Table 1. Inhibition response of ALT activity by patient's serum a NS, normal saline; b Serum, high ALT serum; c PS, patient's serum; d In parentheses

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1 SUMMARY We observed a 74-year old woman with chronic hepatitis C, whose alanine aminotransferase (L-Alanine: 2-oxoglutarate aminotransferase: EC ; ALT) activity in serum was below 2 IU/L (reference value: 9-25 IU/L). ALT activity in normal human serum was inhibited when the patient's serum was added to normal serum. By immunoprecipitation of the patient's IgG was not blocked by adding alanine as a substrate, and also by adding pyridoxal phosphate as a coenzyme. The purified patient's IgG was found to be composed of ity of IgG was exclusively located in the Fab region of the molecule. Key words: alanine aminotransferase, inhibitor, IgG, hepatitis C.

2 Table 1. Inhibition response of ALT activity by patient's serum a NS, normal saline; b Serum, high ALT serum; c PS, patient's serum; d In parentheses is the corresponding inhibition as a percentage.

3 生 物物 理 化 学 が 認 め ら れ る か 否 か 実 験 を 行 っ た. し た 如 く, 抗IgG (γ鎖), そ の 結 果, Fig. 1に 示 の 活 性 阻 害 が 阻 止 され る こ とは なか った は 明 ら か に κ鎖 優 位 4. で あ る こ と が 判 明 し た. 精 製 し た 患 者 お よ び 正 常IgGの 者IgG分 そ の 結 果, 正 常IgGと (ア ラ ニ ン) お よ び 補 酵 素 を 一 定 濃 度 に 添 加 し, 患 者IgGの (ピ リ ドキ 活 性 阻害 が 分 子 量 を 確 認 す る た め, 阻 止 さ れ る か 否 か 実 験 を 行 った. そ の 結 果, ア ラ ニ ン5mM, Fig. 2に 示 し た 如 く, 患 お よ び ピ リ ド キ サ ル リン 酸500μMの 子 を 構 成 す る γ鎖 は 分 子 量 約55,000, 26,000と 清 に基 質 サ ル リ ン 酸) お け る所 見 行 っ た. (Table 3). 基 質 お よび 補 酵 素 の 添 加 実 験 高ALT血 患 者IgGのSDS-PAGEに SDS-PAGEを 50: 227 抗 κ鎖 抗 血 清 で は モ ノ ク ロ ナ ー ル バ ン ドは 観 察 さ れ な か っ た が, L鎖 2) 2006; ほ ぼ 同 様 で あ り, L鎖 は約 ドメイ ン欠 損 な どの 害 率 は い ず れ も90%以 に よ り患 者IgGの 濃 度 で もALT活 性 阻 上 で あ り, 基 質 お よ び 補 酵 素 の 添 加 活 性 阻 害 は 阻 止 さ れ る こ と が な か っ た. 分 子 異 常 は 確 認 さ れ な か っ た. 3) 5. 還 元 処 理 お よ び ノ イ ラ ミ ニ ダ ー ゼ 処 理 に よ る 患 者IgG のALT活 ALTの 性阻害実験 患 者IgGを2-MEお 患 者IgGのALT結 よ び ノ イ ラ ミ ニ ダ ー ゼ 処 理 し, ALT 活 性 阻 害 実 験 を 行 っ た と こ ろ, こ れ ら の 処 理 に よ り患 者IgG 結 合 部 位 が 患 者IgG分 子 の ど の 領 域 に あ る の か, 抗 γfc, 抗 γfab抗 血 清 と 反 応 さ せ た 沈 降 物 を 用 い て, 沈 降 物 でALTの の 結 果, 清 でFab領 子 のFc領 域 を ブ ロ ッ ク し た 場 合 のALT活 ほ と ん ど変 化 な か っ た が, 抗 γfab抗 血 域 を ブ ロ ッ ク した 場 合 の 活 性 阻 害 率 は0%と, ら か にALTと どの 活 性 阻 害 が 阻 止 さ れ る か 実 験 を 行 っ た. そ IgG分 性 阻 害 率 は82%と Table 2. Identification of ALT inhibitor by immunoprecipitation assay using patient's serum and purified IgG 合部位 明 の 結 合 が 阻 止 さ れ る こ と が 確 認 さ れ た. 考 察 酵 素 低 活 性 異 常 か ら 活 性 阻 害 を 示 す 免 疫 グ ロ ブ リ ン (失 活 因 子) A-IgG, IgM, anti-γ anti-μ anti-λ A-IgA, A-κ, anti-α anti-κ の 存 在 を 最 初 に 報 告 し た の はPeel8)のLD例 であ る AA-λ, antiserum. が, そ の 後, 国 内 で もLD, IgGに よ るALT活 ALP例 が 報 告 さ れ て い る2,4,5,9). 性 阻 害 例 は, Maekawaら10)が 出 し報 告 し て い る が, 最初 に 見 そ の 機序 につ い て は 未 だ 明 らか に さ れ て い な い. Fig. 1. Electrophoretic pattern (a) of patient's IgG and immunofixation pattern (b) with antisera to human IgG (4), IgA (5), IgM (6), kappa light (7) and lambda light (8). 1, normal serum; 2, patient's serum; 3, patient's IgG. Anode is to the right. Fig. 2. SDS-PAGE pattern 1, marker; 2, normal patient's of purified IgG with 2-ME. serum; 3, patient's IgG; 5, purified normal IgG. serum; 4, purified

4 Table 3. ALT inhibition assay by purified IgG after 2- mercaptoethanol and neuraminidase treatment With 2-ME, treated with 0.1M 2-mercaptoethanol; With NA, treated with neuraminidase (5 units). 2) Fujita K, Takeya C, Saito T, Sakurabayashi I. Macro lactate dehydrogenase: an LDH-immunoglobulin M complex that inhibits lactate dehydrogenase activity in a patient's serum. Clin Chim Acta 1984; 140: ) Wickus GG, Smith MJ. Rapid loss of lactate dehydrogenase isoenzyme activity in serum by cold-induced formation of immunoglobulin G-lactate dehydrogenase complex. Clin Chem 1984; 30: ) Hirano T, Matsuzaki H, Miura M, Kojima E, Tamura N, Sekine T. An immunoglobulin G inhibiting lactate dehydrogenase activity. Clin Chim Acta 1986; 159: ) Maekawa M, Sudo K, Iwahara K, Kanno T. Lactate dehydrogenase inhibition by immunoglobulin G in human serum. Clin Chem 1986; 32: ) Kraaijenhagen RJ, Backer ET. Reversible loss of lactate dehydrogenase isoenzymes and lactate dehydrogenase activity in patient's serum. Clin Chem 1988; 34: ) Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the

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