乳癌基礎研究 Vol マウス乳癌好発系 C57BL /6MT(+) の樹立鈴木悠加 1) 平岩典子 2) 螺良愛郎 3) 坂倉照妤 4) 1) 三重大学大学院地域イノベーション学 2) 理研 BRC 験動物開発室 3) 関西医科大学病理学第二講座 4) 三重大学はじめにマウス

Size: px

Start display at page:

Download "乳癌基礎研究 Vol マウス乳癌好発系 C57BL /6MT(+) の樹立鈴木悠加 1) 平岩典子 2) 螺良愛郎 3) 坂倉照妤 4) 1) 三重大学大学院地域イノベーション学 2) 理研 BRC 験動物開発室 3) 関西医科大学病理学第二講座 4) 三重大学はじめにマウス"

ありさつまがみ
4 years ago
Views:

1 マウス乳癌好発系 C57BL /6MT(+) の樹立鈴木悠加 1) 平岩典子 2) 螺良愛郎 3) 坂倉照妤 4) 1) 三重大学大学院地域イノベーション学 2) 理研 BRC 験動物開発室 3) 関西医科大学病理学第二講座 4) 三重大学はじめにマウス乳癌ウィルス (mouse mammary tumor virus; MMTV) は 1936 年に乳汁因子として Bittner により発見された 1) MMTV は哺乳類で最初に発見された RNA 腫瘍ウィルスである MMTV は DBA/2 マウス C3H マウスのように乳汁に発現して乳汁を介して仔マウスに水平伝達される外来性ウイルス (exogenous virus) として存在するもの GR マウスのようにマウスのゲノム中に遺伝子座を持ち内在性ウイルス (endogenous virus) として存在し垂直伝達されるとともに乳汁中に発現し水平伝達もするものマウスゲノム中に遺伝子座をもち内在性ウィルスとして存在するがほとんど発現しない不活性型 MMTV の三つに大きく分けられる 2) C57BL/6 は乳癌を移植しても抵抗性を示しまた嫌発性である 3) 今回我々が保有し維持している C57BL/6MT(+) は乳癌好発系を示すので報告する材料と方法乳癌好発系の樹立経産マウス ( 日本 SLC) の 1 匹に乳癌が見つかったためこのマウスの仔を兄妹交配により 16 世代以上交配した連絡先 : 三重大学地域イノベーション学研究科三重県津市栗真町屋町 1577 三重大学地域イノベーション研究開発拠点高層棟 5F SNPs および SSLP によるゲノム解析 C57BL/6MT(+) および C57BL/6CrSlc の尾より自動 DNA 抽出機を用いてDDNAを抽出した 12 の SNP loci(rs , rs , rs , rs , rs , rs , CEL , rs165065, rs ) を用いた SNP 解析とexon 7-11Nnt gene を用いた allele frequenvies 解析を行った病理標本腫瘍確認後屠殺し腫瘍を採取し病理学的検討を行った病理学的検討にはホルマリン固定後に HE 染色 MMTV のエンベロープ糖蛋白質であるgp52を抗 gp52 抗体を用いて免疫組織学染色を行ったウィルス粒子の確認のために腫瘍をオスミウム固定後透過型電子顕微鏡観察を行った前癌病変の有無を調べるため乳腺を採取し脱脂後ヘマトキシリン染色を行い whole mount 標本を作成した内在性ウィルスの検出 C57BL/6MT(+) C57BL/6CrSlc GRS/A SHN および C3H/HeN の尾より自動 DNA 抽出機を用いて DNA を抽出した Endogenous mouse mammary tumor virus Mtv1(AF228550/C3H/ HeN 9851 bp) の LTR gag pro pol env および sagltr 部域のプライマーを作成し PCR により内在性ウィルスの存在を調べたキーワード : 乳がんモデル動物乳癌ウィルス 53

2 腫瘍を発生しない系統を里親とした仔の腫瘍の発症 C57BL/6MT(+) を交配し妊娠 19.5 日で帝王切開を行い BALB/cAJcl nu/+( 日本クレアから購入理研 BRC 飼育中腫瘍発生は確認されていない ) の母親に里仔につけ離乳後雄と交配 1 産後雌のみ 6 カ月以上飼育し腫瘍の発生を調べた結果 SNPs および SSLP によるゲノム解析 SSLP および SNPs マーカーを用いた遺伝背景検査 4) によりC57BL/6MT(+) はC57BL/6CrSlc であることが示された ( 図 1 ) 乳癌発生率経産マウス103 匹中乳癌発生匹数は 94 匹発生率は91.2% で平均発生年齢 ( 日 ) は273.8 日であった未産マウスでは 46 匹中乳癌を発生したのは1 匹であり乳癌発生率は 2% 発生年齢 ( 日 ) は 317 日であった ( 表.1 ) 乳癌組織像乳癌組織は C3Hに似たタイプ A 腺癌であることが認められた ( 図 3 ) 免疫染色により乳癌組織が MMTV のエンベロープ糖蛋白質 gp52 陽性であることが確認された ( 図 4 ) 図 1. C57BL/6N 亜系統の遺伝的違いを区別できる SNPs 表 1. C57BL/6 M T( + ); 乳癌発生率 54

3 図 2. C57BL/6 M T( + ) の乳癌組織像図 3. C57BL/6 M T( + ) の乳腺前癌病変像 55

4 図 4. C57BL/6 M T( + ) の乳癌組織における抗 gp52 抗体による免疫染色図 5. C57BL/6 M T( + ) の乳癌組織における透過型電子顕微鏡像 56

5 ウィルス粒子の確認乳癌組織を透過型電子顕微鏡を用いて観察すると細胞質内に乳癌ウィルス粒子の存在が確認された ( 図 5 ) 内在性ウィルスの検出内在性 MMTV を調べた結果 GRS/A は gag pro pol env および sagltr 部域を持ち SHN は全ての部域を持ち C3H/HeN は gag と sagltr 部域を持っていた C57BL/6MT(+) C57BL/6CrSlc は gag と sagltr 部域を持つ C 3 H / H e N 型を示した ( 図 6 ) 腫瘍を発生しない系統を里親とした仔の腫瘍の発生 4 腹 16 匹の雌が得られたが乳癌発生した個体はいなかった考察乳癌はマウスにおける自然発生腫瘍のうち最も多い腫瘍の 1つであるミルク中に確認される乳癌ウィルス (MMTV) が主な発症原因である MMTV はゲノムに挿入し, 挿入部位の遺伝子変異や周辺遺伝子の発現異常によって, 癌を誘発するこれはウィルス挿入による遺伝子の変異や遺伝子発現の変化によるものであることが知られている本研究の結果から我々の保有するC57BL/ 6MT(+) の乳癌は好発系で C3H 様の腺癌であった更に妊娠より乳癌発生率が促進された乳癌発生原因はミルクを通じて仔マウスに水平伝達される MMMT であることが判明したまた C57BL/6MT(+) はゲノム的に乳癌を自然発生しない元系統であるC57BL/6NCrSlc であることも確認した C57BL/6MT(+) は C57BL/6NCrSl と同様宿主 DNA 中に MMTV がプロウィルスゲノムの状態で組み込まれていることを確認した更にC3HおよびDBA/2 のマウス乳癌ウィルスのようにミルクに発現しミルクを通じて仔マウスに水平伝達される外来性として存在するのか GR マウスのようにマウスゲノムの中に内在性ウィルスとして遺伝子座を持ち垂直伝達されると同時にミルク中にも発現して水平伝達するのかを検討が期待されるヒト乳癌発症はウィルスの可能性を示唆する報告はあるがいまだ証明はされていないしかしマウスで得られた乳癌発症プロセスからの知見をヒトの乳癌の診断予防治療にめざした臨図 6. MMTV 遺伝子構造と PCR による検出領域 57

6 床的研究に役立てることを目標にしている謝辞理研 BRC 実験動物開発室目加田和之博士のご尽力頂き感謝いたします参考文献 1 )Bittner, JJ; Some possible effects of nursing on the mammary tumor in mice, Science 84, )Hilger, J and Bentvelzen, P: Murine mammary tumor virus.interaction between viral and genetic factors in murine mammary cancer, Adv Cancer Res 26, )Pucillo, C et al; Expression of a MHC class II transgene determines both superantigenicity and susceptibility to mammary tumor virus infection, J Exp Med 178, )Mekada, K et al; Genetic differences among C57BL/6 substrains, Exp Anim 54,

Untitled

Untitled 上原記念生命科学財団研究報告集, 25 (2011) 86. 線虫 C. elegans およびマウスをモデル動物とした体細胞レベルで生じる性差の解析井上英樹 Key words: 性差, ストレス応答,DMRT 立命館大学生命科学部生命医科学科緒言性差は雌雄の性に分かれた動物にみられ, 生殖能力の違いだけでなく形態, 行動などそれぞれの性の間でみられる様々な差異と定義される. 性差は, 形態や行動だけでなく疾患の発症リスクの男女差といった生理的なレベルの差異も含まれる.