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1 08:50 からこの部屋は バイオインフォマティクスで使用します 2016 年度バイオインフォマティクス 2017 年度バイオインフォマティクス 座席順 1 2 教卓 まず端末にログインしましょう まず端末にログインしましょう ( 本日は少しだけ使用します ) 1 Internet Explorer を起動し Google のトップページを開いておいてください 年度バイオインフォマティクス バイオインフォマティクスとは? 第 1 回 2017/03/01 講義の前に 園芸学部応用生命化学科 髙橋広夫 3 4 講義の資料置き場 Internet Explorer を起動し Google を使って 高橋広夫 で検索 講義の資料置き場 Google か確認 (bing ではない ) 2 ページ目ぐらいにあるかも 5 講義の資料置き場 をクリック 6

2 講義の資料置き場 バイオインフォマティクスをクリック 統合メールのマナー ( 課題をメールで提出してもらう場合があるので ) 7 8 課題をメールでだす場合に 千葉大学統合メール ( 署名作成 ) メール本文に 相手の名前を書きましょう 自分の名前を名乗りましょう 要件を書きましょう ファイル名は 指定通りに タイトルも指定通りに 2 署名管理 1 ツールを選択 3 新規作成 他の講義や一般的な共通ルールです 9 10 千葉大学統合メール ( 署名作成 ) 千葉大学統合メール ( プロフィール作成 ) 1 ツールを選択 1 設定名 ( 適当 ) 応用生命化学科 学籍番号 氏名は必須!! 千葉大学 や 学年 は書いた方がベター 2 プロフィール管理 3 新規作成 11 12

3 千葉大学統合メール ( プロフィール作成 ) 千葉大学統合メール ( メール作成 ) 1 プロフィール名 ( 適当 ) 3 自分の名前 ( 正確に ) 2 チェック メール作成 4 自分の統合メールアドレス 6OK 5 先ほど自分で作った署名を選択 千葉大学統合メール ( メール作成 ) プロフィール確認 千葉大学統合メール ( 転送 ) 1 ツールを選択 3 新規作成 2 転送 署名確認 千葉大学統合メール ( 転送 ) 設定名 ( 任意 ) 秀丸 ( テキストエディタ ) のインストール 17 18

4 大学生活学部1年修士1修士2年一般教養の勉強 学部2年学部3年学部4年秀丸エディタのインストール Google で 秀丸 で検索 秀丸エディタのインストール ソフトウェアのタブをクリック 1 番目も 2 番目でも同じ 秀丸エディタをクリック 秀丸エディタは メモ帳 の高機能版 秀丸エディタのインストール シェアウェアなので 本当は 有料です ( ただし 学生で困窮している人は無料 ) 秀丸エディタのインストール デスクトップの保存 Z: にインストール 皆さんの PC は 32bitO のはずなので 32bit 版をダウンロードしてください 管理者権限が無いのでインストールできない 秀丸エディタのインストール 話を始める前に 年専門科目の勉強 研究室での研究生活 クリックすると秀丸エディタが起動 23 分かっていることを学ぶ 追試する 高校生活の延長 世界で誰もやっていないことにチャレンジする 努力次第で成果が新聞 論文に載る 製品化される 24

5 物物血圧( 処置無し症例 ) バイオインフォマティクスの意義 生物統計学 酵母 ヒト植マウス 生物結果生実験 生物学 (Biology) + 統計学 (tatistics) 新事実の発見 結論 解釈 解析 ( 生物統計 生物情報処理 ) ウェブツール データベース 統計処理ソフト (R) Excel 発表 ( 報告書 学会発表 論文発表 新聞での発表 ) 生物統計学 (Biostatistics) 生物統計学の必要性 疾患マウス 10 匹 生物統計学の必要性 疾患マウス全体 ( 匹 ) 母集団 (population) 薬剤 投与 7 匹完治 薬剤 の有効率は 70% と言っていいのか?? 10 匹の疾患マウスの有効性は 70% 疾患マウス全体の有効性は 70% とは言えない 標本 (sample) 10 匹の疾患マウス 統計的推測 推定 検定 検定の必要性 それぞれの患者 生物統計学とバイオインフォマティクス 生物学を勉強するものにとって 統計手法を使いこなす必要がある ( 最低限理解できていれば 深いところまで知っている必要はない ) 生物統計手法だけで十分か? コントロール 血圧降下剤 血圧降下剤 B バイオインフォマティクス (Bioinformatics) 見た目でなんとなく効いてそう 微妙!! 生物統計学 (Biostatistics) 血圧降下剤 とBの効果を統計的に 判定する ( 客観的に ) 生物実験の解釈には 統計は不可欠である!! 29 生物実験を解釈するためには 生物統計学だけでなく バイオインフォマティクスの手法を使いこなすことが大事 30

6 バイオインフォマティクス 生物学 (Biology) + バイオインフォマティクス (Bioinformatics) 情報学 (Informatics) 情報学と統計学情報学 情報をどのように扱うかについて考え研究する学問 入力 x 1 x 2 x 3 x n w 2 w 1 w 3 w n f 出力 O w = 結合係数 f = 出力関数 ニューロンモデルニューロンを数学的に模倣 例 : ニューラルネットワークパターン認識 データマイニング 統計学確率を基礎にして, 不確実性を含むデータから, 一定の確実さをもった判断を下す学問 f(x) 例 : 検定 推定 帰無分布 x 応用生命化学科の皆さんにとって手段の一つ ( 車の原理を知らなくても運転可 ) 31 PCR やウエスタンブロットなど生化学的な手段と同じ ( 目的では無い ) 32 バイオインフォマティクスが生まれた時期 バイオインフォマティクスが生まれた時期 PubMed PubMed 医療 生物系の論文検索サイト ( 英語 ) 世界約 85 ヶ国 約 5600 誌の文献を検索することのできる医学 生物文献データベース 米国国立バイオテクノロジー情報センター (National Center for Biotechnology Information: NCBI) 国立衛生研究所 (National Institutes of Health: NIH) の下の国立医学図書館 (National Library of Medicine: NLM) の一部門 33 なぜPubMed!? バイオの最新情報はすべてPubMedに集まる 本など 情報として古い!! ( 日本語の本なら尚更 ) Google で PubMed で検索すれば見つかる PubMed で Bioinformatics [Title/bstract] で検索する 14,361 件の論文がヒット 34 バイオインフォマティクスが生まれた時期 バイオインフォマティクスが生まれた時期 PubMed 14,361 件の論文がヒット もっとも初期の論文 Beltrame F, Tagliasco V. "Confocal microscopy and cellular bioinformatics.", Cytotechnology. 1993;11 uppl 1: 年 8 月 EMBL( 欧 ) データライブラリー設立 1981 年 3 月 mith-waterman アルゴリズム発表 1982 年 9 月 GenBank( 米 ) 設立 1983 年 7 月ウイルスのがん遺伝子とヒト遺伝子との相同性の発見 1984 年 4 月 DDBJ( 日 ) 設立 研究成果として論文になるまで 1-5 年はかかる 1985 年 3 月 FT アルゴリズム発表 1990 年 10 月 BLT アルゴリズム発表 1991 年 8 月 WWW (World Wide Web) 登場 1990 年前後にバイオインフォマティクスが生まれた ? 年 bioinformaticsが 生物情報科学と訳される 1997 年 9 月 BLT2 アルゴリズム発表 36

7 補足 : PubMed の使い方 PubMed 出版物 Publication + Google で PubMed をサーチ 医学 Medicine 補足 : PubMed の使い方 PubMed のトップページ キーワードを入力して右の earch をクリック 37 使い方は Googleとほぼ同じ ( キーワードを入力して検索 ) 例 : gene bioinformatics 38 補足 : PubMed の使い方 1 gene と bioinformatics の 2 つのキーワードの検索結果 1990 年前後までの生物学 セントラルドグマ (1958 年にクリックが提唱した分子生物学の概念 ) 論文 1 論文 2 遺伝情報 転写 翻訳 DN RN 複製 タンパク質 論文 年 年塩基配列 TCG を決定する技術の発達 論文のタイトル ( ここをクリックすると詳細が表示 ) 論文の著者 バイオインフォマティクスを説明する前に ヒトゲノム計画 ヒトゲノム計画 補足 : ゲノム上でシーケンス困難な領域 アメリカエネルギー省 (DOE) 国立衛生研究所 (NIH) 30 億ドルの予算 1990 年 10 月 1991 年から参加 6 か国 24 機関 貢献度 米国 :59% 英国 :31% 日本 : 6% 創薬 生命現象解明? ヒトゲノム 28 億 6 千万塩基対 (99%) ドラフト 2000 年 6 月正式版 2003 年 4 月 塩基が分かっただけ 染色体 テロメア (Telomere) セントロメア (Centromere) 独自のリピート配列を持ち決定困難 41 42

8 網羅的な生物情報 約 30 億塩基対ゲノム (Genome) DN GTTGCGCT CGCCTTGC CTTTCTTGTCGTGCGGTTTTCG 転写 ORF GU UGCGCUCGCC U UGC 開始コドン 翻訳 mrn 終止コドン タンパク質 ヒト v.s. サル患者 v.s. 健常人 トランスクリプトーム (Transcriptome) 約 3 万遺伝子 網羅的な生物情報とバイオインフォマティクス ヒト 酵母 マウス 植物生物 プロテオーム (Proteome) アミノ酸 約 10~20 万種類 疾患部位 v.s. 正常組織 mrnやタンパク質の測定技術の進歩による膨大なデータ違い メカニズムの解明 43 ゲノム 膨大な生物情報 ゲノム情報 遺伝子発現情報 タンパク質発現情報 解析 バイオインフォマティクス 44 バイオインフォマティクスとその拡大 バイオインフォマティクスとその拡大 初期のバイオインフォマティクス ゲノム 配列情報 数理生物学 生物をモデル化 ( 細かいところは無視 ) 現在のバイオインフォマティクス 生物物理学 バイオインフォマティクス ゲノム 配列情報だけでなく 生物情報一般 以前 バイオインフォマティクスと呼ばれなかった分野もバイオインフォマティクスに タンパク質の立体構造 一例 物理化学的シミュレーション 立体構造データ解析 45 システムバイオロジー オミックス情報から生物をシステムとして理解する ジーノム ( 発音 ) ゲノム (Genome) トランスクリプトーム (Transcriptome) プロテオーム (Proteome) メタボローム (Metabolome) フェノーム (Phenome) バイオインフォマティクス オミックス Omics 46 バイオインフォマティクス概観 配列解析 ( 塩基配列 アミノ酸配列 アライメント ) タンパク質構造解析 相互作用解析 ( 遺伝子相互作用 タンパク質相互作用 ) パスウェイ解析 発現解析 ( 遺伝子発現 タンパク質発現 ) 多型解析 (NP CNV) 医療統計 ( 基礎統計 オッズ 生存解析 ) 47 48

9 特定のテーマに沿ったデータを集めて管理 容易に検索 抽出などの再利用可能 コンピュータによって実現されたもの ( 狭義 ) 生物情報データベース 各国 ( 各研究機関 ) がそれぞれ構築 統合した大規模なデータベース 主に web 上で構築されている ゲノム情報 遺伝子発現情報 タンパク質発現情報 タンパク質構造 代謝ネットワーク 49 ゲノム情報 ( 塩基配列 ) データベース 欧州バイオインフォマティクス研究所 (European Bioinformatics Institute : EBI) 米国国立バイオテクノロジー情報センター (National Center for Biotechnology Information: NCBI) GenBank 国立遺伝学研究所 (National Institute of Genetics: NIG) (DN Data Bank of Japan: DDBJ) ヒト : 約 30 億塩基 1500 億塩基 INDC (International Nucleotide equence Database Collaboration) 三大国際(European Molecular Biology Laboratory-Bank : EMBL-Bank) 塩基配列データバンク50 (bp) DDBJ の登録総塩基数の推移 データベース (DB) とは? ゲノム情報 ( 塩基配列 ) データベース一般の研究者が登録 何故? 研究特許 論文応用 製品化 世界で誰もやってないことを行う データベースへの登録がほぼ義務化 生物情報のデータベースの多くは個々の研究者が登録したデータ 図 1 DDBJ の登録総塩基数の推移 正しさは 誰も保証しない 有料のものも存在する ほとんどの DB は無料 タンパク質 ( アミノ酸 ) 配列データベース PIR: Protein Information Resource 国際的なタンパク質 / アミノ酸配列データベースサイト WI-PROTに吸収された UniProt (WI-PROT と TrEMBL が合併 ) タンパク質 / アミノ酸配列データベースをもつ重要サイト WI-PROTは 研究者が人手でハイレベルのアノテーション ( 付加情報 ) をつけたタンパク質 / アミノ酸配列データベース TrEMBLは コンピュータにより自動でアノテーション( 付加情報 ) をつけたタンパク質 / アミノ酸配列データベース PRF: Protein Research Foundation 蛋白質研究奨励会が提供しているアミノ酸配列データベース オンライン情報検索等が可能 wwpdb : Worldwide Protein Data Bank タンパク質と核酸の3 次元構造を蓄積している国際的なデータベース 塩基配列 アミノ酸配列のデータベース検索 BLT (Basic Local lignment earch Tool) バイオインフォマティクス手法の一つ DNの塩基配列あるいはタンパク質のアミノ酸配列のアライメントを行うためのアルゴリズムもしくはプログラム あとで説明 検索できる事が重要 日本では 国立遺伝学研究所が DDBJ 等を検索するツールとして公開 PDBに蓄積されている構造データは 実験的に決定されたデータ 53 54

10 どの座標にどの原子があるか分かる 塩基配列 アミノ酸配列のデータベース検索 BLT (Basic Local lignment earch Tool) クエリ配列何が出来るか? 塩基配列 アミノ酸配列のデータベース検索 BLT (Basic Local lignment earch Tool) 図で表すと blastn ( 塩基配列 塩基配列データベース ) blastx ( 塩基配列 [ アミノ酸配列] アミノ酸配列データベース ) tblastx ( 塩基配列 [ アミノ酸配列] 塩基配列データベース [ アミノ酸配列]) blastp ( アミノ酸配列 アミノ酸配列データベース ) tblastn ( アミノ酸配列 塩基配列データベース [ アミノ酸配列]) 55 検索したい アミノ酸配列 ( 翻訳 ) 塩基配列データベース DDBJ EMBL GenBank アミノ酸配列塩基配列 翻訳アミノ酸配列 アミノ酸配列データベース UniProt PRF wwpdb 56 塩基配列 アミノ酸配列のデータベース検索 BLT (Basic Local lignment earch Tool) 何がうれしいの? 酵母マウス ヒト 興味ある塩基配列 GTTG 生物 BLT 興味あるアミノ酸配列 RGD 既知遺伝子の一部であると判明 異種の生物で機能を推測 植物59 タンパク質構造データベース wwpdb : Worldwide Protein Data Bank タンパク質と核酸の3 次元構造を蓄積している国際的なデータベース PDBに蓄積されている構造データは 実験的に決定されたデータ RCB PDB( 米 ) MD-EBI( 欧 ) PDBj( 日本 ) の三つの組織で運営 3 次元構造データベースなのでそのままでは 数値の羅列視覚化ソフトが必要 タンパク質立体構造データ PDB ID コード 60

11 水分子が進入できない領域を埋める PyMOL 水分子が進入できない領域を埋める分子表面表示 謝物 タンパク質構造データベース視覚化ソフトが必要 RasMolによるタンパク質の3 次元構造の視覚化 61 タンパク質構造データベースどんな視覚化ソフトがあるか? RasMol 高速なアルゴリズムを実装 ( 安価なPCでも表示可能 ) 多機能 ( コマンド操作で操作は煩雑 ) 原子 分子表面の表示は出来ない Chime Rasmolベース ブラウザ (IE 等 ) 内で使うプラグイン 分子表面表示が可能原子無し有り 高画質 (OpenGLを使用) 分子表面表示 機能拡張可能 62 分子表面表示原子 代謝ネットワークデータベース KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) 京都遺伝子ゲノム百科事典 バイオインフォマティクス研究用のデータベース 原子 無し 有り 遺伝子 タンパク質 代謝やシグナル伝達などの分子間ネットワークに関する情報を統合したデータベース 京都大学化学研究所の金久教授らによるプロジェクト (1996 年 ) 二項関係に基づいた情報として整理代他の分子と相互作用する場所の同定に有効 代謝ネットワークデータベース KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) 例 : グルタミン酸代謝マップ 詳しく見てみ代謝物 酵素 反応 フマル酸 リンゴ酸 オキサロ酢酸クエン酸 クエン酸回路 ( TC 回路 ) ( クレブス回路 ) 代謝物2-オキソグルタルアマート 65 るコハク酸 α-ケトグルタル酸 KEGGのこのような反応経路の集合体 66

12 配列比較と生物の進化 配列解析 相同性検索 進化 突然変異突然変異 類似性のある配列を同種 異種のゲノムからサーチ 似ている配列とその起源は?? 共通祖先 突然変異 67 マウス 1 種分化による相同タンパク生成オルソログ (ortholog) ヒト 68 配列データベースとクエリ配列 クエリ配列とは?? Query ( 質問 ) クエリ配列 DB( データベース ) TCGTCGT 完全一致配列あり TCGTCGT 配列データベースとアライメント アライメントとは?? lignment ( 整列 ) アライメント前クエリ配列 GCGTCGTCGTTTCGCGCTGCGTTT DB 配列 GGGGGGGGCCCCTCGTCGTGGCGCGGG こんな配列があるか? DB に問い合わせる配列の事 TCGTTCGT 類似配列あり 69 アライメント後クエリ配列 GCGTCGTCGTTTCGCGCT DB 配列 GGGGGGGGCCCCTCGTCGTGGCGCGGG 似ている配列を隣り合うように整列させること 70 配列比較とアライメント サーチしたい配列 TCGTCGT TCGTCGT 10 塩基 4の10 乗 =105 万種類 クエリ配列 完全一致 部分一致 検索したいデータベース CCCCTCGTCGTGGGG CCCCTCGTTCGTGGGG 何か意味がある 偶然で一致する可能性は高くない ( より長い配列なら尚更 ) 71 ギャップとアライメントギャップを入れることで余分な配列がある場合もアライメントが可能サーチしたい配列 TCGTCGT ギャップ配列比較とアライメント TCG -TCGT データベース配列 CCCCTCGTTCGTGGGG 1 個余分な塩基があるヘモグロビンαのアライメントの例 72

13 然変異祖先配列 配列比較と生物の進化 ヘモグロビン α のアライメント ヒトとマウスのアミノ酸比較 配列比較と生物の進化 2 遺伝子重複による相同タンパク生成 遺伝子重複 配列 1 配列 2 同一 アミノ酸変化 突アミノ酸レベルでは ほとんど同じ 祖先タンパク質から機能が多様化した複数の相同タンパク質が生成 アライメントでそれが判明 パラログ (paralog) 配列 1 配列 2 機能変化 配列比較と生物の進化 配列比較と生物の進化 2 遺伝子重複による相同タンパク生成の例 ヘモグロビン (4 量体 ) 補足 偽遺伝子 (pseudogene: シュードジーン ) 進化の過程で機能を失った遺伝子 β α γ α 遺伝子 遺伝子重複 ゲノム α β α γ 成人の血液中胎児の血液中酸素運搬能力が高いヘモグロビンにはα β γサブユニットがあり 相同タンパク質である 75 遺伝子 遺伝子 遺伝子 偽遺伝子機能無し ゲノム突然変異ゲノム 76 配列比較と生物の進化 アライメントは 相同タンパクを発見するための手段 グローバルアライメント ローカルアライメント例 : 2つのアミノ酸配列 MIGMITGとMITGMTGのアライメントローカルアライメントグルーバルアライメント MIGMITG--- MI-GMITG ---MITGMTG MITGM-TG アルゴリズム ( 言葉の定義 ) アルゴリズムとは?? なんらかの問題を解くための手順のことである 対応する日本語は 算法 ( さんぽう ) 例 : 数学的帰納法のアルゴリズム 自然数全体に関する命題 P(n) (n N) が真であることを証明 1 P(0) は真である 2 任意の自然数 k に対し,P(k) が真であれば,P(k+1) も真である よって任意の自然数 n について P(n) は真である 77 78

14 ダイナミックプログラミングによるアライメント最適化とは? ダイナミックプログラミングによるアライメント最適化とは? アライメント問題 経路最適化問題 アライメント問題 経路最適化問題 I M - L(a,b) b L(b,d) d a L(b,e) 経路最適化問題 部分問題に分解 - M O L(a,c) c L(c,e) e ダイナミック プログラミングの原理 ダイナミックプログラミング ダイナミックプログラミング ダイナミックプログラミングとは?? b a c d e ダイナミックプログラミングとは?? 1 a b d 2 a c e b d 1 a b + b d a d への最短ルートを求めたい 候補は 2 通りある 1 a b d 2 a c e b d 2 a c e b + b d この範囲で最短ルートであれば a d へのルートでも最短 問題の分割ダイナミックプログラミングの原理 同じ b は絶対に通る 部分問題に分解 a b と b d 81 最短ルート 最短ルート 全体として最短ルート 82 アライメント問題から経路最適化問題へ アライメント問題から経路最適化問題へ IM と MO の配列のアライメント IM と MO の配列のアライメント I M I M 最短 ただし 上左が要一致 最短 ただし 上左が要一致 M O 左の文字列にギャップ M O 左の文字列にギャップ 上の文字列にギャップ 上の文字列にギャップ 経路問題 83 84

15 3つ以上の配列をアライメント- O O アライメント問題から経路最適化問題へ IM と MO の配列のアライメント I M 最短 ただし 上左が要一致 アライメント問題から経路最適化問題へ IM と MO の配列のアライメント I M 最短 ただし 上左が要一致 M O 左の文字列にギャップ M O 左の文字列にギャップ 上の文字列にギャップ 上の文字列にギャップ 赤色の部分を通るのが最短 85 ダイナミックプログラミングの原理で を部分問題に分解して解く 86 アライメント問題から経路最適化問題へ IM と MO の配列のアライメント I M 最短 ただし 上左が要一致 アライメント問題から経路最適化問題へ IM と MO の配列のアライメント I M 最短 ただし 上左が要一致 M O 左の文字列にギャップ M O 左の文字列にギャップ 上の文字列にギャップ 上の文字列にギャップ 赤丸 を通るように最短経路を探索 今回は 1 通りしかない 87 ギャップの計算 88 アライメント問題から経路最適化問題へ マルチプルアライメント M O IMとMOの配列のアライメント I M I M - - M O IM と MO の 2 配列だけでなくてさらに MOO I M - - M O アライメント完了 - M 89 90

16 BLT mith-watermanアルゴリズムの変形版第 1ステップ第 2ステップ第 3ステップ クエリ配列 G T T C W=3 CTTG データベース配列 W のサイズの完全一致を探索 クエリ配列 G T T C CTTG データベース配列 ギャップ無しアライメント クエリ配列 G T T ギャップありアライメント C CTTGC データベース配列 BLT は 第 1 2 ステップで 一致度の低いものはステップ 3 を行わない インターネット上のプログラムを利用したバイオインフォマティクス入門編 ここがmith-Watermanアルゴリズムと異なる 準備として まずは メモ帳を起動 UniProt を使ったタンパク質の検索 Google で Uniprot( 大文字小文字は区別無し ) と入力するク2 すべてのプログラム Notepad と入力しても良い 1 スタートメニューを開く UniProt を使ったタンパク質の検索 UniProt を使ったタンパク質の検索 目的 UniProt から p53 タンパク質を検索 UniProt の BLTp や ClustalΩ( オメガ ) DDBJ の BLT と EMBO で対応する塩基配列を見つける earch タブで Query に p53 を入力して earch ボタンを押す リックアクセッション番号 タンパク質名 遺伝子名 属種名 アミノ酸長 95 96

17 UniProt を使ったタンパク質の検索 UniProt を使ったタンパク質の検索 アクセッション番号 P04637 をクリックすると ヒトの p53 タンパク質の詳細情報を閲覧可能 Protein names > タンパク質名 Gene names (ynonyms) > 遺伝子名 ( 別名 ) Organism > 属種名 Taxonomic identifier > 種名番号 Taxonomic lineage > 系統情報 ( 界門綱目科属種等 ) equence length > アミノ酸長 equence status > 完全長かなどなど Blast タブをクリック 97 E 値の閾値 ( 大きいほど 緩い ) 前のページで見ていたタンパク質配列情報からアミノ酸データのみを FT 形式に 自動変換してくれる ギャップありアライメント 98 UniProt を使ったタンパク質の検索 チンパンジー ゴリラ チンパンジーは 100% ゴリラとは 99% 一致 99

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