ml/ UHPLC (ISET). µm Agilent 6 Infinity LC HPLC 6 MPa Hz HPLC % UHPLC Agilent 9 Infinity LC UHPLC UHPLC HPLC (..6 mm) LC LC/MS MPa ml/ UHPLC BlendAssist UHPLC 9

20 AdvanceBio RP-mAb ph C Å 9 C.. SB-C Å 9 C.. Diphenyl Å 9 C.. (mm) (µm) C. x C. x C. x C. x C.6 x C.6 x C.6 x SB-C. x SB-C. x SB-C. x SB-C. x SB-C.6 x SB-C.6 x SB-C.6 x Diphenyl. x Diphenyl. x Diphenyl. x Diphenyl. x Diphenyl.6 x Diphenyl.6 x Diphenyl.6 x Poroshell ph SB-C C C Å 9 C.. Extend-C Å ph ph 6.. (mm) SB-C USP L SB-C USP L7. x x SB-C Extend-C USP L. x x x x

21 HPLC UHPLC ZORBAX Å ph SB-C Å 9 C.. SB-C Å C.. SB-C Å C.. SB-CN Å C.. Extend-C Å 6 C.. -Diphenyl Å C.. (mm) (µm) SB-C USP L SB-C USP L7 SB-CN USP L SB-C USP L6 Extend-C USP L -Diphenyl USP L. x 66-9 RR. x RR. x x 7-9. x x x RR. x RR. x RR. x x x x x x x x x x x x x PrepHT. x PrepHT. x PrepHT. x PrepHT. x PrepHT. x PrepHT PrepHT 7 x

22 ph PLRP-S HPLC (mm) (µm) PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L. x PL- PL-. x PL- PL-. x PL-.6 x PL- PL- PL-.6 x PL- PL-.6 x PL- PL-.6 x PL- PL- PL- PL-.6 x PL- PL-.6 x PL- PL-. x PL9-. x PL9- PL9- PL9-. x PL9- PL9- PL9-. x PL9- PL9-. x PL9- PL9-. x PL9- PL9- PL9- PL9-. x PL9- PL9-. x PL9- PL9-.6 x PL-7 PL x - PL- PL-.6 x - PL- PL-.6 x PL- PL- PL- PL-.6 x PL- PL- PL-.6 x PL-7 PL-7.6 x - PL- PL-.6 x - PL-.6 x PL- PL- PL- PL-.6 x PL- PL- PL- PL- x PL- PL- x - PL-6 PL x - PL-6 PL x PL-6 PL x PL-6 PL x PL7-6 PL x PL7-7 PL7-7 x - PL7- PL x - PL7- PL x PL7- PL7- PL7- PL7- x PL7- PL x - PL-6 PL x - PL-6 PL x PL-6 PL x PL-6 PL x PL-7 PL-7 x PL- PL- PL7- PL7- x PL- PL x PL- PL- PLRP-S x mm PL6- PL6- PL6- PL6-. x. mm PL-6 PL-6 PL-6 PL-6

x mm.7 µm 69-. x mm.7 µm 67-9. x mm.7 µm 67-9. x mm.7 µm 67-9.6 mm Fast Guard* 7-9.

23 PLRP-S HPLC (µm) PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L kg PL-6K PL-6K PL-6K g PL-K PL-K PL-K kg PL-67 PL-67 g PL-7 PL-7 - kg PL-6 PL g PL- PL- - kg PL-6 PL-6 g PL- PL- kg PL-6 PL-6 PL-6 PL-6 g PL- PL- PL- PL- kg PL-6 PL-6 AdvanceBio.6 x mm.7 µm x mm.7 µm 69-. x mm.7 µm x mm.7 µm x mm.7 µm mm Fast Guard* 7-9. mm Fast Guard* 7-9. mm Fast Guard* 7-9 *Fast Guards MPa 6 MPa MPa AdvanceBio RP-mAb ZORBAX RRHD Å. µm Poroshell ZORBAX Å. µm PLRP-S µm AdvanceBio.7 µm Agilent AdvanceBio : Agilent AdvanceBio AdvanceBio 6

24 : BioHPLC HPLC UHPLC Poroshell AdvanceBio RP-mAb LC ZORBAX RRHD. µm ( MPa ) UHPLC AdvanceBio BioHPLC Load & Lock Load & Lock PLRP-S / : -77- Agilent Technologies, Inc. Printed in Japan November 9, 99-6JAJP

細辛 (Asari Radix Et Rhizoma) 中のアサリニンの測定 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C µm カラムアプリケーションノート製薬著者 Rongjie Fu Agilent Technologies Shanghai

細辛 (Asari Radix Et Rhizoma) 中のアサリニンの測定 Agilent InfinityLab Poroshell 2 EC-C8.9 µm カラムアプリケーションノート製薬著者 Rongjie Fu Agilent Technologies Shanghai 概要細辛 (Asari Radix Et Rhizoma) 中の活性化合物アサリニンをサブ 2 µm の Agilent