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ひできはらしない
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1 ベトナム Bien Hoaにおける初産婦の母乳中ダイオキシンレベルステロイドホルモンレベル乳児身体計測値との関連について金沢大学大学院医学系研究科保健学専攻看護科学領域健康発達看護学講座地域環境保健看護学分野博士前期課程小池郁美

2 ダイオキシン類通常は無色固体脂溶性の性質をもつ農薬などの塩素を含む化学物質の製造の際に副産物として生産され田畑へ散布され環境を汚染する土壌や水中へ長期間残留し微量でも環境や人体に強い影響をもたらす可能性が大きい 2,3,7,8-TCDD

3 ダイオキシン類が生体に及ぼす影響妊娠中のマウスに高用量 2,3,7,8 TCDD を連続投与すると口蓋裂水腎症の先天異常が出現する (Couture et al., 1990) TCDD 曝露は唾液中のテストステロン値の減少エストラジオールプロゲステロン値の減少を引き起こす (Weisglas et al., 2000, Moran et al.,2003, Barsotti et al,1979 ) 動物実験において妊娠中および授乳中の 2,3,7,8 TCDD の曝露による仔への生殖毒性甲状腺機能免疫機能への影響が認められている (Faqi et al., 1998;Mably et al., 1992,Nishimura et al.,2005,narasimhan et al.,1994;gehrs et al.,1997)

4 ダイオキシンと母乳乳児との先行研究よりヒトにおいてダイオキシン類は母乳中に高率に排出され女性においては最も効率的な排出経路 (Landrigan et al., 2002,Abraham et al.,1996) 母乳中ダイオキシンレベルは初産婦と経産婦で比較すると初産婦の方が有意にダイオキシンレベルが高い (Uehara R et al.,2005) 母親の母乳中ダイオキシンレベルが新生児の大きさに負の相関を示した (Tawara et al.,2003)

5 ベトナム戦争と枯葉剤 Da Nang Phu Cat Bien Hoa

6 ベトナム枯葉剤の汚染レベルに関する先行研究より Hot Spot の土壌の沈殿物のダイオキシン濃度は西欧諸国と比較し高濃度であった (Schecter et al., 2006) ベトナムにおいて枯葉剤非散布地区よりも散布地区の方が高い (Nhu et al.,2009,saito et al.,2010) ベトナム戦争中の枯葉剤散布作戦による健康影響を調査する研究はいくつかみられるがほとんどがアメリカ人帰還兵等を対象にしたものであり枯葉剤散布後もその土地に住み続けている人を対象にした調査は少ない

7 枯葉剤とステロイドホルモンとの先行研究よりベトナム Phu Cat 8 名非散布地区 8 名の初産婦を対象にした調査で散布地区のステロイドホルモン値が有意に高かったダイオキシンとコルチゾールとの相関はベル型エストラジオールとの相関はU 字型相関がみられた (Nhu et al.,2011) ダイオキシン類とステロイドホルモンの関連について毒性等量のみの報告でありダイオキシン異性体がどのステロイドホルモンに作用するかが明らかでないまた対象者が 8 名と少なく分析に必要な対象者を確保する必要がある

8 研究目的調査地区としてベトナムにおけるダイオキシン汚染のあった Hot Spotの1つであるBien Hoaを初めて選定し 17 種類の母乳中ダイオキシン異性体レベルとステロイドホルモン値その母親の母乳で育児されている子どもの身体計測値母親のステロイドホルモン値と乳児身体計測値との3つの関連性について分析に必要な初産婦の対象数を増やして明らかにすることを目的とした

9 研究方法

10 研究方法対象地区調査期間調査対象者ベトナム戦争中に高濃度汚染のあったBien Hoaを対象地区とした 2010 年 8 月 2010 年 8 月時点で授乳中の初産婦 55 名その第 1 子を対象とした

11 研究方法母乳採取授乳中の母親本人現地女性スタッフ調査員のいずれかが母乳を手で20ml 搾乳した採取後は-70 度で冷凍保存し日本に移送した唾液採取母親の唾液を母親本人が2ml 採取し, 70 で冷凍保存し日本に移送した血液採取母親に対し調査員が5ml 採血を行いその場で血清分離した後冷凍保存し日本に移送した身体計測対象となった母親の母乳を哺乳している児に対し調査員が身長体重頭囲胸囲を計測した

12 研究方法質問紙調査た調査員が対象者に対し聞き取り記録し ( 年齢居住年数世帯収入児の性別月齢等 ) サンプル測定方法母乳中ダイオキシンレベル: 質量分析法ステロイドホルモンレベル: 液体クロマトグラフィー -タンデム質量分析法

13 母乳中ダイオキシン類の分析方法母乳脂質脂質抽出母乳約 10g 振とう抽出エーテル層シュウ酸カリウム0.25g エタノール25ml ジエチルエーテル50ml 石油エーテル50ml 水層ジエチルエーテル25ml 石油エーテル25ml 振とう抽出 2 % NaCl 250ml 水 100mlを 2 回洗浄無水硫酸ナトリウム脱水 K.D. 濃縮 N 2 ガス濃縮乾固重量測定抽出精製分画回収定量濃度内部標準液 13 C ラベル化 Dioxin 類 20µl 添加アルカリ分解ヘキサン抽出 KOH35ml N ヘキサン30ml 振とう抽出を3 回多層シリカゲルカラムクロマトグラフィ N ヘキサン抽出溶液 10ml 添加 N ヘキサン300mlを 2.5ml/minで流下活性炭分散シリカゲルカラムクロマトグラフィ 25% ジクロロメタン /N ヘキサン溶液を 60ml を 2.5m l/m in で流 PCB 分画活性炭分散シリカゲル1g ダイオキシン類分解溶液添加後 30 分放置トルエン 300ml を 2.5ml/min で流下 PCDDs/Fs 分画濃縮乾固高分解能ガスクロマトグラフィ / 質量分析計 (GC/HRMS) 測定濃度算出

14 コレステロールステロイドホルモンの生合成プレグネノロン 17 OH プレグネノロンデヒドロエピアンドロステロン (DHEA) プロゲステロン (P4) 17 OH プロゲステロンアンドロステンジオンデオキシコルチゾールテストステロンコルチゾール (F) エストラジオールコルチゾン (E) 病態生理で切った内科学 4 内分泌疾患 ; 医学教育出版社

15 統計解析の手法母乳中ダイオキシンレベルとステロイドホルモンレベルの相関母親のステロイドホルモンレベルと乳児身体計測値の相関スピアマンの順位相関係数母乳中ダイオキシンレベルと児計測値との相関ピアソンの相関係数

16 倫理的配慮本研究は金沢大学医学倫理委員会の承認を得て行った ( 承認番号 89) 本調査にあたり参加者には Bien Hoa の人民委員会を通じて対象者に研究主旨を説明し参加の同意を得た当日調査会場である診療所に来場したすべての人に対しベトナム語で書かれた文書にて研究参加の同意を得た

17 結果

18 初産婦の属性 n=55 平均値 S.D 年齢 ( 才 ) 身長 (cm) 体重 (kg) BMI 世帯収入 ( 10 4 VND/ 月 ) 居住年数 ( 年 )

19 乳児の属性男児 (S.D) n=34 女児 (S.D) n=21 月齢 ( ヶ月 ) 3.3 (1.1) 2.9 (1.1) 身長 (cm) 62.9(4.0) 60.5 (4.5) 体重 (g) (1274.8) (848.6) 頭囲 (cm) 40.0 (1.9) 38.7 (1.5) 胸囲 (cm) 41.8 (3.0) 39.3 (2.2)

20 母乳中ダイオキシンレベル median (inter quartile) PCDD congeners 2,3,7,8 TCDD ( ) 1,2,3,7,8 PeCDD ( ) 1,2,3,4,7,8 HxCDD ( ) 1,2,3,6,7,8 HxCDD ( ) 1,2,3,7,8,9 HxCDD ( ) 1,2,3,4,6,7,8 HpCDD ( ) OCDD ( ) PCDF congeners 2,3,7,8 TCDF ( ) 1,2,3,7,8 PeCDF ( ) 2,3,4,7,8 PeCDF ( ) 1,2,3,4,7,8 HxCDF ( ) 1,2,3,6,7,8 HxCDF ( ) 1,2,3,7,8,9 HxCDF ( ) 2,3,4,6,7,8 HxCDF ( ) 1,2,3,4,6,7,8 HpCDF 4.14 ( ) 1,2,3,4,7,8,9 HpCDF ( ) OCDF ( ) Total PCDDs ( ) Total PCDFs ( ) Total PCDD+PCDFs ( )

21 母乳中ダイオキシンレベルとステロイドホルモンレベルとの関連母乳中ダイオキシンレベルと乳児身体計測値との関連母親のステロイドホルモンレベルと乳児身体計測値との関連

22 母乳中ダイオキシンレベルとステロイドホルモンレベルとの関連母乳中ステロイドホルモンレベルと乳児身体計測値との関連母親のステロイドホルモンレベルと乳児身体計測値との関連

23 血清エストラジオール唾液母乳中ダイオキシンレベルと血清唾液中ホルモン値との相関表 (r 2 値 ) r 2 値 >0.1 r 2 値 >0.2 r 2 値 >0.3 2,3,7,8- TCDD (n=46) 1,2,3,7,8- PeCDD (n=46) 1,2,3,4,7,8- HxCDD (n=46) PCDD PCDF Total 1,2,3,6,7,8- HxCDD (n=45) 1,2,3,7,8,9- HxCDD (n=46) 1,2,3,4,6,7, 8-HpCDD (n=47) OCDD (n=44) 2,3,7,8- TCDF (n=46) 1,2,3,7,8- PeCDF (n=47) 2,3,4,7,8- PeCDF (n=45) 1,2,3,4,7,8- HxCDF (n=46) 1,2,3,6,7,8- HxCDF (n=45) 1,2,3,7,8,9- HxCDF (n=45) 2,3,4,6,7,8- HxCDF (n=46) 1,2,3,4,6,7, 8-HpCDF (n=43) 1,2,3,4,7,8, 9-HpCDF (n=47) OCDF (n=46) Total PCDD (n=47) Total PCDF (n=43) Total PCDD+PCD F (n=47) 1,2,3,4,6,7,8 HpCDF コルチゾール中デヒドロエピアンドロステロンコルチゾンテストステロンアンドロステンジオンデヒドロエピアンドロステロン (DHEA) プロゲステロンコルチゾンテストステロンデヒドロエピアンドロステロンアンドロステンジオンプロゲステロンエストラジオール

24 母乳中ダイオキシンレベルと血清中 DHEA の相関 10.0 y = 0.246x x R² = n= y = 0.560x x R² = n= DHEA(pg/mL) DHEA(pg/mL) ,2,3,7,8 PeCDD(pg/lipid) ,2,3,4,7,8 HxCDD(pg/lipid)

25 母乳中ダイオキシンレベルと血清中 DHEA の相関 y = 0.014x x R² = n= y = 2.405x x R² = n=46 DHEA(pg/mL) DHEA(pg/mL) ,2,3,4,6,7,8 HpCDD(pg/lipid) ,3,7,8 TeCDF(pg/lipid)

26 母乳中ダイオキシンレベルと血清中 DHEA の相関 y = 0.186x x R² = n= y = 1.623x x R² = n=47 DHEA(pg/mL) DHEA(pg/mL) ,2,3,4,6,7,8 HpCDF(pg/lipid) ,2,3,4,7,8,9 HpCDF(pg/lipid)

27 母乳中ダイオキシンレベルとステロイドホルモンレベルとの関連母乳中ダイオキシンレベルと乳児身体計測値との関連母親のステロイドホルモンレベルと乳児身体計測値との関連

28 男女母乳中ダイオキシンレベルと性別ごとの児の計測値との相関表 (r 2 値 ) r 2 値 >0.1 r 2 値 >0.2 r 2 値 >0.3 r 2 値 >0.4 PCDD PCDF Total 2,3,7,8- TCDD (n=29) 1,2,3,7,8- PeCDD (n=31) 1,2,3,4,7,8- HxCDD (n=31) 1,2,3,6,7,8- HxCDD (n=30) 1,2,3,7,8,9- HxCDD (n=31) 1,2,3,4,6,7,8- HpCDD (n=31) OCDD (n=30) 2,3,7,8- TCDF (n=30) 1,2,3,7,8- PeCDF (n=31) 2,3,4,7,8- PeCDF (n=29) 1,2,3,4,7,8- HxCDF (n=30) 1,2,3,6,7,8- HxCDF (n=29) 1,2,3,7,8,9- HxCDF (n=29) 2,3,4,6,7,8- HxCDF (n=29) 1,2,3,4,6,7,8- HpCDF (n=26) 1,2,3,4,7,8,9- HpCDF (n=30) OCDF (n=30) Total PCDD (n=31) Total PCDF (n=28) Total PCDD+PCDF (n=31) 身長 E 体重 E E 児男児胸囲頭囲 E E E E 胸囲 E ,3,7,8- TCDD (n=17) 1,2,3,7,8- PeCDD (n=15) 1,2,3,4,7,8- HxCDD (n=15) 1,2,3,6,7,8- HxCDD (n=15) 1,2,3,7,8,9- HxCDD (n=15) 1,2,3,4,6,7,8- HpCDD (n=16) OCDD (n=14) 2,3,7,8- TCDF (n=16) 1,2,3,7,8- PeCDF (n=16) 2,3,4,7,8- PeCDF (n=16) 1,2,3,4,7,8- HxCDF (n=16) 1,2,3,6,7,8- HxCDF (n=16) 1,2,3,7,8,9- HxCDF (n=16) 2,3,4,6,7,8- HxCDF (n=17) 1,2,3,4,6,7,8- HpCDF (n=17) 1,2,3,4,7,8,9- HpCDF (n=17) OCDF (n=16) Total PCDD (n=16) Total PCDF (n=15) Total PCDD+PCDF (n=16) 身長女児頭囲体重 E 児女児胸囲頭囲胸囲

29 母乳中ダイオキシンレベルと女児頭囲との相関 y = 0.644x R² = y = x R² = 頭囲 (cm) 38.0 頭囲 (cm) ,2,3,7,8 PeCDD(pg/lipid) ,2,3,6,7,8, HxCDD y = x R² = y = x R² = 頭囲 (cm) 38.0 頭囲 (cm) ,2,3,7,8,9 HxCDD(pg/lipid) ,3,7,8TCDF(pg/lipid)

30 母乳中ダイオキシンレベルと女児頭囲との相関 y = 0.649x R² = n=16 頭囲 (cm) ,3,4,7,8 PeCDF(pg/mL)

31 母乳中ダイオキシンレベルとステロイドホルモンレベルとの関連母乳中ダイオキシンレベルと乳児身体計測値との関連母親のステロイドホルモンレベルと乳児身体計測値との関連

32 母親のステロイドホルモンレベルと性別ごとの児の計測値との相関表 (r 2 値 ) r 2 値 >0.1 r 2 値 >0.2 r 2 値 >0.3 r 2 値 >0.4 血清中唾液中コルチゾールコルチゾンテストステロンデヒドロエピアアンドロステンプロゲステロンエストラジオーンドロステロンジオンルコルチゾールコルチゾンテストステロンデヒドロエピアアンドロステンンドロステロンジオンプロゲステロンエストラジオール男身長体重児頭囲唾液中アンドロステンジオン胸囲コルチゾールコルチゾンテストステロンデヒドロエピアアンドロステンプロゲステロンエストラジオーンドロステロンジオンルコルチゾールコルチゾンテストステロンデヒドロエピアアンドロステンンドロステロンジオンプロゲステロンエストラジオー r 体重ル女2 =0.506 児身長頭囲胸囲

33 結果のまとめ母乳中ダイオキシンレベルとステロイドホルモン値との関連について血清中 DHEAとダイオキシン異性体で多く関連がみられ U 字型相関が得られた 1,2,3,4,6,7,8 HpCDFとステロイドホルモンと多くの関連がみられた母乳中ダイオキシンレベルと乳児身体計測値との関連について男児よりも女児の方が有意な負の相関が多く見られた男児 : 胸囲と有意な負の関連が最も多くみられた女児 : 頭囲と有意な負の関連が多くまた頭囲に次いで胸囲も相関が多く見られた母親のステロイドホルモンレベルと乳児身体計測値との関連について女児に多く関連がみられ U 字型相関が多かった

34 考察

35 母乳中ダイオキシンレベルとステロイドホルモンレベルについて血清中 DHEAとダイオキシンレベルでは U 字型の相関だった同様にダイオキシンレベルとアンドロステンジオンやエストラジオールとの相関もU 字型相関であったダイオキシンレベルとDHEAレベルとの相関はU 字型相関反対にエストロゲンとの関連は山型の相関であったダイオキシンレベルがDHEAに影響しその後の合成されるホルモンに影響している (Manh et al.,2012) ダイオキシン異性体が直接体内の DHEA レベルに影響し他のステロイドホルモンについても直接ダイオキシンが影響していることが考えられる

36 母乳中ダイオキシンレベルと乳児身体計測値についてダイオキシンレベルと計測値との関連は男児よりも女児の方が強い結果であった母乳中胎盤中臍帯血中のダイオキシン濃度と出生児の体重低下頭囲と負の関連がある (Koopman et al.,1996, Vreugdenhil et al.,2004, Tawara et al.,2009) イタリアセベソで起こったダイオキシン類高曝露での研究では出生児の性別は女児に偏っていたダイオキシン高曝露下においては男児が女児よりも高頻度に流産死産し出生児が女児に偏る結果となった可能性が示唆されている (Mocarelli et al.,1996) 出生にあたって女児の方が男児よりも影響をうけづらく出生後の女児の方が負の相関を強く示した結果となったのではないかと考えられる

37 ステロイドホルモンレベルと乳児身体計測値について妊娠中のダイオキシン曝露が児童期の子どもの DHEA S レベルに影響し児の二次性徴にも影響すると示唆されている (Rennert et al.,2012) これまでの論文において母親のホルモン値と乳児の計測値の関連についての報告はされていないダイオキシン曝露によって母体ホルモン値を変化させ結果としてその子どもの成長に影響を及ぼしていることも考えられるが今後成長に影響を及ぼす児のホルモンレベル等の測定等さらなる詳細な調査が必要と考えられる

38 本研究の意義本研究の意義と研究の限界ダイオキシン等の環境中に存在する有害な化学物質が人体に及ぼす影響を明らかにすることで各個人の自主的取り組み化学物質規制の審査基準への反映適切なリスク管理体制への構築母子の健全な成長発達に貢献することが出来ると考えられる研究の限界本研究の調査対象はベトナムダイオキシン高濃度汚染地区に住む母親 55 名と少なく非汚染地区との比較をしていないため本結果の一般化には限界がある

39 今後の展望今後対象者数を増やし対照地区での調査を行うとともに詳細な測定を行っていくまた疫学研究だけでなく基礎臨床医学研究をはじめ幅広い知見を求め各専門分野の研究者との共同研究をさらに発展させていく必要がある

40 結論 1. 母乳中ダイオキシンレベルとステロイドホルモンとの関連では血清中 DHEA とダイオキシン異性体で最も多くの関連がみられ U 字型相関が得られた 2. 母乳中ダイオキシンレベルと乳児身体計測値との関連では男児では胸囲女児では頭囲胸囲で多く関連がみられた性別でみると男児よりも女児の方が多くの関連がみられた 3. ステロイドホルモン値と乳児身体計測値との関連では関連がみられたのは女児で顕著に多かったしかし母親のステロイドホルモン値と乳児身体計測値の関係はさらなる詳細な調査が必要である

Microsoft Word - TR-APA

Microsoft Word - TR-APA 2017/09/25 GC/MS 用ダイオキシン類自動前処理装置 ~ 新型精製カラムを用いた内標準物質回収率と精製効果排ガス試料 ~ 1. はじめに JIS K 0311: 2008 排ガス中のダイオキシン類の測定法及び JIS K 0312: 2008 工業用水工場排水中のダイオキシン類の測定法の 6.1 試料の前処理の概要において JIS に挙げた精製操作以外の操作であっても次の条件を満たすことが確認されれば用いても良いと記載され