Agilent BioHPLC HPLC/UHPLC /

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1 Agilent BioHPLC HPLC/UHPLC /

2 HPLC/UHPLC ( Å Å ) BioHPLC MPa.. µm UHPLC Poroshell ( )

3 Agilent AdvanceBio RP-mAb : AdvanceBio RP-mAb Poroshell mab Agilent AdvanceBio :.7 µm C AdvanceBio Agilent Poroshell : Agilent ZORBAX RRHD Å. µm : MPa UHPLC Agilent ZORBAX Å. µm : HPLC. µm Agilent PLRP-S : ph HPLC PLRP-S : AdvanceBio RP-mAb mab AdvanceBio 7 Poroshell ZORBAX RRHD ZORBAX StableBond ph 7 PLRP-S /

4 HPLC LC HPLC/UHPLC 6 MPa ( Å) mab mab AdvanceBio RP-mAb Å mabs. µm SB-C C ZORBAX Å. µm RRHD SB-C RRHD SB-C RRHD SB-C RRHD -Diphenyl ZORBAX Å. µm SB-C SB-C SB-C SB-CN ZORBAX Å Extend-C Poroshell C mab ph USP L6 StableBond C Agilent 9 Infinity LC MPa High Definition. µm mm mm StableBond C StableBond C CN ph. ph Poroshell SB-C SB-C SB-C Extend-C AdvanceBio Poroshell HPLC Å Poroshell DNA PLRP-S PLRP-S Å Å Å Å / PLRP-S Å / PLRP-S Å PLRP-S Å DNA/ PLRP-S Å ZORBAX (AAA) OPA FMOC HPLC UHPLC

5 ADVANCEBIO RP-mAb mabs Agilent AdvanceBio RP-mAb QA/QC Poroshell AdvanceBio RP-mAb : LC ( Å) (. µm) mab : ( ) : Poroshell µm : SB-C C 6 AdvanceBio RP-mAb C x mm. µm A:. % TFA IPA (9:) B: IPA:ACN: A (7::). ml/ % B 9 % B % B Creative Biolabs Variant IgG ( mg/ml) µl C UV nm. AdvanceBio RP-mAb C IgG Agilent AdvanceBio AdvanceBio RP-mAb C 他社カラム C, Å,. µm 他社カラム C, Å,.6 µm 他社カラム C, Å,.6 µm :. x mm. µm A:. % TFA IPA (9:) B: IPA:ACN: A (7::) : : : : :. ml/ % B 9 % B % B Creative Biolabs Variant IgG ( mg/ml) µl C UV nm. AdvanceBio RP-mAb mab

6 mab AdvanceBio RP-mAb QC ( ) IgG AdvanceBio RP-mAb AdvanceBio RP-mAb Poroshell AdvanceBio RP-mAb x mm. µm A:. % TFA IPA (9:) B: IPA:ACN: A (7::). ml/ % B 9 % B % B Creative Biolabs Variant IgG ( mg/ml) µl C UV nm. AdvanceBio RP-mAb Poroshell AdvanceBio RP-mAb SB-C :. MPa x mm. µm A:. % TFA B: - ACN: A (::). ml/ % B 9 % B % B Creative Biolabs Fc/Fab Variant IgG ( mg/ml) µl 6 C UV nm.advancebio RP-mAb 6

7 ADVANCEBIO ペプチドマッピングカラム 解像度を低下させずにペプチドマッピング時間を短縮 Agilent AdvanceBio ペプチドマッピングカラムを使用すると 時間を短縮: 全多孔質 HPLC カラムの 倍の速度で高分 次構造のアミノ酸の修飾を迅速に分離し 同定することがで きます 全多孔質カラムのように 6 分も時間がかかることは ありません 離能の分離を実行します すべての機器の機能を向上: 内径.6. および. mm のカラムは 6 MPa まで使え UHPLC 装置を最大限に活用で これらの高度なバイオカラムは Åのポアサイズと.7 µm きます 従来の MPa の装置でも優れた性能を実現しま の表面多孔質粒子を特徴としており 次を目的に設計されて す います 柔軟性を向上: ギ酸移動相を使用することで MS の感度を 分析の信頼性を向上: AdvanceBio ペプチドマッピングカラ 向上します ム充填剤の各バッチは 厳密なペプチド混合物を使用した テストを実施しているため 適合性と再現性が確保されて おり 複雑なペプチドマップの主要ペプチドの同定が可能 です ペプチド混合物を使用した品質管理テスト バイオシミラー EPO のペプチドマップ カラム : カラム: AdvanceBio ペプチドマッピング. x mm.7 µm p/n 67-9 流量 :. ml/ 注入量 : µl ºC 検出 : nm グラジエント : A 水 (. % TFA) B ACN (. % TFA) 分 6 % B 6 分 6 9 % B 7 6 温度 : サンプル : Agilent ペプチドマッピング 標準混合物 ( ペプチドごと に.. µg/µl) p/n 9 流量:. ml/ 注入量: µl (. mg/ml) 温度: ºC 検出: nm グラジエント: A w n 6 9 % B 6 AdvanceBio ペプチドマッピング. x mm.7 µm p/n ピーク番号 MW 77 成分 ブラジキニンフラグメント 7 6 ブラジキニン 6 アンギオテンシン II 67 ニューロテンシン 9 アンギオテンシン I 6 6 ACTH フラグメント レニン 7. 図 6.AdvanceBio ペプチドマッピングカラムを使用することで容易に タンパク質を同定し すべての翻訳後修飾を特定できます PEPTIDE MAPPING STANDARDS Now Available p/n 9- メリチン 図. AdvanceBio ペプチドマッピング充填剤の全バッチにテスト用混合 物を使用しました この混合物には 分子量の範囲が 77 Da の 種類の親水性 疎水性 および塩基性ペプチドが含まれます すべて のカラムは低分子プローブを使用したテストにより効率も保証されて います x 6 Cpd :.: +ESI ECC Scan Frag=7.V EPOdigestd.d Cpd : Counts vs. Acquisition Time () 図 6a. EPO 消化物 MassHunter Workstation ソフトウェアにより LC/MS TOF の 9 % 配列範囲を達成 7

8 AdvanceBio AdvanceBio 7 AdvanceBio Norm Norm PEP79 Inj. (9 bar) Inj. ( bar) Inj. (97 bar) 6 7 RT ( ) RT ( ) RT ( ) RT ( ) PW PW PW PW B69 Norm Inj. (97 bar) Inj. ( bar) 6 7 RT ( ) RT ( ) RT ( ) RT ( ) PW PW PW PW : AdvanceBio. x mm.7 µm p/n 67-9 :. ml/ : µl : C : nm : A (. % TFA) B ACN (. % TFA) 6 % B. 9 9 % B : Sigma HPLC -Gly-Tyr -Val-Tyr-Val -Met Enk - Angio II - Leu Enk 7.. x mm AdvanceBio

9 Agilent AdvanceBio.7 µm (>99.99 % SiO ) C AdvanceBio IgG LC/MS x : AdvanceBio. x mm.7 µm p/n 69- LC/MS (Agilent 6 Q-TOF) : L/ Vcap: V : V :. ml/ : µl : C : A (. % FA) B ACN (. % FA) % B % B 6 % B. 7 9 % B : Stratagene mab IgG (n=) 9

10 POROSHELL Agilent Poroshell MPa Agilent Poroshell Poroshell RP-HPLC Poroshell Å. µm Å. µm Poroshell µm UHPLC. µm. µm StableBond ph TFA Poroshell

11 . mm Å Poroshell 9. Poroshell. II.. RNase Time () : Poroshell SB-C. x 7 mm µm : A:. % TFA B:.7 % TFA ACN :. ml/ : 7 C : UV nm :. % B : MPa 重鎖 軽鎖 IgG の処理 : DTT 6 グリコシル化 グリコシル化なし IgG の処理 : DTT ペプチド-N-グリコシダーゼ F 6 IgG の処理 : DTT ペプチド-N-グリコシダーゼ F カルボキシペプチダーゼ-B 6. lgg : ( ) % B.... Poroshell SB-C. x 7 mm µm A:H O-ACN (9:) B:H O-ACN (:9) A B. % TFA ml/l PEG. ml/ 7 C UV nm

12 µm Poroshell.7 µm mm ( ) MPa HPLC Agilent Poroshell Poroshell Poroshell * 6 7 * * C. x mm.7 µm DAD: A.. c. ( 66 kda) A: (. % TFA) B:ACN (. % TFA) C UV nm 9 % B 6. ml/ B-. Agilent.6.6 * 6 7 * 6 7 Poroshell SB-C. x 7 mm µm * Agilent Poroshell A: (. % TFA) B:ACN (. % TFA) C DAD: UV nm 9 % B. ml/. Poroshell SB-C

13 Poroshell HPLC SB-C SB-C SB-C Extend-C c Poroshell SB- C Poroshell SB-C ( ) Poroshell SB-C C Poroshell SB-C µl µl Poroshell SB-C 7, Poroshell SB-C. x 7 mm µm Poroshell SB-C. x 7 mm µm A:. % TFA/H O B:.7 % TFA/ACN. ml/ 7 C. % B UV nm Poroshell SB-C.... Poroshell SB-C C 6 c 6 9. II.. RNase A. B. 6. c A () µl Poroshell SB-C. x 7 mm µm A:. % TFA /H O B:.7 % TFA/ACN. ml/ C. 6 % B % B µl ( ) UV nm µl 6 RT (). Agilent Poroshell SB-C

14 ph. Poroshell Poroshell Extend-C ph ph C SB-C Extend C SB-C SB-C Poroshell. x 7 mm µm A: (. % TFA) B:ACN (. % TFA).7 ml/ C % B. 6 % B gly-tyr. mg/ml. Val-tyr-val. mg/ml. Met-. mg/ml. Leu-. mg/ml. II. mg/ml Time () RNase A mg/ml 7. c mg/ml. mg/ml 9. mg/ml 7 9 Poroshell SB-C. x 7 mm µm /. µl P/N G-67 A:. % TFA HO B:.7 % TFA ACN ml/ % B. 7 C DAD /6 nm ref = / nm

15 ZORBAX RRHD Å. µm MPa ZORBAX RRHD SB-C C C -Diphenyl. µm 9 Infinity LC UHPLC ZORBAX StableBond (C C C) ph (TFA) ph ph C ma ZORBAX RRHD SB-C. x mm. µm mab A:H O:IPA (9:). % TFA B:IPA:ACN:H O (7::). % TFA. ml/ C 9 Infinity LC ( nm) : ( ) % B ma... C C C C C C - UHPLC 7 UV 6. Agilent ZORBAX RRHD SB-C

16 Å Pursuit XRs Å Pursuit ZORBAX Å. µm. µm RRHD. µm UHPLC ZORBAX RRHD :C. x mm 6. MPa µl 7. Agilent ZORBAX RRHD SB-C -Diphenyl. x mm. µm ZORBAX RRHD SB-C -Diphenyl. x mm. µm (IgG) (. mg/ml) A:. % TFA B: % n- % ACN 9.9 %. % TFA % B % B % B. ml/ 7 C UV C Diphenyl ZORBAX RRHD SB-C. x mm. µm.9 MPa 7 9 DAD: A: (. % TFA) B:ACN (. % TFA) % B. 6 % B. ml/ C nm. Agilent High Definition Å. µm ( ) 6

17 ZORBAX Å. µm ph 6 Agilent ZORBAX StableBond Å ZORBAX StableBond ph (TFA ) ph LC/MS ZORBAX StableBond StableBond C C C Extend-C StableBond ( 9 ) ph ZORBAX SB-C % k 残存フェニルヘプタン ZORBAX SB-C 他社 C ZORBAX SB-C.6 x mm µm % B A:. % TFA B:. % TFA - % A % B. ml/ 6 C,,,,, 6, 7,, 移動相の量 9. ph TFA ( ) Agilent StableBond 7

18 AGILENT PLRP-S HPLC PLRP-S ph Å PLRP-S PLRP-S PLRP-S M NaOH / NaOH. (, MW). (, MW) M NaOH 通液前 カラムボリューム (M NaOH) 後.. II. I. PLRP-S Å PLRP-S Å : PLRP-S Å.6 x mm µm : : % B. ml/ : A:. % TFA B:. % TFA ACN : UV nm PLRP-S Å.6 x mm µm PLRP-S Å.6 x mm µm A:. % TFA B:. % TFA % 9 % ACN. ml/.agilent PLRP-S ph / 6 % B UV nm. Agilent PLRP-S Å PLRP-S Å PLRP-S Å

19 HPLC Agilent 6 Infinity LC Agilent 9 Infinity LC UHPLC Poroshell UHPLC % : ph ( ph ) M M UHPLC :6 MPa ZORBAX RRHD Å / LC LC/MS MPa ml/ UHPLC (ISET). µm Agilent 6 Infinity LC HPLC 6 MPa Hz HPLC % UHPLC Agilent 9 Infinity LC UHPLC UHPLC HPLC (..6 mm) LC LC/MS MPa ml/ UHPLC BlendAssist UHPLC 9

20 AdvanceBio RP-mAb ph C Å 9 C.. SB-C Å 9 C.. Diphenyl Å 9 C.. (mm) (µm) C. x C. x C. x C. x C.6 x C.6 x C.6 x SB-C. x SB-C. x SB-C. x SB-C. x SB-C.6 x SB-C.6 x SB-C.6 x Diphenyl. x Diphenyl. x Diphenyl. x Diphenyl. x Diphenyl.6 x Diphenyl.6 x Diphenyl.6 x Poroshell ph SB-C C C Å 9 C.. Extend-C Å ph ph 6.. (mm) SB-C USP L SB-C USP L7. x x SB-C Extend-C USP L. x x x x

21 HPLC UHPLC ZORBAX Å ph SB-C Å 9 C.. SB-C Å C.. SB-C Å C.. SB-CN Å C.. Extend-C Å 6 C.. -Diphenyl Å C.. (mm) (µm) SB-C USP L SB-C USP L7 SB-CN USP L SB-C USP L6 Extend-C USP L -Diphenyl USP L. x 66-9 RR. x RR. x x 7-9. x x x RR. x RR. x RR. x x x x x x x x x x x x x PrepHT. x PrepHT. x PrepHT. x PrepHT. x PrepHT. x PrepHT PrepHT 7 x

22 ph PLRP-S HPLC (mm) (µm) PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L. x PL- PL-. x PL- PL-. x PL-.6 x PL- PL- PL-.6 x PL- PL-.6 x PL- PL-.6 x PL- PL- PL- PL-.6 x PL- PL-.6 x PL- PL-. x PL9-. x PL9- PL9- PL9-. x PL9- PL9- PL9-. x PL9- PL9-. x PL9- PL9-. x PL9- PL9- PL9- PL9-. x PL9- PL9-. x PL9- PL9-.6 x PL-7 PL x - PL- PL-.6 x - PL- PL-.6 x PL- PL- PL- PL-.6 x PL- PL- PL-.6 x PL-7 PL-7.6 x - PL- PL-.6 x - PL-.6 x PL- PL- PL- PL-.6 x PL- PL- PL- PL- x PL- PL- x - PL-6 PL x - PL-6 PL x PL-6 PL x PL-6 PL x PL7-6 PL x PL7-7 PL7-7 x - PL7- PL x - PL7- PL x PL7- PL7- PL7- PL7- x PL7- PL x - PL-6 PL x - PL-6 PL x PL-6 PL x PL-6 PL x PL-7 PL-7 x PL- PL- PL7- PL7- x PL- PL x PL- PL- PLRP-S x mm PL6- PL6- PL6- PL6-. x. mm PL-6 PL-6 PL-6 PL-6

23 PLRP-S HPLC (µm) PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L kg PL-6K PL-6K PL-6K g PL-K PL-K PL-K kg PL-67 PL-67 g PL-7 PL-7 - kg PL-6 PL g PL- PL- - kg PL-6 PL-6 g PL- PL- kg PL-6 PL-6 PL-6 PL-6 g PL- PL- PL- PL- kg PL-6 PL-6 AdvanceBio.6 x mm.7 µm x mm.7 µm 69-. x mm.7 µm x mm.7 µm x mm.7 µm mm Fast Guard* 7-9. mm Fast Guard* 7-9. mm Fast Guard* 7-9 *Fast Guards MPa 6 MPa MPa AdvanceBio RP-mAb ZORBAX RRHD Å. µm Poroshell ZORBAX Å. µm PLRP-S µm AdvanceBio.7 µm Agilent AdvanceBio : Agilent AdvanceBio AdvanceBio 6

24 : BioHPLC HPLC UHPLC Poroshell AdvanceBio RP-mAb LC ZORBAX RRHD. µm ( MPa ) UHPLC AdvanceBio BioHPLC Load & Lock Load & Lock PLRP-S / : -77- Agilent Technologies, Inc. Printed in Japan November 9, 99-6JAJP

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