第31回生理学技術研究会・第20回生物学技術研究会予稿集 PDF版

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1 合 同 開 催 第 31 回 生 理 学 技 術 研 究 会 第 20 回 生 物 学 技 術 研 究 会 予 稿 集 日 時 : 平 成 21 年 2 月 19 日 ( 木 ) 20 日 ( 金 ) 会 場 : 岡 崎 コンファレンスセンター 大 学 共 同 利 用 機 関 法 人 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課

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3 第 31 回 生 理 学 技 術 研 究 会 ( 同 時 開 催 : 第 5 回 奨 励 研 究 採 択 課 題 技 術 シンポジウム) 第 20 回 生 物 学 技 術 研 究 会 会 期 : 平 成 21 年 2 月 19 日 ( 木 )~20 日 ( 金 ) 会 場 : 自 然 科 学 研 究 機 構 岡 崎 コンファレンスセンター 主 催 : 生 理 学 研 究 所 技 術 課 愛 知 県 岡 崎 市 明 大 寺 町 字 西 郷 中 38 TEL : (0564) ,FAX : (0564) 月 19 日 ( 木 )(1 階 大 会 議 室 ) 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 愛 知 県 岡 崎 市 明 大 寺 町 字 西 郷 中 38 TEL : (0564) ,FAX : (0564) プログラム 13:30 ~ 13:50 挨 拶 事 務 連 絡 13:50 ~ 14:50 研 修 講 演 (L1: 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 生 体 膜 研 究 部 門 深 田 正 紀 ) 14:50 ~ 15:10 休 憩 記 念 撮 影 15:10 ~ 16:20 ポスター 発 表 グループⅠ[P1 P3 P5 : 奇 数 番 号 ] 16:20 ~ 17:30 ポスター 発 表 グループⅡ[P2 P4 P6 : 偶 数 番 号 ] 17:30 ~ 17:50 自 由 討 論 18:00 ~ 20:00 懇 親 会 (1 階 中 会 議 室 ) 2 月 20 日 ( 金 )(1 階 大 会 議 室 1 階 中 会 議 室 ) ( 口 演 会 場 1 1 階 中 会 議 室 ) 8:50 ~ 9:00 挨 拶 事 務 連 絡 9:00 ~ 10:20 口 演 発 表 (A1~4) 10:20 ~ 10:40 休 憩 10:40 ~ 11:20 口 演 発 表 (A5~6) 11:20 ~ 12:00 話 題 提 供 (T1) 12:00 ~ 13:00 昼 食 (1 階 中 会 議 室 ) 13:00 ~ 14:20 口 演 発 表 (A7~10) 14:20 ~ 14:30 まとめ 14:30 ~ 14:45 休 憩 ( 口 演 会 場 2 1 階 大 会 議 室 ) 8:50 ~ 9:00 挨 拶 事 務 連 絡 9:00 ~ 10:20 奨 励 研 究 採 択 課 題 技 術 シンポジウム(S1~4) 10:20 ~ 10:40 休 憩 10:40 ~ 12:00 奨 励 研 究 採 択 課 題 技 術 シンポジウム(S5~8) 12:00 ~ 13:00 昼 食 (1 階 中 会 議 室 ) 13:00 ~ 14:20 奨 励 研 究 採 択 課 題 技 術 シンポジウム(S9~12) 14:20 ~ 14:30 まとめ 14:30 ~ 14:45 休 憩 (1 階 大 会 議 室 ) 14:45 ~ 15:45 特 別 講 演 (SP1: 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 大 庭 明 生 ) 15:45 ~ 16:00 研 究 会 のまとめ - 1 -

4 目 次 プログラム 1 参 加 者 へのお 願 い 6 発 表 者 へのお 願 い 7 研 究 会 会 場 周 辺 地 図 8 岡 崎 コンファレンスセンター 案 内 図 9 研 修 講 演 (1 階 大 会 議 室 ) (L1) 細 胞 内 の 情 報 伝 達 メカニズムの 解 明 へ 向 けて 生 細 胞 イメージングとプロテオミクスを 用 いた 解 析 深 田 正 紀 ( 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 生 体 膜 研 究 部 門 ) 12 特 別 講 演 (1 階 大 会 議 室 ) (SP1) 大 学 共 同 利 用 機 関 技 術 課 はどこへ 向 かうのか 大 庭 明 生 ( 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 ) 14 第 5 回 奨 励 研 究 採 択 課 題 技 術 シンポジウム(1 階 大 会 議 室 ) (S1) リポソームの 電 子 顕 微 鏡 を 用 いたウラン 染 色 に 代 わる 染 色 条 件 の 検 討 愛 媛 大 学 総 合 科 学 研 究 支 援 センター 生 物 機 能 解 析 分 野 首 藤 政 親 16 (S2) 皮 膚 知 覚 特 性 を 重 視 した 情 報 通 信 機 器 の 入 力 環 境 に 関 する 基 礎 的 検 討 東 北 大 学 工 学 部 工 学 研 究 科 菊 池 裕 人 17 (S3) 病 理 分 野 におけるマクロ 写 真 を 利 用 した3DCG の 作 製 における 基 礎 的 検 討 東 京 大 学 附 属 病 院 病 理 部 金 子 伸 行 18 (S4) トランスジェニックカタユウレイボヤ 作 製 技 術 の 導 入 と 完 全 閉 鎖 系 水 槽 飼 育 名 古 屋 大 学 理 学 研 究 科 附 属 臨 海 実 験 所 福 岡 雅 史 19 (S5) 非 放 射 性 (non-ri) 試 薬 による 糖 脂 質 代 謝 測 定 法 の 開 発 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 斉 藤 久 美 子 20 (S6) ヒト 培 養 細 胞 への 遺 伝 子 導 入 発 現 阻 害 によるフィブリノゲン 生 成 分 泌 に 及 ぼす 影 響 浜 松 医 科 大 学 医 学 部 附 属 病 院 検 査 部 澤 村 暢 21 (S7) 動 物 実 験 施 設 内 から 分 離 した 緑 膿 菌 の DNA 多 型 の 検 出 と 薬 剤 感 受 性 についての 検 討 熊 本 大 学 生 命 資 源 研 究 支 援 センター 病 態 遺 伝 分 野 中 村 直 子 22 (S8) 中 枢 機 能 に 対 する 音 楽 の 効 果 筑 波 大 学 医 学 系 技 術 室 秋 山 佳 代 23 (S9) 生 体 表 面 の 移 動 マーカ 追 随 システムの 開 発 徳 島 大 学 ソシオテクノサイエンス 研 究 部 石 田 富 士 雄 24 (S10) 微 弱 電 波 の 無 線 LAN ブリッジを 利 用 した 自 動 避 難 経 路 誘 導 システム 岩 手 大 学 総 務 企 画 部 情 報 企 画 課 栗 田 宏 明 25 (S11) レーザの 保 護 メガネ - 自 然 科 学 研 究 機 構 技 術 連 携 - 核 融 合 科 学 研 究 所 山 内 健 治 分 子 科 学 研 究 所 鈴 井 光 一 国 立 天 文 台 川 島 進 26 生 理 学 研 究 所 大 庭 明 生 吉 友 美 樹 基 礎 生 物 学 研 究 所 古 川 和 彦 (S12) ホームケージ 用 摂 水 摂 餌 量 連 続 計 測 装 置 の 開 発 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 佐 治 俊 幸

5 口 演 発 表 (1 階 中 会 議 室 ) (A1) 学 生 実 験 における 酵 母 の 胞 子 形 成 条 件 の 検 討 筑 波 大 学 生 命 環 境 科 学 等 技 術 室 応 用 生 物 化 学 系 木 澤 祥 恵 30 (A2) イムノブロッティングを 用 いたタンパク 質 の 特 異 的 検 出 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 壁 谷 幸 子 31 (A3) 学 生 実 験 を 活 用 したタンパク 質 2 次 元 マップの 作 成 九 州 工 業 大 学 情 報 工 学 部 楠 本 朋 一 郎 32 (A4) Peptide mass fingerprint 用 サンプルの 保 存 条 件 の 検 討 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 水 谷 健 33 (A5) MALDI-TOF MS で 用 いるマトリックスの 選 択 等 測 定 方 法 について 奈 良 先 端 科 学 技 術 大 学 院 大 学 研 究 協 力 課 塚 本 潤 子 34 (A6) LC/Q-TOF MS を 用 いた 微 量 タンパク 質 の 同 定 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 森 友 子 35 (A7) 免 疫 組 織 化 学 および 蛍 光 観 察 におけるピットホール 高 知 大 学 教 育 研 究 部 医 療 学 系 医 学 部 門 林 芳 弘 36 (A8) 小 規 模 ミルクプラントでの Koch 法 とスタンプ 法 による 製 造 環 境 の 微 生 物 検 査 帯 広 畜 産 大 学 畜 産 フィールド 科 学 センター 村 上 文 朗 37 (A9) 野 生 霊 長 類 の 薬 用 利 用 植 物 に 関 する 化 学 的 研 究 :Trema orientalis の 抗 寄 生 虫 成 分 を 例 に 京 都 大 学 農 学 研 究 科 山 口 加 乃 子 38 (A10) 次 世 代 DNA シークエンサーの 運 用 における 様 々な 問 題 点 と 解 決 に 向 けた 試 み 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 山 口 勝 司 39 話 題 提 供 (1 階 中 会 議 室 ) (T1) ライトシート 型 顕 微 鏡 DSLM による 三 次 元 ライブイメージング 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 小 林 弘 子

6 ポスター 発 表 (1 階 大 会 議 室 エントランスホール) (P1) fmri 用 刺 激 装 置 の 製 作 改 造 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 伊 藤 嘉 邦 44 (P2) Window Discriminator の 製 作 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 戸 川 森 雄 44 (P3) MRI 計 測 用 樹 脂 製 マウス 頭 部 固 定 装 置 の 製 作 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 小 原 正 裕 45 (P4) LED を 用 いた 小 型 蛍 光 光 度 計 の 開 発 徳 島 大 学 大 学 院 ヘルスバイオサイエンス 研 究 部 先 端 医 研 庄 野 正 行 45 ソシオテクノサイエンス 研 究 部 知 能 情 報 工 学 科 石 田 富 士 雄 (P5) AVR を 用 いたアンプチェッカー 回 路 の 製 作 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 佐 藤 茂 基 46 (P6) 実 演 用 視 覚 刺 激 システムの 開 発 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 竹 島 康 行 46 (P7) 液 体 ヘリウム 急 速 凍 結 試 料 作 製 時 の 工 夫 岩 手 医 科 大 学 共 同 研 究 部 門 バイオイメージングセンター 花 坂 智 人 47 (P8) 透 過 型 電 子 顕 微 鏡 用 細 線 位 相 板 による 位 相 差 観 測 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 大 河 原 浩 47 (P9) 電 子 顕 微 鏡 観 察 の 魅 力 発 信 の 試 み 東 北 大 学 大 学 院 農 学 研 究 科 電 子 顕 微 鏡 室 伊 東 久 美 子 48 (P10) バクテリオファージの TEM 観 察 東 京 工 業 大 学 技 術 部 バイオ 技 術 センター 山 道 桂 子 48 (P11) Chamber と 灌 流 システムの 開 発 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 髙 橋 直 樹 49 (P12) 超 音 波 発 生 機 器 による 迅 速 免 疫 染 色 装 置 の 開 発 富 山 大 学 医 薬 系 技 術 部 病 理 診 断 学 講 座 八 田 秀 樹 49 (P13) マウスの 脳 脊 髄 液 の 採 取 および 脳 室 への 急 性 投 与 実 験 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 山 本 友 美 50 (P14) DAB を 用 いたチトクローム c オキシダーゼ(CO)とバイオサイチンの 二 重 染 色 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 石 原 博 美 50 (P15) GAD67-GFP ノックインマウスを 用 いた 脊 髄 後 角 膠 様 質 GABA ニューロンの 形 態 学 的 解 析 九 州 大 学 医 学 部 統 合 生 理 学 分 野 水 口 洋 子 51 (P16) 逆 行 性 トレーサーと ISH による 三 重 蛍 光 染 色 法 の 検 討 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 大 澤 園 子 51 (P17) ショウジョウバエ 神 経 回 路 形 成 において 軸 索 の 標 的 認 識 およびシナプス 形 成 に 関 わる 遺 伝 子 の 探 索 と 機 能 解 析 国 立 遺 伝 学 研 究 所 技 術 課 谷 口 美 佐 子 52 (P18) CT Scan による 組 織 中 微 小 石 灰 撮 影 と CT Scan が RT-PCR に 及 ぼす 影 響 についての 検 討 島 根 大 学 1 医 学 部 循 環 器 呼 吸 器 外 科 2 医 学 部 解 剖 学 講 座 発 生 生 物 学 3 総 合 科 学 研 究 支 援 センター 生 体 情 報 RI 実 験 分 野 4 医 学 部 附 属 病 院 病 理 部 52 1 栂 とも 子 2 宇 田 川 潤 3 田 邊 洋 子 3 松 本 健 一 4 丸 山 理 留 敬 1 織 田 禎 二 (P19) 衝 撃 波 による 植 物 細 胞 破 壊 現 象 の 画 像 解 析 評 価 熊 本 大 学 衝 撃 極 限 環 境 研 究 センター 嶽 本 あゆみ 53 (P20) 線 虫 C.elegans の 腸 の 色 の 解 析 国 立 遺 伝 学 研 究 所 技 術 課 大 石 あかね 53 (P21) ゼブラフィッシュ 凍 結 精 子 の 解 凍 試 験 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 内 海 秀 子

7 (P22) アオハダトンボ 成 虫 の 未 成 熟 個 体 と 成 熟 個 体 における 視 物 質 発 色 団 量 と 複 眼 構 造 の 比 較 浜 松 医 科 大 学 医 学 部 総 合 人 間 科 学 講 座 外 山 美 奈 弘 中 満 太 郎 堀 口 弘 子 針 山 孝 彦 54 (P23) シロイヌナズナのペルオキシソーム 局 在 異 常 変 異 体 における 光 環 境 適 応 についての 検 討 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 難 波 千 営 子 55 (P24) キネシンの 変 異 体 の 作 製 大 腸 菌 による 発 現 と 精 製 東 京 大 学 理 学 系 研 究 科 技 術 部 佐 伯 喜 美 子 55 (P25) 新 規 酸 受 容 チャネル 複 合 体 PKD1L3/PKD2L1 の 解 析 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 福 田 直 美 56 (P26) 接 着 細 胞 における 細 胞 死 の 評 価 浜 松 医 科 大 学 実 験 実 習 機 器 センター 柴 田 清 56 (P27) 質 量 分 析 計 による ADP-リボシル 化 タンパク 質 の 同 定 法 の 確 立 島 根 大 学 医 学 部 代 謝 生 化 学 長 子 晴 美 57 (P28) 質 量 分 析 装 置 を 用 いたタンパク 質 解 析 実 習 のための 条 件 検 討 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 牧 野 由 美 子 岡 早 苗 57 (P29) VBA を 用 いた 顕 微 鏡 画 像 解 析 用 画 像 並 べソフトウェアの 作 製 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 前 橋 寛 58 (P30) 次 世 代 シーケンサーのデータ 解 析 について 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 西 出 浩 世 58 (P31) 耳 鼻 咽 喉 科 検 査 部 門 システムの 構 築 (インピーダンスオージオメトリーへの 対 応 ) 富 山 大 学 医 薬 系 技 術 部 耳 鼻 咽 喉 科 武 田 精 一 59 (P32) MODx による 生 物 学 技 術 研 究 会 サイトの 構 築 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 水 谷 健 59 (P33) 携 帯 電 話 のブラウザ 機 能 を 利 用 した 緊 急 時 連 絡 システムの 検 討 東 北 大 学 加 齢 医 学 研 究 所 小 森 和 樹 60 (P34) 会 議 室 予 約 システムの 構 築 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 中 村 貴 宣 60 (P35) ネットワークサーバーとファイアウォールシステムの 更 新 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 吉 村 伸 明 村 田 安 永 61 (P36) 基 生 研 耐 震 改 修 工 事 に 伴 うネットワーク 移 設 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 三 輪 朋 樹 61 (P37) 微 弱 な 放 射 線 をイメージングプレートで 検 出 するための 検 討 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 澤 田 薫 62 (P38) マイクロプレートを 用 いた 放 射 能 測 定 における 留 意 点 自 然 科 学 研 究 機 構 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 松 田 淑 美 62 (P39) オープンキャンパスにおける 参 加 者 への 放 射 線 の 啓 蒙 と RI 実 験 室 紹 介 京 都 工 芸 繊 維 大 学 高 度 技 術 支 援 センター 尾 崎 誠 63 (P40) 生 物 資 源 部 門 におけるエネルギー 削 減 の 取 り 組 み 福 井 大 学 ライフサイエンス 支 援 センター 生 物 資 源 部 門 向 川 市 郎 糸 崎 悦 子 前 田 秀 之 63 (P41) 生 理 学 研 究 所 一 般 公 開 における 研 究 紹 介 ビデオの 制 作 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 森 将 浩 64 (P42) 技 官 (Gi-Kwan) のキャリアを 考 える 国 立 遺 伝 学 研 究 所 技 術 課 古 海 弘 康 64 (P43) 実 験 動 物 教 育 研 究 センター 施 設 紹 介 中 部 大 学 実 験 動 物 教 育 研 究 センター 長 原 美 樹 65 (P44) CERN 技 術 職 海 外 派 遣 研 修 報 告 高 エネルギー 加 速 器 研 究 機 構 加 速 器 研 究 施 設 加 速 器 第 三 研 究 系 中 島 啓 光 65 (P45) 生 理 研 における 対 外 広 報 活 動 自 然 科 学 研 究 機 構 生 理 学 研 究 所 技 術 課 永 田 治 66 参 加 者 名 簿

8 参 加 者 へのお 願 い 会 場 について 研 究 会 会 場 は 岡 崎 コンファレンスセンター( 以 下 OCC)です 会 場 については 研 究 会 会 場 周 辺 地 図 および 岡 崎 コンファレンスセンター 案 内 図 をご 覧 ください 受 付 について 受 付 は 一 日 目 の 13:00~13:30 の 間 OCC エントランスホールにて 行 いますので 名 札 と 資 料 をお 取 り ください 遅 れる 場 合 は 事 前 に 連 絡 をお 願 いします 研 究 会 当 日 は OCC 事 務 室 (TEL: )までご 連 絡 ください 旅 費 支 給 者 の 方 へ 航 空 機 利 用 の 場 合 航 空 チケットの 半 券 と 領 収 書 をお 持 ちください 帰 りの 分 は 後 日 郵 送 してください 手 荷 物 について 研 究 会 の 間 手 荷 物 はお 預 かりいたしません 大 会 議 室 後 方 に 荷 物 置 場 を 設 置 いたしますのでご 利 用 くだ さい 貴 重 品 等 については 各 自 の 責 任 でお 願 いします 懇 親 会 参 加 者 へ 一 日 目 の 発 表 終 了 後 OCC 中 会 議 室 で 懇 親 会 を 開 きます 記 念 記 帳 について 研 究 会 の 期 間 中 参 加 記 念 帳 を 大 会 議 室 入 り 口 付 近 に 置 きますので 都 合 を 見 てご 記 帳 ください 記 念 撮 影 について 研 究 会 開 催 中 に 全 体 での 記 念 写 真 撮 影 を 行 います 日 時 等 はプログラムをご 覧 ください 入 構 について 研 究 会 受 付 にてお 渡 しする 名 札 が 入 構 許 可 証 となります 受 付 以 前 に 機 構 内 に 入 られる 方 は 正 門 横 の 守 衛 室 にて 氏 名 所 属 等 を 記 載 し 入 構 手 続 きを 行 ってください 駐 車 場 について 研 究 所 および OCC には 一 般 利 用 駐 車 場 がありませんので 公 共 交 通 機 関 をご 利 用 ください 宿 泊 について ご 自 身 で 宿 泊 を 確 保 される 方 は 研 究 会 会 場 周 辺 地 図 をご 覧 ください ロッジ 宿 泊 者 へ ロッジ 利 用 時 間 は 午 後 3 時 からです また 門 限 は 午 後 10 時 です 門 限 に 間 に 合 わなかった 場 合 は 貸 与 された 各 室 の 鍵 で 玄 関 の 鍵 を 開 けて 入 館 し その 後 鍵 を 掛 けてください 退 館 (チェックアウト)に 際 し て 必 ず 部 屋 の 鍵 を 玄 関 の 鍵 返 却 ポスト に 返 却 してください なお 退 館 時 間 は 午 前 9 時 30 分 までです ご 不 明 な 点 がありましたら 生 理 学 研 究 所 技 術 課 (TEL: , FAX: ) または 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 (TEL: , FAX: ) までご 連 絡 ください - 6 -

9 発 表 者 へのお 願 い 報 告 誌 原 稿 の 提 出 について 報 告 誌 原 稿 は 本 研 究 会 で 用 意 した テンプレートファイル を 使 用 してください 本 研 究 会 ホームページ ( 原 稿 用 テンプレート よりダウンロードが 可 能 です 原 稿 は 平 成 21 年 2 月 16 日 ( 月 )までに Word File と pdf File をメール 添 付 で まで 送 付 してください pdf File はレイアウト 等 の 確 認 のために 必 要 です 発 表 について 1. ポスター 発 表 は ポスター 討 論 の 前 に 画 像 ビューワーを 用 いて 説 明 をしていただきます 説 明 用 の 画 像 は 一 人 1 枚 で 発 表 時 間 は1 分 間 を 予 定 しています( 画 像 は 事 前 に 指 定 の 方 法 でご 提 出 をお 願 いします) 発 表 は2グループに 分 けて 行 います グループⅠのスライド 説 明 とポスターの 閲 覧 お よび 討 論 を 行 った 後 グループⅡを 同 様 に 行 います 2. 口 演 発 表 は20 分 ( 発 表 15 分 質 疑 応 答 5 分 ) 奨 励 研 究 採 択 課 題 技 術 シンポジウムは20 分 ( 発 表 15 分 質 疑 応 答 5 分 )です 十 分 な 質 疑 応 答 の 時 間 が 取 れるよう 発 表 をまとめてください 3. ポスター 発 表 者 は 早 めに 受 付 を 済 ませ 13:30 までにポスターを 展 示 してください なおポスター は 研 究 会 終 了 まで 展 示 をお 願 いします 4. 発 表 内 容 の 補 足 で 用 いる 配 布 資 料 がある 場 合 は 各 自 で 準 備 をお 願 いします ポスター 作 成 について ポスターは 一 発 表 演 題 につき 1 枚 です サイズは 縦 115 cm 横 85 cm 縦 長 です 上 部 20 cm に 演 題 名 所 属 機 関 名 発 表 者 名 を 右 図 の 様 に 記 入 してください パネルの 左 上 に 発 表 番 号 が 貼 ってあり ます 所 定 のパネルにご 展 示 ください 発 表 およびポスターに 関 し 不 明 な 点 は 生 理 学 研 究 所 技 術 課 小 原 正 裕 または 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 大 澤 園 子 まで お 問 い 合 わせください - 7 -

10 研 究 会 会 場 周 辺 地 図 東 岡 崎 駅 から 岡 崎 コンファレンスセンター までは 徒 歩 で10~15 分 程 度 です(ほとんど 上 り 坂 ) タクシー 乗 り 場 とバス 停 は ともに 東 岡 崎 駅 の 南 側 にあります バスは 竜 美 丘 循 環 線 のりば 東 岡 崎 駅 南 口 11 番 おりば 岡 崎 高 校 前 始 発 6:50 最 終 22:55 ( 逆 は 始 発 6:27 最 終 23:12) 運 賃 120 円 7,8 時 台 及 び16~22 時 台 は1 時 間 に4 本 9~15 時 台 は1 時 間 に2 本 です 宿 泊 連 絡 先 (それぞれのロッジの 管 理 人 につながります) 三 島 ロッジ TEL: (22~8 時 は 不 通 ) 参 考 : 岡 崎 セントラルホテル TEL: グリーンホテル 徳 川 園 TEL: 連 絡 先 (できる 限 りFAXを 使 ってください) 研 究 会 会 場 (OCC) TEL: , FAX: 生 理 学 研 究 所 技 術 課 TEL: , FAX: 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 TEL: , FAX:

11 岡 崎 コンファレンスセンター 案 内 図 岡 崎 コンファレンスセンター 事 務 室 生 理 学 研 究 所 技 術 課 基 礎 生 物 学 研 究 所 技 術 課 TEL: TEL: TEL:

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13 研 修 講 演

14 L1 19 日 13:50~ 細 胞 内 の 情 報 伝 達 メカニズムの 解 明 へ 向 けて 生 細 胞 イメージングとプロテオミクスを 用 いた 解 析 自 然 科 学 研 究 機 構 / 生 理 学 研 究 所 / 細 胞 器 官 研 究 系 / 生 体 膜 研 究 部 門 深 田 正 紀 細 胞 は 様 々な 外 界 シグナルを 正 確 に 受 け 取 り 細 胞 内 に 情 報 を 伝 達 し その 刺 激 に 応 じた 生 理 機 能 を 遂 行 する 例 えば 皮 膚 に 傷 が 生 じた 場 合 皮 膚 の 上 皮 細 胞 は 創 傷 部 位 を 埋 める 方 向 に 向 かって 移 動 ( 遊 走 )し 傷 が 閉 じた 時 点 でその 細 胞 移 動 は 停 止 する また 神 経 細 胞 間 のシナプスでは 使 用 状 況 に 応 じて 情 報 伝 達 効 率 が 変 化 する この 柔 軟 な 変 化 はシナプス 可 塑 性 とも 呼 ばれ 記 憶 や 学 習 の 分 子 基 盤 と 考 えられている この ようなダイナミックな 細 胞 移 動 やシナプスの 可 塑 的 変 化 には 空 間 的 位 置 情 報 と 時 間 情 報 を 正 確 に 細 胞 内 に 伝 達 統 合 し 細 胞 の 主 な 構 成 成 分 である 蛋 白 質 を 適 切 に 再 構 築 し 再 配 置 することが 必 要 不 可 欠 である 近 年 の 顕 微 鏡 システムの 発 展 により 我 々 研 究 者 は 生 きた 細 胞 のみならず 細 胞 内 の 蛋 白 質 の 動 態 をより 詳 細 に 可 視 化 できるようになってきた また 質 量 分 析 計 を 用 いる ことにより 微 量 な 検 体 から 精 度 よく 細 胞 内 の 蛋 白 質 の 存 在 様 式 ( 複 合 体 )を 捉 えるこ とができるようになってきた 生 体 膜 研 究 部 門 ではこれらの 技 術 を 生 かして 細 胞 内 の 蛋 白 質 の 動 態 解 析 存 在 様 式 を 明 らかにし 生 体 内 の 巧 妙 な 仕 組 み(とりわけ シナプス における 情 報 伝 達 制 御 機 構 )を 明 らかにしようとしている 本 研 修 講 演 では 細 胞 のダ イナミックな 振 る 舞 いを 紹 介 するとともに 実 際 の 実 験 現 場 での 技 術 面 でのニーズをお 話 ししたい 参 考 文 献 1. Tsutsumi R, Fukata Y, Noritake J, Iwanaga T, Perez F and Fukata M. Identification of G-protein p supunit papmitoppating enzpme. Mop. Cepp. Biop. in press 2. Tsutsumi R, Fukata Y, Fukata M. Discoverp of protein-papmitoppating enzpmes. Pfpgers Arch-Eur. J. Phpsiop. 456, (2008) 3. Fukata Y, Adesnik H, Iwanaga T, Bredt DS, Nicopp RA, and Fukata M. Epipepsp-repated pigand/receptor comppex LGI1 and ADAM22 regupates spnaptic transmission. Science 313, (2006)

15 特 別 講 演

16 SP1 20 日 14:45~ 大 学 共 同 利 用 機 関 技 術 課 はどこへ 向 かうのか 自 然 科 学 研 究 機 構 / 生 理 学 研 究 所 / 技 術 課 大 庭 明 生 大 学 共 同 利 用 機 関 技 術 課 は 創 設 以 来 30 年 余 生 理 学 技 術 研 究 会 の 開 催 と 生 理 学 技 術 研 究 会 報 告 の 発 行 を 通 して 技 術 系 職 員 の 組 織 の 確 立 と 大 学 等 の 技 術 系 職 員 の 技 術 交 流 を 大 学 共 同 利 用 機 関 技 術 課 の 使 命 として 進 めてきた こうした 活 動 も 大 学 の 志 のある 一 部 の 技 術 系 職 員 の 協 力 により 進 めてこられたが 2004 年 の 大 学 の 法 人 化 とともに 大 学 は 技 術 系 職 員 の 組 織 の 確 立 とその 活 動 を 大 学 のテーマとして 進 めるに 至 っている これまでのこうした 技 術 課 の 活 動 も 大 学 に 引 き 継 がれ 新 しい 展 開 を 見 せている こうしたなかで 技 術 課 はどこへ 向 かうのか の 自 問 が 必 要 となっている この 自 答 を 第 Ⅰ 期 (1977 年 -)の 課 の 立 ち 上 げ 第 Ⅱ 期 (1990 年 -)の 課 の 拡 充 第 Ⅲ 期 (1997 年 -)の 研 究 体 制 の 新 たな 流 れへの 対 応 第 Ⅳ 期 (2004 年 -)の 法 人 化 への 対 応 第 Ⅴ 期 (2007 年 -)の 研 究 体 制 の 変 革 への 対 応 の 経 緯 のなかに 探 り 今 技 術 課 はどこにいるのか これからどこへ 向 かおうとし ているのか を 考 えてみたい

17 口 演 発 表 ( 第 5 回 奨 励 研 究 採 択 課 題 技 術 シンポジウム) 本 技 術 シンポジウムの 一 部 は 成 茂 神 経 科 学 研 究 助 成 基 金 の 助 成 基 金 により 運 営 しています

18 S1 20 日 9:00~ リポソームの 電 子 顕 微 鏡 を 用 いたウラン 染 色 に 代 わる 染 色 条 件 の 検 討 愛 媛 大 学 / 総 合 科 学 研 究 支 援 センター/ 生 物 機 能 解 析 分 野 首 藤 政 親 リポゾームは 身 体 の 特 定 部 位 に 医 療 を 輸 送 する 手 段 として 癌 治 療 薬 医 療 品 化 粧 品 等 先 端 医 療 から 日 常 生 活 まで 多 岐 にわたり 使 用 され 多 数 の 研 究 者 技 術 者 からの 注 目 を 集 めている 従 来 リポゾームの 内 部 構 造 の 解 析 には 電 子 顕 微 鏡 によるネガティブ 染 色 法 が 用 いられており その 際 の 染 色 液 としては 酢 酸 ウランが 使 用 されていた しかしな がら 酢 酸 ウランは 核 燃 料 物 質 のため 現 在 購 入 不 可 能 となり それに 代 わる 染 色 液 の 必 要 性 が 急 務 となっている 当 方 が 酢 酸 ウランに 代 わる 染 色 液 として 検 証 を 行 ったのは リンタングステン 酸 モ リブデン 酸 アンモニウム ウーロン 茶 抽 出 物 (Oolong Tea Extract:OTE) タンニン 酸 塩 化 ハフニウム 等 である 実 験 における 工 夫 は 以 下 の 点 にある 支 持 膜 について 親 水 性 に 優 れたコロジオン 支 持 膜 電 子 線 に 強 いホルムバール 支 持 膜 を 状 況 に 応 じ 使 い 分 け 検 証 した 緩 衝 液 について 通 常 使 用 されている 燐 酸 緩 衝 液 では 染 色 液 の 乾 燥 時 に 塩 結 晶 による 汚 れが 生 じた よ って 反 応 産 物 が 出 来 にくいカコジル 酸 緩 衝 液 を 使 用 した 染 色 液 の 濃 度 及 び 時 間 について リポゾームは 親 水 性 基 と 疎 水 性 基 の 二 重 層 内 に 内 空 を 持 ち とりわけ 内 部 構 造 であるラ メラ 構 造 の 観 察 が 不 可 欠 となる しかし 通 常 の 高 濃 度 染 色 液 で 短 時 間 染 色 させる 方 法 で は 外 部 構 造 は 鮮 明 に 見 えるが 内 部 構 造 は 不 明 瞭 となる そこで 低 濃 度 の 染 色 液 を 長 時 間 染 色 する 方 法 での 内 部 構 造 の 観 察 を 試 みた 試 料 を 染 色 液 になじませるための 手 法 について 当 初 400 メッシュグリッドの 上 に 試 料 であるリポゾーム 混 濁 液 を 必 要 とされる 量 盛 っ て 行 っていたが 染 色 状 態 は 不 安 定 であった これを 解 消 するため リポゾーム 混 濁 液 を 一 度 山 盛 りに 盛 った 後 に 濾 紙 で1mm 付 近 まで 吸 い 取 る 処 理 を 行 った この 処 理 で 染 色 状 態 が 安 定 する 率 は 高 まった 今 回 の 実 験 から リンタングステン 酸 モリブデン 酸 アンモニウム 塩 化 ハフニウムは 試 料 固 有 の 特 性 を 認 識 し 適 正 濃 度 と 染 色 時 間 等 の 条 件 を 見 誤 らなければ 酢 酸 ウランに 代 わる 染 色 液 となることが 確 認 できた 今 後 より 多 くの 症 例 実 験 を 行 い 汎 用 性 の 高 いモ デルケース 作 成 を 目 指 したい

19 S2 20 日 9:20~ 皮 膚 知 覚 特 性 を 重 視 した 情 報 通 信 機 器 の 入 力 環 境 に 関 する 基 礎 的 検 討 東 北 大 学 / 工 学 部 工 学 研 究 科 菊 池 裕 人 目 的 現 在 我 々の 生 活 基 盤 は 様 々な 情 報 通 信 機 器 によって 支 えられている その 一 方 で 情 報 通 信 機 器 の 利 用 に 不 安 を 抱 える 層 ( 高 齢 者 や 障 害 を 持 つ 人 々)との 格 差 は 広 がり を 見 せ 社 会 的 な 問 題 の 一 つとして 認 識 されている 特 に 視 覚 に 障 害 を 持 つ 人 々にとって は 操 作 ( 入 力 )と 情 報 取 得 ( 出 力 )の 両 面 において 自 力 での 対 応 が 難 しく 何 らかの 支 援 が 不 可 欠 となる 一 般 に 情 報 通 信 機 器 の 入 力 は ( 入 力 ボタン 等 の)オブジェクト 自 身 が 持 つ 意 味 情 報 オブジェクトの 空 間 的 な 位 置 情 報 という 2 種 類 の 情 報 取 得 により 達 成 される 視 覚 に 障 害 を 持 つ 人 々の 情 報 通 信 機 器 の 利 用 を 想 定 した 時 後 者 の 位 置 情 報 の 取 得 は 非 常 に 困 難 なテーマである このような 問 題 に 対 し 本 研 究 では 位 置 情 報 を 取 得 する 手 法 とし て 振 動 刺 激 によるオブジェクトへの 入 力 誘 導 手 法 を 提 案 し その 有 効 性 について 検 討 する 振 動 刺 激 に 見 られる 認 知 心 理 学 的 な 皮 膚 知 覚 特 性 に 着 目 し 振 動 刺 激 を 用 いた 空 間 的 な 位 置 情 報 の 取 得 および 情 報 通 信 機 器 の 入 力 位 置 誘 導 技 術 の 確 立 を 目 的 に 行 う 方 法 本 研 究 では (1) 振 動 刺 激 に 対 する 皮 膚 知 覚 の 弁 別 に 関 する 実 験 (2) 非 視 覚 環 境 での 位 置 情 報 取 得 に 関 する 実 験 の 2 つの 実 験 を 行 い その 後 これらの 成 果 を 組 み 合 わせ て 提 案 する 入 力 位 置 誘 導 技 術 のプロトタイプをタッチパネル ディスプレイ 上 に 実 装 す る 予 定 である (1)は 基 準 となる 220Hz と 比 較 し 周 波 数 や 波 形 を 変 更 した 時 の 違 いが 識 別 できるかを 回 答 してもらう 実 験 である 振 動 素 子 として 磁 歪 素 子 を 用 い 周 波 数 や 波 形 の 発 振 はフリーウエアの OSCILLATER を 用 いる (2)は1 辺 が 14cm の 正 方 形 の 四 隅 とその 中 間 地 点 4 箇 所 (7cm の 位 置 ) 正 方 形 の 中 心 位 置 の 合 計 9 箇 所 にマークした 試 験 紙 を 提 示 し 目 隠 し 状 態 で 中 心 位 置 以 外 の 8 箇 所 のマーク 位 置 を 再 現 してもらう 実 験 である 試 験 紙 の 提 示 は 視 覚 による 提 示 および 触 覚 による 提 示 ( 目 隠 し 状 態 )の 2 通 りの 方 法 で 行 う 結 果 (1)は 予 備 的 実 験 として 被 験 者 数 名 を 対 象 に 周 波 数 や 波 形 の 変 化 による 識 別 が 可 能 かどうかの 確 認 を 行 った 段 階 である のこぎり 波 とサイン 波 で 比 較 的 容 易 に 80~100Hz と 220Hz の 識 別 が 可 能 であることを 確 認 した (2)は 正 方 形 の 四 隅 にあたる 箇 所 が 内 側 に 再 現 される 傾 向 が 見 られた( 全 体 的 に 円 形 に 近 い 形 状 に 再 現 される 傾 向 ) 考 察 (1)は 実 験 の 詳 細 な 手 続 き 等 を 決 定 して 今 後 本 格 的 に 実 験 を 行 う 予 定 である (2) は Sanders や Millar らの 文 献 を 参 考 にした 詳 細 な 結 果 解 析 が 今 後 必 要 と 考 えられる ま た 被 験 者 数 がまだ 少 なく さらに 被 験 者 を 募 り 実 験 データを 収 集 する 予 定 である 参 考 文 献 資 料 Sanders A.F.J, et al.: Haptically straight lines, Perception, 36, , Susanna Millar: Space and Sense, Psychology Press,

20 S3 20 日 9:40~ 病 理 分 野 におけるマクロ 写 真 を 利 用 した3DCG の 作 製 における 基 礎 的 検 討 東 京 大 学 / 附 属 病 院 / 病 理 部 金 子 伸 行 目 的 CT 検 査 における CT 画 像 の3 次 元 デジタル 画 像 ( 以 下 3DCG) 化 が 代 表 するように 医 学 分 野 でも 3DCG 画 像 は 教 育 的 側 面 だけでなく 臨 床 的 に 非 常 に 有 益 な 情 報 であること は 実 証 されている しかし 病 理 診 断 分 野 では 立 体 臓 器 を 撮 影 する 頻 度 が 非 常 に 高 いもか かわらず 今 だ 2 次 元 写 真 のみを 利 用 するに 留 まっている 病 理 写 真 も 近 年 ではデジタル 写 真 の 利 用 が 大 半 を 占 めているが CT のような 断 層 写 真 ではなく 俗 に 言 う 肉 眼 写 真 のため 3DCG にするのが 非 常 に 困 難 であり 高 度 な 専 門 知 識 と 高 価 な PC が 必 要 であったためと 考 え られる 最 近 では デジタルカメラの 普 及 とともにデジタル 画 像 を 利 用 した 一 般 向 けの3 CDG 化 ソフトが 開 発 され 3DCG はウェーブサイトなどでも 日 常 的 に 見 かけるようになって いる 本 検 討 は 一 般 向 けのソフトを 用 いた 病 理 診 断 の 分 野 での3DCG 作 製 の 基 礎 的 検 討 を 行 う 方 法 Ⅰ: 材 料 : 手 術 解 剖 によって 得 られた 臓 器 を 用 いる Ⅱ:ソフトの 検 討 STRATA FOTO 3D(STRATA 社 )と imodeller 3D(UZR GmbH&Co KG )を 用 い 操 作 性 の 検 討 をおこなう Ⅲ:3DCG の 作 製 1 撮 影 条 件 作 製 機 材 の 検 討 23DCG 作 製 時 間 の 測 定 33DCG の 自 己 評 価 4 臓 器 種 類 による 適 正 の 検 討 Ⅳ:それぞれの 3DCG の 臨 床 的 有 効 性 につては 認 定 病 理 医 にアンケートを 行 い 評 価 する 結 果 STRATA FOTO 3D については 画 像 の 出 来 としてはまだ 不 十 分 な 点 も 多 々あるが 撮 影 時 間 を 含 め 約 1 時 間 で3DCG を 作 製 することができ 臨 床 的 に 価 値 のあるものと 考 えられる imodeller 3D は 処 理 に 要 するメモリーが 大 きく 撮 影 した 画 像 から 直 接 処 理 できないため 処 理 画 像 数 画 質 の 調 整 を 行 ない 検 討 している 段 階 である 考 察 撮 影 条 件 がその 後 の 処 理 時 間 画 像 の 良 悪 を 決 定 するため 臓 器 が 撮 影 中 に 変 形 しない 様 臓 器 を 固 定 するためのペデスタルを 作 製 するのに 非 常 に 時 間 を 要 している 撮 影 時 間 の 延 長 は 臓 器 の 乾 燥 をもたらし 診 断 に 影 響 するため ペデスタルに 用 いる 素 材 をも 含 めた 検 討 が 必 要 である

21 S4 20 日 10:00~ トランスジェニックカタユウレイボヤ 作 製 技 術 の 導 入 と 完 全 閉 鎖 系 水 槽 飼 育 名 古 屋 大 学 / 理 学 研 究 科 附 属 臨 海 実 験 所 福 岡 雅 史 目 的 カタユウレイボヤは ゲノムのドラフト 配 列 が 決 定 されており 世 界 中 で 研 究 材 料 とし て 利 用 されている 優 れた 海 洋 モデル 動 物 である また 海 産 無 脊 椎 動 物 のなかで トラン スポゾンベクターを 利 用 したトランスジェニック 個 体 の 作 成 法 が 確 立 されている 唯 一 のモ デル 動 物 でもある ホヤ 類 は 一 般 に 雌 雄 同 体 であるが 本 種 は 自 己 の 精 子 による 受 精 は 起 こらない いわゆる 自 家 不 和 合 性 を 示 す 生 物 である 我 々は 本 種 を 材 料 として 主 に 生 殖 と 受 精 の 分 子 機 構 に 関 する 研 究 を 進 めている 本 研 究 では 自 家 不 和 合 性 に 関 与 する 自 己 非 自 己 識 別 遺 伝 子 や ライシンの 候 補 遺 伝 子 についてトランスジェニック 個 体 の 作 出 を 行 うことにより その 機 能 解 析 を 行 なうことを 目 的 としている 遺 伝 子 組 換 動 物 は 閉 鎖 系 に 隔 離 して 飼 育 する 必 要 があるので まず 実 験 室 内 の 水 槽 で 生 殖 可 能 な 成 熟 個 体 までホ ヤを 飼 育 養 成 するシステムを 確 立 することから 本 研 究 をスタートさせた 方 法 トランスジェニック 個 体 の 作 出 はカタユウレイボヤの 受 精 卵 に,TC1/mariner スーパー ファミリーに 属 するトランスポゾンである Minos 由 来 のトランスポゾンベクターと 転 移 酵 素 をコードするプラスミドをエレクトロポレーション 法 もしくはマイクロインジェクショ ン 法 により 共 導 入 する 導 入 されたベクターは 転 移 酵 素 の 働 きでゲノム 中 にランダムに 組 み 込 まれる カタユウレイボヤの 飼 育 は 実 験 所 内 に 設 置 した 閉 鎖 系 水 槽 で 行 った 飼 育 海 水 はできる 限 り 自 然 界 の 環 境 に 近 づけるために 通 常 海 水 を 用 い 飼 料 には 複 数 の 人 工 飼 料 を 混 合 して 与 えた また 排 水 は 過 酸 化 水 素 処 理 により 浄 化 滅 菌 し 遺 伝 子 組 換 動 物 の 海 洋 への 流 出 を 防 止 した 結 果 考 察 カタユウレイボヤの 自 家 不 和 合 性 に 関 わる 自 己 非 自 己 識 別 遺 伝 子 (テミス 遺 伝 子 )は 最 近 我 々の 研 究 グループによって 単 離 同 定 された この 遺 伝 子 は 非 常 に 多 型 に 富 んでおり 遺 伝 子 導 入 を 行 う 際 のレシピエントとなる 個 体 については 識 別 遺 伝 子 の 遺 伝 子 型 が 概 知 の 個 体 を 用 いる 必 要 があった そこでトランスジェニック 実 験 のレシピエントとなる 近 交 系 統 を 作 出 し 飼 育 維 持 することを 行 った 現 在 近 交 系 統 の 飼 育 ホヤは 3 世 代 目 に 達 し ている しかし 水 槽 飼 育 のホヤは 自 然 界 の 個 体 と 比 較 して 保 持 する 配 偶 子 量 が 少 なく 実 験 系 への 安 定 供 給 が 難 しい 飼 育 環 境 の 更 なる 改 良 が 今 後 も 必 要 である

22 S5 20 日 10:40~ 非 放 射 性 (non-ri) 試 薬 による 糖 脂 質 代 謝 測 定 法 の 開 発 自 然 科 学 研 究 機 構 / 生 理 学 研 究 所 / 技 術 課 斉 藤 久 美 子 目 的 今 日 肥 満 糖 尿 病 は 大 きな 社 会 問 題 であり その 対 策 が 急 務 である 肥 満 糖 尿 病 の 原 因 として 糖 脂 質 代 謝 異 常 があげられる そこで 肥 満 糖 尿 病 の 発 症 過 程 にお いて 各 臓 器 の 糖 脂 質 代 謝 変 化 を 測 定 することは 肥 満 糖 尿 病 の 発 症 メカニズム 治 療 法 の 開 発 に 重 要 である 現 在 培 養 細 胞 及 び 各 臓 器 の 代 謝 変 化 は 放 射 性 化 合 物 (RI)を 用 いた 方 法 で 解 析 されており 特 別 な 実 験 施 設 を 必 要 とする そこで この 問 題 に 対 処 す るため 非 放 射 性 (non-ri) 試 薬 による 糖 脂 質 代 謝 測 定 法 の 開 発 を 行 っている 本 研 究 会 では グルコース アナログである non-ri 2-デオキシグルコース(2DG)を 用 いたグルコース 利 用 速 度 測 定 法 を 中 心 に 酵 素 法 による 糖 脂 質 代 謝 測 定 法 の 開 発 経 過 について 紹 介 する グルコース 利 用 速 度 測 定 の 方 法 2DG は グルコースと 同 じように 細 胞 内 に 取 り 込 まれ 2-デオキシグルコース6リン 酸 (2DG-6-P)となり その 後 は 代 謝 されず 細 胞 内 に 蓄 積 される それゆえ 細 胞 内 2DG-6-P の 蓄 積 量 を 測 定 することでグルコース 利 用 速 度 を 算 出 することができる 2DG ならびにそ の 代 謝 産 物 である 2-DG-6-P 量 を glucose-6-phosphate dehydorogenase の 酵 素 濃 度 を 変 化 させることで 選 択 的 に 代 謝 し 生 成 される NADPH を 新 規 に 開 発 した 酵 素 サイクリング 法 で 比 例 増 幅 させ 比 色 定 量 により 測 定 する 結 果 各 酵 素 反 応 の 基 質 濃 度 酵 素 量 反 応 時 間 の 検 討 により 96 穴 プレートを 用 いた 測 定 が 可 能 になった 本 法 にて マウス 組 織 における in vivo グルコース 利 用 速 度 定 数 (Ki)の 測 定 及 び 3T3-L1 adipocyte におけるインスリン 刺 激 によるグルコース 取 込 み 量 を 測 定 した 考 察 現 在 は 糖 代 謝 測 定 とともに 脂 肪 酸 酸 化 調 節 因 子 として 重 要 であるマロニル CoA の 測 定 法 を 開 発 している グルコース 利 用 速 度 測 定 法 と 同 様 に いくつかの 酵 素 反 応 によりマ ロニル CoA を NADPH に 変 換 後 酵 素 サイクリング 法 によって 比 例 増 幅 させ 比 色 定 量 する 方 法 を 検 討 している これらの 方 法 は 肥 満 糖 尿 病 研 究 における 治 療 薬 のスクリーニングに 有 用 である

23 S6 20 日 11:00~ ヒト 培 養 細 胞 への 遺 伝 子 導 入 発 現 阻 害 による フィブリノゲン 生 成 分 泌 に 及 ぼす 影 響 浜 松 医 科 大 学 / 医 学 部 附 属 病 院 / 検 査 部 澤 村 暢 はじめに フィブリノゲンの 先 天 的 な 欠 損 症 には 2 タイプあり 主 にアミノ 酸 置 換 によるフィブリ ノゲン 蛋 白 はあるが 活 性 が 低 下 している 質 的 な 異 常 症 と 蛋 白 そのものが 産 生 されない 量 的 な 異 常 症 がある 質 的 な 異 常 症 では 易 出 血 や 易 血 栓 形 成 傷 の 治 りが 悪 いなどの 症 状 を 呈 する 事 があるが 無 症 状 の 場 合 もある 一 方 量 的 な 欠 損 症 では 出 血 症 状 がみられる 他 妊 娠 継 続 が 困 難 などの 症 状 がある しかし 病 態 との 因 果 関 係 は 完 全 には 解 明 されていな い 今 回 後 者 に 属 する 無 フィブリノゲン 血 症 の 一 患 者 を 経 験 し その 解 析 から FGA 遺 伝 子 の 1238bp の 欠 落 を 見 出 したが 同 時 にウェスタンブロット 法 により FGA, FGB, FGG 遺 伝 子 の 産 物 である Aα Bβ γ ポリペプチドが 血 漿 中 には 存 在 しないことを 確 認 した 肝 臓 におけるこれらポリペプチドの 生 合 成 課 程 は 既 に 明 らかにされているが 先 天 性 フィブ リノゲン 欠 損 症 において 3 種 類 のポリペプチド 鎖 のうちいずれかのポリペプチド 鎖 が 生 成 されない 時 の 動 態 については 未 だ 研 究 が 行 われていない フィブリノゲン 欠 損 症 において FGA 上 で 起 こるナンセンス 突 然 変 異 や 欠 失 挿 入 の 報 告 がなされている 事 から 本 研 究 では 3 種 類 のポリペプチド 鎖 のうち Aα 鎖 の 欠 失 をヒト 肝 臓 由 来 培 養 細 胞 で 擬 似 的 に 再 現 し その 動 態 について 研 究 を 行 った 方 法 と 結 果 フィブリノゲン 産 生 ヒト 肝 臓 由 来 の 培 養 細 胞 Hep-G2 を 用 い shrna 発 現 ベクターを 遺 伝 子 導 入 し RNAi を 行 い Aα 鎖 の 生 成 をノックダウンさせる ネオマイシンにより 薬 剤 選 択 を 行 い 得 られた 細 胞 中 培 養 液 中 の Aα Bβ γ の 3 種 類 のポリペプチド 鎖 の 生 成 状 態 を SDS-PAGE ウエスタンブロッティングにて 検 出 し 解 析 を 行 う 通 常 培 養 を 行 う 際 に 用 いるウシ 胎 児 血 清 中 には 本 研 究 で 使 用 している 抗 ヒトフィブリ ノゲン 抗 体 と 反 応 するタンパクが 含 まれているため 無 血 清 培 地 を 用 い 培 養 を 行 っている 現 在 上 記 のような 実 験 系 で 解 析 を 進 めている

24 S7 20 日 11:20~ 動 物 実 験 施 設 内 から 分 離 した 緑 膿 菌 の DNA 多 型 の 検 出 と 薬 剤 感 受 性 についての 検 討 熊 本 大 学 / 生 命 資 源 研 究 支 援 センター/ 病 態 遺 伝 分 野 中 村 直 子 目 的 動 物 実 験 施 設 ( 施 設 )では 精 度 の 高 い 動 物 実 験 成 績 を 得 るために 様 々な 微 生 物 を 対 象 にした 実 験 動 物 の 品 質 管 理 や 品 質 検 査 がおこなわれている その 中 で 緑 膿 菌 (P.a) は 幼 弱 動 物 や 免 疫 不 全 動 物 など 様 々な 理 由 で 免 疫 力 の 低 下 した 状 態 にある 動 物 に 実 験 処 置 を 施 した 際 に 発 症 する 日 和 見 感 染 症 の 原 因 として 非 常 に 問 題 となっている 我 々は 過 去 に 施 設 内 の 各 種 実 験 動 物 環 境 飼 育 者 等 から 分 離 された P.a の 血 清 群 別 をおこなったが 同 じ 群 に 片 寄 って 分 類 されたため 伝 播 経 路 などについて 詳 細 な 解 析 が 出 来 なかった 今 回 は 伝 播 経 路 解 明 のための 方 法 として 薬 剤 耐 性 パターンや DNA 多 型 による 解 析 も 試 みるこ とで 以 前 は 解 析 が 不 可 能 であった 施 設 内 への P.a の 進 入 経 路 や 施 設 内 での 分 布 を 詳 細 に 明 らかにし 最 終 的 には 施 設 内 における P.a の 感 染 拡 大 防 止 のための 方 法 を 見 いだすこ とに 繋 げることを 目 的 とする 方 法 熊 本 大 学 生 命 資 源 研 究 支 援 センター 動 物 資 源 開 発 研 究 施 設 において 飼 育 され ているマウスの 新 鮮 糞 便 を NAC ブロスで 48 時 間 増 菌 した 後 1 白 金 耳 を NAC 寒 天 培 地 へ 接 種 して 24 時 間 培 養 し P.a を 分 離 する 分 離 した P.a は 各 種 解 析 まで 半 流 動 ハートイン フュージョン 寒 天 培 地 に 接 種 し 保 存 する 被 検 菌 を 純 培 養 し 緑 膿 菌 群 別 用 免 疫 血 清 にて 緑 膿 菌 の O 型 血 清 群 を 確 認 する また Clinical and Laboratory Standards Institute 標 準 法 ( 旧 NCCLS 標 準 法 )に 従 って 感 受 性 ディスク 法 により 薬 剤 感 受 性 試 験 を 実 施 し ノ ギスを 用 いて 中 間 発 育 阻 止 部 位 の 阻 止 直 径 を 計 測 して 判 定 基 準 表 から 感 受 性 中 間 耐 性 を 判 定 し 薬 剤 感 受 性 による 型 別 を 試 みる さらに 被 検 菌 から DNA を 抽 出 し Mahenthiralingam らの 方 法 に 準 じて Random amplified polymorphic DNA(RAPD) 法 によ る 分 離 P.a の 型 別 を 試 みる 血 清 群 別 薬 剤 感 受 性 RAPD による 型 別 の 結 果 より P.a の 進 入 経 路 や 施 設 内 での 分 布 の 解 析 を 試 みる 結 果 施 設 内 の 一 般 飼 育 室 および 特 殊 飼 育 室 で 飼 育 されているマウスから 分 離 された P.a を 対 象 に 各 種 型 別 を 試 みた 血 清 群 別 では 分 離 された P.a 株 の 大 部 分 が B 群 に 分 類 され 一 部 は I 群 や G 群 等 に 分 類 された 薬 剤 感 受 性 試 験 もおこなっているが 現 在 のところ B 群 の 株 全 てが 感 受 性 試 験 を 試 みた 全 ての 抗 菌 薬 に 対 して 感 受 性 であり 他 の 血 清 群 の 数 株 が 一 部 の 抗 菌 薬 に 中 等 度 耐 性 であるという 結 果 が 得 られている 現 在 さらに 薬 剤 感 受 性 の 検 討 および RAPD 法 による 型 別 を 進 めているところであり それら の 結 果 も 交 えて 発 表 する

25 S8 20 日 11:40~ 中 枢 機 能 に 対 する 音 楽 の 効 果 筑 波 大 学 / 医 学 系 技 術 室 秋 山 佳 代 目 的 免 疫 組 織 化 学 染 色 は 組 織 内 に 分 布 する 化 学 物 質 を 正 確 かつ 微 細 に 識 別 すること ができる 私 共 は 蛍 光 免 疫 組 織 化 学 的 に 染 色 した 脳 切 片 の 全 領 域 の 蛍 光 強 度 分 布 を 細 胞 レベルで 定 量 し 画 像 化 する Brain Mapping Analyzer を 開 発 した 1) この 装 置 を 用 いて 脳 内 ドーパミンの 合 成 を 調 節 するメカニズムを 解 明 し 各 種 疾 病 の 発 症 機 序 や 様 々な 環 境 下 での 中 枢 機 能 の 変 化 を 明 らかにした 今 回 この 方 法 を 用 いて 音 楽 の 微 弱 な 刺 激 によっ て 誘 導 される 脳 内 の 情 報 伝 達 系 の 変 化 を 捉 えることに 成 功 したので 報 告 する 方 法 (1) Brain Mapping Analyzer: 本 装 置 は 落 射 蛍 光 顕 微 鏡 の 光 路 にピンホールを 挿 入 し 切 片 の 微 小 な 領 域 のみを 照 射 し そこから 発 せられる 光 を 光 電 子 増 倍 管 で 計 測 す るものである 切 片 を 載 せた 電 動 ステージをコンピューターの 制 御 下 で 移 動 し 切 片 全 面 をスキャンしながら 蛍 光 強 度 分 布 を 分 析 することができる (2) ドーパミン 分 析 : 自 然 発 症 高 血 圧 ラット (SHR) に モーツァルトの 曲 (K. 205 平 均 音 量 65dB) を 2 時 間 聴 かせ 脳 内 の 免 疫 組 織 化 学 的 ドーパミン 分 布 の 変 化 を Brain Mapping Analyzer によって 解 析 した (3) その 他 の 分 析 : 血 液 中 のカルシウム 及 び 血 圧 に 対 する 音 楽 の 効 果 を 調 べた 結 果 SHR に 音 楽 を 15 分 ~2 時 間 聴 かせると 血 清 カルシウムレベルが 有 意 に 増 加 し 引 き 続 き 線 条 体 外 側 領 域 のドーパミンレベルが 18% (P<0.01) 増 加 した さらに 音 楽 開 始 後 30 分 から 収 縮 期 圧 が 有 意 に 降 下 し 音 楽 終 了 後 2 時 間 まで 降 圧 作 用 が 持 続 した 血 圧 を 降 下 させる 音 楽 の 効 果 は カルシウム 依 存 性 のドーパミン 合 成 経 路 を 薬 物 で 遮 断 するこ とにより 消 失 した 考 察 音 楽 によって 血 液 中 のカルシウムレベルが 増 加 し その 一 部 が 脳 に 移 行 してドー パミンの 合 成 能 を 亢 進 し 様 々な 中 枢 機 能 を 調 節 することが 示 唆 される その 一 つとして 増 加 したドーパミンは 末 梢 の 交 感 神 経 系 を 抑 制 して 血 圧 を 降 下 させると 考 えられる 2, 3) この 分 析 法 は 音 楽 のような 微 弱 な 刺 激 によって 誘 導 される 脳 内 の 変 化 でも 詳 細 に 捉 える ことが 可 能 で 様 々な 環 境 下 での 情 報 伝 達 系 を 分 析 する 上 で 有 効 な 手 法 であると 考 える 参 考 文 献 資 料 1) Sutoo, D., Akiyama, K. and Yabe, K. (1998) Quantitative mapping analyzer for determining the distribution of neurochemicals in the human brain. J. Neurosci. Methods 85: ) Sutoo, D. and Akiyama, K. (2004) Music improves dopaminergic neurotransmission: demonstration based on the effect of music on blood pressure regulation. Brain Res. 1016: ) 須 藤 伝 悦 (2008) モーツァルトが 求 め 続 けた 脳 内 物 質. 講 談 社

26 S9 20 日 13:00~ 生 体 表 面 の 移 動 マーカ 追 随 システムの 開 発 徳 島 大 学 /ソシオテクノサイエンス 研 究 部 石 田 富 士 雄 目 的 本 研 究 は 生 体 表 面 のマーカに 追 随 するシステムを 開 発 したものである 最 近 の 医 学 においては 主 要 な 病 気 の 原 因 はほぼ 解 明 され 優 れた 経 口 薬 などにより 病 気 の 改 善 がな されている しかし 癌 などでは ピンポイントの 投 薬 や 照 射 (レーザ 放 射 線 )などに よる 治 療 を 要 する ところが 患 者 自 身 の 呼 吸 やその 他 の 生 理 現 象 により 体 が 動 くと 治 療 が 中 断 したり 効 果 が 得 られなかったりする そうした 場 合 でも 治 療 が 可 能 な 患 者 が 自 然 体 で 治 療 が 受 けられる 装 置 の 開 発 を 目 的 とした 方 法 この 追 随 システムは1マーカを 抽 出 する 画 像 処 理 2 追 随 コントローラ 32 軸 の 駆 動 装 置 からなる 画 像 処 理 では カメラから 送 られてくる 20 フレーム/ 秒 の 画 像 に 対 して タイマイベントを 発 生 させて パターンマッチングを 行 いマーカの 座 標 を 得 る 追 随 コン トローラは 画 像 処 理 で 得 られた 座 標 と 現 在 の2 軸 アクチュエータ 座 標 から 変 位 データ を 生 成 し パソコンのシリアルポートよりそのデータを 出 力 する 駆 動 装 置 は パソコン からのデータをマイコンで 受 信 後 処 理 し 2 軸 をコントロールする 制 御 データを 生 成 する 結 果 12 月 末 現 在 において 画 像 のパターンマッチングは 未 解 決 である 従 って パソコン 上 において 仮 想 のマーカ 座 標 を 用 いて 実 験 を 進 めている 仮 想 のマーカ 座 標 は 配 列 に 入 れて タイマイベントが 発 生 するたびに 逐 次 データを 更 新 するようにした タイマイベントは カメラ 画 像 が 20f/sec であるので 逆 数 をとり 50msec 毎 とした タイマイベント 発 生 時 に 座 標 の 変 位 計 算 を 行 い データをシリアルポートに 出 力 させた このデータは シリ アルケーブルで 接 続 したマイコン 側 において 割 り 込 み 処 理 による 受 信 が 確 認 できた ま た 受 信 したデータから 2 軸 アクチュエータの 制 御 信 号 を 生 成 し モータに 信 号 を 出 力 し たところ タイマイベント 発 生 のタイミングで 変 位 座 標 に 追 随 するのが 確 認 できた 考 察 仮 想 の 座 標 データを 使 用 したリアルタイム 制 御 において パソコンからマイコンへの データ 転 送 やマイコンでのデータ 処 理 2 軸 アクチュエータの 動 作 速 度 はともに 人 体 の 動 きに 対 応 する 結 果 が 得 られた 今 後 の 課 題 は 画 像 処 理 によるマーカ 座 標 の 抽 出 である 参 考 文 献 資 料 H8/3069F ハードウエアマニュアル ( 株 ) 日 立 製 作 所. Microsoft Visual Studio 2005 ドキュメント

27 S10 20 日 13:20~ 微 弱 電 波 の 無 線 LAN ブリッジを 利 用 した 自 動 避 難 経 路 誘 導 システム 岩 手 大 学 / 総 務 企 画 部 / 情 報 企 画 課 栗 田 宏 明 目 的 大 都 市 の 家 屋 の 密 集 地 や, 東 京 駅 にあるような 広 大 な 地 下 街 などにおいて, 地 震 など 大 規 模 な 災 害 に 見 舞 われたとき, 建 物 の 倒 壊 や 火 災 などの 災 害 が 発 生 すると 考 えられ る.そのような 場 所 で 被 災 した 場 合, 命 を 守 るためには 一 刻 も 早 く 安 全 な 場 所 に 避 難 しな ければならない. 本 研 究 では, 微 弱 な 電 波 を 使 用 した 無 線 LAN 同 士 をブリッジ 接 続 してネ ットワークを 作 り, 分 散 設 置 することを 考 える.もし 災 害 が 発 生 し, 建 物 の 倒 壊 や 火 災 が 発 生 した 場 合, 点 在 している 無 線 LAN の 一 部 が 破 壊 されると,そこを 通 るネットワークが 途 切 れるので, 被 災 場 所 や 被 災 規 模 の 特 定 と 同 時 に,その 避 難 経 路 は 危 険 であると 判 断 で きる. 無 線 LAN は 自 動 的 にその 情 報 を 収 集 し, 安 全 な 避 難 経 路 情 報 を 発 信 する. 被 災 者 は その 情 報 を 端 末 で 受 信 し, 情 報 に 沿 って 移 動 すれば, 迅 速 に 避 難 することができる. 方 法 無 線 LAN モジュールの LANTRONIX 社 製 WiPort 評 価 キット 数 台 をブリッジ 接 続 して 実 験 を 行 った.ネットワークの 状 態 を 自 動 収 集 するプログラムを JAVA アプレットで 開 発 し,WiPort に 実 装 する. 取 得 した 情 報 は WiPort 自 身 が WEB で 情 報 を 発 信 する. (1) LANTRONIX 社 の WiPort を 使 用 した 理 由 自 作 した JAVA アプレットのプログラムを 搭 載 できる. WiPort 内 部 から 情 報 発 信 できる WEB サーバ 機 能 を 持 っている. ブリッジ 接 続 ができる. (2) 開 発 の 過 程 で 苦 労 した 点 プログラムは JAVA アプレットで 作 成 したが,WiPort に 搭 載 できるプログラム 容 量 に 制 限 があるので,アルゴリズムの 軽 量 化 が 必 要 であった. 結 果 隣 接 している WiPort 間 で TCP/IP 接 続 することができた.また, 双 方 間 の 通 信 が 途 絶 えたときに, 自 動 的 に WiPort 自 らアラートを 発 信 させる 実 験 と, 避 難 経 路 を 指 示 する 実 験 に 成 功 した. 考 察 ネットワーク 全 体 の 情 報 収 集 アルゴリズムについて 現 在 検 討 している

28 S11 20 日 13:40~ レーザの 保 護 メガネ 自 然 科 学 研 究 機 構 技 術 連 携 核 融 合 科 学 研 究 所 山 内 健 治 分 子 科 学 研 究 所 鈴 井 光 一 国 立 天 文 台 川 島 進 生 理 学 研 究 所 大 庭 明 生 吉 友 美 樹 基 礎 生 物 学 研 究 所 古 川 和 彦 目 的 : 自 然 科 学 研 究 機 構 内 の 技 術 組 織 の 代 表 者 が 集 まり 組 織 の 問 題 や 技 術 について 定 期 的 に 会 議 をおこなっている 自 然 科 学 研 究 機 構 技 術 研 究 会 の 開 催 も その 会 議 で 決 められたことである その 会 議 で 機 構 内 では 研 究 にレーザを 用 いることが 多 くな っており 高 出 力 のレーザを 試 料 の 加 工 やエネルギー 伝 達 手 段 として 使 う 実 験 が 行 わ れている 高 出 力 レーザは 人 間 の 目 にとって 非 常 に 危 険 であるが 光 軸 調 整 などで 目 視 しなければならない 場 合 がある 機 構 内 の 研 究 所 の 実 験 にも 高 出 力 レーザが 使 用 さ れており 核 融 合 研 ではトムソン 散 乱 計 測 やレーザー ブローで 生 理 研 では 脳 内 血 栓 の 人 工 生 成 に 分 子 研 ではレーザ 研 究 施 設 で また 基 礎 生 物 研 ではスペクトル 施 設 で 高 出 力 レーザが 使 われている そのために 保 護 メガネを 共 同 して 開 発 することにした 方 法 :1 ビーム パターンの 可 視 化 と 改 良 今 回 YAG レーザの 波 長 1.06 ミクロン の 赤 外 線 にも 感 度 のある 小 型 CCD カメラと 小 型 液 晶 ファインダとを 組 み 合 わせて 直 接 ビームを 見 なくて 済 む 保 護 メガネを 試 作 した しかし 実 際 にこの 保 護 メガネを 使 用 し てビーム 調 整 を 行 った 研 究 者 から 視 野 が 狭 く 作 業 を 行 うには 不 安 があると 指 摘 を 受 け た 試 作 した 保 護 メガネは 小 型 液 晶 ファインダが 両 眼 を 覆 うゴーグル 型 のもので CCD カメラからの 映 像 しか 見 ることができない CCD カメラの 視 角 は 約 60 度 で 肉 眼 の 視 角 約 120 度 に 比 べて 狭 い 範 囲 しか 見 ることができない レーザ ビームの 調 整 のため には 狭 い 場 所 や 高 所 での 作 業 を 伴 うために 視 野 が 狭 いことは 安 全 面 で 問 題 があるこ とが 分 かった また 生 理 学 研 究 所 生 体 恒 常 機 能 発 達 機 構 研 究 部 門 においては マウス の 脳 血 管 にレーザを 照 射 する 実 験 で 顕 微 鏡 下 で 照 射 した 箇 所 を 見 ながら 作 業 するため にレーザの 散 乱 光 を 見 てしまう 危 険 があり これを 改 良 した 改 良 した 保 護 メガネ この 点 を 改 善 するために 片 目 のみ 装 着 できる 小 型 液 晶 ファイ ンダを 購 入 し 従 来 から 使 われている 光 吸 収 型 保 護 メガネの 片 眼 に 取 り 付 け 他 方 は 裸 眼 で 作 業 ができるようにし 視 野 の 確 保 をはかりながら 片 眼 でレーザ ビームが 見 え る 保 護 メガネを 試 作 した 最 近 リモコンで 液 晶 ファインダが 収 納 されるものをみつけ て 使 用 している 顕 微 鏡 の 接 眼 レンズに CCD カメラを 取 り 付 けて 液 晶 ファインダで 観 察 し 直 接 散 乱 光 を 見 なくて 済 む 装 置 も 製 作 した また 暗 い 場 所 での 使 用 を 考 えて 映 像 信 号 の 増 幅 回 路 をつくっている ルクスとい う 星 明 り 程 度 で 働 く 高 感 度 CCD カメラからの 映 像 信 号 をビデオ 増 幅 IC を2 段 に 接 続 し て4 倍 程 度 増 幅 度 を 上 げて 暗 い 場 所 でも 観 察 できるシステムを 製 作 し 試 してもらって いる

29 S12 20 日 14:00~ ホームケージ 用 摂 水 摂 餌 量 連 続 計 測 装 置 の 開 発 自 然 科 学 研 究 機 構 / 生 理 学 研 究 所 / 技 術 課 佐 治 俊 幸 目 的 実 験 動 物 の 飲 水 量 を 計 測 することは 動 物 実 験 において 一 般 状 態 観 察 における 基 本 事 項 の 一 つであり 通 常 は 代 謝 ケージを 用 いて 計 測 されている しかし 代 謝 ケージでは 多 数 の 動 物 を 用 いたスクリーニングや 行 動 解 析 実 験 に 使 用 するには 煩 雑 すぎ 単 位 時 間 当 た りの 摂 水 摂 餌 量 を 長 期 間 にわたって 連 続 的 に 測 定 出 来 ない そこで 昨 年 度 の 本 技 術 研 究 会 で 摂 水 量 連 続 計 測 装 置 の 試 作 報 告 *1 を 行 った 本 年 度 は この 装 置 を 発 展 させ 摂 水 量 および 摂 餌 量 の 同 時 連 続 測 定 を 可 能 にした 装 置 を 試 作 したので 報 告 する なお この 装 置 は マウスの 行 動 解 析 に 用 いられるホームケージ 内 活 動 量 & 社 会 的 行 動 測 定 システム *2 に 組 み 込 むことを 目 的 としている 方 法 試 作 した 装 置 は ケージの 左 側 面 からハイドロパック *3 により 給 水 を 行 い 右 側 面 から 給 餌 を 行 う 給 水 器 および 給 餌 器 は ケージ 等 に 接 することなく 設 置 されており その 重 量 は 電 子 天 秤 により 連 続 的 に 計 測 が 可 能 である なお ハイドロパックを 用 いることによ り 摂 水 時 の 飲 みこぼしはほとんど 発 生 せず *4 給 餌 器 からの 食 べこぼしは 電 子 天 秤 上 に 落 下 するため 計 測 への 影 響 は 少 ない 電 子 天 秤 の 計 測 データは RS232C USB と 変 換 され 計 算 機 へ 取 り 込 まれる 取 り 込 みは 昨 年 度 の 摂 水 量 連 続 計 測 装 置 用 に 製 作 した Windows 上 で 動 作 する ACCESS と VBA を 用 いたプログラムで 制 御 している VBA のみでは 通 信 ポートの 制 御 が 困 難 であるため EasyComm *5 をインポートして 使 用 した 結 果 考 察 試 作 直 後 であるため 実 験 データは 少 ないが 4 週 間 にわたる 連 続 計 測 が 行 え 十 分 な 性 能 であることが 判 った その 間 のデータの 欠 落 も 発 生 しなかった 床 敷 きおよび 糞 の 掻 き 出 しがあり 計 測 に 誤 差 が 生 じる 箇 所 が 発 生 したが 給 餌 口 の 形 状 を 変 更 することで 対 処 する 予 定 である また 摂 水 摂 餌 量 の 計 測 と 同 時 に24 時 間 連 続 のビデオ 撮 影 も 行 えたこ とから ホームケージ 内 活 動 量 & 社 会 的 行 動 測 定 システムと 併 せて 使 用 可 能 と 思 われる 第 30 回 生 理 学 技 術 研 究 会 マウス ラット 用 飲 水 量 連 続 計 測 装 置 の 開 発 小 原 医 科 産 業 株 式 会 社 *3 Lab Products 製 参 照 HP: *4 第 41 回 日 本 実 験 動 物 技 術 者 協 会 総 会 マウス 飲 水 量 連 続 測 定 ケージの 試 作 *5 木 下 隆 氏 作 成 参 照 HP: *1 *2-27 -

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31 口 演 発 表 ( 一 般 口 演 )

32 A1 20 日 9:00~ 学 生 実 験 における 酵 母 の 胞 子 形 成 条 件 の 検 討 筑 波 大 学 / 生 命 環 境 科 学 等 技 術 室 / 応 用 生 物 化 学 系 木 澤 祥 恵 目 的 微 生 物 実 験 で 酵 母 の 供 試 菌 (Saccharomyces cerevisiae Hansenula anomala Candida utilis Schizosaccharomyces pombe)の 同 定 を 行 う 際 生 菌 を 光 学 顕 微 鏡 で 観 察 して 出 芽 分 裂 などの 様 子 を 観 察 するほかに 胞 子 形 成 の 状 態 を 顕 微 鏡 で 観 察 している 胞 子 の 形 成 にはスポア 形 成 培 地 で 栄 養 増 殖 を 抑 えながら なおかつ 菌 が 生 育 できる 条 件 を 作 り 出 す 必 要 があり 現 在 応 用 生 物 学 実 験 Ⅱ( 生 物 情 報 学 類 2 年 生 対 象 )では Kleyn 培 地 を 用 いている しかし 植 菌 量 を 多 めにして 生 菌 量 を 調 節 するなど 初 めて 微 生 物 を 扱 う 場 合 には 取 り 扱 いが 難 しく 培 地 成 分 の 塩 類 溶 液 の 調 製 などにも 手 間 がかかり 実 際 に 観 察 できるプレパラートを 作 成 することが 大 変 難 しい そのため より 扱 いやすく 確 実 に 胞 子 形 成 を 観 察 できる 培 地 条 件 を 調 べる 必 要 があると 考 えた 方 法 応 用 生 物 化 学 実 験 Ⅱで 実 際 に 供 試 菌 として 使 用 している 4 種 類 の 酵 母 (Saccharomyces cerevisiae Hansenula anomala Candida utilis Schizosaccharomyces pombe )を 用 い Saccharomyces 属 の 胞 子 形 成 培 地 として 知 られる SPO 培 地 Schizosaccharomyces 属 の 胞 子 形 成 培 地 として 知 られる ME 培 地 の 2 種 類 の 平 板 培 地 に 植 菌 し 30 で 培 養 を 行 った 培 養 3 日 後 4 日 後 5 日 後 にサンプリングを 行 い マラカイト グリーンで 胞 子 を サフラニンで 栄 養 細 胞 の 対 比 染 色 を 行 って 顕 微 鏡 で 観 察 した 結 果 及 び 考 察 Kleyn 培 地 では 7 日 以 上 培 養 しても 受 講 生 20 名 前 後 のうち 胞 子 を 確 認 できるプレパラートを 作 成 できた 例 が 1~2 人 であったが 今 回 の 実 験 では 3 日 ないし 4 日 で 胞 子 が 確 認 でき それぞれの 胞 子 の 特 性 を 確 認 することができた 培 地 組 成 も Kleyn 培 地 より 単 純 で 新 たな 試 薬 を 購 入 する 必 要 もなく 今 後 の 実 験 でも 導 入 しやすいと 考 え られる しかし 今 回 の 染 色 法 では 核 や 生 育 していない 菌 などが 余 分 に 染 色 されて 胞 子 かどうか 確 認 しづらいこと スライドグラス 上 で 染 色 液 を 加 熱 するなどプレパラートの 破 損 や 染 色 液 の 突 沸 など 安 全 面 での 問 題 もあることなどからまだ 改 善 できる 点 が 多 く 今 後 も 検 討 する 必 要 があると 考 えている 参 考 文 献 資 料 筑 波 大 学 生 物 学 類 応 用 生 物 化 学 実 験 Ⅱ 微 生 物 の 取 り 扱 い 基 礎 実 験 応 用 酵 素 の 検 索 2008 年 度 テキスト 実 験 農 芸 化 学 ( 下 ) 第 3 版 東 京 大 学 農 学 部 農 芸 化 学 教 室 編 朝 倉 書 店 スポア 実 験 マニュアル 技 報 堂 出 版 酵 母 のすべて 系 統 細 胞 から 分 子 まで シュプリンガージャパン

33 A2 20 日 9:20~ イムノブロッティングを 用 いたタンパク 質 の 特 異 的 検 出 自 然 科 学 研 究 機 構 / 基 礎 生 物 学 研 究 所 / 技 術 課 壁 谷 幸 子 目 的 タンパク 質 を 特 異 的 に 検 出 する 手 法 は 数 多 く 報 告 されているが 中 でもイムノブロッティ ングは 安 全 かつ 簡 便 に 標 的 タンパク 質 の 定 量 や 存 在 様 式 などの 解 析 を 行 うことができる 今 回 イムノブロッティングにおける 時 間 の 短 縮 化 検 出 の 高 感 度 化 などの 技 術 的 検 討 を 行 ったのでここに 報 告 する 方 法 イムノブロッティングは 細 胞 の 溶 解 物 中 のタンパク 質 を SDS ポリアクリルアミドゲル 電 気 泳 動 (SDS-PAGE) により 分 離 後 メンブレンに 転 写 し 抗 体 を 用 いて 標 的 タンパク 質 を 特 異 的 に 検 出 する 方 法 である 所 属 研 究 室 では 酵 母 を 用 いた 研 究 が 行 われているため 酵 母 (Saccharomyces cerevisiae) を 材 料 に 用 い 検 出 対 象 としては 力 価 の 高 い 抗 体 A と 低 い 抗 体 B を 用 いて 検 討 した 1) 短 縮 化 ; 免 疫 検 出 をより 迅 速 に 行 うために 吸 引 システムの 導 入 により 抗 体 反 応 時 間 および 洗 浄 時 間 を 大 幅 に 短 縮 することが 出 来 るといわれている SNAPid システム (Millipore) の 検 討 を 行 った 2) 高 感 度 化 ; 力 価 の 低 い 抗 体 B の S/N (Signal/ Noise) 比 を 高 めるため イムノブロ ッティングを 利 用 した 抗 体 精 製 法 を 検 討 した 結 果 1) 短 縮 化 ; 従 来 イムノブロッティングには 4.5 時 間 かかっていたが SNAPid システム を 用 いることにより 約 半 分 の 2 時 間 に 短 縮 することができた 2) 高 感 度 化 ; 抗 体 B を 精 製 したところ 非 特 異 的 バンドが 減 少 し S/N 比 をあげることが でき 標 的 タンパク 質 を 感 度 よく 検 出 することができた 考 察 1) 短 縮 化 ; 力 価 の 高 い 抗 体 A を 用 いた 場 合 には 有 効 であったが 力 価 の 低 い 抗 体 B で は 難 しいことから 抗 体 に 応 じた 至 適 濃 度 の 検 討 が 必 要 であることが 分 かった 2) 高 感 度 化 ;イムノブロッティングを 用 いた 抗 体 精 製 法 が 有 効 であることが 分 かった た だし 用 いる 抗 体 の 性 質 により 検 出 感 度 が 異 なるため 感 度 の 上 昇 幅 は 一 定 では ないようだった また 精 製 した 抗 体 B を 用 いて 短 縮 化 を 試 みたが 感 度 を 維 持 したまま 検 出 することは 難 しかった 総 合 的 にイムノブロッティングにおいて 標 的 タンパク 質 の 性 質 およびその 特 異 的 な 抗 体 に 応 じた 検 出 条 件 の 検 討 が 非 常 に 重 要 であると 考 えられた

34 A3 20 日 9:40~ 学 生 実 験 を 活 用 したタンパク 質 2 次 元 マップの 作 成 九 州 工 業 大 学 / 情 報 工 学 部 楠 本 朋 一 郎 目 的 学 生 実 験 は 研 究 活 動 や 他 の 業 務 を 抱 える 技 術 職 員 にとってかなりの 負 荷 のかか る 業 務 であり この 時 間 を 有 効 に 使 いたいと 考 えている 技 術 職 員 は 多 いと 考 える 今 回 研 究 材 料 として 使 用 している Corynebacterium glutamicum の 細 胞 質 画 分 を 2 次 元 展 開 した ものを 用 い 学 生 実 験 でペプチドマスフィンガープリンティング 法 によりタンパク 質 の 同 定 を 行 い 2 次 元 マップの 作 成 が 可 能 か 見 極 めることを 目 的 とした また 2 次 元 電 気 泳 動 予 想 プログラムと 現 行 の 2 次 元 展 開 法 との 比 較 を 行 い 2 次 元 電 気 泳 動 法 が 抱 える 問 題 点 を 検 証 した 方 法 Corynebacterium glutamicum の 細 胞 質 画 分 100μg を 等 電 点 電 気 泳 動 膨 潤 液 (7M Urea,2M Thiourea,4% CHAPS,1% Triton,0.5% IPG Buffer(pH4-7))に 溶 解 し DE-Steark Reagent を 加 えた 上 で IPG ストリップ(13cm)に 膨 潤 させ 等 電 点 電 気 泳 動 後 SDS-PAGE にて 2 次 元 展 開 した 泳 動 後 のゲルを CBB 染 色 し タンパク 質 のバンドを 切 り 出 した 上 で 脱 染 色 システインのカルボキシメチル 化 処 理 トリプシン 消 化 (37 1 晩 )を 行 い TOF-MS にて 消 化 断 片 の 分 子 量 を 測 定 した また 同 時 に BSA cytochrome c などの 既 知 のタンパク 質 も 同 様 の 処 理 を 行 い タンパク 質 の 同 定 は MASCOT 若 しくは 自 前 で 作 成 した タンパク 質 同 定 プログラム 1) にて 行 った 結 果 考 察 学 生 実 験 ではゲルの 切 り 出 し 以 降 の 処 理 を 行 った 当 初 は 未 知 のタンパ ク 質 の 同 定 がほとんど 上 手 くいかなかったが 後 半 は 改 善 された MASCOT で 同 定 できなか った 場 合 は 自 作 のタンパク 質 同 定 プログラムで 候 補 を 絞 り アミノ 酸 配 列 から MS-DIGEST でペプチド 断 片 の 分 子 量 を 予 想 させ 観 察 された 分 子 量 セットと 見 比 べ 合 致 するか 否 か 調 べさせた 未 知 タンパク 質 を 同 定 した 場 合 は そのタンパク 質 の 性 質 を 調 べさせた また 2 次 元 電 気 泳 動 結 果 予 想 プログラム 1) のタンパク 質 展 開 予 想 図 と 実 際 の 2 次 元 展 開 像 を 比 較 すると 塩 基 性 領 域 のタンパク 質 がほとんど 観 察 できておらず 等 電 点 電 気 泳 動 /SDS-PAGE の 2 次 元 展 開 法 では 解 析 が 困 難 のようであった 参 考 文 献 資 料 1) 楠 本 朋 一 郎 坂 本 順 司 生 物 情 報 データベースを 利 用 したプロテオーム 解 析 支 援 ソフトの 作 成 生 物 学 生 理 学 技 研 報 p

35 A4 20 日 10:00~ Peptide mass fingerprint 用 サンプルの 保 存 条 件 の 検 討 自 然 科 学 研 究 機 構 / 基 礎 生 物 学 研 究 所 / 技 術 課 水 谷 健 目 的 Peptide Mass Fingerprint は 比 較 的 多 サンプルの 処 理 が 可 能 ではあるが 手 動 では Zip-Tip C18(Millipore)での 脱 塩 処 理 過 程 等 がボトルネックとなり 一 度 に 処 理 で きるサンプル 数 に 限 度 がある 切 り 出 したスポット(バンド)をある 程 度 保 管 できれば 処 理 日 をずらして1 枚 のゲルからより 多 くのスポットの 解 析 が 可 能 となる この 為 BSA を 用 いて SDS-PAGE を 行 い バンドを 切 り 出 した 後 のサンプル 保 管 条 件 について 検 討 した 方 法 本 検 討 を 行 う 以 前 に 2D-E のゲルから 打 ち 抜 いたスポットをアルキル 還 元 化 脱 水 冷 凍 保 存 の 後 trypsin 消 化 を 行 ったことがあったが 結 果 は 芳 しくなかった この 為 ゲルでの 保 管 と 酵 素 消 化 物 での 保 管 の 2 通 りの 保 管 条 件 で 検 討 を 行 った サンプルの BSA は 各 レーン 40ng を SDS-PAGE ゲルにアプライした 染 色 は SYPRO Ruby(Invitrogen) を 用 いた 質 量 分 析 は MALDI-TOF/MASS(REFLEX III / Bruker Daltonics)で 行 い 解 析 は M/Z(Proteometrics)を 用 いた 得 られたデータのうち m/z のピークで MASCOT(MatrixScience)による 検 索 を 行 った 結 果 ゲルでの 保 管 の 検 討 : 2 週 まではある 程 度 同 定 が 可 能 であるが 全 般 的 にスコアが 低 く 確 実 性 が 低 い 傾 向 が 見 られた さらに3 週 ではスコアと 確 実 性 が 落 ち 4 週 では 同 定 不 能 となった 酵 素 消 化 物 での 保 管 の 検 討 : 濃 縮 された 液 体 状 態 では 同 定 が 不 確 実 となる 場 合 もあっ た 完 全 に 乾 燥 させたものでは バラツキはあるものの より 良 いスコアが 出 てほぼ 確 実 に 同 定 出 来 た 考 察 今 回 の 検 討 は 実 験 の 流 れの 中 で 予 備 的 に 行 った 為 サンプル 数 も 少 なく 大 まかな 傾 向 を 読 みとることができるだけである しかし 酵 素 消 化 物 を 乾 燥 させることで ある 程 度 安 定 してサンプルを 保 管 する 事 が 出 ることがわかった 吸 着 等 の 問 題 を 考 えると 量 的 に 少 ないサンプルでは 難 しいが 量 のあるサンプルではこの 保 存 でも 適 用 可 能 であろう 2D-E ゲルから 打 ち 抜 いたスポットの 中 で 量 の 少 ないサンプルは 連 続 的 に 処 理 解 析 を 行 い 多 いサンプルやポジティブコントロールは 酵 素 消 化 物 で 保 管 して 後 日 解 析 といった 使 い 分 けでより 多 サンプルへの 対 応 が 可 能 となるだろう 今 後 はゲルで 乾 燥 させた 場 合 の 検 討 (アルキル 還 元 化 前 など)を 行 い より 確 実 性 の 高 い 保 管 条 件 が 無 いか 検 討 を 行 う 予 定 である

36 A5 20 日 10:40~ MALDI-TOF MS で 用 いるマトリックスの 選 択 等 測 定 方 法 について 奈 良 先 端 科 学 技 術 大 学 院 大 学 / 研 究 協 力 課 塚 本 潤 子 目 的 現 在 マトリックス 支 援 レーザー 脱 離 イオン 化 飛 行 時 間 型 質 量 分 析 計 (MALDI-TOF MS) を 用 いて 依 頼 分 析 業 務 を 行 っている 業 務 を 行 う 上 での 課 題 としてタンパク 質 の 測 定 にお ける 精 度 の 向 上 ペプチドの 測 定 での 感 度 の 向 上 が 挙 げられ さらに 常 に 一 定 のサービス を 提 供 するために 再 現 性 の 高 い 簡 便 な 方 法 の 確 立 も 必 要 となっている このためにはマトリックスの 選 択 サンプル 調 製 方 法 の 検 討 が 重 要 である これまで この 検 討 はマニュアルを 基 本 とし 情 報 収 集 工 夫 等 により 適 宜 改 良 を 行 ってきた より 良 いサービスの 提 供 を 目 指 して 従 来 方 法 を 改 めて 比 較 検 討 した また これをも とに 簡 便 に 精 度 感 度 良 く 測 定 するためのマニュアル 作 成 を 試 みた 方 法 1.ペプチドの 測 定 に 使 用 するマトリックスの 検 討 マトリックスにα-シアノ-4-ヒドロキシケイ 皮 酸 (α-chca), 2,5-ジヒドロキシ 安 息 香 酸 (2,5-DHB)を 用 いてサンプル 調 製 後 測 定 し 感 度 精 度 結 晶 形 状 を 比 較 検 討 した 2.サンプル 調 整 方 法 の 検 討 精 度 よく 測 定 するために 均 一 な 結 晶 の 作 成 方 法 を 検 討 した サンプルをマトリックス と 混 合 し 結 晶 化 薄 膜 結 晶 化 マトリックス 上 でサンプルを 結 晶 化 薄 膜 結 晶 化 マトリック ス 上 でマトリックスと 混 合 したサンプルを 結 晶 化 する 方 法 で 標 品 サンプルを 調 整 後 結 晶 を 観 察 し 感 度 精 度 への 影 響 を 比 較 検 討 した またマニュアル 作 成 のため 結 晶 の 様 子 を 文 章 化 イラスト 化 することを 試 みた 結 果 考 察 α-chca を 用 いた 場 合 2,5-DHB の 場 合 と 比 較 すると 測 定 感 度 がよく 結 晶 が 均 一 であ るため 測 定 精 度 もよくなる 一 方 α-chca ではイオン 化 により 修 飾 等 が 切 断 されたスペク トルがより 強 く 観 測 される このため 修 飾 が 予 想 される 場 合 にはリニアとリフレクタの 二 つのモードで 測 定 をするか 両 方 のマトリックスでサンプル 調 製 を 行 うことが 望 ましい マトリックスにシナピン 酸 を 使 用 した 場 合 薄 膜 結 晶 化 マトリックス 上 でマトリック スと 混 合 したサンプルを 結 晶 化 する 方 法 が 均 一 な 結 晶 が 得 られ 精 度 よく 測 定 できた サービス 向 上 のためには 自 らの 技 術 の 向 上 とともに 依 頼 者 の 要 望 を 聞 くことが 重 要 となる このため 今 後 は 依 頼 者 への 意 見 調 査 も 行 いたい

37 A6 20 日 11:00~ LC/Q-TOF MS を 用 いた 微 量 タンパク 質 の 同 定 自 然 科 学 研 究 機 構 / 基 礎 生 物 学 研 究 所 / 技 術 課 森 友 子 目 的 所 属 する 分 析 室 ではおよそ 60 種 類 の 分 析 機 器 を 維 持 管 理 しており 特 にタンパク 質 の 解 析 については 種 々の 装 置 を 用 いての 依 頼 分 析 として 技 術 提 供 をしている その 中 でも 質 量 分 析 は 生 体 内 の 微 量 タンパク 質 の 同 定 や 一 次 構 造 解 析 及 び 特 定 の 器 官 に 存 在 するタンパク 質 の 網 羅 的 な 解 析 において 必 須 の 分 析 手 法 の 一 つである 今 回 は 2 年 前 に 分 析 室 に 導 入 した 液 体 クロマトグラフ/ 四 重 極 飛 行 時 間 ハイブリッ ド 型 質 量 分 析 装 置 (LC/Q-TOF MS)の 概 要 と それを 用 いた 微 量 タンパク 質 の 分 析 に 関 する 注 意 点 などについて 報 告 する 方 法 LC/Q-TOF MS を 用 いたタンパク 質 の 同 定 は LC から 溶 出 してくる 消 化 ペプチドの 質 量 (MS)を 判 別 して 自 動 的 に 測 定 モードを 切 り 替 えて ペプチドを 断 片 化 した MS/MS スペ クトルを 取 得 する DDA(Data Directed Analysis) 法 で 行 った これはタンパク 質 を 高 感 度 かつ 確 実 に 同 定 ができる 優 れた 手 法 であると 言 われている 試 料 としては 市 販 の 標 準 タンパク 質 (エノラーゼ)のトリプシン 消 化 物 を 用 い 量 (25fmol, 50fmol, 100fmol, 500fmol,1pmol)を 変 えて 測 定 した サンプル 量 によるピーク 強 度 の 違 いと そこから 得 られる 同 定 結 果 を 比 較 検 討 した 結 果 と 考 察 標 準 タンパク 質 (エノラーゼ)の 測 定 結 果 50fmol でも 同 定 はできたが 充 分 な 信 頼 性 のある 同 定 には 100fmol は 必 要 であった このことから 未 知 試 料 の 測 定 を 行 う 際 には 依 頼 者 が 準 備 するサンプルとして 最 低 100fmol は 必 要 であると 思 われる しか し 未 知 試 料 はタンパク 量 を 見 積 もる 事 が 難 しく 予 想 に 反 して 純 度 が 低 い 場 合 や 量 が 少 ない 事 があるので 注 意 が 必 要 である タンパク 質 の 同 定 は 測 定 したデータの 質 量 精 度 に 影 響 される サンプル 量 が 充 分 にある 場 合 は 質 量 精 度 が 低 い( 誤 差 数 十 ppm)データでもタンパクの 同 定 を 行 うことができる 場 合 がある しかし サンプルの 量 が 少 ないとタンパク 質 の 同 定 は 極 端 に 困 難 となる これ を 質 量 誤 差 が 10ppm 以 下 になるように 装 置 をキャリブレーションし 再 測 定 を 行 うと 予 想 の 結 果 を 得 ることができた このことから 特 にサンプル 量 が 限 られた 未 知 試 料 の 同 定 には 特 に 質 量 精 度 の 厳 密 さが 要 求 されることが 判 った また 逆 にサンプル 量 が 多 すぎても 良 好 な 同 定 結 果 を 得 ることが 出 来 ない 場 合 がある サンプル 量 が 必 要 以 上 に 多 いと LC から 長 時 間 同 じペプチドが 溶 出 されるので 質 量 分 析 装 置 は 同 じペプチドの MS を 何 度 もとらえて MS/MS 測 定 を 行 うことになる そのため 能 率 のよ い 分 析 が 出 来 ないばかりでなく 量 の 多 い 成 分 の 陰 に 隠 れて 微 量 なペプチドのデータを 取 り 逃 がす 危 険 がある 適 切 なサンプル 量 と 高 い 質 量 精 度 をもって 測 定 することが 必 要 で ある

38 A7 20 日 13:00~ 免 疫 組 織 化 学 および 蛍 光 観 察 におけるピットホール 高 知 大 学 / 教 育 研 究 部 / 医 療 学 系 / 医 学 部 門 林 芳 弘 目 的 免 疫 組 織 化 学 法 は ヒトや 実 験 動 物 の 組 織 や 細 胞 に 存 在 するタンパク 質 糖 鎖 ホルモンなどを 酵 素 反 応 物 や 蛍 光 物 質 として 検 出 するものである 今 日 では フナコシな どのウェブサイトや 分 厚 いカタログで 検 索 すると 大 部 分 の 抗 体 は 商 業 的 に 入 手 すること が 可 能 であるが 特 異 的 抗 体 を 使 用 しても 陽 性 像 の 間 違 った 解 釈 をしている 著 明 雑 誌 の 論 文 も 見 受 けられる また 免 疫 組 織 化 学 的 な 手 法 を 用 いた 研 究 を 始 めて 間 もない 研 究 者 は 偽 陽 性 を 陽 性 と 誤 認 識 することも 多 い 今 回 免 疫 組 織 化 学 およびその 蛍 光 観 察 にお ける 注 意 点 と EGFP など 蛍 光 物 質 発 現 トランスジェニックマウスや 蛍 光 ラベルした 細 胞 の 移 植 実 験 などで 慎 重 な 判 定 を 必 要 とした 実 際 例 について 示 す 方 法 ヒトおよびマウス ラットの 組 織 を 実 験 に 用 いた 1 組 織 標 本 の 免 疫 組 織 化 学 による 偽 陽 性 と 固 定 法 検 出 法 による 差 1) 内 因 性 物 質 の 影 響 (ペルオキシダーゼ,ビオチン,アルカリフォスファターゼ)など 2) 固 定 液 による 影 響 (ホルマリン 液 Zinc Fixative solution;bd biosciences)など 2 初 代 培 養 細 胞 を 用 いた in vitro 蛍 光 免 疫 細 胞 化 学 ラット 胎 齢 13.5 日 より 分 離 した 肝 芽 細 胞 を 培 養 し 化 学 固 定 後 免 疫 蛍 光 染 色 を 施 行 3 蛍 光 標 識 を 利 用 した 動 物 実 験 例 1)EGFP 発 現 トランスジェニックマウス 肝 障 害 モデル 2) 骨 髄 細 胞 の 蛍 光 標 識 細 胞 の 移 植 4 蛍 光 免 疫 組 織 標 本 の 長 期 保 存 後 の 蛍 光 観 察 に 使 用 可 能 な 封 入 剤 の 検 討 1)Vectashield (Vector Lab) 2)Fluorescent Mounting Medium (Dako) 3)CC/Mount (Diagnostic BioSystems)など 結 果 免 疫 組 織 化 学 の 観 察 において 内 因 性 物 質 による 偽 陽 性 や 固 定 液 固 定 法 の 間 違 った 使 用 法 による 陽 性 像 の 陰 性 化 が 起 こることがあった また 蛍 光 免 疫 組 織 化 学 およびその 蛍 光 観 察 においても 自 家 蛍 光 や 非 特 異 的 な 反 応 による 偽 陽 性 像 が 観 察 された 一 方 EGFP 発 現 トランスジェニックマウスの 肝 障 害 モデルの 蛍 光 観 察 では 偽 発 現 蛍 光 像 が 観 察 された 蛍 光 免 疫 組 織 化 学 後 の 封 入 剤 の 検 討 では 封 入 剤 や 蛍 光 標 識 物 質 により 陽 性 蛍 光 強 度 に 与 える 影 響 に 差 が 認 められた 考 察 蛍 光 免 疫 組 織 化 学 的 手 法 や EGFP など 蛍 光 物 質 を 用 いた 実 験 系 で 得 られた 結 果 を 正 しく 判 断 するためには 基 礎 的 な 知 識 を 身 につけることが 必 要 不 可 欠 である

39 A8 20 日 13:20~ 小 規 模 ミルクプラントでの Koch 法 とスタンプ 法 による 製 造 環 境 の 微 生 物 検 査 帯 広 畜 産 大 学 / 畜 産 フィールド 科 学 センター 村 上 文 朗 目 的 帯 広 畜 産 大 学 乳 製 品 工 場 においてはパック 牛 乳 製 造 工 程 の 衛 生 管 理 を HACCP に 準 拠 して 実 施 している HACCP は 一 般 的 衛 生 管 理 (PP)の 徹 底 が 基 本 で その 一 つに 環 境 衛 生 管 理 がある 特 に 製 造 環 境 の 落 下 微 生 物 数 については 厚 生 労 働 省 が 設 定 した 衛 生 規 範 に その 基 準 値 が 示 されている 当 工 場 は 施 設 の 老 朽 化 に 伴 い 2008 年 2~3 月 に HEPA フィルタ ーを 取 り 入 れた 換 気 システムの 導 入 や 床 材 の 更 新 による 排 水 性 の 改 善 などの 施 設 改 修 を 行 った それに 伴 い 製 造 工 程 の 作 業 動 線 も 改 善 した そこで 今 回 改 修 前 後 における 施 設 改 修 の 効 果 を 検 証 することを 目 的 として Koch 法 とスタンプ 法 による 環 境 微 生 物 の 調 査 を 実 施 したので 報 告 する 方 法 試 験 期 間 は 施 設 改 修 前 の 2007 年 10~12 月 と 改 修 後 の 2008 年 10~11 月 の 2 期 間 とし 以 下 の 項 目 について 比 較 した パック 牛 乳 製 造 工 程 を 衛 生 管 理 水 準 により 汚 染 作 業 区 ( 受 入 室 ) 準 清 潔 作 業 区 ( 殺 菌 室 ) 清 潔 作 業 区 ( 充 填 室 )に 区 分 し これら 3 区 画 に おいて 製 品 製 造 時 に Koch 法 による 落 下 細 菌 を 公 定 法 により 3 回 開 放 時 間 を 延 長 して 2 回 測 定 した 衛 生 規 範 に 従 い 3 区 画 の 落 下 細 菌 数 ( 標 準 寒 天 培 地 )と 特 に 清 潔 作 業 区 に ついては 落 下 真 菌 数 (CP 加 ポテトデキストロース 寒 天 培 地 : 栄 研 化 学 株 式 会 社 )も 測 定 し た また 製 造 開 始 前 の 床 面 の 衛 生 状 態 については 前 日 の 製 造 後 に 床 洗 浄 を 実 施 して 当 日 まで 乾 燥 状 態 にした 床 面 を スタンプ 法 (ペタンチェック 25: 栄 研 化 学 株 式 会 社 )に より 一 般 細 菌 数 と 大 腸 菌 群 数 について 2 回 測 定 した 結 果 衛 生 規 範 の 評 価 基 準 により 落 下 細 菌 と 真 菌 数 を 評 価 した 両 試 験 期 間 共 に 3 区 画 全 てにおいて 基 準 内 であった 特 に 清 潔 作 業 区 については 開 放 時 間 を 延 長 した 結 果 にお いて 改 修 前 後 の 落 下 細 菌 数 が 寒 天 培 地 あたり 平 均 4.63±2.34CFU から 0.50±0.71CFU 真 菌 数 が 寒 天 培 地 あたり 平 均 2.00±1.00CFU から 0.75±1.09CFU へ 有 意 (P<0.05)に 減 少 した 床 面 の 衛 生 状 態 については 一 般 細 菌 数 の 発 育 レベルの 6 段 階 (0~5) 評 価 におい て 改 修 前 後 で 汚 染 作 業 区 は 平 均 2.75 から 1.13 準 清 潔 作 業 区 は 平 均 3.38 から 1.13 清 潔 作 業 区 は 平 均 1.5 から 0.5 と 3 区 画 全 てにおいて 有 意 (P<0.05)に 減 少 した なお 大 腸 菌 群 については 改 修 前 の 準 清 潔 作 業 区 において 1 コロニー 確 認 されたが 改 修 後 には 確 認 されなかった 考 察 施 設 改 修 と 作 業 動 線 の 改 善 により 環 境 微 生 物 が 明 らかに 減 少 し 改 修 の 効 果 が 確 認 された 参 考 文 献 資 料 1) 栄 研 グループ:イーズ No.013,014 栄 研 化 学 (1999)

40 A9 20 日 13:40~ 野 生 霊 長 類 の 薬 用 利 用 植 物 に 関 する 化 学 的 研 究 :Trema orientalis の 抗 寄 生 虫 成 分 を 例 に 京 都 大 学 / 農 学 研 究 科 山 口 加 乃 子 目 的 新 しい 天 然 薬 剤 を 開 発 する 一 つのアプローチとして 熱 帯 アフリカに 棲 む 野 生 チンパン ジーが 薬 用 的 あるいは 非 栄 養 的 に 利 用 している 植 物 に 注 目 した これら 植 物 の 中 には 人 の 健 康 の 維 持 や 生 体 機 能 調 節 さらには 各 種 疾 病 予 防 に 有 効 である 成 分 が 頻 度 高 く 見 つか ってきている そこで 活 性 物 質 を 有 する 植 物 から 有 効 成 分 を 精 製 単 離 し in vivo におけ る 試 験 をおこない 有 効 性 をみる 方 法 (1) 使 用 した 材 料 や 手 法 ( 試 薬 機 器 など)を 選 択 した 理 由 精 製 単 離 方 法 は ほぼ 定 法 に 則 って 有 機 溶 媒 を 使 用 し 単 離 した 化 合 物 は NMR,MS,IR 等 を 用 いて 化 合 物 の 同 定 をした (2) 実 験 測 定 や 作 製 の 過 程 において 苦 労 工 夫 した 点 単 離 した 物 質 を in vivo 試 験 をおこなうため 大 量 に 合 成 しなければならない (ため をとる) 最 初 はより 緩 和 な 反 応 をする 酵 素 反 応 を 試 みたが 反 応 が 進 まず 時 間 的 制 約 もあ り 断 念 した その 後 反 応 を 化 学 合 成 に 切 り 替 え 目 的 物 を 得 た 結 果 得 られた 化 合 物 を 住 血 吸 虫 を 感 染 させたマウスに 腹 腔 内 投 与 したところ 1 回 投 与 し たものより 3 回 投 与 したもののほうが 明 らかに 住 血 吸 虫 の 産 卵 抑 制 効 果 があった 考 察 投 与 法 常 用 的 にこの 化 合 物 を 摂 取 した 場 合 はどのような 効 果 が 期 待 できるか

41 A10 20 日 14:00~ 次 世 代 DNA シークエンサーの 運 用 における 様 々な 問 題 点 と 解 決 に 向 けた 試 み 自 然 科 学 研 究 機 構 / 基 礎 生 物 学 研 究 所 / 技 術 課 山 口 勝 司 目 的 基 生 研 分 析 室 に 次 世 代 DNA シークエンサーが 設 置 されるに 至 った 次 世 代 DNA シークエンサーはこれまでの DNA シークエンサーとは 方 式 を 全 く 異 にするものであり そ のハイスループットな 解 析 量 が 大 きな 特 徴 であり 魅 力 となっている その 応 用 法 は 多 岐 に 渡 り 単 なる DNA シークエンサーではなく むしろゲノムアナライザーと 捉 えるべきもの と 言 える しかし まだ 最 先 端 的 な 機 器 であるため いずれの 場 所 においても 十 分 な 運 用 実 績 がなく 多 くの 課 題 を 抱 えている 今 回 の 発 表 では 次 世 代 DNA シークエンサーのシ ステムと 応 用 法 を 説 明 し 次 世 代 DNA シークエンサーを 運 用 していく 上 で 現 状 と 問 題 点 その 解 決 に 向 けた 試 みを 紹 介 したい 方 法 次 世 代 DNA シークエンサーの 解 析 の 手 順 として 1シークエンスライブラリーの 作 成 2 次 世 代 DNA シークエンサー 本 体 の 運 用 3 得 られた 結 果 の 解 析 が 挙 げられる 各 手 順 に 様 々な 課 題 が 山 積 みの 現 状 であるが ここでは 主 にシークエンスライブラリー 作 成 の 課 題 を 挙 げる 次 世 代 DNA シークエンサーの 解 析 には 一 定 量 以 上 の DNA ライブラリー が 必 要 であり 多 くの 場 合 は PCR 増 幅 が 必 要 になる しかし PCR 増 幅 は 配 列 によるバイア スの 宝 庫 になりうる 懸 念 があり そのバイアスを 如 何 に 抑 え 効 率 良 く 定 量 的 に 増 幅 する かが 課 題 である そこでまず 定 量 PCR を 用 い 各 段 階 のサンプル 量 を 定 量 し その 定 量 値 を 参 考 にしながら 実 験 を 進 めるようにした 結 果 考 察 市 販 の 定 量 PCR 機 を 用 いることにより 各 ステップのサンプル 量 を 正 確 に 見 積 もり その 量 に 応 じて 増 幅 サイクル 数 や 次 のステップへの 持 ち 込 み 量 を 決 定 するこ とが 可 能 であった また さらにこの 方 法 は 各 操 作 段 階 の 回 収 効 率 を 知 り 個 々のステッ プのさらなる 改 善 策 を 講 じていく 上 でも 有 効 であると 考 えられた 発 表 ではこれ 以 外 の 次 世 代 シークエンサー 運 用 に 関 する 問 題 点 と 解 決 に 向 けた 方 策 を 含 めて 紹 介 したい 参 考 文 献 資 料 特 集 超 高 速 シークエンスが 開 く 次 世 代 の 生 命 科 学, 実 験 医 学, 2009 年 1 月 号 ゲノムサイエンスを 支 えるシークエンステクノロジー -DNA シークエンシングの 新 展 開 を 臨 む-, 山 口 勝 司, 生 物 学 技 術 研 究 会 報 告 第 19 号 p.46-55,

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43 話 題 提 供

44 T1 20 日 11:20~ ライトシート 型 顕 微 鏡 DSLM による 三 次 元 ライブイメージング 自 然 科 学 研 究 機 構 / 基 礎 生 物 学 研 究 所 / 技 術 課 小 林 弘 子 近 年 の 様 々な 顕 微 鏡 及 び 蛍 光 プローブ 等 の 開 発 により 生 物 試 料 を 生 きたままで 細 胞 の 挙 動 や 遺 伝 子 蛋 白 質 の 発 現 を 追 跡 することが 可 能 になった 欧 州 分 子 生 物 学 研 究 所 (EMBL)の Ernst Stelzer 博 士 らが 2004 年 に 開 発 した ライトシート 型 顕 微 鏡 SPIM (Selective plane illumination microscope)は 生 体 試 料 を 傷 つけずに 深 部 まで 観 察 で きる 新 しい 顕 微 鏡 である 所 属 する 研 究 室 では 自 然 科 学 研 究 機 構 と EMBL との 間 の 共 同 研 究 協 定 に 基 づき SPIM の 改 良 型 であるライトシート 型 顕 微 鏡 DSLM (Digital scanned laser light sheet fluorescence microscope)を 導 入 し 運 用 を 開 始 している ライトシート 型 顕 微 鏡 では 非 常 に 薄 いシート 状 の 励 起 光 を 試 料 に 照 射 し その 光 路 と 直 角 に 配 置 した 観 察 用 対 物 レンズを 通 して CCD カメラで 照 射 層 からの 蛍 光 画 像 を 検 出 す る 励 起 光 は 観 察 用 対 物 レンズの 焦 点 面 だけに 照 射 され 一 枚 の 平 面 画 像 (XY 画 像 )が 得 られる 立 体 画 像 (XYZ 画 像 )を 取 得 するには 試 料 をライトシートに 対 して 移 動 させて 撮 影 した 各 照 射 層 からの 蛍 光 画 像 を 統 合 する SPIM ではシリンドリカルレンズを 用 いてシ ート 状 の 励 起 光 を 作 成 しているが DSLM ではガルバノミラーを 用 いた 高 速 スキャンによっ て 擬 似 的 にシート 状 の 光 を 作 成 することで より 均 一 な 強 度 の 照 射 光 が 得 られる 観 察 試 料 は 蛍 光 標 識 された 胚 や 組 織 等 の 生 物 試 料 をそのまま あるいは 固 定 後 直 径 数 mm の 円 筒 形 のアガロースゲルに 包 埋 して 調 製 する 試 料 の 入 ったゲルは 生 理 的 緩 衝 液 に 浸 されているので 生 きたままでの 観 察 が 可 能 になる また 試 料 を 回 転 することが 可 能 で 同 一 試 料 について 多 方 向 から 立 体 画 像 (XYZ 画 像 )を 取 得 し それらを 重 ね 合 わせる ことで 比 較 的 大 きな 生 体 試 料 ( 数 mm 程 度 )についても その 全 体 像 を 構 築 できる ライトシート 型 顕 微 鏡 では 焦 点 以 外 の 部 分 に 光 が 当 たらないため 弱 い 光 で 試 料 の 深 部 まで 観 察 が 可 能 になり 褪 色 や 照 射 光 による 細 胞 へのダメージ( 光 毒 性 )を 最 小 限 に 抑 え られ 胚 の 発 生 過 程 の 追 跡 などの 長 時 間 のライブイメージングが 可 能 になる また 短 い 露 光 時 間 で 充 分 なシグナルを 得 ることができるので 速 いタイムラプス 測 定 も 可 能 である このように DSLM は 三 次 元 ライブイメージングにおいて 従 来 の 共 焦 点 顕 微 鏡 にみられる 弱 点 を 解 決 できる 顕 微 鏡 である 現 在 までに メダカ ゼブラフィッシュの 胚 及 び 稚 魚 固 定 したマウス 初 期 胚 等 につい て 観 察 を 行 っている 今 回 は DSLM によるライブイメージングについて その 現 状 と 今 後 の 課 題 について 紹 介 する 参 考 文 献 : Huisken J, et al., Science 305 (2004) Keller P J, et al., Science 322 (2008)