03_サンプル調製_P indd

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1 サンプル調製 タンパク質サンプル調製 2 タンパク質抽出 3 タンパク質分離改善 4 タンパク質分画 6 タンパク質サンプルの濃縮と除去 10 核酸サンプル調製 13 RNA 精製 13 DNA 精製 15 DNAクリーンアップ 16

2 タンパク質サンプル調製 タンパク質サンプル調製タンパク質サンプル調製は サンプルタイプ毎に方法が異なる他 次の実験ステップに最適な手法や条件が必要であるなど様々です バイオ ラッドは タンパク質の抽出 精製 分画 濃縮のために最適化した様々なキットや試薬 抽出やクリーンナップ 濃縮を行う装置を提供します 物質の化学的特性に基づいた分離 分画 クロマトグラフィーの原理に基づいた分離 分画 電気泳動の原理に基づいた分離 分画 目的に応じた最適な試薬を 下記サンプル調製セレクションガイドを参考にお選びください サンプル調製キットセレクションガイド 2 サンプル調製

3 タンパク質サンプル調製 タンパク質抽出 タンパク質抽出 細胞溶解や抽出キット グラインダーなどを利用し 培養細胞や組織などからタンパク質を効率的に抽出することができます ReadyPrep タンパク質抽出キット (Total Protein) (Total Protein) は 様々な生 体サンプルからタンパク質抽出物を調製するための簡単かつ迅速で再現性のある方法を提供します このキットの使用により IEFや2 次元ゲル電気泳動などの様々な用途に直接適用できるタンパク質サンプルが得られます Web: キットの内容 構成品 組成 容量 Total Protein 2-D Rehydration Buffer 1 TBP 7M ウレア 2M チオウレア 1%(w/v)ASB-14 40mM Tris 0.001% BPB 200mM TBP 10ml 2 バイアル 0.6ml カタログ番号 品名 価格 (Total Protein) 22,000 Cell lysisキットマイクロロトフォア lysisキットサンプルに含まれる多種多様なタンパクを分離 分画することで 低含量タンパク質の検出が可能になります このための1つの方法として 等電点電気泳動によるサンプルの分画が効果的です 2.5mlの小規模な液相等電点電気泳動にはマイクロロトフォアが使用でき そのためのサンプル調製にはマイクロロトフォア lysisキットが便利です 本キットは簡単にサンプルタイプに応じたキットが利用できます See Also マイクロロトフォア : P.188 プロティアンi12 IEFシステム : P.175 プロテインアッセイ : P.20 哺乳類細胞 植物細胞 酵母 バクテリアのサンプルごとに最適化した専用キット マイクロロトフォア以外の用途 (SDS-PAGE 2-D) にも利用可能 抽出後 バッファー交換せずに すぐにマイクロロトフォアでの分画が可能 マイクロロトフォア lysis キット Bio-Plex Cell lysis キット Bio-Plex Cell lysisキットは 特に Bio-Plexリン酸化タンパク質アッセイ / トータルターゲットアッセイ用の培養細胞や組織抽出物を調製するために開発されています このCell lysisキットを使用して ウェスタンブロット解析用の抽出液を調製することもできます See Also Bio-Plex: P.310 Web: and /bioplexcelllysis Request or download bulletins: 3033, 3034, and 5517 Bio-Plex Cell lysis キット サンプル調製 3

4 タンパク質サンプル調製タンパク質分離改善 ReadyPrep ミニグラインダー ReadyPrep ミニグラインダーは 各種サンプルからタンパク質や核酸を高回収率で抽出するためのグラインダーです 1.5mlのサンプル粉砕用チューブには 粉砕用の樹脂と粉砕棒が含まれます 粉砕用樹脂は伸張性の微粒子からなる中性の研磨剤で タンパク質や核酸を吸着しません ReadyPrepミニグラインダーはディスポーサブル製品で ヌクレアーゼフリー プロテアーゼフリーの製品です マイクロロトフォアlysisキット (Mammal) には含まれます 組織サンプル等の小規模抽出に便利 粉砕用の樹脂が組織を効率的に粉砕します ほとんどのベンチトップ型遠心器が利用できます ReadyPrep ミニグラインダー Web: カタログ番号 品名 価格 保存 マイクロロトフォアlysisキット マイクロロトフォアlysisキット (Mammal) 41, 回用 : タンパク質可溶化用バッファー (50ml) ReadyPrep mini grinder 20 本 マイクロロトフォアlysisキット (Plant) 61, 回用 : タンパク質可溶化用バッファー (50ml) ReadyPrep 2-Dクリーンアップキット マイクロロトフォアlysisキット (Yeast) 56, 回用 : タンパク質可溶化用バッファー (50ml) 酵母懸濁バッファー(15ml) lyticase(0.5ml 2:1.5U/μl) マイクロロトフォアlysisキット (Bacteria) 56, 回用 : タンパク質可溶化用バッファー (50ml) バクテリア懸濁バッファー(25ml) lysozyme(1ml:1,500u/μl) ReadyPrepミニグラインダー (20 回用 ) 21,000 室温 サンプル調製用キット Bio-Plex Cell Lysisキット (96well 1 回分 ) 25, B03 Bio-Plex Cell Lysisキット (96well 3 回分 ) 60, Bio-Plex Cell Lysisキット (96well 10 回分 ) 130, タンパク質分離改善 クリーンアップキットやカラムを用いることで塩やその他のコンタミナントを除去できます Protein Sample Cleanup Kit Selection Guide Kit Type and Catalog Number Applications Procedure Salt Removal Preparation Time Number of Preps ReadyPrep 2-D cleanup kits (# , # ) Cleanup of protein samples for 1-D and 2-D applications TCA-like precipitation to remove salts, detergents, lipids, phenolic compounds <1 hr 50 Reduction of streaking on 2-D gels Concentration of dilute samples Micro Bio-Spin 6 columns (see pages 17 18) Removal of Other Contaminants Removal of salts and other contaminants Size exclusion chromatography 5 min 25, 100, 1,000 ReadyPrep 2-D cleanup kits (# , # ) Reduction of streaking on 2-D gels Concentration of dilute samples TCA-like precipitation to remove salts, detergents, lipids, phenolic compounds <1 hr 50 Reduction and Alkylation ReadyPrep reductionalkylation kit (# ) Reduction of streaking on 2-D gels Improved resolution of basic proteins Reduction, then alkylation of sample to remove disulfide bonds and prevent their re-formation <2 hr 100 Web: Request or download bulletins: 2934 and サンプル調製

5 タンパク質サンプル調製 タンパク質分離改善 ReadyPrep 2-D クリーンアップキット 界面活性剤やカオトロープ等の物質に影響を受けない試薬を用いて タンパク質を沈殿化します これにより サンプル中の 2 次元電気泳動を妨害する界面活性剤 塩 ペプチド 脂質 フェノール化合物等を除去します また 低濃度のタンパク質を濃縮することもできます マイクロバイオスピンカラム P-6 ゲルろ過用担体バイオゲルP-6( 排除限界 :6,000Da) を充填したもので タンパク質を希釈することなく 容易に脱塩することが可能です 極微量 (10-75μl) のサンプルに最適です ReadyPrep 2-Dクリーンアップキットを用いた改善例 ( 左 ) 1M NaClを含むサンプルバッファーで可溶化したE.coliサンプル ( 右 ) ReadyPrep 2-Dクリーンアップキットを用いて脱塩したE.coli サンプル ReadyPrep 還元アルキル化キット 塩基性タンパク質の分離を改善します 一般的に使用される DTTはアルカリ側 (ph7 以上 ) では電荷を帯びているため 電極の外側 ( 中性側 ) に抜けていきます そのため塩基性側では DTTによる還元が不十分となり ジスルフィド結合が再形成されてしまいます 本キットではサンプル調製の段階でまずタンパク質のジスルフィド結合を還元し 次に還元されたチオール 基が再酸化しないようにアルキル化し保護します この処理により1 次元目での塩基性タンパク質の可溶性を維持し ストリーキングや擬似スポットの検出を抑えます カップローディングトレイを用いたサンプルアプライ法により 最大限の分離改善が見込まれます ReadyPrep 還元アルキル化キットを用いた改善例 ( 左 ) 抽出物をそのままアプライしたマウス肝臓サンプル ( 右 ) ReadyPrep 還元アルキル化キットを用いて処理した後 カップローディング法によりアプライしたマウス肝臓サンプル カタログ番号 品名 数量 価格 ReadyPrepキット ReadyPrep 2-Dクリーンアップキット 41, ReadyPrep 還元アルキル化キット 38,000 マイクロバイオスピンカラム マイクロバイオスピンカラム6, Tris 25 本 17, B04 マイクロバイオスピンカラム6, Tris 25 本 4セット 57, マイクロバイオスピンカラム6, Tris 1,000 本 290,000 サンプル調製 5

6 タンパク質サンプル調製 タンパク質分画 タンパク質分画 分画キットによりサンプルの複雑度が低減され 発現量の少ないタンパク質の検出に役立ちます 分画キットは 目的タンパク質の細胞内局在 溶解度の差 タンパク質の電荷に基づき分画する3つのタイプがあります サイズや電荷によりタンパク質を分離するための機器も利用できます 製品概要 キットの分類と製品名原理と目的適用サンプル操作時間容量 溶解度の違い (Total Protein) (Soluble/ Insoluble) ASB-14 を用いた可溶化能の強いサンプルバッファーによる総タンパク質の抽出 2 種類の異なるサンプルバッファーによるタンパク質の抽出 (2 分画 ) 45min 20 回分 1hour 20 回分 ReadyPrep サンプルプレパレーションキット 3 種類の異なるサンプルバッファーによるタンパク質の抽出 (3 分画 ) 3hour 15 回分 タンパク質の細胞内局在の違い (Membrane I ) (Membrane II ) (Signal) (Cytoplasimc/ Nuclear) 電荷の違い Aurum 陰イオン交換 (AEX) Mini キット Aurum 陽イオン交換 (CEX) Miniキットアフィニティー活性の違い ( 高含量タンパク除去 ) Aurum 血清タンパク質 Miniキット Aurum アフィゲルブルー Mini キット TritonX-114 の温度依存性可溶化能の違いによる膜タンパク質 ( 膜結合型 ) の分画 Na 2 CO 3 バッファーを用いた超遠心法による膜タンパク質 ( 複数回貫通型 ) の抽出 TritonX-100 の温度依存性可溶化能の違いによる膜タンパク質 ( ラフト カベオラ結合タンパク質 ) の抽出 核とその他の細胞小器官の溶解度の違いによる核内タンパク質の分画 スピンカラムを用いた陰イオン交換クロマトグラフィーの手法によるタンパク質の分画 スピンカラムを用いた陽イオン交換クロマトグラフィーの手法によるタンパク質の分画 アフィニティークロマトグラフィーによる アルブミンとIgGの除去アフィニティークロマトグラフィーによるアルブミンの除去 3hour 50 回分 3hour 10 回分 3hour 50 回分 3hour 50 回分 30min 2 回分 30min 2 回分 30min 10 回分 30min 2 回分 ( タンパク質エンリッチメント ) ProteoMiner タンパク質 Enrichment キット 高含量タンパク質の希釈と低含量タンパク質の濃縮 3hour 2, 10 回分 Mammalian tissue or cells. Plant leaves. E. coli. Yeast. Serum, plasma Web: Request or download bulletins: 2934 and サンプル調製

7 タンパク質サンプル調製 タンパク質分画 溶解度の違いを利用した調製 バイオ ラッドでは サンプルバッファーの可溶化能の違いにより 全タンパク質を抽出するキット 2 分画するキット 3 分画するキットを販売しており 目的に応じたタンパク質の抽出と分画を行うことが可能です (Total Protein) 簡単 短時間で 再現性よくサンプル中のタンパク質を抽出します 両イオン性界面活性剤のASB-14を含むバッファーで より多くのタンパク質を可溶化することができます (Soluble/Insoluble) 1つのサンプルを2つに分画し 親水性タンパク質と疎水性タンパク質をそれぞれ濃縮します 可溶化能の強い界面活性剤であるASB-14を使用して より多くのタンパク質を可溶化することができます ReadyPrep サンプルプレパレーションキット 1つのサンプルを3つに分画し 各フラクションのタンパク質を濃縮することで 発現量の低いタンパク質の検出を可能にします チオウレアや比較的強い界面活性剤であるSB3-10 チャージを持たず還元力の強いTBPを使用しているため 従来使用されてきたバッファーに比べて多くのタンパク質を可溶化することができます サンプルプレパレーション実験プロトコール キットの内容 構成品 組成 容量 Total Protein 2-D Rehydration Buffer 1 TBP Soluble/Insoluble 2-D Rehydration Buffer 1 Lysis Buffer TBP 200mM TBP サンプルプレパレーションキット Reagent1 Reagent2 Reagent3 TBP 7M ウレア 2M チオウレア 1%(w/v)ASB-14 40mM Tris 0.001% BPB 200mM TBP 7M ウレア 2M チオウレア 1%(w/v)ASB-14 40mM Tris 0.001% BPB 40mM Tris 8M ウレア 4%(w/v)CHAPS 40mM Tris 0.2%(w/v)Bio-Lyte3/10 5M ウレア 2M チオウレア 2%(w/v)CHAPS 2%(w/v)SB mM Tris 0.2%(w/v)Bio-Lyte3/10 200mM TBP 10ml 2 バイアル 0.6ml 10ml 2 バイアル 50ml 5 ポーチ 0.6ml 50ml 10ml 3 バイアル 10ml 2 バイアル 0.5ml カタログ番号 品名 数量 価格 保存 ReadyPrepタンパク質抽出キット ReadyPrepタンパク質抽出キット (Total Protein) 22,000 室温 ReadyPrepタンパク質抽出キット (Soluble/ Insoluble) 28,000 室温 ReadyPrepサンプルプレパレーションキット 31,000 室温 ReadyPrepサンプルプレパレーションキット構成品 ReadyPrep Reagent 1 1 本 8,000 室温 ReadyPrep Reagent 2 1 本 8,000 室温 ReadyPrep Reagent 3 1 本 8,000 室温 Reducing Agent TBP 200mM 0.6ml 1 本 8,000 室温 * * 開封後は -20 で保存 サンプル調製 7

8 タンパク質サンプル調製 タンパク質分画 タンパク質の細胞内局在に基づく調製 タンパク質の細胞内における局在に基づく分画を行うことで ターゲットとする発現量の低いタンパク質を濃縮し 検出感度を向上させます 微量な膜タンパク質や核タンパク質をターゲッ トとする場合 電気泳動後新たなバンドおよびスポットの検出 効率的な解析を行うことが可能になります 膜タンパク質の特異的分画 (Membrane I) 膜に結合したタンパク質を TritonX-114 を用いて 効率よく抽出 します 超遠心や密度勾配遠心等のステップを踏まずに 簡便に 膜タンパク質を分画することが可能です (Membrane II) 複数回膜を貫通したタンパク質を特異的に分画します Na 2 CO 3 を含むバッファーで懸濁し 超遠心法により分画します ReadyPrepタンパク質抽出キット (Signal) スフィンゴ脂質 コレステロールが豊富なカベオラやラフトなどのシングルドメインをTritonX-100を用いて 効率よく抽出します シグナル伝達や脂質の輸送に重要な役割を果たす膜タンパク質 (GPIアンカー型タンパク質 アシル化チロシンキナーゼ Gタンパク質など ) を特異的に抽出することが可能です 核内タンパク質の特異的分画 (Cytoplasmic/ Nuclear) 核内のタンパク質と細胞質中のタンパク質を分画します 核膜 を溶解することなく細胞質内のタンパク質だけを抽出するバッファーを加え シリンジ ( 培養細胞 ) ホモジナイザー ( 組織 ) を用いて核と溶解した細胞質タンパク質を分画します 遠心して得られた核ペレットを可溶化能の強いバッファーで懸濁することで核内のタンパク質を抽出します Web: Request or download bulletins: 2934 and 2961 (MembraneⅠ) (MembraneⅡ) (Signal) (Cytoplasmic/Nuclear) 8 サンプル調製

9 タンパク質サンプル調製 タンパク質分画 キットの構成品 Membrane I Membrane protein extraction buffer 1(M1) 50ml 1 本 Membrane protein extraction buffer 2(M2) 50ml 1 本 Protein solubilization buffer (PSB)25g 1 本 PSB diluent 30ml 1 本 ReadyPrep 2-D クリーンアップキット 1 箱 Membrane II 2-D Rehydration / Sample Buffer 10ml 2 本組成 : 7M Urea, 2M Thiourea, 1% (w/v) ASB-14, 40mM Tris, 0.001% BPB Lysis Buffer 50ml 5 袋 Membrane Protein Concentraining Reagent 125ml 5 袋 200mM TBP 0.6ml 1 本 TBP 保存用ガラス製バイアル 1 本 Signal Signal protein extraction buffer (S1)50ml 1 本 Signal protein extraction buffer (S2)50ml 1 本 Protein solublization buffer(psb)25g 1 本 PSB diluent 30ml 1 本 Cytoplasmic/ Nuclear Cytoplasmic protein extraction buffer(cpeb)50ml 1 本 Protein solubilization buffer(psb)25g 1 本 PSB diluent 30ml 1 本 ReadyPrep 2-Dクリーンアップキット 1 箱 別途必要な機器 試薬 還元剤 キャリアアンフォライト ソニケーター 37 に設定可能なヒートブロック キャリアアンフォライト ソニケーター 超遠心機 ( 100,000 g 回転可能なローターと 30ml 以下のチューブ ) 還元剤 キャリアアンフォライト ソニケーター 還元剤 キャリアアンフォライト 20 ゲージニードルのシリンジ ( 培養細胞の場合 ) ホモジナイザー ( 組織の場合 ) カタログ番号 品名 価格 保存 ReadyPrepタンパク質抽出キット ReadyPrepタンパク質抽出キット (MembraneⅠ) 70,000 室温 ReadyPrepタンパク質抽出キット (MembraneⅡ) 31,000 室温 ReadyPrepタンパク質抽出キット (Signal) 43,000 室温 ReadyPrepタンパク質抽出キット (Cytoplasmic/Nuclear) 70,000 室温 タンパク質のチャージに基づく調製 Aurum イオン交換 Mini キット Aurumイオン交換 Miniキットはイオン交換担体が充填されたスピンカラムタイプのキットです 高価なクロマトグラフィーシステム あるいはクロマトグラフィー法に関する深い知識を必要とせず どなたでも簡単にご使用いただけます Aurumイオン交換 Miniキットは陰イオン交換 (AEX) および陽イオン交換 (CEX) 用のミニカラムがあり これらのキットはルーチンでの前分画 精製 および血清 バクテリア 酵母培養細胞などの多くの未処理サンプルのスクリーニングに適用可能です Aurumイオン交換 MiniキットにはUNOsphere S&Qイオン交換用担体がプレパックされています これはバイオ ラッド独自の重合法を用いて開発された新世代の親水性ポリマーです UNOsphereイオン交換担体は 有効なタンパク質の吸着量と高いタンパク質結合力を持ちます Web: Request or download bulletin: 2928 サンプル調製 9

10 タンパク質サンプル調製 タンパク質サンプルの濃縮と除去 仕様 Aurum 陰イオン交換 AEX Aurum 陽イオン交換 CEX 担体 UNOsphere Q UNOsphere S 結合容量 36mg protein/column* 12mg protein/column* Bed Volume 0.2ml 0.2ml 結合バッファー 20mM Tris ph8.3** 20mM 酢酸ナトリウム ph5.0** 溶出バッファー結合バッファー +1.0M NaCl 結合バッファー +1.0M NaCl 品質保持期間 4 /1 年 4 /1 年 * BSA(AEX) および IgG(CEX) により決定された結合容量になります 結合容量はタンパク質の種類により多少異なります ** このバッファーはキットに付属されているバッファーになります これ以外の一般的にクロマトグラフィーに使用されれているバッファーもバッファー置換を行うことで使用することができます カタログ番号 品名 包装 価格 保存 Aurumイオン交換 Miniキット Aurum 陽イオン交換 (CEX)Miniキット 2セット 20, Aurum 陰イオン交換 (AEX)Miniキット 2セット 20,000 4 タンパク質サンプルの濃縮と除去 複雑なサンプルでは 少量のタンパク質を検出可能にするために 大量に含まれるタンパク質の除去が必要となることがしばしばあります バイオ ラッドは タンパク質の除去のための異なる2つの方法を提供しますー ProteoMiner タンパク質 Enrichmentシステム ( ヘキサペプチドライブラリーを使用 ) およびAurum 血清 / アフィゲルブルー製品 ( アフィニティ樹脂を使用 ) いずれの技術も大量のタンパク質レベルを低減しますが ProteoMinerシステムは少量のタンパク質を高濃度に濃縮し 血清や血漿以外のサンプルにも適用が可能です 製品概要 キットの分類と製品名目的原理操作時間適用サンプル検体数 ProteoMiner タンパク質 Enrichment キット 高含量タンパク質の希釈と低含量タンパク質の濃縮 Affinity chromatography 3hour 2, 10 Aurum 血清タンパク質 Mini キット アルブミンと IgG の除去 Affinity chromatography <30min 10 Aurum アフィゲルブルー Mini キット アルブミンの除去 Affinity chromatography <30min 2, bulk Mammalian tissue or cells. E. coli. Yeast. Serum, plasma ProteoMiner タンパク質 Enrichmentシステム ProteoMiner タンパク質 Enrichmentキット生体サンプル中の高含量タンパク質は 中 低含量タンパク質の検出を妨げます ProteoMinerタンパク質 Enrichmentキットは 生体サンプルに含まれるタンパク質の含有量の違い ( ダイナミックレンジ ) を小さくすることができる 新しいサンプル処理ツールです ProteoMinerタンパク質 Enrichment 技術は 多種多様のペプチドリガンドが結合したビーズにより 高含量タンパク質を希釈すると同時に 低含量タンパク質を濃縮します 生体サンプルをビーズに添加すると 高含量タンパク質は それらに対する親和性の高いビーズに対して飽和結合し 過剰のタンパク質は洗い流されます 一方 低含量タンパク質は それらに特異的なビーズリガンドにより濃縮されます 10 サンプル調製

11 タンパク質サンプル調製 タンパク質サンプルの濃縮と除去 イムノデプリーションすることなく高含量タンパク質量を低下させることができる 一般的な方法では検出できなかった中 低含量タンパク質を濃縮することができる 多様なサンプルに適用可能 多様な検出方法に適用可能 便利で簡単なキット ProteoMiner 小 / 大容量キット タンパク質量に応じて 2 種類のサイズからお選びいただけます 0.2ml 用キットー限られたサンプル材料での使用に最適化されています ( 最低 10mgのタンパク質が推奨されます ) 1ml 用キットー最低 50mgのタンパク質を含むサンプルの使用に最適化されています Web: Request or download bulletins: 5632, 5635, and 5841 サンプル ( ダイナミックレンジ大 ) カラム サンプル添加 結合 洗浄 溶出 過剰タンパク質 ProteoMiner 技術 それぞれのビーズには サンプル中の特定のタンパク質に親和性をもつ 6 アミノ酸から構成される 異なるペプチドリガンドが結合している サンプルをビーズに添加することでタンパク質はそれらに特異的なビーズに結合する ビーズに結合しない過剰のタンパク質は洗い流され ビーズに結合したタンパク質を溶出し その後の検出に用いる 処理前 血漿 血清 処理後 血漿 血清 高含量タンパク質の減少により タンパク質の検出能 / 分解能が向上する 左 未処理血漿 / 血清 ; 右 ProteoMinerタンパク質 Enrichmentキットを使用して処理した血漿 / 血清 サンプル調製 11

12 タンパク質サンプル調製 タンパク質サンプルの濃縮と除去 カタログ番号 品名 価格 保存 ProteoMinerタンパク質 Enrichmentキット ProteoMinerタンパク質 Enrichmentキット (0.2ml 用, 10 回 ) 58,000 4 構成内容 :10mg 用スピンカラム (10) 洗浄バッファー 溶出バッファー 回収チューブ ProteoMinerタンパク質 Enrichmentキット (1ml 用, 10 回 ) 80,000 4 構成内容 :50mg 用スピンカラム (10) 洗浄バッファー 溶出バッファー 回収チューブ ProteoMinerタンパク質 Enrichmentスターターキット (0.2ml 用, 2 回 ) 20,000 4 構成内容 :10mg 用スピンカラム (2) 洗浄バッファー 溶出バッファー 回収チューブ ProteoMinerタンパク質 Enrichmentスターターキット (1ml 用, 2 回 ) 28,000 4 構成内容 :50mg 用スピンカラム (2) 洗浄バッファー 溶出バッファー 回収チューブ ProteoMiner 段階溶出キット ProteoMiner 4 段階溶出キット (0.2ml 用, 10 回 ) 72,000 4 構成内容 :10mg 用スピンカラム (10) 洗浄バッファー 溶出試薬(4 種類 ) 回収チューブ ProteoMiner 4 段階溶出キット (1ml 用, 10 回 ) 98,000 4 構成内容 :50mg 用スピンカラム (10) 洗浄バッファー 溶出試薬(4 種類 ) 回収チューブ ProteoMinerキットアクセサリー ProteoMiner 4 段階溶出試薬 (10 回 ) 28,000 4 構成内容 : 用の溶出試薬 (4 種類 ) ミニバイオスピンエンプティーカラム (100 本 ) 29,000 アフィニティー活性を利用した調製 Aurum 血清タンパク Mini キット Aurum 血清タンパクMiniキットはアフィニティー担体であるアフィゲルブルーとアフィゲルプロテインAが充填されたスピンカラムを用いてサンプルを精製します 遠心するだけで血清中のアルブミンとIgGをより簡単により速く除去します Aurum 血清タンパクMiniキットによりサンプルを精製することで 90% 以上の割合でアルブミンとIgGを除去することができ 結果的にそれ以外のタンパク質を3-4 倍近い濃度でアプライすることが可能になります サンプル調製の際 Aurum 血清タンパクMiniキットを使用することで 血清及び血漿試料中のアルブミン IgGレベルを減少させることができます その結果 アルブミン周辺のスポットの出現やマイナースポットのシグナル増加を達成することが可能となります Aurum アフィゲルブルー Mini キット アルブミンだけを除きたいときは Aurumアフィゲルブルー Miniキットをご使用ください Web: Request or download bulletin: 2823 仕様 Aurum 血清タンパクMiniキット * Aurumアフィゲルブルー Miniキット アルブミン結合容量 >11mg/ml >11mg/ml human IgG 結合容量 >18mg/ml - 保存バッファー 0.05% NaN % NaN 3 サンプル量 250μl 100μl 品質保持期間 4 /1 年 4 /1 年 * ヒト血清に最適化されておりますので 他の動物種では非特異的な吸着が生じることがあります ご注意ください カタログ番号 品名 価格 保存 Aurum 血清タンパクMiniキット (10セット) 40, Aurumアフィゲルブルー Miniキット (2セット) 20, サンプル調製

13 核酸サンプル調製 RNA 精製 核酸サンプル調製 バイオ ラッドでは DNA RNA PCR 産物などの精製試薬をスモールスケールからラージスケールまで 用途に合わせて幅広く提供します RNA 精製 See Also 核酸増幅試薬 : P.380 リアルタイムPCR 解析システム : P.369 Experion 全自動 電気泳動システム : P.278 Aurum トータル RNA キット AurumトータルRNAキットは シリカメンブレンを使用したトータルRNA 精製キットです 本キットはシリカメンブレンを採用していますので 迅速な精製が可能で インタクトなトータルRNAを高い収量で得られます RNAの分解を避けるために 本キットに含まれる試薬やプラスチック用品はRNaseフリーです See Also トランスフェクション 試薬 : P.345 キットにはゲノムDNAのコンタミネーションを防ぐために DNaseⅠが含まれています Aurum Total RNA Fatty and Fibrous Tissue Kit 検体数にあわせて ミニカラム形式のMiniキット マイクロプレート形式の96キットの2 種類からお選びください また精製が困難な脂肪や繊維が多いサンプルにはFatty and Fibrous Tissueキットのご使用をお勧めいたします AurumトータルRNA Fatty and Fibrous Tissueキットは脂肪 繊維 タンパク質 DNAそしてヌクレアーゼがリッチなサンプルから高品質なDNAフリー フェノールフリーのトータルRNA を精製することが可能です 通常そのようなサンプルはRNAの回収率や品質を向上させるために 特殊なプロトコールなどが要求されていました AurumトータルRNA Fatty and Fibrous TissueキットではPureZOL 試薬を利用してサンプルの効果的な溶解を行うことにより その後のプロトコールを簡便にすることができました キットはそのほとんどの動物または植物組織 培養細胞 酵母そしてバクテリアに有効です Aurum Total RNA 96 Kit Aurum Total RNA Mini Kit Aurum Vacuum Manifold 仕様 Aurum トータル RNA Mini キット Aurum トータル RNA 96 キット Aurum トータル RNA Fatty and Fibrous Tissue キット 精製法シリカメンブレンシリカメンブレンシリカメンブレン &PureZOL 形式 カラム遠心または吸引 96 ウェルプレート遠心または吸引 カラム遠心または吸引 適用サンプル培養細胞 個以下 / カラム 個以下 / ウェル 個以下 / カラム バクテリア 個以下 / カラム 個以下 / ウェル 個以下 / カラム 酵母 個以下 / カラム 個以下 / ウェル 個以下 / カラム 動物組織 20-40mg 以下 / カラム 100mg 以下 / カラム 植物組織 60mg 以下 / カラム 100mg 以下 / カラム DNaseI 添付 有り 有り 有り 作業時間 <50 分以内 (DNAase 処理含まない ) <50 分以内 (DNAase 処理含まない ) <60 分以内 メンブレン結合容量 >100μg >40μg >100μg 精製度 (A 260/280 ) 溶出容量 2 40μl 2 40μl 80μl 収量 ( 例 ) 20-40μg/ HeLa 35-55μg/ E.coli 17μg/ HeLa 5μg/ E.coli μg/ H 20-30μg/ E.coli サンプル調製 13

14 核酸サンプル調製 RNA 精製 カタログ番号 品名 価格 保存 AurumトータルRNAキット AurumトータルRNA Miniキット (50 回分 ) 35,000 室温 構成内容 :RNA binding カラム (50) 2ml 蓋なしwashチューブ (50) 1.5ml 蓋付遠心チューブ (50) 2.0ml 蓋付遠心チューブ (100) DNaseⅠ( 凍結乾燥品 ) Lysis solution Low stringency wash solution High stringency wash soltion Elution solution DNase dilution solution B03 AurumトータルRNA Miniキット (150 回分 )50 回分 3セット 90,000 室温 B05 AurumトータルRNA Miniキット (250 回分 )50 回分 5セット 145,000 室温 B10 AurumトータルRNA Miniキット (500 回分 )50 回分 10セット 279,000 室温 AurumトータルRNA 96キット (96well 2 回分 ) 83,000 室温 構成内容 :RNA binding プレート (2) Grow block(2) Sample collectionプレート (2) Aurum growth membrane(2) DNaseⅠ( 凍結乾燥品 ) Lysis solution Low stringency wash solution High stringency wash soltion DNase dilution solution B03 AurumトータルRNA 96キット (96well 6 回分 ) 96 2 回分 3セット 242,000 室温 B05 AurumトータルRNA 96キット (96well 10 回分 )96 2 回分 5セット 390,000 室温 B10 AurumトータルRNA 96キット (96well 20 回分 )96 2 回分 10セット 758,000 室温 Aurumバキュームマニホールド 103,000 構成内容 : バキュームレギュレーター (1) ステージ(1) 交換用ルアーキャップ (4) カラムアダプタープレート(1) チュービング(1) JA AurumトータルRNA Fatty and Fibrous Tissueキット (50 回分 ) 49,000 室温 構成内容 :50ml PureZOL RNA isolation reagent* RNA bindingカラム (50) 2ml 蓋なしcollectionチューブ (50) 2ml 蓋付遠心チューブ (100) 1.5ml 蓋付遠心チューブ (50) DNaseⅠ( 凍結乾燥品 ) Low stringency wash solution Elution solution DNase dilution solution * ただし構成品の PureZOL RNA isolation reagent は 4 保存にて 1 年 バキュームフォーマットでは Aurum バキュームマニホールドが必要になります 14 サンプル調製

15 核酸サンプル調製 DNA 精製 DNA 精製 Quantum Prep プラスミド精製キット Quantum Prepプラスミド精製キットは バクテリアからプラスミドDNAを精製するための試薬キットです 本キットは バイオ ラッド独自の珪藻土マトリクスを採用しているため すぐれた回収量および精製度を得ることができます 高純度に精製されたプラスミドはそのままDNAシーケンシング ジーントランスファー DNAミュータジェネシス クローニングおよび制限酵素処理に使用できます また 本キットには溶菌から回収までに必要とされるほとんどの試薬が含まれています 操作も簡便であるため プラスミド精製が短時間に行えます Quantum Prep Mini キット Quantum Prep kit Quantum Prep Midi キット Brand X Brand Y Phenol/chloroform Plasmid yield in μg/1.5ml culture Quantum Prepの優れた回収能プラスミドを保持した大腸菌 DH5α 培養液 1.5mlから 24μgのプラスミドを回収 Quantum Prep Mini キット Quantum Prep Midi キット 入数 100 回分 20 回分 1カラムあたりの培養液量 1 2ml 40 50ml 1カラムあたりの回収量 (High copyプラスミド ) <40μg μg カタログ番号 品名 価格 保存 Quantum Prep Miniキット (100 回分 ) 29,000 室温 Quantum Prep Midiキット (20 回分 ) 26,000 室温 インスタジーンDNA 精製マトリクスインスタジーンマトリックスはPCRの鋳型として使用するに十分な純度のゲノムDNAを1 時間で迅速に精製するための製品です 特別に配合された6%w / v キレックス樹脂は PCRを阻害する細胞溶解産物を吸着し 上清中にゲノムDNAが精製されます See Also PCR 関連 : P.362 DCode 微生物 群集解析 : P.272 上清のゲノム DNA はそのまま PCR にすぐに使用することができます Web: Request or download bulletin: 2074 InstaGene Protocol PCR-ready Add bacterial colony to water. Spin and remove supernatant. Add InstaGene matrix and incubate at 56 C for 30 min. Vortex and incubate at 100 C for 8 min. Spin; use supernatant for PCR. カタログ番号 品名 価格 保存 インスタジーンDNA 精製マトリクス (100 回分 )20ml 15,000 4 サンプル調製 15

16 核酸サンプル調製 DNA クリーンアップ キレックス 100 分子生物学グレード ヌクレアーゼ並びにリガーゼ阻害剤フリーの樹脂は PCRを阻害しないように サンプル中からPCR 阻害物と金属イオンを除去することができます Web: Request or download bulletin: 2074 カタログ番号 品名 価格 キレックス100, 50 g, sodium, dry mesh, 分子生物学グレード75 150μm wet bead 25,000 DNA クリーンアップ バイオ ラッドは PCR 前 PCR 後のサンプル調製のための様々なクリーンアップカラムや充填済みカラムを提供しています 次ページのセレクションガイドを参照いただき 用途に合った最適な製品をお選びください See Also アガロースゲル システム : P.254 DNAラダー : P.268 Freeze N Squeeze DNA Gel Extraction Spin Columns Freeze N Squeezeスピンカラムは アガロースゲルからDNAを回収するためのキットです 凍結したゲルをスピンカラムに入れ 遠心することでDNAをゲルから押し出します 溶液の調製やカラム 担体 メンブレン等の準備も不要です 簡単な操作による回収 精製に要する時間は約 10 分 実際に操作を行う時間はわずか 1 分です 精製された50-23,000bpのDNAはそのままPCR サブクローニング ライゲーション 制限酵素処理 等様々な酵素反応にご使用いただけます 1,000 bp Recovery of DNA fragments using Freeze N Squeeze spin columns. Extracted fragments were rerun on a ReadyAgarose 1 % T A E g e l. L a n e 1, precision molecular mass ruler; lane 7, EZ Load 100 bp PCR molecular ruler. Web: Freeze N Squeeze Method 20ºC for 5 min Purified DNA Cut out gel slice. Chop into pieces. Transfer to spin column and freeze for 5 min. Spin for 3 min. Recover purified DNA. カタログ番号 品名 価格 保存 Freeze N Squeezeスピンカラム (25 回分 ) 25 本 10,000 室温 Freeze N Squeezeスピンカラム (100 回分 )100 本 28,000 室温 16 サンプル調製

17 核酸サンプル調製 DNA クリーンアップ 充填済みスピンカラム プレパックサイズ排除 ( ゲルろ過 ) スピンカラムにより 放射線標識したプローブ ニックトランスレーション産物 プラスミド PCR 混合物を簡単にクリーンアップ / 精製できます バイオスピン / マイクロバイオスピン /PCR Kleen カラムにより迅速にDNAやタンパク質のサンプルをクリーンアップし 簡単 にサイズ排除クロマトグラフィーを使用できます これらのカラムは複数のサイズで利用可能で 複数の分子量排除限界を提供し 様々なニーズに応えます 以下のチャートを使用して ニーズに最も合うカラムを選んでください 充填済みスピンカラムセレクションガイド バイオスピン 6 マイクロバイオスピン 6 バイオスピン 30 マイクロバイオスピン 30 PCR Kleen 充填担体 Special grade Bio-Gel P-6 gel Special grade Bio-Gel P-6 gel Special grade Bio-Gel P-30 gel Special grade Bio-Gel P-30 gel Special grade size exclusion gel 平衡化バッファー 10mM Tris, ph 7.4, or SSC buffer* 10mM Tris, ph 7.4, or SSC buffer* 10mM Tris, ph 7.4, or SSC buffer* 10mM Tris, ph 7.4, or SSC buffer* 10mM Tris, 1mM EDTA, ph 7.0 用途 20 塩基未満のオリゴヌクレオチドの脱塩 標識反応 : DNA からの 20 塩基 (bp) 未満の未取り込みヌクレオチドの除去 200bp 未満の PCR 産物からのプライマーやプライマーダイマーの除去 バッファー交換 ( 制限酵素断片 PCR 産物 酵素反応 シークエンシング用テンプレート ) DNA シークエンシング反応混合物の精製 ** リボプローブ精製 *** 抗体 酵素 タンパク質溶液の脱塩 分子量 6,000 未満のタンパク質の精製 分子量 40,000 未満のタンパク質の精製 ベッドボリューム 1.1ml 0.7ml 1.1ml 0.7ml 0.6ml 回収 / 分離 20base もしくは 20bp の回収 20base もしくは 20bp の回収 22base もしくは 22bp の回収 22base もしくは 22bp の回収 700bp 以上の回収 脱塩 脱塩 ddntpsの分離 ddntpsの分離 プライマー プライマーダイマーの 分離 分子量の排除限界 球状タンパク質 6,000 6,000 40,000 40,000 8,000,000 サンプル容積 μl 10-75μl μl 10-75μl μl 遠心タイプ スイングバケット マイクロ冷却 スイングバケット マイクロ冷却 マイクロ冷却 オートクレーブ可否 可 可 可 可 可 * 150mM NaCl, 17.5mM sodium citrate, ph7.0. ** In Tris buffer. *** In RNase-free Tris buffer. サンプル調製 17

18 核酸サンプル調製 DNAクリーンアップ See Also エンプティーカラム : P.97 バイオゲル担体 : P.77 バイオスピン マイクロ バイオスピン ミニバイオ スピンカラム : P.90 プレパックバイオスピン / マイクロバイオスピンカラムバイオスピン / マイクロバイオスピンカラムにより DNA( およびタンパク質 ) サンプルを迅速にクリーンアップします バイオスピン / マイクロバイオスピンカラムは 特別にサイズ分画した Bio-Gel P 担体を充填して Tris または SSC バッファー中に十分に水和させて出荷し 直ぐに使用できます これらの製品により 塩 オリゴヌクレオチド プライマーダイターミネーターおよび DNA RNA からの小分子 並びにタンパク質サンプルがわずか 10 分間で効果的にクリーンアップ / 除去されます 5cm End cap Reservoir 3.7cm working bed height 1.2ml bed volume 3cm End cap 2cm working bed height Reservoir 0.8ml bed volume 4 分間の微量遠心チューブスピンでの迅速なサンプル精製 ddntpおよびダイターミネーターの効率的な (98%) 除去 収率の向上 22bp 未満のDNAの95% 回収率 10~100μlのサンプル充填に適応 RNaseフリーのマイクロバイオスピンP-30 Trisスピンカラムで Porous 30μm polyethylene bed support retains fine particles Luer end fitting with snap-off tip Luer end fitting with snap-off tip プレパックバイオスピン / マイクロバイオスピンカラム の安全なリボプローブ調製 Web: and /protein-cleanup PCR Kleen スピンカラム PCR Kleen スピンカラムはゲルろ過担体をプレパックしたカラムで 200bp 以上の PCR 産物の精製に適しています 本キットの使用により 反応液に含まれる dntps プライマー プライマーダイマー 酵素などその後のアプリケーションに影響を及ぼす物質の除去が簡単に行えます 精製後の DNA は PCR サブクローニング 制限酵素処理 他の酵素反応等にそのまま使用することができます PCR Kleen スピンカラム Web: Request or download bulletin: 2311 カタログ番号 品名 包装 価格 保存 Micro Bio-Spin Columns With Bio-Gel P-6 in Tris Buffer マイクロバイオスピンカラム6 Tris 25 本 17, B04 マイクロバイオスピンカラム6 Tris 25 本 4セット 57, マイクロバイオスピンカラム6 Tris 1,000 本 290,000 4 Micro Bio-Spin Columns With Bio-Gel P-30 in Tris Buffer マイクロバイオスピンカラム30 Tris 25 本 17, B04 マイクロバイオスピンカラム30 Tris 25 本 4セット 57, マイクロバイオスピンカラム30 Tris 1,000 本 290, マイクロバイオスピンカラム30 Tris RNase free 25 本 17, B04 マイクロバイオスピンカラム30 Tris RNase free 25 本 4セット 57,000 4 Micro Bio-Spin Columns With Bio-Gel P-6 in SSC Buffer マイクロバイオスピンカラム6 SSC 25 本 17, B04 マイクロバイオスピンカラム6 SSC 25 本 4セット 57, マイクロバイオスピンカラム6 SSC 1,000 本 290,000 4 Micro Bio-Spin Columns With Bio-Gel P-30 in SSC Buffer マイクロバイオスピンカラム30 SSC 25 本 17, B04 マイクロバイオスピンカラム30 SSC 25 本 4セット 57, マイクロバイオスピンカラム30 SSC 1,000 本 290,000 4 Bio-Spin Columns With Bio-Gel P-6 in Tris Buffer バイオスピンカラム6 Tris 25 本 20, B04 バイオスピンカラム6 Tris 25 本 4セット 72,000 4 Bio-Spin Columns With Bio-Gel P-30 in Tris Buffer バイオスピンカラム30 Tris 25 本 20, B04 バイオスピンカラム30 Tris 25 本 4セット 72,000 4 Bio-Spin Columns With Bio-Gel P-6 in SSC Buffer バイオスピンカラム6 SSC 25 本 20, バイオスピンカラム6 SSC 1,000 本 370,000 4 Bio-Spin Columns With Bio-Gel P-30 in SSC Buffer バイオスピンカラム30 SSC 25 本 20,000 4 PCR Kleenスピンカラム PCR Kleenスピンカラム 25 本 15, サンプル調製