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6 動植物 と細菌のカチオ ン輸送系の接点 C.Kup 51 こ の こ と は も し マ ル チ ス パ ン型 膜 蛋 白質 が 細 菌 膜 大 腸 菌 のKupの ホ モ ロ グが 糸 状 菌48 や 高 等 植 物49,50 へ 正 規 の 状 態 で組 み 込 まれ る こ とが あ れ ば 動 植 物 の か ら 見 い だ さ れ て い る これ らの トラ ン ス ポ ー タ ー は イ オ ン輸 送 系 が 細 菌 で 機 能 を も っ て 発 現 す る 可 能 性 を 細 胞 外 か ら内 へK を輸 送 す る さ らに こ の ホモ ログ 示 唆 し て い る カ チ オ ン トラ ン ス ポ ー タ ー に つ い て は の 遺 伝 子 が ヒ トの 遺 伝 子 に も見 い だ せ る と報 告 され て 大 腸 菌 に お け る機 能 発 現 の 報 告 は1998年 い る50 た 筆 者 らは 植 物 のShaker型K 以前 はなかっ チ ャネル KAT1 AKT2 51,56 が 大 腸 菌 のK 取 込 み 変 異 を相 補 す る こ と 2 大 腸 菌 に お け る 植 物K トラ ン スポ ー ター の活 性 発 現 と ス ク リー ニ ン グ 系 の 開 発 原 核 細 胞 由 来 の 膜 蛋 白質 を活 性 発 現 させ る の な ら大 を 見 いだ した57 Ⅱ 1項 に 記 した とお り 大 腸 菌 の3種 類 の 主 要 なK 取 込 み 系 Kdp Kup Trk K トラ ン ス ポ ー タ ーKAT1やAKT2と と植 物 の は相 同 性 は な 腸 菌 真 核 細 胞 由 来 の膜 蛋 白質 を活 性 発 現 さ せ る の な く 構 造 の 点 か ら は ま っ た く別 の イ オ ン トラ ン ス ポ ー ら酵 母 また は 動 物 細 胞 と い う の が い ま まで の 常 識 で あ タ ー で あ る 大 腸 菌 の こ の3種 る な か で も 動 植 物 細 胞 の カ チ オ ン トラ ン ス ポ ー タ の変 異 株 は低 い濃 度 のK 培 地 で は増 殖 で きな い とこ ーの機能 解析 には 突 然変 異体 の作 製 が可能 でバ ック ろ が KAT1 AKT2を 類 の トラ ンス ポ ー タ ー 発 現 させ る と 低 いK 濃 度 の グ ラ ン ド 内 在 性 活 性 の低 い発 現 系 が 構 築 可 能 な 酵 培 地 で増 殖 した 図3 ま た 植 物 のAtKupト 母 は 有 効 な遺 伝 子 発 現 系 で あ る 実 際 にK 取 込 み 系 が ポ ー タ ー に つ い て も大 腸 菌 のKup変 欠 損 した 酵 母 の 突 然 変 異 体 を用 いて 植 物 のK トラ ン 遺伝 子 変 異 株 の 活 性 を相 補 した49 植 物 のK トラ ンス ポー タ ー が 細 菌 で も機 能 発 現 す る こ とは 正 規 の コ ン フ ォ メ ー の 機 能 解 析 も行 なわ シ ョン を大 腸 菌 膜 で 保 持 して い る こ と を強 く示 唆 して れ た 動 物細胞 を用 いて行 なわ れ る電気 生理 学測定 を い る そ こで そ れ ま で 実 験 的 に証 明 され て い な か っ 補 完 す る 発 現 系 と し て ①1次 た Shaker型K ス ポ ー タ ー のKATI51 が 単 離 され KAT54 AKTI52 やHKT153 やHKT153 ス ク リーニ ング系 とし ラ ンス 異 を 含 む3種 類 の チ ャ ネ ル の トポ ロ ジ ー を大 腸 菌 の発 て便 利 ② 長 期 にお け る生 理 条件 で の細胞 への影 響 を調 べ ら れ る 点 で 有 効 で あ る 大 腸 菌 に お け る真 核 細 胞 由 来 の膜 蛋 白 質 の 活 性 発 現 に つ い て は成 功 例 は 限 られ て い た こ れ は 大 腸 菌 と真 核 生 物 の 膜組 成 膜 へ の輸送 機構 折 りた た み機 構 な ど が 異 な る こ とや 大腸 菌 での糖 鎖修 飾 な ど の機 能 欠 損 が 予 想 さ れ 実 際 の検 討 が 多 くな され な か っ た た め と想 像 され る しか し 1993年 種 々 の抗 が ん 剤 に対 し て耐 性 を ひ き起 こす 機 能 を も っ たMDR1 P糖 蛋 白質 が 図3植 糖 鎖非 修飾 で機 能 を もって大 腸 菌 で 発 現 し た55 前 述 した よ う に 細 菌 と動 物K チ ャ ネ ル とK トラ ン ス ポ ー タ ー は 細 菌 細 胞 膜 に 機 能 を も っ て 発 現 す る 大 腸 菌 に は2種 類 の膜 系 外 膜 と 内膜 が あ る 外 膜 に はK が 自由 に通 過 で き る孔 が あ る 内 膜 は カ チ オ ン な ど の透 過 の 障 壁 に な る 内 膜 に は さ ま ざ ま な 物 質 を透 過 させ る トラ ン ス ポ ー タ ー が 存 在 し K 透 過 の た め に はTrk Kdp,Kup系 が あ る こ れ ら 3種 のK 輸 送 系遺 伝 子 に 変 異 を導 入 し た変 異 株 は 外 部 に100mMのNaCIを 植 物 の イ オ ン輸 送 系 の 間 に は 基 本 構 造 に相 同性 が み える 含 む 培 地 で は30mMのK きな い 植 物 のK トラ ンス ポ ー タ ー 遺伝 子 を導 入 す る と 10mNのK がな い と生 育 で 濃 度 で も生 育 で きる よ うに なる 植 物 のK トラ ンスポ ー タ ーが 細 菌 細 胞 膜 に正 しく組 み込 まれ てい る と示 唆 され る49,57) 1993

7 1) Karpel, R., Olami, Y., Taglicht, D., Schuldiner, S., Padan, E. : J. Biol. Chem., 263, (1988) 2) Pinner, E., Padan, E., Schuldiner, S.: J. Biol. Chem., 267, (1992) 3) Ivey, D. M., Guffanti, A. A., Zemsky, J., Pinner, E., Karpel, R., Padan, E., Schuldiner, S., Krulwich, T. A. : J. Biol. Chem., 268, (1993) 4) Ohyama, T., Igarashi, K., Kobayashi, H.: J. Bacteriol., 176, (1994) 5) Nakamura, T., Komano, Y., Itaya, E., Tsukamoto, K., Tsuchiya, T., Unemoto, T. : Biochim. Biophys. Acta, 1190, (1994) 6) Nakamura, T., Enomoto, H., Unemoto, T.: Biochim. Biophys. Acta, 1275, (1996) 7) Nakamura, T., Hsu, C., Rosen, B. P.: J. Biol. Chem., 261, (1986) 8) Taglicht, D., Padan, E., Schuldiner, S.: J. Biol. Chem., 266, (1991) 9] Nakamura, T., Komano, Y., Unemoto, T.: Biochim. Biophys. Acta, 1230, (1995) 10) Rothman, A., Padan, E., Schuldiner, S.: J. Biol. Chem., 271, (1996) 11) Williams, K. A., Kaufer, U. G., Padan, E., Schuldiner, S., Kuhlbrandt, W. : EMBO J., 18, (1999) 12) Enomoto, H., Unemoto, T., Nishibuchi, M., Padan, E., Nakamura, T. : Biochim. Biophys. Acta, 1370, (1998) 13) Booth, I. R.: Microbiol. Rev., 49, (1985) 14) Tokuda, H., Nakamura, T., Unemoto, T.: Biochemistry, 20, (1981) 15) Nakamura, T., Tokuda, H., Unemoto, T.: Biochim. Biophys. Acta, 776, (1984) 16) Nakamura, T., Kawasaki, S., Unemoto, T.: J. Gen. Microbiol., 138, (1992) 17) Nakamura, T., Tokuda, H., Unemoto, T. : Biochim. Biophys. Acta, 692, (1982) 18) Kumar, S., Nicholas, D. J. D. : Biochim. Biophys. Acta, 765, (1984) 191 Putnoky, P., Kereszt, A., Nakamura, T., Endre, G., Grosskopf, E., Kiss, P., Kondorosi, A.: Mol. Microbiol., 28, (1998) 20) Tromballa, H.-W.: Biochim. Biophys. Acta, 904, (1987) 21) Hiramatsu, T., Kodama, K., Kuroda, T., Mizushima, T., Tsuchiya, T.: J. Bacteriol., 180, (1998) 22) Kosono, S., Morotomi, S., Kitada, M., Kudo, T. Biochim. Biophys. Acta, 1409, (1999) 23) Ito, M., Guffanti, A. A., Oudega, B., Krulwich, T. A. : J. Bacteriol., 181, (1999) 24) Rhoads, D. B., Waters, F. B., Epstein, W.: J. Gen. Physiol., 67, (1976) 25) Stumpe, S., Schlosser, A., Schleyer, M., Bakker, E. P.: in Handbook of Biological Physics (ed. Konings, W. N., Kaback, H. R., Lolkema, J. S.), Vol. 2, pp , Elsevier Science B. V., Amsterdam (1996) 26) Nakamura, T., Suzuki, F., Abe, M., Matsuba, Y., Unemoto, T. : Microbiology, 140, (1994) 27) Nakamura, T., Matsuba, Y., Yamamuro, N., Booth, I. R., Unemoto, T. : Biochim. Biophys. Acta, 1219, (1994) 28) Nakamura, T., Katou, Y., Shimizu, Y., Matsuba, Y., Unemoto, T. : Biochim. Biophys. Acta, 1277, (1996) 29) Nakamura, T., Yamamuro, N., Stumpe, S., Unemoto, T., Bakker, E. P. : Microbiology, 144, (1998) 301 Nakamura, T., Yuda, R., Unemoto, T., Bakker, E. P. : J. Bacteriol., 180, (1998) 31) Murata, T., Takase, K., Yamato, I., Igarashi, K., Kakinuma. Y.: J. Biol. Chem., 271, (1996) 32) Schrempf, H., Schmidt, O., Kummerlen, R., Hinnah, S., Muller, D., Betzler, M., Steinkamp, T., Wagner, R. : EMBO J., 14, (1995) 33) Doyle, D. A., Cabral, J. M., Pfuetzner, R. A., Kuo,

8 A., Gulbis, J. M., Cohen, S. L., Chait, B. T., Mac- Kinnon, R. : Science, 280, (1998) 34] Durell, S. R., Hao, Y., Nakamura, T., Bakker, E. P., Guy, H. R. : Biophys. J., 77, (1999) 35) Tholema, N., Bakker, E. P., Suzuki, A., Nakamura, T. : FEBS Lett., 450, (1999) 36) Schlosser, A., Hamann, A., Bossemeyer, D., Schneider, E., Bakker, E. P. : Mol. Microbiol., 9, (1993) 37) Gulbis, J. M., Mann, S., MacKinnon, R.: Cell, 97, (1999) 38) Sukharev, S. I., Blount, P., Martinac, B., Blattner, F. R., Kung, C. : Nature, 368, (1994) 39) Chang, G., Spencer, R. H., Lee, A. T., Barclay, M. T., Rees, D. C. : Science, 282, (1998) 40) Sukharev, S. I., Blount, P., Martinac, B., Kung, C.: Annu. Rev. Physiol., 59, (1997) 41) Nakamaru, Y., Takahashi, Y., Unemoto, T., Nakamura, T. : FEBS Lett., 144, (1999) 42) Levina, N., Totemeyer, S., Stokes, N. R., Louis, P., Jones, M. A., Booth, I. R. : EMBO J., 18, (1999) 43) Calamita, G., Bishai, W. R., Preston, G. M., Guggino, W. B., Agre, P.: J. Biol. Chem., 270, (1995) 44) Weissenborn, D. L., Wittekindt, N., Larson, T. J.: J. Biol. Chem., 267, (1992) 45) Milkman, R. : Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, (1994) 46) Baker, K. E., Ditullio, K. P., Neuhard, J., Kelln, R. A. : J. Bacteriol., 178, (1996) 47) Wallace, B., Yang, Y., Hong, J., Lum, D. : J. Bacteriol., 172, (1990) 48) Banuelos, J. A., Klein, R. D., Alexander, S. J., Rodriguez-Navarro, A. : EMBO J., (1995) 49] Kim, E. J., Kwak, J. M., Uozumi, N., Schroeder, J. I.: Plant Cell, 10, (1998) 50) Santa-Maria, G. E., Rubio, F., Dubcovsky, J., Rodriguez-Navarro, A. : Plant Cell, 9, (1997) 51) Anderson, J. A., Huprikar, S. S., Kochian, L. V., Lucas, W. J., Gaber. R. F. : Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 89, (1992) 52) Sentenac, H., Bonneaud, N., Minet, M., Lacroute, F., Salmon, J. M., Gaymard, F., Grignon, C. : Science, 256, (1992) 53) Rubio, F., Gassmann, W., Schroeder, J. I.: Science, 270, (1996) 54] Uozumi, N., Gassmann, W., Cao. Y., Schroeder, J. I.: J. Biol. Chem., 270, (1995) 55] Bibi, E., Gros, P., Kaback, H. R. : Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90, (1993) 56) Cao. Y., Ward, J. M., Kelly, W. B., Ichida, A. M., Gaber, R. F., Anderson, J. A., Uozumi, N., Schroeder, J. I., Crawford. N. M. : Plant Physiol., 109, (1995) 57] Uozumi, N., Nakamura, T., Schroeder, J. I., Muto, S. : Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, (1998)

45 癌抑制遺伝子PTEN 酵 素活 性 を阻害 す る活性 中心 後述 付 近 で の ミス セ ン 者 に は 乳 癌 甲状 腺 癌 卵 巣 癌 が 発 生 しや す い こ とが ス 変 異 が 多 く 子 宮 内 膜 腫 で 頻 繁 に観 察 さ れ る よ うな 知 ら れ て い る Cowden病 ナ ン セ ン ス フ レ ー ム シ フ ト変 異 は あ ま り検 出 さ れ な

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